固定化細(xì)胞磁穩(wěn)定流化床反應(yīng)器制備生物柴油

1、第 27卷 第 10期 農(nóng) 業(yè) 工 程 學(xué) 報(bào) V ol.27 No.10 238 2011年 10月 Transactions of the CSAE Oct. 2011固定化細(xì)胞磁穩(wěn)定流化床反應(yīng)器制備生物柴油李麗萍,陳冠益 ,黃業(yè)千(天津大學(xué)環(huán)境科學(xué)與工程學(xué)院,天津 300072摘 要:為了探索生物酶法制備生物柴油新工藝,克服現(xiàn)有工藝的不足,采用超順磁性全細(xì)胞催化劑在自制的磁穩(wěn)定流 化床中對(duì)廢油脂連續(xù)生產(chǎn)生物柴油進(jìn)行了試驗(yàn)研究。考察了改變磁場(chǎng)強(qiáng)度、進(jìn)料醇油摩爾比、催化劑用量及流量等因素 對(duì)連續(xù)酯交換反應(yīng)的影響,進(jìn)而得到單級(jí)磁流化床酯交換反應(yīng)的最佳工藝條件:磁穩(wěn)態(tài)操作,醇油摩爾比為 1 1,

2、催化 劑用量為原料油質(zhì)量的 12%,進(jìn)料流量為 42.6 mL/min。四級(jí)磁流化床連續(xù)系統(tǒng)最終轉(zhuǎn)酯化率達(dá)到 85%以上,連續(xù)反應(yīng) 200 h后四級(jí)出口的甲酯產(chǎn)率仍在 80%以上。這說(shuō)明全細(xì)胞催化劑在磁穩(wěn)定流化床中活性較高,使用壽命較長(zhǎng),該系統(tǒng)具 有良好的操作穩(wěn)定性。關(guān)鍵詞:生物柴油,生物催化劑,流化床,固定化,超順磁性doi :10.3969/j.issn.1002-6819.2011.10.042中圖分類(lèi)號(hào):S216 文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A 文章編號(hào):1002-6819(2011-10-0238-05李麗萍, 陳冠益, 黃業(yè)千. 固定化細(xì)胞磁穩(wěn)定流化床反應(yīng)器制備生物柴油J. 農(nóng)業(yè)工程學(xué)報(bào), 201

3、1, 27(10:238-242. Li Liping, Chen Guanyi, Huang Yeqian. Biodiesel production in magnetically stabilized fluidized bed reactor by whole-cell bio-catalystJ. Transactions of the CSAE, 2011, 27(10: 238-242. (in Chinese with English abstract0 引 言生物柴油是由動(dòng)植物油脂酯交換得到的可再生替代 能源。生物酶法合成生物柴油具有反應(yīng)條件溫和、無(wú)污 染物排放、原料油適應(yīng)性

4、廣等優(yōu)點(diǎn),是近年來(lái)的研究熱 點(diǎn) 1-4。目前生物酶法制備生物柴油工藝大多停留在試驗(yàn) 室階段,且一般為間歇操作。沒(méi)有實(shí)現(xiàn)工業(yè)化的主要瓶 頸在于反應(yīng)過(guò)程中脂肪酶易失活,使用壽命短,從而導(dǎo) 致生產(chǎn)成本過(guò)高,僅有的連續(xù)化工藝都采用固定床填充 反應(yīng)器 5-7, 真正進(jìn)行連續(xù)化生產(chǎn)還存在轉(zhuǎn)酯化效率不高、 催化劑難于回收等問(wèn)題。因此,亟需配套工業(yè)化反應(yīng)器 研制的突破以及成熟工藝路線(xiàn)的開(kāi)拓。采 用 全 細(xì) 胞 生 物 催 化 劑 (whole-cell biocatalyst, WCB 不僅可以免去脂肪酶分離純化的工藝,杜絕了酶 法在此過(guò)程中的大量損失,還可以節(jié)省大量的設(shè)備投資 和運(yùn)行費(fèi)用 8-10。 Nak

