食品微生物檢驗技術實驗指導

1、實驗一 培養(yǎng)基的配制及器材的滅菌  一、目的要求    1、學習并熟練培養(yǎng)基的制備的方法、步驟和技術。    2、學習和掌握高壓蒸汽滅菌的具體操作方法和技術。    3、為下一次實驗做好實驗前的準備。二、實驗原理     培養(yǎng)基是人工配制的適合于不同微生物生長繁殖或積累代謝產物的營養(yǎng)基質，它是進行科學研究，生產微生物制品及應用等方面的基礎。由于各類微生物對營養(yǎng)的要求不同，培養(yǎng)目的和檢測需要不同，因而培養(yǎng)基的種類很多，要根據培養(yǎng)目的和檢測需要不同，選擇配制不

2、同的培養(yǎng)基。     從培養(yǎng)基的用途來區(qū)分，培養(yǎng)基可分為選擇培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基等。     選擇培養(yǎng)基 在培養(yǎng)基中加入某種物質以殺死或抑制不需要的菌種生長的培養(yǎng)基，稱之為選擇培養(yǎng)基。如鏈霉素、氯霉素等抑制原核微生物的生長；而制霉菌素、灰黃霉素等能抑制真核微生物的生長；結晶紫能抑制革蘭氏陽性細菌的生長等。    增殖培養(yǎng)基 在自然界中，不同種的微生物常生活在一起，為了分離我們所需要的微生物，在普通培養(yǎng)基中加入一些某種微生物特別喜歡的營養(yǎng)物質，以增加這種微生物的繁殖速度，逐漸淘

3、汰其它微生物，這種培養(yǎng)基稱為增殖培養(yǎng)基，這種培養(yǎng)基常用于菌種篩選和選擇增菌中。在某種程度上講，增殖培養(yǎng)基也是一種選擇培養(yǎng)基。    鑒別培養(yǎng)基 在培養(yǎng)基中加入某種試劑或化學藥品，使難以區(qū)分的微生物經培養(yǎng)后呈現出明顯差別，因而有助于快速鑒別某種微生物。這樣的培養(yǎng)基稱之為鑒別培養(yǎng)基。例如用以檢查飲水和乳品中是否含有腸道致病菌的伊紅美藍培養(yǎng)基就是一種常用的鑒別性培養(yǎng)基。有些培養(yǎng)基是具有選擇和鑒別雙重作用。例如食品檢驗中常用的麥康凱培養(yǎng)基是一例。它含有膽鹽、乳糖和中性紅。膽鹽具有抑制腸道菌以外的細菌的作用（選擇性），乳糖和中性紅（指示劑）能幫助區(qū)別乳糖發(fā)酵腸道菌（如大腸桿

4、菌）和不能發(fā)酵乳糖的腸道致病菌（如沙門氏菌和志賀氏菌）。1 / 19    滅菌原理：高壓蒸汽滅菌是將待滅菌的物品放在一個密閉的加壓滅菌鍋內，通過加熱，使滅菌鍋隔套間的水沸騰而產生蒸汽。待水蒸汽急劇地將鍋內的冷空氣從排氣閥中驅盡，然后關閉排氣閥，繼續(xù)加熱，此時由于蒸汽不能溢出，而增加了滅菌器內的壓力，從而使沸點增高，得到高于100的溫度。導致菌體蛋白質凝固變性而達到滅菌的目的。適用于一般培養(yǎng)基、玻璃器皿、無菌水、金屬用具。一般培養(yǎng)基在1213滅菌20分鐘即可。干熱滅菌是利用高溫使微生物細胞內的蛋白質凝固變性而達到滅菌的目的。細胞內的蛋白質凝固性與其本身的含水量有關

