燈盞花素口腔崩解片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究

1、質(zhì) 量燈盞花素口腔崩解片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究周毅生1, 翟冬艷2, 段瓊輝2, 秦梅頌2, 咸銀庫(kù)1(1.廣東藥學(xué)院,廣東廣州510006;2.河南中醫(yī)學(xué)院,河南鄭州450008收稿日期:2006209218作者簡(jiǎn)介:周毅生(1957,男,教授,從事藥物制劑和藥物體內(nèi)過(guò)程研究,電話(huà):020*。關(guān)鍵詞:野黃芩苷;口腔崩解片;質(zhì)量評(píng)價(jià)摘要:目的:對(duì)燈盞花素口腔崩解片進(jìn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。方法:用薄層色譜法鑒別燈盞花素口腔崩解片中主要成分野黃芩苷,高效液相法測(cè)定該制劑中野黃芩苷的含量進(jìn)行質(zhì)量檢查;并測(cè)定其崩解時(shí)限、溶出度和片重差異。結(jié)果:燈盞花素口腔崩解片能在30s 內(nèi)崩解完全,且片重差異符合規(guī)定;其溶出速度

2、與市售燈盞花素片比較顯著加快。野黃芩苷在0.0816L g0.4080L g 范圍內(nèi),色譜峰面積與進(jìn)樣量間線(xiàn)性關(guān)系良好,r =0.9999,平均回收率為99.67%,RS D 為0.47%。結(jié)論:建立了該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),其鑒別與含量測(cè)定方法簡(jiǎn)便、可靠,可作為該制劑的質(zhì)量控制指標(biāo)。中圖分類(lèi)號(hào):R 927.2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A 文章編號(hào):100121528(20071021446205Q ua lity standard of B reviscap i ne O ra ll y D isi n tegrati ng Tab letsZ HOU Y i 2sheng 1, Z HA I Dong 2y

3、an 2, D UAN Q i o ng 2hu i 2, Q I N M ei 2Song 2, XI A N Y in 2Ku 1(1.Guangdong Univers it y o f Pharmacy ,Guang z hou 510006,Ch ina; 2.H enan Colle g e of Tri d itional Ch i n es eM e d icine ,Zheng z hou 450008,Ch ina K EY W ORD S :scutellari n ;orally d isintegrati n g tab lets ;qua lity evaluati

4、 o nABSTRACT :A I M :To establish quality contr olm ethod f or Breviscap i n e O rally D isintegrati n g T ablets .M ETH 2ODS :Its m ain i n gredient scute llarin was i d entified by TLC ,the scute llarin i n the tablets was deter m i n ed byH PLC .And the disi n tegrati o n ,d issol u ti o n rate a

5、nd tablet weigh ts were deter m i n ed .RE S ULTS :Breviscapine O ra lly D i s integrati n g Tablets cou l d be disi n tegrated i n 30seconds ,and the tablet weight was fit f or the criterion .And the dissolution rate wasmore quick than the origina l Breviscapine tablets i n the m arke.t A good line

6、arity was obtai n ed w ith i n the range of 0.0816L g-0.4080L g w ith the correlation coeffic i e n t 0.9999.The recovery was 99.67%and RS D was 0.47%.CONCLUSI ON :The method f or identif yi n g and deter m i n g Breviscap i n e O rally D isintegrati n g Tab lets is si m ple ,reproduc i b le and pra