5、ashima 等 11-13最早采用生物質(zhì)載體 固定丙酮干燥的 Rhizopus chinensis細(xì)胞制得全細(xì)胞生物 催化劑,并通過(guò)循環(huán)發(fā)酵流化床制備生物柴油。 Ban 10等將 Rhizopus oryzae IFO4697細(xì)胞固定于聚氨酯泡沫顆 粒,最終甲酯轉(zhuǎn)化率與采用胞外酶催化相當(dāng)。全細(xì)胞催化 劑相對(duì)于胞外脂肪酶催化劑的主要不足在于增加了傳質(zhì)阻收稿日期:2011-01-01 修訂日期:2011-05-01基金項(xiàng)目:天津市科技發(fā)展計(jì)劃重點(diǎn)項(xiàng)目(06YFGZSH00400 ;科技部 863高新技術(shù)項(xiàng)目(2007AA05Z413作者簡(jiǎn)介:李麗萍(1986- ,女,河北廊坊人,主要從事生物柴油

6、生產(chǎn)工 藝的研究。天津 天津大學(xué)環(huán)境科學(xué)與工程學(xué)院, 300072。Email: liliping2009通信作者:陳冠益(1970- ,男,江西玉山人,博士,博士生導(dǎo)師,主 要從事生物質(zhì)轉(zhuǎn)化及利用技術(shù)研究。天津 天津大學(xué)環(huán)境科學(xué)與工程學(xué)院, 300072。 Email: chen 力,因此催化活性不高。為了提高全細(xì)胞催化劑的催化轉(zhuǎn) 酯化效率,各國(guó)學(xué)者進(jìn)行了大量研究。 Hama 14等通過(guò)調(diào)節(jié) 培養(yǎng)液中脂肪酸的種類(lèi)和含量來(lái)控制催化細(xì)胞的胞膜脂肪 酸組成與不飽和度,從而提高細(xì)胞催化劑的活性和穩(wěn)定性。 同時(shí),培養(yǎng)環(huán)境對(duì)催化細(xì)胞也有一定的影響 15。磁流化床 (magnetically fluidi

7、zed bed, MFB 是將流 態(tài)化技術(shù)與電磁技術(shù)相結(jié)合,采用磁性顆粒作為床層介 質(zhì)并附加磁場(chǎng)的流化床系統(tǒng)。與普通的流化床相比,磁 流化床可有效控制相間返混,具有固體顆粒裝卸方便、 物料分布均勻、傳熱傳質(zhì)效率高及流動(dòng)性和穩(wěn)定性能好 等特點(diǎn) 16,目前研究主要應(yīng)用在廢水處理、生物大分子 的提純、化工催化等方面,已經(jīng)顯示出巨大的工業(yè)化運(yùn) 用價(jià)值。而將磁流化床用于生物柴油的制備還未見(jiàn)報(bào) 道。本文采用超順磁性全細(xì)胞催化劑在自制的磁穩(wěn)定流 化床中對(duì)廢油脂連續(xù)制備生物柴油進(jìn)行了試驗(yàn)研究,探 索采用該系統(tǒng)進(jìn)行生物柴油連續(xù)化生產(chǎn)的工藝路線(xiàn),為 今后實(shí)現(xiàn)細(xì)胞催化工業(yè)化提供有參考價(jià)值的試驗(yàn)結(jié)果。1 材料與方法1

8、.1 主要材料1.1.1 超順磁性 Rhizopus oryzae全細(xì)胞催化劑采用化學(xué)共沉淀法合成納米 Fe 3O 4磁性微粒, 以該顆 粒作為磁性基質(zhì),采用戊二醛共價(jià)交聯(lián)殼聚糖制備 Fe 3O 4/CS復(fù)合微球,通過(guò)溶脹 -吸附法,固定本試驗(yàn)室培 育的 R.oryzae 細(xì)胞,制備出一種新型的具有超順磁性的 全細(xì)胞生物催化劑。1.1.2 原料油本試驗(yàn)所采用的原料油為天津益生能生物柴油有限 公司提供的地溝油,其物理化學(xué)性質(zhì)如表 1所示。第 10期 李麗萍等:固定化細(xì)胞磁穩(wěn)定流化床反應(yīng)器制備生物柴油 239表 1 廢油脂的主要物理化學(xué)特性Table 1 Major physical and ch