5、，在菌體受熱時，當環(huán)境和細胞內含水量越大，則蛋白質凝固就越快，反之含水量越小，凝固緩慢。因此，與濕熱滅菌相比，干熱滅菌所需溫度高（160170），時間長（12小時）。但干熱滅菌溫度不能超過180，否則，包器皿的紙或棉塞就會烤焦，甚至引起燃燒，因而一般塑料制品不能用干熱滅菌。三、試劑和儀器    1、藥品及試劑：    牛肉膏、蛋白胨、 瓊脂、 MgSO4·7H2O  FeSO4、NaCl 等    2、儀器    天平、高壓蒸汽滅菌鍋、

6、干燥箱    3、玻璃器材及其它    試管、三角瓶 、燒杯、量筒、玻棒、藥匙、玻璃漏斗、pH試紙（5.5-9.0） 、棉花、牛皮紙、記號筆、棉線、紗布、吸管（1ml）、培養(yǎng)皿、玻璃珠。四、方法步驟  （一）、配制培養(yǎng)基配制培養(yǎng)基的制備與分裝步驟    1、稱量  除瓊脂外，按培養(yǎng)基配方比例依次準確地稱取藥品，放入適當大小的燒杯中。蛋白胨極易吸水，稱量時動作要快。補足所需水分，混勻后加入瓊脂。   2、加熱溶解  向燒杯內加入所需水量的一部分，放到電爐上加

7、熱，同時不斷進行攪拌，使其溶解，最后補足所需水分。加熱過程所蒸發(fā)的水分，應在全部原料溶解后加水補足。   3、調pH值  用精密pH試紙（或pH電位計、氫離子濃度比色計）測試培養(yǎng)基的pH值，如不符合需要，可用10%HCl或10%NaOH進行調節(jié)，直到調節(jié)到配方要求的pH值為止。   4、加入瓊脂融化  向溶液中加入所需的碎瓊脂，在電爐上一面加熱一面攪拌，直到瓊脂完全融化后才能停止攪拌，并加入熱水補足水分。    5、過濾  用濾紙、紗布或棉花趁熱將已配好的培養(yǎng)基過濾。用紗布過濾時，最好折疊成六層

8、，用濾紙過濾時，可將濾紙折疊成瓦棱形，鋪在漏斗上過濾。沒有懸浮物的不用過濾。    6、分裝 將培養(yǎng)基趁熱加至漏斗上進行分裝。如果要制作斜面培養(yǎng)基，須將培養(yǎng)基分裝于試管中，裝試管時，裝量不要超過試管的1/4；如果要制作平板培養(yǎng)基或液體、半固體培養(yǎng)基，則須將培養(yǎng)基分裝于三角瓶或錐形瓶內，一般以其容積的1/2為宜。注意管口不要沾上培養(yǎng)基。在漏斗下口處套有一段透明膠管，膠管下部用彈簧夾夾緊。分裝時，一手捏松彈簧夾，使培養(yǎng)基流出，另一只手握住幾支試管或錐形瓶，依次接取培養(yǎng)基。分裝時，注意不要使培養(yǎng)基粘附管口或瓶口，以免浸濕棉塞引起雜菌污染。  

9、0; 7、加塞、包扎、標記 加上塞子，然后在外面用一層牛皮紙包扎。試管應先捆成一捆后再于棉塞外包扎牛皮紙，貼上標簽，注明培養(yǎng)基名稱、日期、組別。    分裝完畢后，需要用棉塞堵住管口或瓶口。堵棉塞的主要目的是過濾空氣，避免污染。棉塞應采用普通新鮮、干燥的棉花制作，不要用脫脂棉，以免因脫脂棉吸水使棉塞無法使用。棉塞做成后，應迅速塞入管口或瓶口中，棉塞應緊貼內壁不留縫隙，以防空氣中微生物沿皺折侵入。棉塞不要過緊過松，塞好后，以手提棉塞、管、瓶不下落為合適。棉塞的2/3應在管內或瓶內，上端露出少許棉花便于拔取。塞好棉塞的試管和錐形瓶應蓋上厚紙用繩捆扎，準備滅菌。（二）、