7、ctica.l 片劑是一種傳統(tǒng)的劑型,因其質(zhì)量穩(wěn)定、劑量準(zhǔn)確,服用、攜帶方便、機(jī)械化程度高、生產(chǎn)成本低而成為目前最常用的劑型之一?？谇槐澜馄?作為一種新的藥物制劑,因具有無(wú)需水送服、口感好、起效快、生物利用度高、消化道黏膜刺激性小等優(yōu)點(diǎn),適于吞咽困難者(尤其是老人、兒童,不宜喝水或特殊環(huán)境下不能得到水的病人用藥,而成為片劑研究開(kāi)發(fā)的重點(diǎn)。心腦血管疾病是當(dāng)今世界發(fā)病率和死亡率最高的疾病之一,燈盞花具有散寒解表、活血舒筋、止痛消積等功效,臨床上廣泛用于治療腦梗塞、缺血性心臟病、眩暈、老年性癡呆及腎病綜合征等,療效確切。燈盞花主要含燈盞花素,為黃酮類(lèi)成分,水溶性很差(幾乎不溶于水,限制了燈盞花制劑在

8、臨床上的推廣和使用。本實(shí)驗(yàn)根據(jù)野黃芩苷的理化特性,以及速釋的特點(diǎn)制備口腔崩解片,并對(duì)其質(zhì)量控制方法進(jìn)行了研究。1 材料1.1 儀器UV 22261型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(日本島津;LC 22016A 型高效液相色譜儀(PD A 檢測(cè)器(日本島津;BS110S 型電子分析天平(德國(guó)Satori u s;D 2800型智能藥物溶出儀(天津大學(xué)無(wú)線(xiàn)電廠;ZF 26型三用紫外線(xiàn)分析儀(上海嘉鵬科技有限公司;超聲波清洗器(上海超聲波儀器廠。1.2 試劑四氫呋喃(A ct u a lAnalysi s ,Exc l u si v ely D istri b u 21446ted byH ua i y i n

9、 Guoda Che m ica lReagent CO.,Ltd.;冰醋酸(Actual Analysis,Exclusively D istri b uted by H uaiyin Guoda Che m i c al Reagent Co.,L t d.;三乙胺(分析純,上海恒信化學(xué)試劑有限公司;醋酸乙酯(分析純,天津科密歐化學(xué)試劑開(kāi)發(fā)中心出品;甲酸(分析純,天津科密歐化學(xué)試劑開(kāi)發(fā)中心出品;定性毛細(xì)管(US A;微孔濾膜(0.8L m(北京化工學(xué)校附屬工廠;硅膠G(青島海洋化工有限公司出品,粒度范圍10L m40L m。野黃芩苷(供含量測(cè)定用,批號(hào):8802200001 (中國(guó)藥品生物

10、制品檢定所;燈盞花素原料(云南玉溪萬(wàn)方天然藥物有限公司,批號(hào)031101,含量以野黃芩苷計(jì)為96.76%;燈盞花素口腔崩解片(自制,含燈盞花素以野黃芩苷計(jì)每片約40mg;燈盞花素片(市售普通片,某藥業(yè)有限公司,批號(hào): 20030701、20040201。2方法與結(jié)果2.1燈盞花素口腔崩解片的鑒別4燈盞花素主要含燈盞花乙素,又稱(chēng)野黃芩苷,化學(xué)名稱(chēng)為5,6,7,4c2四羥基黃酮27202B2D2葡萄糖醛酸苷,屬黃酮類(lèi)化合物,可用鹽酸2鎂粉顯色反應(yīng)進(jìn)行鑒別。另外,還可以野黃芩苷對(duì)照品為對(duì)照進(jìn)行薄層鑒別。鹽酸2鎂粉試驗(yàn)取燈盞花素口腔崩解片的細(xì)粉適量(約相當(dāng)于燈盞花素10mg,加甲醇20mL,振搖使溶解

11、,濾過(guò),取濾液2mL,加鎂粉少量及鹽酸數(shù)滴,加熱數(shù)分鐘。試制的樣品顯橙紅色,呈正反應(yīng);取處方配比相應(yīng)量輔料為空白對(duì)照,同法操作,未顯橙紅色。表明輔料對(duì)主藥鑒別無(wú)影響。2.2檢查2.2.1溶出度2.2.1.1溶出介質(zhì)的選擇經(jīng)試驗(yàn),燈盞花素在蒸餾水中的溶解度為0.026mg/mL,在鹽酸溶液(9y1000中溶解度為0.0048mg/mL,在磷酸鹽緩沖液(p H6.8中溶解度為4.6mg/mL。因此,燈盞花素在900mL前兩種介質(zhì)中均達(dá)不到漏槽條件,故不能選用。燈盞花素屬黃酮類(lèi)成分,主要是野黃芩苷,其7位上連接一葡萄糖醛酸,在5,6,4c位上有3個(gè)羥基,因此具有較強(qiáng)酸性,在堿性或近中性介質(zhì)中易溶。燈