9、emical properties of waste oil酸值 /(mg·g-1皂化值 /(mg·g-1粘度 /(Pa·s (40 5.961980.014051.1.3 其他試劑乙醇、石油醚、油酸、磷酸二氫鉀(分析純;甲 醇(色譜純;肉豆蔻酸甲酯、棕櫚油酸甲酯、棕櫚酸 甲酯、油酸甲酯、亞油酸甲酯、硬脂酸甲酯 (standard 。 1.2 主要儀器單級(jí)循環(huán)磁穩(wěn)態(tài)流化床反應(yīng)系統(tǒng)及四級(jí)磁穩(wěn)定流化 床反應(yīng)系統(tǒng)如圖 1, 2所示。 1. 循環(huán)水泵 2. 磁流化床反應(yīng)器 3. 空氣壓縮機(jī) 4. 恒流泵 5. 甲醇 6. 原料油 7. 加熱攪拌器圖 1 單級(jí)磁穩(wěn)定流化床反

10、應(yīng)系統(tǒng)Fig.1 Schematic of single-stage magnetically stabilized fluidizedbed reactor 1. 循環(huán)水泵 2. 原料油罐 3. 甲醇罐 4. 加熱攪拌器 5. 空氣壓縮機(jī) 6. 恒流泵 7. 產(chǎn)品罐圖 2 四級(jí)磁穩(wěn)定流化床反應(yīng)系統(tǒng)Fig.2 Schematic of four-stage magnetically fluidized bed reactorsystem1.3 試驗(yàn)方法試驗(yàn)采用磁穩(wěn)定流化床生物反應(yīng)器,以單級(jí)或多級(jí) 運(yùn)行。反應(yīng)前反應(yīng)器先通過(guò)高溫蒸汽滅菌 20 min,冷卻 后填充超順磁性 R.oryzae 全細(xì)胞

11、催化劑,地溝油經(jīng)過(guò)抽 濾 -活性白土吸附預(yù)處理后與無(wú)水甲醇按一定比例在三口 瓶中混合,并用恒溫磁力攪拌器攪拌預(yù)熱,然后由恒流 泵以一定流量從流化床底部流加,在反應(yīng)器中與細(xì)胞催 化劑接觸并反應(yīng)。反應(yīng)溫度為 35,由恒溫循環(huán)水浴控 制。 采用自然 pH 值, 體系的含水率通過(guò)磷酸緩沖溶液控制在 15%左右。產(chǎn)物由流化床上部的三相分離器分離, 經(jīng)重力分離后上層清液即為粗生物柴油。 1.3.1 單級(jí)影響因素試驗(yàn)首先采用單級(jí)反應(yīng)系統(tǒng),分別改變磁場(chǎng)強(qiáng)度、進(jìn)料 醇油摩爾比、催化劑用量及流量等因素,考察不同因素 對(duì)連續(xù)酯交換反應(yīng)的影響,從而得到單級(jí)酯交換反應(yīng)的 最佳工藝條件。1.3.2 單級(jí)放大循環(huán)試驗(yàn)在單級(jí)

12、影響因素試驗(yàn)分析的基礎(chǔ)上進(jìn)行單級(jí)放大循 環(huán)試驗(yàn),為設(shè)計(jì)生物柴油的連續(xù)化制備工藝提供參數(shù)。 1.3.3 四級(jí)串聯(lián)試驗(yàn)在單級(jí)放大循環(huán)試驗(yàn)的基礎(chǔ)上,通過(guò)試驗(yàn)獲得的最 佳反應(yīng)級(jí)數(shù),建立由四級(jí)磁流化床串聯(lián)的反應(yīng)系統(tǒng),上 一級(jí)的產(chǎn)物與等摩爾的最佳甲醇量混合后導(dǎo)入下一級(jí)反 應(yīng)器,依次反應(yīng)完畢后產(chǎn)物經(jīng)重力分離甘油,即為連續(xù) 化制備的粗生物柴油。1.3.4 產(chǎn)物的鑒定與定量分析本試驗(yàn)采用氣質(zhì)聯(lián)用對(duì)產(chǎn)品組分進(jìn)行定性分析,以 測(cè)定產(chǎn)物的主要成分,然后以主要脂肪酸甲酯作為標(biāo)準(zhǔn) 品,采用蒸發(fā)光散射高效液相色譜檢測(cè)法 (HPLC-ELSD對(duì)生物柴油產(chǎn)品進(jìn)行定量分析 17。甲酯產(chǎn)率的計(jì)算公式為%100%=×樣品中