10、培養(yǎng)基及器材的滅菌    殺菌操作流程：    檢查殺菌鍋各部件是否正常加水裝鍋加蓋密封通電加熱排空氣（大量蒸汽排出時，維持5 min）升溫恒溫殺菌斷電降溫開蓋取出物品    培養(yǎng)基、無菌水等，放入高壓蒸汽滅菌鍋內，濕熱滅菌。    1、含糖培養(yǎng)基：115滅菌10min或113滅菌15min    2、無糖培養(yǎng)基：121滅菌1520min     玻璃器皿：干熱滅菌，放入烘箱加熱滅菌：160165滅菌2h；

11、或濕熱滅菌：121滅菌2030min。 五、思考題           1、培養(yǎng)基配好后，為什么必須立即滅菌？如何檢查滅菌后的培養(yǎng)菌是無菌的？    2、加壓蒸汽滅菌的原理是什么？是否只要壓力表上的指針指到所需的壓力時就能達到所需滅菌溫度？為什么？    3、干熱滅菌應該注意哪些事項？    4、管口、瓶口為什么要用棉塞？能否用木塞或棉皮塞代替？為什么？實驗二 醬油中菌落總數的測定一、目的要求 &

12、#160;  1、了解細菌總數檢驗的意義。    2、掌握樣品稀釋處理的方法和菌落總數計數的方法    3、掌握國際法測定菌落總數的方法和技能二、實驗原理菌落總數是指食品經過處理，在一定條件下培養(yǎng)后，所得1g或1ml檢樣中所含細菌菌落總數。菌落總數主要作為判別食品被污染程度的標志，也可以應用這一方法觀察細菌在食品中繁殖的動態(tài)，以便對被檢樣品進行衛(wèi)生學評價時提供依據。菌落總數并不表示樣品中實際存在的所有細菌總數，菌落總數并不能區(qū)分其中細菌的種類，所以有時被稱為雜菌數，需氧菌數等。三、實驗儀器與材料恒溫箱、水浴鍋、天平、可調式電

13、爐、試管、吸管、三角平等營養(yǎng)瓊脂、生理鹽水、樣品（醬油、乳粉）四、實驗程序與步驟（一）、基本操作過程：    樣品稱量樣品稀釋傾注平皿培養(yǎng)24小時計數報告。（二）、樣品的稀釋（樣品的處理）樣品：醬油 外包裝消毒無菌稱樣品25g加無菌生理鹽水加蓋振蕩搖均勻     1、用75%酒精棉球擦拭消毒袋口，用無菌剪刀開封取樣。以無菌操作吸取檢樣25ml，放入含有225ml滅菌生理鹽水的滅菌玻璃瓶內（瓶內預置適量玻璃珠），經充分振搖做成1:10的稀釋液。若為固體檢樣，在加入稀釋液后，最好置滅菌均質器中以800010000r/m

14、in的速度處理1min，制成1：10的均勻稀釋液。     2、用1ml滅菌吸管，吸取110稀釋液1ml，注入含有9ml滅菌生理鹽水的試管內，振搖試管混合均勻，制成1100稀釋液。     3、另取1ml滅菌吸管，按上項操作順序作10倍遞增稀釋液，如此每遞增稀釋一次，即換用另一支1ml滅菌吸管。     4、根據對檢樣污染情況的估計，選擇23個適宜稀釋度，分別在作10倍遞增稀釋的同時，即以吸取該稀釋度的稀釋液1ml于滅菌平皿內，每個稀釋度做2個平皿。  &

15、#160;  5、用1ml生理鹽水作空白對照試驗，做2個平皿。      注意：    吸管尖端不要觸及瓶口或試管口外部，也不得觸及管內稀釋液。    吸管插入檢樣液內取樣稀釋時，插入深度要達2.5cm以上,調整時應使管尖與容器內壁緊貼。    進行稀釋時，應使吸管內的液體沿管壁小心流加入，以免增加檢液。    每遞增稀釋一次，即換用一支1ml滅菌吸管。（三）、倒平板    稀