12、盞花素在磷酸鹽緩沖液(pH6.8中溶解度為4.6mg/mL,其在900mL的磷酸鹽緩沖液(p H6.8中的飽和溶解量大大超過(guò)每片所含藥物量(40mg的10倍,故選擇磷酸鹽緩沖液(pH6.8900mL為溶出介質(zhì)。該介質(zhì)的p H值在人體唾液p H值范圍之內(nèi)。2.2.1.2吸收光譜精密稱(chēng)取野黃芩苷對(duì)照品適量(約5mg置于100mL量瓶中,以磷酸鹽緩沖液(pH6.8為介質(zhì),超聲30m in使溶解,定容。對(duì)此野黃芩苷對(duì)照品溶液在190nm400nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)測(cè)定紫外吸收,并繪制吸收曲線(xiàn)。測(cè)得在335nm波長(zhǎng)處有最大吸收。2.2.1.3輔料空白對(duì)照吸收曲線(xiàn)按處方比例稱(chēng)取輔料0.21g(為一片所含輔料量,置

13、100mL量瓶中,以磷酸鹽緩沖液(pH6.8為介質(zhì),超聲30m i n,定容,濾過(guò)。取續(xù)濾液在190 nm400nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)測(cè)定紫外吸收,并繪制吸收曲線(xiàn)。結(jié)果表明輔料及溶劑系統(tǒng)對(duì)主藥在335nm 波長(zhǎng)處的最大吸收無(wú)影響。2.2.1.4對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥至恒重的野黃芩苷對(duì)照品11.75mg,置250mL量瓶中,用磷酸鹽緩沖液(p H6.8溶解,精密量取此溶液20mL,置50mL量瓶中,加磷酸鹽緩沖液(pH6.8稀釋至刻度,搖勻,精密吸取5mL置10mL量瓶中,以磷酸鹽緩沖液(p H6.8稀釋,定容,振搖,即得(每1mL中含野黃芩苷9.4L g。2.2.1.5標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的

14、制備精密稱(chēng)取野黃芩苷對(duì)照品11.75mg,置250mL 量瓶中,用磷酸鹽緩沖液(p H6.8溶解,定量稀釋得濃度為0.047mg/mL對(duì)照品溶液,精密量取此溶液20mL置50mL量瓶中,加磷酸鹽緩沖液(p H 6.8稀釋至刻度,搖勻,精密吸取此對(duì)照品溶液1, 3,5,7,9mL分別置10mL量瓶中,以上述磷酸鹽緩沖液稀釋,定容,振搖。照分光光度法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄V A,在335nm波長(zhǎng)處測(cè)定各對(duì)照品溶液的吸收度,制備標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。制備標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),為A=51.3512C+0.0072,r =0.9999。表明野黃芩苷濃度在0.00188mg/mL 0.01692mg/mL范圍內(nèi),吸收度與