13、脂肪酸甲酯含量甲酯產(chǎn)率 油脂理論上完全甲酯化后脂肪酸甲酯的含量 2 結(jié)果與分析2.1 單級(jí)影響因素試驗(yàn)2.1.1 磁場(chǎng)強(qiáng)度對(duì)產(chǎn)率的影響本試驗(yàn)在醇油摩爾比為 1 1的條件下考察了不同磁 場(chǎng)強(qiáng)度下的甲酯產(chǎn)率,結(jié)果如表 2所示。表 2 不同磁場(chǎng)強(qiáng)度對(duì)甲酯產(chǎn)率的影響Table 2 Effects of different magnetic field strengthes on methylester production rate磁場(chǎng)強(qiáng)度 H /(A·m-11 5923 1854 7776 369甲酯產(chǎn)率 /%18.7 22.3 31.1 31.8 26.8由表 2可以看出,隨著磁場(chǎng)強(qiáng)度的

14、增加,甲酯產(chǎn)率先增加后降低。當(dāng)無(wú)磁場(chǎng)(H =0 A/m或磁場(chǎng)強(qiáng)度較小 (H =1 592 A/m時(shí),由于催化劑粒徑小、質(zhì)量輕,分散 于油相中不易沉降,因此在三相分離器中難以分離,不 少顆粒被出口液體帶出。同時(shí),床體內(nèi)產(chǎn)生的氣泡很大, 對(duì)催化劑的物理?yè)p害較大,且造成了嚴(yán)重的返混,雖然 傳質(zhì)效果最好,但是催化效果不佳,轉(zhuǎn)酯化效果差,甲 酯產(chǎn)率分別為 18.7%和 22.3%。當(dāng)采用較高的磁場(chǎng)強(qiáng)度 (H =3 185、 4 777 A/m時(shí),床層穩(wěn)定,氣泡小而均勻, 床層膨脹有一定的空隙,催化劑之間形成磁鏈,因此液 -固相間傳質(zhì)效果好 18,酯化效果好,甲酯產(chǎn)率較高。當(dāng) 進(jìn)一步增大外加磁場(chǎng)強(qiáng)度(H

15、=6 369 A/m時(shí),床層高度 下降,床層界面之間波動(dòng)較劇烈,磁鏈?zhǔn)湛s,催化劑以農(nóng)業(yè)工程學(xué)報(bào) 2011年 240磁聚形式存在,由于團(tuán)聚導(dǎo)致比表面積成倍減少,部分 催化劑顆粒甚至被包圍不能參與反應(yīng),液 -固相間傳質(zhì)效 果差, 因此轉(zhuǎn)酯化效率也不高, 出口甲酯產(chǎn)率僅為 26.8%。 因此,磁流化床生物反應(yīng)器制備生物柴油的最優(yōu)操 作形式為鏈?zhǔn)降拇欧€(wěn)態(tài)操作,床層穩(wěn)定有利于轉(zhuǎn)酯化反 應(yīng)的進(jìn)行。2.1.2 醇油摩爾比對(duì)轉(zhuǎn)化率的影響根據(jù)轉(zhuǎn)酯化反應(yīng)化學(xué)計(jì)量式, 理論上轉(zhuǎn)化 1 mol甘油 三酸酯需要 3 mol甲醇。 由圖 3可以看出, 隨著醇油摩爾 比的增大,甲酯產(chǎn)率先增大,然后急劇降低。這與酶促 合成生

16、物柴油反應(yīng)動(dòng)力學(xué)的理論 19一致。由此可見(jiàn),體 系中過(guò)量的甲醇會(huì)對(duì)細(xì)胞催化劑的活性起到相當(dāng)大的抑 制作用,從而影響了轉(zhuǎn)酯化反應(yīng)的進(jìn)行。因此,單次循 環(huán)最佳醇油摩爾比為 1 1。 圖 3 醇油摩爾比對(duì)甲酯產(chǎn)率的影響Fig.3 Effects of methanol to oil molar ratioes on methyl ester production rate2.1.3 催化劑用量對(duì)轉(zhuǎn)化率的影響本試驗(yàn)對(duì)不同流量下催化劑用量對(duì)甲酯產(chǎn)率的影響 做了初步的研究,結(jié)果如圖 4所示。 圖 4 不同流量下催化劑用量對(duì)甲酯產(chǎn)率的影響Fig.4 Effects of amount of catalyst