16、釋液移入平皿后，應及時將涼至46的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（放置于46水浴保溫）傾注入平皿約15ml，并轉動平皿使混合均勻。     注意：    培養(yǎng)基不能觸及平皿口邊沿，加入培養(yǎng)基后可正反兩個方向旋轉，但不可用力過度，以免濺起觸及上蓋。    檢樣從開始稀釋到傾注最后一個平皿，所用時間不宜超過20min。（四）、培養(yǎng)    待瓊脂凝固后，翻轉平皿，置36±1溫箱內培養(yǎng)24h后取出，立即計算平皿內菌落數目，乘以稀釋倍數，即得每克（每毫升）樣品所含菌落總數。

17、0;      注意：    （1） 瓊脂凝固后，就立即將平板放入培養(yǎng)箱內進行培養(yǎng)，以免細菌蔓延生長。    （2） 如果把不能立即計數，要將平板放入04冰箱中，但不能超過24 h。    不同產品菌落總數測定的培養(yǎng)時間：    肉、乳、蛋及制品：            

18、;        37培養(yǎng) 48h    水產品：                              30培養(yǎng) 48h：    清涼飲料、調味品、糕點、果脯、酒類等：37培

19、養(yǎng) 24h五、思考題  1、食品檢驗為什么要測定細菌菌落總數？    2、食品中檢出的菌落總數是否代表該食品上的所有細菌數？為什么？    3、為什么營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基在使用前要保持地（46±1）的溫度？4、培養(yǎng)時為什么要把培養(yǎng)皿倒置培養(yǎng)？實驗三 鮮肉中大腸菌群的測定    一、目的要求    1、了解大腸菌群在食品衛(wèi)生檢驗中的意義。    2、學習并掌握大腸菌群檢驗的原理和方法。二、實驗原理  &#

20、160;  大腸菌群系指一群能發(fā)酵乳糖，產酸產氣，需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。一般認為該菌群細菌可包括：大腸埃希氏菌、檸檬酸桿菌、產氣克雷白氏菌和陰溝腸桿菌等。該菌主要來源于人畜糞便，故以此作為糞便污染指標來評價食品的衛(wèi)生質量，具有廣泛的衛(wèi)生學意義。它反映了食品是否被糞便污染，同時間接地指出食品是否有腸道致病菌污染的可能性。     食品中大腸菌群數系以每100g（或ml）檢樣內大腸菌群最近似數（the most probable number-簡稱MPN）表示。三、實驗儀器與材料顯微鏡、恒溫箱、水浴鍋、

21、天平、可調式電爐、試管、吸管、三角平等；乳糖膽鹽發(fā)酵管、伊紅美藍瓊脂、乳糖發(fā)酵管、革蘭氏染色液、生理鹽水、鮮肉等四、方法與步驟程序：樣品處理及初發(fā)酵接種EMB平板分離乳糖發(fā)酵（證實試驗）接種、鏡檢、靛基質試驗觀察乳糖發(fā)酵結果（一）樣品處理及初發(fā)酵接種：1、樣品處理與稀釋（無菌操作）    樣品：鮮肉     （1） 先將鮮肉進行表面消毒處理，即沸水內燙3-5秒或燒灼消毒。再用無菌剪刀剪取深層肌肉25克，放于含有225ml滅菌生理鹽水的玻璃瓶內（內置玻璃珠），經搖床以8000-10000r/min的轉速處理 1min做成1:10的均勻稀釋液。&#