15、溶液濃度間線(xiàn)性關(guān)系良好。2.2.1.6精密度試驗(yàn)取同一對(duì)照品溶液,按標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)制備項(xiàng)下方法連續(xù)測(cè)定5次,吸收度平均值為0.4899,RS D值為0.118%,表明精密度良好。2.2.1.7野黃芩苷在溶出介質(zhì)中的穩(wěn)定性試驗(yàn)精密稱(chēng)取野黃芩苷對(duì)照品11.75mg,置250mL 量瓶中,用磷酸鹽緩沖液(pH6.8溶解,精密量取此1447溶液20mL,置50mL量瓶中,加磷酸鹽緩沖液(pH 6.8稀釋至刻度,搖勻,精密吸取5mL置10mL量瓶中,以磷酸鹽緩沖液(pH6.8稀釋,定容,振搖。在不同時(shí)間內(nèi)分別在335nm的波長(zhǎng)處測(cè)定溶液的吸收度。結(jié)果表明,野黃芩苷在磷酸鹽緩沖液(p H6.8中4h之內(nèi)測(cè)定比較

16、穩(wěn)定。2.2.1.8回收率試驗(yàn)精密稱(chēng)取輔料適量,置250mL量瓶中,精密加入對(duì)照品溶液4mL(0.564mg/mL,加適量磷酸鹽緩沖液(pH6.8,使溶解,再用磷酸鹽緩沖液(pH 6.8稀釋至刻度,搖勻,濾過(guò),得供試品溶液。依次測(cè)定并計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。表1回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=5加入野黃芩苷量/m g 測(cè)得野黃芩苷量/mg回收率/%平均回收率/%RSD/%2.2562.24499.472.2562.22898.762.2562.23699.1199.290.3992.2562.25299.822.2562.24099.292.2.1.9溶出度的測(cè)定取樣品,照溶出度測(cè)定法(中國(guó)藥典2000年

17、版二部附錄XC第一法,以磷酸鹽緩沖液(p H6.8900mL為溶出介質(zhì),轉(zhuǎn)速為每分鐘100轉(zhuǎn),依法操作,經(jīng)3,5,10,20,30,60,90,120m in時(shí),分別取溶液10mL,同時(shí)補(bǔ)加同溫介質(zhì)10mL。溶液濾過(guò),分別精密吸取各時(shí)間點(diǎn)的續(xù)濾液2mL,置小試管中,加磷酸鹽緩沖液(pH6.8稀釋至8mL,搖勻,作為供試品溶液。測(cè)定吸收度,由標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算出每片的溶出量。重復(fù)測(cè)定3次。繪制溶出度曲線(xiàn),見(jiàn)圖1 。圖1燈盞花素口腔崩解片溶出度曲線(xiàn)2.2.1.10燈盞花素口腔崩解片與燈盞花素普通片溶出度的比較取市售燈盞花素片(某藥業(yè)有限公司兩批,同法測(cè)定,求得平均溶出度,作溶出度曲線(xiàn);與燈盞花素口腔崩解

18、片的平均溶出度進(jìn)行比較。見(jiàn)表2,圖2。表2口腔崩解片與市售普通片的溶出度取樣時(shí)間/m i n351020306090120口腔崩解片溶出度/%88.38?0.5188.49?0.3288.08?0.2787.06?0.3586.40?0.6385.32?0.2483.82?0.4083.13?0.58市售普通片溶出度/%18.58?0.4836.45?0.3770.48?0.6177.55?0.4279.20?0.2678.34?0.3377.77?0.5776.80?0. 20圖2溶出度比較曲線(xiàn)2.2.2崩解時(shí)限測(cè)定方法:取樣品1片,置事先于37b C?1e的水浴中預(yù)熱的10mL干燥燒杯中,

19、加入溫度為37e ?1e的水2mL靜置,觀察至完全崩解并能全部通過(guò)2號(hào)篩的時(shí)限,不得超過(guò)1m in。壓制5批樣品,每批分別測(cè)定6片,見(jiàn)表3。2.2.3重量差異檢查參照中國(guó)藥典2000年版一部附錄Ñ制劑通則中片劑項(xiàng)下重量差異的檢查方法檢杳。片重0.25g,重量差異限度為?7.5%。對(duì)所壓制的5批樣品分別檢查,重量差異均合格。表3樣品崩解時(shí)限編號(hào)123456x?s第1批35.1s36.4s33.8s34.5s33.7s35.0s34.8?0.99第2批36.7s35.5s36.0s35.8s34.6s34.4s35.5?0.87第3批38.1s37.8s39.0s37.5s40.0s39