17、 on methyl ester production rate under different feed rates由圖 4可知,甲酯產(chǎn)率隨催化劑用量的增加而提高, 當(dāng)催化劑用量為原料油質(zhì)量的 12%時(shí)產(chǎn)率最高,進(jìn)一步 提高催化劑用量產(chǎn)率也不再提高。在反應(yīng)體系一定的情 況下,繼續(xù)增大催化劑用量將使體系中存在過(guò)多的固體 顆粒,影響體系的傳質(zhì)性能,給設(shè)備造成負(fù)擔(dān),并且不 利于催化劑的回收,增加了成本。因此,最佳的催化劑 用量為原料油質(zhì)量的 12%。 2.1.4 流量對(duì)轉(zhuǎn)化率的影響在磁流化床的操作中,流量的大小與底物在床體內(nèi) 的停留時(shí)間密切相關(guān)。圖 5為采用鏈?zhǔn)酱欧€(wěn)態(tài)操作,醇 油摩爾比為 1 1,

18、催化劑用量為 12%條件下不同流量的 試驗(yàn)結(jié)果。 圖 5 流量對(duì)甲酯產(chǎn)率的影響Fig.5 Effects of flow rates on methyl ester production rate由圖 5可知, 當(dāng)流量小于 42.6 mL/min時(shí), 流量的變 化對(duì)甲酯產(chǎn)率影響不大, 當(dāng)流量大于 42.6 mL/min時(shí), 轉(zhuǎn) 化率開(kāi)始急劇下降。由于流量過(guò)小會(huì)導(dǎo)致轉(zhuǎn)酯化時(shí)間過(guò) 長(zhǎng),增加運(yùn)行成本。因此,綜合考慮反應(yīng)時(shí)間和甲酯產(chǎn) 率,采用 42.6 mL/min作為后續(xù)試驗(yàn)的進(jìn)料流量。 2.1.5 床層膨脹比對(duì)轉(zhuǎn)化率的影響在磁流化床的操作過(guò)程中,當(dāng)進(jìn)料流量和外加磁場(chǎng) 強(qiáng)度一定時(shí),通過(guò)在磁穩(wěn)操作區(qū)內(nèi)

19、調(diào)節(jié)表觀氣速可以改 變床層的膨脹比。 圖 6 床層膨脹比對(duì)甲酯產(chǎn)率的影響Fig.6 Effects of bed expansion ratio onmethyl ester production rate如圖 6所示,床層的膨脹比對(duì)催化反應(yīng)的結(jié)果影響 不大,在一定范圍內(nèi)隨著膨脹比的增加甲酯產(chǎn)率增大。 原因可能是膨脹比的增大,導(dǎo)致固體顆粒之間的空隙增 加,液 -固相間傳質(zhì)效率提高,使得轉(zhuǎn)化率提高。但當(dāng)床 層膨脹比大于 2.5后, 甲酯產(chǎn)率降低, 一方面可能是由于 空隙率過(guò)大導(dǎo)致部分床層出現(xiàn)短路,致使底物未經(jīng)反應(yīng) 就流出反應(yīng)器,另一方面氣速增大可能導(dǎo)致對(duì)催化劑的 物理傷害增大,使得產(chǎn)率下降。2.

20、2 單級(jí)流化床循環(huán)試驗(yàn)為了構(gòu)建可以連續(xù)化生產(chǎn)生物柴油的反應(yīng)系統(tǒng),需 要確定連續(xù)反應(yīng)器所采用的級(jí)數(shù)。為此,在單因素試驗(yàn)第 10期 李麗萍等:固定化細(xì)胞磁穩(wěn)定流化床反應(yīng)器制備生物柴油241的基礎(chǔ)上,利用單級(jí)磁穩(wěn)定流化床反應(yīng)器進(jìn)行循環(huán)試驗(yàn), 等量流加甲醇,保證每次循環(huán)反應(yīng)體系中醇油摩爾比均 為1 1 。圖 7 循環(huán)次數(shù)對(duì)甲酯產(chǎn)率的影響Fig.7 Effects of reaction cycles on methyl ester production rate圖 7為循環(huán)次數(shù)對(duì)甲酯產(chǎn)率的影響。由試驗(yàn)結(jié)果可 知,隨著循環(huán)次數(shù)的增加,甲酯產(chǎn)率依次提高,當(dāng)循環(huán) 超過(guò)四次以后,甲酯產(chǎn)率基本保持恒定。因此,綜