22、160; （2） 取一支1ml滅菌吸管吸取1:10稀釋液1ml，注入含有9ml滅菌生理鹽水的試管內，振搖試管使其充分混合均勻，做成1:100的稀釋液（3）按上法進行操作依次做成10倍遞增稀釋液。2、乳糖初發(fā)酵試驗（無菌操作）根據食品衛(wèi)生標準要求或對檢樣污染情況的估計，選擇三個稀釋度，每個稀釋度接種三管。     （1）用1ml移液管吸取稀釋液1ml分別注入單料乳糖膽鹽發(fā)酵管中，每個稀釋度接種3支，共接種9支。   （2）放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)：    將接種后的乳糖膽鹽發(fā)酵管置36&

23、#177;1溫箱內，培養(yǎng)24±2h，如所有乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產酸不產氣，則可報告為大腸菌群陰性；如有產酸產氣者（培養(yǎng)液由紫藍色變成黃色并有氣泡），則按下列程序進行試驗。（二）EMB平板分離    將產氣的發(fā)酵管分別轉種在EMB瓊脂平板上（一管對一個平板），置36±1溫箱內，培養(yǎng)1824h，然后取出，觀察菌落形態(tài)，并挑取可疑菌落做：革蘭氏染色和證實試驗。    在EMB平板上的典型菌落：呈紫黑色，圓形，邊緣整齊，表面光滑濕潤，常有金屬光澤。由于藥物影響，亦呈現紫色、粉紫、中心灰紫、無黑心、濕潤等，常為大腸桿菌，均應注

24、意挑選。（三）乳糖復發(fā)酵（證實試驗）接種、鏡檢、靛基質試驗1、乳糖發(fā)酵接種從EMB平板上，挑取可疑大腸菌群菌落12個同時接種乳糖發(fā)酵管，置36±1溫箱內培養(yǎng)24±2h，觀察產氣情況。2、進行鏡檢    從EMB平板上，挑取可疑大腸菌群菌落12個進行革蘭氏染色。大腸菌群菌：革蘭氏染色陰性無芽胞短桿菌。3、進行靛基質試驗    向培養(yǎng)后的蛋白胨水中沿管壁加入靛基質試劑（歐波試劑）0.5mL，靜置片刻，觀察液面。陽性反應者，液面呈玫瑰紅色；陰性反應液面呈試劑本色。則證實為糞大腸菌群陽性。（四）觀察乳糖發(fā)酵結果及器材的消毒

25、和清洗1、觀察乳糖發(fā)酵結果    觀察：乳糖發(fā)酵管內是否有氣體產生    凡乳糖管產氣、革蘭氏染色為陰性的無芽胞桿菌，即可報告為大腸菌群陽性。2、查表報告結果根據證實為大腸菌群陽性的管數，查MPN檢索表，報告每100mL(g)大腸菌群的MPN值。根據證實為糞大腸菌群的陽性管數，查MPN檢索表，報告每100mL(g)糞大腸菌群的MPN值。五、思考題           1、大腸菌群檢驗中為什么首先要用乳糖膽鹽發(fā)酵管？  

26、0; 2、為什么大腸菌群的檢驗要經過復發(fā)酵才能證實？    3、復發(fā)酵時為什么使用乳糖發(fā)酵管但不需要加膽鹽？4、所有發(fā)酵管均為陰性反應時，檢驗結果可否報告為“零”？實驗四 鮮蛋蛋液中志賀氏菌及其檢驗一、目的要求1、了解志賀氏菌生物學特性及原理2、掌握志賀氏菌檢驗方法二、實驗原理志賀氏菌屬（Shigella）的細菌是細菌性痢疾的病原菌，通稱痢疾桿菌。臨床上能引起痢疾癥狀的病原生物很多，有志賀氏菌、沙門氏菌、變形桿菌、大腸桿菌等，還有阿米巴原蟲、鞭毛蟲、以及病毒等均可引起人類痢疾，其中以志賀氏菌引起的細菌性痢疾最為常見。人類對痢疾桿菌有很高的易感性。在幼兒可引起急性中