20、.8s38.7?1.05第4批35.7s36.8s37.4s36.5s37.9s36.4s36.8?0.78第5批36.7s37.4s35.9s36.5s37.1s36.2s36.6?0.56 2.3含量測(cè)定132.3.1測(cè)定波長(zhǎng)的選擇精密稱(chēng)取對(duì)照品約20mg,置250mL量瓶中,加甲醇使溶解,稀釋至刻度,精密量取3mL置10 mL量瓶中,加50%甲醇稀釋至刻度,搖勻。以50%甲醇溶液為空白對(duì)照在分光光度計(jì)上測(cè)定190nm 400nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)的紫外吸收,結(jié)果在335nm 處有最大吸收。2.3.2色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)1448用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑,柱溫30e,以四氫呋喃21%冰醋酸

21、溶液(含0.05%三乙胺(28B72為流動(dòng)相:檢測(cè)波長(zhǎng)為335nm。理論塔板數(shù)按野黃芩苷計(jì)算應(yīng)不低于4000。2.3.3對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取野黃芩苷對(duì)照品約20mg,置250mL 量瓶中,加甲醇使溶解,稀釋至刻度,搖勻,得對(duì)照品溶液。2.3.4供試品溶液的制備取燈盞花素口腔崩解片10片,精密稱(chēng)定,研細(xì),精密稱(chēng)取適量(約相當(dāng)于燈盞花素30mg,置50 mL量瓶中,加甲醇適量,超聲處理30m i n,放冷,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,濾過(guò),精密吸取續(xù)濾液1 mL,置25mL量瓶中,用50%甲醇稀釋至刻度,搖勻,得供試品溶液。2.3.5空白對(duì)照溶液的制備按照燈盞花素口腔崩解片的處方配比,精密稱(chēng)取混合

22、均勻的輔料0.158g,置50mL量瓶中,加甲醇適量,超聲處理30m i n,放冷,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,濾過(guò),精密吸取續(xù)濾液1mL,置25mL量瓶中,用50%甲醇稀釋至刻度,搖勻,得空白對(duì)照溶液。2.3.6線(xiàn)性范圍的確定精密吸取對(duì)照品溶液1.0,2.0,3.0,4.0, 5.0 mL分別置于10mL量瓶中,加50%甲醇稀釋至刻度,搖勻,分別取10L L注入液相色譜儀,測(cè)定峰面積,以色譜峰面積為因變量Y,進(jìn)樣量為自變量X,進(jìn)行線(xiàn)性回歸,得到回歸方程。Y=2606508.578X+4726.3(r=0.9999表明燈盞花素在0.08160.4080L g范圍內(nèi),色譜峰面積與進(jìn)樣量間線(xiàn)性關(guān)系良好

23、。2.3.7空白對(duì)照試驗(yàn)分別取對(duì)照品溶液、供試品溶液、空白對(duì)照溶液10L L注入液相色譜儀,記錄色譜圖?？瞻讓?duì)照品在與對(duì)照品峰的相應(yīng)位置上未見(jiàn)色譜峰,表明輔料對(duì)主藥測(cè)定無(wú)影響;而供試品溶液的出峰時(shí)間同對(duì)照品一致。見(jiàn)圖35。圖3對(duì)照品色譜圖1 野黃芩苷?qǐng)D4 空白對(duì)照色譜圖圖5供試品色譜圖1野黃芩苷2.3.8精密度試驗(yàn)精密吸取2.3.3項(xiàng)下的對(duì)照品溶液2.5mL,置10mL量瓶中,加50%甲醇稀釋至刻度,搖勻,得濃度為0.0204L g/L L的對(duì)照品溶液。取10L L注入液相色譜儀,連續(xù)進(jìn)樣,測(cè)定5次。結(jié)果RSD為0.76%。2.3.9重復(fù)性試驗(yàn)取同一批燈盞花素口腔崩解片5份,照2.3.4項(xiàng)下分