21、合考 慮轉(zhuǎn)酯化效率和停留時(shí)間,采用四次循環(huán)反應(yīng)可以取得 最佳的經(jīng)濟(jì)效益。2.3 四級(jí)磁流化床連續(xù)化制備生物柴油根據(jù)單級(jí)磁流化床循環(huán)試驗(yàn)結(jié)果,將四次循環(huán)轉(zhuǎn)酯 化反應(yīng)設(shè)計(jì)為四級(jí)串聯(lián)磁流化床連續(xù)式反應(yīng)系統(tǒng),用于 生物柴油的全細(xì)胞催化連續(xù)生產(chǎn)。系統(tǒng)穩(wěn)定運(yùn)行后,各 級(jí)流化床出口的甲酯產(chǎn)率如表 3所示。表 3 磁穩(wěn)態(tài)操作時(shí)各級(jí)磁流化床的甲酯產(chǎn)率Table 3 Methyl ester production rates at all levels of the fluidizedbed when using magnetic steady-state operation流化床 一級(jí)流化床二級(jí)流化床三級(jí)流化床

22、四級(jí)流化床甲酯產(chǎn)率 /%22 49 71 87由表 3可以看出,采用四級(jí)磁穩(wěn)定流化床反應(yīng)系統(tǒng) 的轉(zhuǎn)酯化效率和采用胞外酶催化的效果相當(dāng) 1,20-21,高于之前整體細(xì)胞催化研究的試驗(yàn)結(jié)果 14,22,可見(jiàn)磁穩(wěn)定流化床非常適于細(xì)胞催化,全細(xì)胞催化劑在磁穩(wěn)定流化床中 具有很高的活力,可以有效地減小傳質(zhì)阻力和消除甲醇 的抑制作用。 圖 8 四級(jí)磁流化床反應(yīng)系統(tǒng)連續(xù)運(yùn)行甲酯產(chǎn)率Fig.8 Methyl ester production rates of four-stage continuousmagnetically fluidized bed reactor system圖 8表示四級(jí)磁流化床反應(yīng)系

23、統(tǒng)連續(xù)反應(yīng) 200 h四級(jí) 出口的甲酯產(chǎn)率, 反應(yīng)超過(guò) 200 h后甲酯產(chǎn)率仍在 80%以 上,可見(jiàn)該反應(yīng)系統(tǒng)具有較高的穩(wěn)定性。3 結(jié) 論本文采用超順磁性全細(xì)胞催化劑在自制的磁穩(wěn)定流 化床中對(duì)廢油脂連續(xù)生產(chǎn)生物柴油進(jìn)行了試驗(yàn)研究,采 用單級(jí)磁流化床催化廢油脂轉(zhuǎn)酯化的優(yōu)化工藝為:采用 磁穩(wěn)態(tài)操作,醇油摩爾比為 1 1,催化劑用量為原料油 質(zhì)量的 12%,進(jìn)料流量為 42.6 mL/min。連續(xù)化工藝所需 要的最佳反應(yīng)級(jí)數(shù)為四級(jí),連續(xù)化試驗(yàn)廢油脂的轉(zhuǎn)酯化 率達(dá)到 85%以上, 連續(xù)反應(yīng) 200 h后四級(jí)出口的甲酯產(chǎn)率 仍在 80%以上。參 考 文 獻(xiàn)1Shimada Y, Watanabe Y,

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36、iversity, 2008. (in Chinese with English abstract18 慕旭宏,宗保寧,閔恩澤.氣液固三相磁穩(wěn)定流化床的操 作狀態(tài)對(duì)反應(yīng)結(jié)果的影響 J. 化學(xué)反應(yīng)工程與工藝, 1997, 13(2:198-201.Mu Xuhong, Zong Baoning, Min Enze. Effect of the operating state on reations in a three-phase magnetically stabilized fluized bed reactiorJ. Chemical Reaction Engineering and Te

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38、 (in Chinese with English abstract20 Dossat V, Combes D, Marty A. Continuous enzymatic transesterification of high oleic sunflower oil in a packed bed reactor: influence of the glycerol productionJ. Enzyme and Microbial Technology, 1999, 25(3/5: 194-200.21 Li L L, Du W, Liu D H, et al. Lipase-cataly

39、zed transesterification of rapeseed oils for biodiesel production with a novel organic solvent as the reaction mediumJ. Journal of Molecular Catalysis B-Enzymatic, 2006, 43(1/4: 58-62.22 Matsumoto T, Takahashi S, Kaieda M, et al. Yeast whole-cell biocatalyst constructed by intracellular overproduction of Rhyzopus oryzaelipase is applicable to biodiesel fuel productionJ. Applied Microbiology and Biotechnology, 2001, 57(4: 515-520.Biodiesel production in mag