27、毒性菌痢，死亡率甚高。所以在食物和飲用水的衛(wèi)生檢驗時，常以是否含有志賀氏作為指標。志賀氏菌屬細菌的形態(tài)與一般腸道桿菌無明顯區(qū)別，為革蘭氏陰性桿菌，長約2-3 m ,寬0.5-0.7 m 。不形成芽胞，無莢膜，無鞭毛，不運動，有菌毛。志賀氏菌屬的主要鑒別特征為：無鞭毛，不運動，對各種糖的利用能力較差，并且在含糖的培養(yǎng)基內一般不產生氣體。志賀氏菌的進一步分群分型有賴于血清學試驗。三、實驗儀器與材料1、恒溫箱、水浴鍋、天平、可調式電爐、試管、吸管、三角瓶2、GN增菌液、EMB培養(yǎng)基、SS瓊脂、三糖鐵斜面、葡萄糖半固體培養(yǎng)蛋白胨水、5%乳糖發(fā)酵管、甘露醇發(fā)酵管、棉子糖發(fā)酵管、甘油發(fā)酵管、兔血漿、多價血

28、清和26種因子血清四、操作步驟1、樣品處理無菌操作稱取檢樣25g，加入裝有225mLGN增菌液的500mL廣口瓶內，固體食品用均質器以8000-10000r/min打碎1min，或用乳缽加滅菌砂磨碎，粉狀食品用金屬匙或玻璃棒研磨使其乳化。2、增菌培養(yǎng)放于36培養(yǎng)68h。培養(yǎng)時間視細菌生長情況而定，當培養(yǎng)液出現輕微混濁時即應中止培養(yǎng)。3、接種選擇性平板及培養(yǎng)取增菌液1環(huán)，劃線接種于HE瓊脂平板或SS瓊脂平板1個；另取1環(huán)劃線接種于麥康凱瓊脂平板和EMB（伊紅美藍）瓊脂平板各1個。放于36培養(yǎng)1824h。結果：志賀氏菌在這些培養(yǎng)基上呈現無色透明不發(fā)酵乳糖的菌落4、接種三糖鐵瓊脂和葡萄糖半固體培養(yǎng)基

29、從SS、EMB瓊脂平板、挑取平板上的可疑菌落，接種三糖鐵瓊脂和葡萄糖半固體各1管。一般應多挑幾個菌落，以防遺漏。經36培養(yǎng)1824h，分別觀察結果。結果：乳糖、蔗糖不發(fā)酵，葡萄糖產酸不產氣(福氏志賀氏菌6型可產生少量氣體)，無動力可以棄去的培養(yǎng)物：（1）在三糖鐵瓊脂斜面上呈蔓延生長的培養(yǎng)物；（2）在1824h內發(fā)酵乳糖、蔗糖的培養(yǎng)物；（3）不分解葡萄糖和只生長在半固體表面的培養(yǎng)物；（4）產氣的培養(yǎng)物；（5）有動力的培養(yǎng)物；（6）產生硫化氫的培養(yǎng)物。5、血清學分型和進一步的生化試驗凡是乳糖、蔗糖不發(fā)酵，葡萄糖產酸不產氣(福氏志賀氏菌6型可產生少量氣體)，無動力的菌株，可做血清學分型和進一步的生化

30、試驗。血清學分型鑒定：從三糖鐵瓊脂上挑取培養(yǎng)物，做玻片凝集試驗。（1）先用4種志賀氏菌多價血清檢查，如果由于K抗原的存在而不出現凝集，應將菌液煮沸后再檢查；（2）如果呈現凝集，則用A1、A2、B群多價和D群血清分別試驗。（3）如系B群福氏志賀氏菌，則用群和型因子血清分別檢查。福氏志賀氏菌各型和亞型的型和群抗原見表1?？上扔萌阂蜃友鍣z查，再根據群因子血清出現凝集的結果，依次選用型因子血清檢查。第4步、4種志賀氏菌多價血清不凝集的菌株，可用鮑氏多價1、2、3分別檢查，并進一步用115各型因子血清檢查。如果鮑氏多價血清不凝集，可用痢疾志賀氏菌312型多價血清及各型因子血清檢查。進一步的生化試驗已判