24、別制為供試品溶液,分別精密吸取10L L,測(cè)定結(jié)果RS D為0.69%。2.3.10穩(wěn)定性試驗(yàn)取燈盞花素口腔崩解片,照2.3.4項(xiàng)下制得供試品溶液,在不同時(shí)間進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果表明,燈盞花素口腔崩解片供試溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。2.3.11回收率試驗(yàn)取已知含量的樣品10片,置小研缽中,研細(xì),精密稱(chēng)取藥粉適量(約含燈盞花素15mg,分別精密加入野黃芩苷對(duì)照品約15mg,置50mL量瓶中,加甲醇適量,超聲處理30m i n,放冷,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,濾過(guò),精密吸取續(xù)濾液1mL,置25mL量瓶中,用50%甲醇稀釋至刻度,搖勻,得供試品溶液。精密吸取2.3.3項(xiàng)下的對(duì)照品溶液2.5mL,置10mL量瓶中,加

25、50%甲醇稀釋至刻度,搖勻,得濃度為0.0204L g/L L的對(duì)照品溶液。取供試品溶液和對(duì)照品溶液各10L L注入液相色譜儀,記錄色譜圖。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算。見(jiàn)表4。2.3.12含量測(cè)定取燈盞花素口腔崩解片10片,精密稱(chēng)定,研細(xì),精密稱(chēng)取適量(約相當(dāng)于野黃芩苷30mg,置50 mL量瓶中,加甲醇適量,超聲處理30m i n,放冷,加1449甲醇稀釋至刻度,搖勻,濾過(guò),精密量取續(xù)濾液1 mL,置25mL量瓶中,用50%甲醇稀釋至刻度,搖勻,得供試品溶液。取10L L注入液相色譜儀,記錄色譜圖;另取2.3.7項(xiàng)下對(duì)照品溶液(0.0204L g/ L L10L L注入液相色譜儀,記錄色譜圖。按外

26、標(biāo)法以峰面積計(jì)算,測(cè)定5批樣品的含量。見(jiàn)表5。表4回收率試驗(yàn)取樣量/g 樣品含野黃芩苷量/mg加入野黃芩苷量/m g測(cè)得野黃芩苷量/m g回收率/%平均回收率/%RS D/%0.089914.2915.3029.64100.330.092514.7115.5030.1499.550.090114.3315.1129.3099.070.091114.4915.2029.6299.5499.670.470.090014.3115.3229.6199.870.088614.0915.2229.4899.66表5樣品含量測(cè)定結(jié)果(n=5批次12345野黃芩苷/m g39.75?0.0540.40?0.

27、1040.38?0.1240.07?0.0839.64?0.065批樣品含量測(cè)定結(jié)果在39.6440.40mg/片之間,考慮到生產(chǎn)過(guò)程中的損失及市售藥廠原料不同等因素,暫定本品每片含燈盞花素以野黃芩苷計(jì)不得低于39.00mg。3討論3.1專(zhuān)屬性燈盞花素口腔崩解片的定性鑒別,采用了鹽酸-鎂粉試驗(yàn),并與各自的陰性對(duì)照液進(jìn)行了對(duì)照試驗(yàn),結(jié)果沒(méi)有干擾。3.2空白試驗(yàn)含量測(cè)定采用了H PLC,方法準(zhǔn)確穩(wěn)定,輔料無(wú)干擾,平均回收率達(dá)到99.67%,RS D為0.47%,可以起到控制產(chǎn)品質(zhì)量的作用。3.3溶出度測(cè)定中,通過(guò)測(cè)定不同介質(zhì)中野黃芩苷的溶解度,為滿(mǎn)足漏槽條件,選擇磷酸鹽緩沖液(p H6.8作為溶出介質(zhì)。溶出結(jié)果較為理想。3.4口腔崩解