31、定為志賀氏菌屬的培養(yǎng)物，應進一步做5%乳糖發(fā)酵、甘露醇、棉子糖、甘油的發(fā)酵、靛基質試驗。（1）接種生化培養(yǎng)基從三糖鐵瓊脂上挑取培養(yǎng)物上,拌種到：5%乳糖、甘露醇、棉子糖、甘油、靛基質培養(yǎng)基中（2）觀察試驗結果志賀氏菌屬4個生化群的培養(yǎng)物，應符合該群的生化特性。但福氏6型的生化特性與A群或C群相似。 志賀氏菌屬四個群的生化特性生化群5%乳糖發(fā)酵甘露醇棉子糖甘油靛基質A群：痢疾志賀氏菌（）B群：福氏志賀氏菌（）C群：鮑氏志賀氏菌（）D群：宋內氏志賀氏菌+/（+）d注：陽性；陰性；多數陰性,小數陽性;；（）遲緩發(fā)酵；d有不同生化型結果報告：綜合生化和血清學的試驗結果判定菌型并作出報告 五、思考題1、

32、志賀氏菌在三糖鐵培養(yǎng)基上的反應結果如何？解釋這些現象？2、志賀氏菌檢驗有哪5個基本步驟？實驗五 午餐牛肉罐頭中金黃葡萄球菌的檢驗一、目的要求：了解金黃葡萄球菌的生物學特性掌握金黃葡萄球菌檢驗原理和檢驗方法二、實驗原理：金黃葡萄球菌耐鹽性強，在100-150g/L氯化鈉培養(yǎng)基中能生長，適宜生長的鹽濃度為5-7.5%，可以利用這個特性對金黃葡萄球菌增菌，抑制雜菌。金黃葡萄球菌可產生溶血素，在血平板上生長，菌落周圍有透明的溶血環(huán)；可產生卵磷脂酶，分解卵磷脂產生甘油脂和可溶性磷酸膽堿，所以在baird-parker(含卵黃和亞碲酸鉀)平板上生長，菌落為黑色，周圍有一渾濁帶,在其外層有一透明圈，利用此特

33、性可分離金黃葡萄球菌；金黃葡萄球還可產生凝固酶，酶可使血漿中的可溶性纖維蛋白原變成不溶解的纖維蛋白，使血漿凝固，這是鑒定致病性金黃葡萄球菌的重要指標，是否是致病的金黃葡萄球菌主要看它是否產生凝固酶。三、實驗試劑及器材：1、培養(yǎng)基與試劑：胰酪胨大豆肉湯；75個/L氯化鈉肉湯；血瓊脂平板；baird-parker平板；肉浸液肉湯；滅菌鹽水；兔血漿2、器具及其他用品顯微鏡；恒溫箱；離心機；滅菌吸管；滅菌試管；均質器；載玻片；L型涂棒；酒精燈；接種環(huán)等四、實驗內容1、檢樣處理與增菌培養(yǎng)稱取25g固體樣品；吸取25mL液體樣品，加入225mL滅菌生理鹽水，固體樣品研磨或置均質器中制成混懸液。吸取5mL上

34、述混懸液，接種于7.5%氯化鈉肉湯或胰酪胨豆肉湯50mL培養(yǎng)基內，置36±1溫箱培養(yǎng)24h。在肉湯中呈混濁生長，在胰酪陳大豆肉湯內有時液體澄清，菌量多時呈混濁生長2、平板分離用接種環(huán)將增菌液劃線接種于血平板和baird-parker平板，（36±1）培養(yǎng)24h，結果：血平板：菌落成金黃色，大而突起，圓形，不透明，表面光滑，周圍有透明溶血圈（型） BairdParker平板： 圓形、光滑凸起、濕潤、直徑為2-3mm，顏色呈灰色到黑色，邊緣為淡色，周圍為一混濁帶，在其外層有一透明圈。用接種針接觸菌落似有奶油樹膠的硬度。3、革蘭氏染色鏡檢及血漿凝固酶試驗挑取金黃色葡萄球菌可疑菌落

35、進行革蘭氏染色。結果：為革蘭氏陽性球菌，排列是葡萄球狀，無芽胞，無莢膜，致病性葡萄球菌菌體較小，直徑約為0.5-1m如發(fā)現葡萄球菌,再做血漿凝固E試驗吸取14新鮮兔血漿0.5mL，放入于8mm×100mm試管內 ，再加入培養(yǎng)24h的金黃色葡萄球菌肉浸液肉湯培養(yǎng)物0.5mL，振蕩搖勻，放36±1溫箱或水浴內，每半小時觀察一次，觀察6h，如呈現凝固，即將試管傾斜或倒置時，呈現凝塊者，被認為陽性結果。同時以已知陽性和陰性葡萄球菌株及肉湯作為對照4、結果報告（1）初步報告：根據血平板培養(yǎng)計數和鏡檢，如發(fā)現有G+葡萄串狀球菌存在，且有溶血性，則初步報告為：“有金黃色葡萄球菌存在，1g

36、樣品約含多少?！?（2）結果報告：根據培養(yǎng)特性、鏡檢、生化試驗、動物試驗結果，可報告為：“是否是致病性葡萄球菌” .五、思考題1、金黃色葡萄球菌在B-P平板上的菌落特征如何，說明其原理。2、金黃色葡萄球菌在血平板上的菌落特征如何，說明其原理。3、確認葡萄球菌為金黃色葡萄球菌的依據至少應包括哪幾個試驗？ 4、金黃色葡萄球菌的形態(tài)與染色、培養(yǎng)特征如何？實驗六 霉菌和酵母菌的檢驗    （9課時）  一、目的要求    1、掌握測定霉菌和酵母菌的方法和技能    2、熟練無菌操作技術。二、實驗原理霉菌

37、和酵母可造成食品腐敗變質。有些霉菌的有毒代謝產物能引起急性和慢性中毒，特別是有些霉菌毒素具有強烈的致癌性。一次大量食入或長期少量食入，均能誘發(fā)癌癥。目前已知的產毒霉菌如青霉、曲霉和鐮刀菌在自然界中分布較廣，對食品的侵染機會較多。因此霉菌和酵母也作為評價食品衛(wèi)生質量的指示菌，并以霉菌和酵母計數來制定食品被污染的程度。目前已有若干個國家制訂了某些食品的霉菌和酵母限量標準。我國已制訂了一些食品中霉菌和酵母的限量標準。三、實驗儀器與材料恒溫箱、水浴鍋、天平、可調式電爐、試管、吸管、三角平等高鹽察氏培養(yǎng)基 生理鹽水、樣品（醬油、乳粉）四、方法步驟（一）基本操作過程：   

38、樣品稱量樣品的稀釋傾注平皿培養(yǎng)5天計數報告。（二）樣品的稀釋（樣品的處理）    樣品：糕點、果脯、糖果類，或糧食類    外包裝消毒無菌稱取樣品25g加無菌水加蓋振蕩、吹吸均勻    糕點：如為原包裝，用滅菌鑷子夾下包裝紙，采取外部及中心部位。如為帶餡糕點，取外皮及內餡25g,奶花糕點，采取奶花及糕點部分各一半共25g。    果脯：采取不同部位稱取25g檢樣，加入滅菌水225mL，制成混懸液。     糖果：用滅菌鑷子夾取包裝紙,稱取數塊共25g，加入預溫至45的滅菌水225mL，待溶化后檢驗。    1、用75%酒精棉球擦拭消毒袋口，以無菌操作開封取樣。稱取檢樣