甜蕎麥葉總黃酮降糖、降脂作用及機(jī)制

1、甜蕎麥葉總黃酮降糖、降脂作用及機(jī)制    作者：劉淑梅 韓淑英 崔國(guó)金 朱麗莎 呂華    【關(guān)鍵詞】 蕎麥葉總黃酮 Effects and mechanism of total flavones of buckwheat leaf in lowering serum glucose and lipid 【Abstract】 AIM: To study the effects and mechanism of total flavones of buckwheat leaf (TFBL) in lowering s

2、erum glucose, lipid and antilipid peroxidation in diabetic and hyperlipidemia rats. METHODS: The diabetic and hyperlipid model of rats were established by streptozotocin and high lipid feed. The levels of serum glucose, TC, TG, insulin, MDA, SOD and insulin receptor of liver were detected after TFBL

3、 was administered orally with the dose of 0.2, 0.4 and 0.8 gkg-1 for 12 wk. RESULTS: TFBL obviously decreased the serum glucose, TG and LDLc (P<0.01), increased HDLc (P<0.01), enhanced both the insulin sensitivity index and the combination of insulin with receptor, and improved the glucose tol

4、erance. TFBL also obviously lowered the content of MDA (P<0.01) and improved the SOD activity in blood. CONCLUSION: TFBL has the effects of reducing serum glucose, lipid, MDA, antilipid peroxidation and increasing the insulin receptor quantity and/or sensitivity. 【Keywords】 total flavones of buck

5、wheat leaf; diabetic; hyperlipidemia; serum glucose; serum lipid; lipid peroxides 【摘要】 目的: 研究蕎麥葉總黃酮（TFBL）對(duì)實(shí)驗(yàn)性糖尿病高脂血癥大鼠的降血糖、血脂作用及其機(jī)制. 方法: 用鏈脲佐菌素和高脂飼料誘發(fā)大鼠糖尿病和高脂血癥，以TFBL口服治療12 wk，劑量分別為0.2, 0.4和0.8 gkg-1. 實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)檢測(cè)空腹血糖（FBG）、糖耐量(OGTT), TC, TG, LDLC, HDLC, 胰島素（INS）、血清和肝組織脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶(SOD)及肝細(xì)胞膜胰島素

6、受體結(jié)合力. 結(jié)果: TFBL能降低血中FBG， TG， LDLC（P<0.01），升高HDLC（P<0.01），改善OGTT，增加胰島素敏感指數(shù)（ISI）和胰島素與受體的結(jié)合力，存在劑量依賴性. 同時(shí)TFBL能降低血清和肝組織中MDA含量（P<0.01），增加血清SOD活力. 結(jié)論: TFBL具有良好的降血糖、調(diào)血脂、增加胰島素與受體結(jié)合力和敏感性及抗脂質(zhì)過氧化作用. 【關(guān)鍵詞】 蕎麥葉總黃酮； 糖尿??； 高脂血癥；血糖；血脂；脂質(zhì)過氧化 0引言 糖尿?。―M）高脂血癥的發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)并嚴(yán)重危害人類健康. 因此，研究和開發(fā)防治DM及并發(fā)癥的藥物越來(lái)越受到人們重視，特別

7、是從中草藥中尋找有效防治糖尿病高脂血癥及并發(fā)癥的藥物倍受人們關(guān)注. 蕎麥為蓼科本草植物, 其全草含較高的黃酮類化合物. 流行病學(xué)研究表明蕎麥產(chǎn)區(qū)人群血糖、血脂水平低于非蕎麥產(chǎn)區(qū). 國(guó)外學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)蕎麥種子提取物具有降糖、降脂、抗氧化及抑制血小板聚集等活性1,2. 蕎麥葉總黃酮(total flavones of buchwheat leaf, TFBL)主要含有蘆丁、槲皮素，但蕎麥葉總黃酮和純度明顯高于種子. 目前對(duì)蕎麥種子研究報(bào)道較多，對(duì)蕎麥葉研究鮮有報(bào)道，而用蕎麥葉總黃酮研究降糖、降血脂作用機(jī)制目前未見. 我們前期研究了蕎麥種子總黃酮具有降糖、降脂、抗氧化等活性3. 在前期工作基礎(chǔ)上，用T

8、BFL觀察了對(duì)實(shí)驗(yàn)性糖尿病高脂血癥大鼠的治療作用，探討其降血糖和調(diào)血脂的可能機(jī)制. 1材料和方法 1.1材料動(dòng)物: SD大鼠，體質(zhì)量（220±20） g，雌雄各半（北京中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所提供），合格證號(hào)為SCXK11000006. 藥品與試劑: 蕎麥葉為甜蕎麥種子收割后自然干燥的葉（來(lái)自內(nèi)蒙古庫(kù)倫旗），用10倍量的700 mLL-1乙醇回流提取3次，合并提取液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器回收乙醇并濃縮原液量的1/2，提取液趁熱過濾去除不容性沉淀，加分離劑冷卻析出淡黃色結(jié)晶，離心，沉淀物經(jīng)70烤干即為TFBL（經(jīng)中國(guó)科學(xué)院藥物研究所鑒定為黃酮類，總黃酮含量為98 gL-1）. 鏈脲佐菌素、

9、四乙氧基丙烷和硫代巴比妥酸（Sigma公司），格列苯脲（HB419,蘇州長(zhǎng)征制藥廠），膽固醇（進(jìn)口，廣州化學(xué)試劑分公司分裝），膽酸鈉（進(jìn)口，上?；瘜W(xué)試劑站分裝），血糖和血脂試劑（寶靈曼公司），SOD和MDA試劑（南京建成生物研究所）. 胰島素放免試劑盒和同位素標(biāo)記胰島素（為北京北方生物技術(shù)研究所提供），其他試劑為國(guó)產(chǎn)分析純. 儀器: FT630G型微機(jī)多探頭放免儀（北京核儀器廠），TGL16型冷凍低溫離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠），日立7150全自動(dòng)生化分析儀（日本），722型分光光度儀（北京）. 日立850熒光分光光度儀（日本）. 1.2方法 1.2.1大鼠糖尿病高脂血癥模型4大鼠60只，按體

10、質(zhì)量隨機(jī)分6組，每組10只. 組為正常對(duì)照組：喂基礎(chǔ)飼料. 組為糖尿病高脂模型組，方法為大鼠均禁食16 h，腹腔注射鏈脲佐菌素50 mgkg-1，1 wk后以同樣方法再注射1次，同時(shí)喂高脂飼料（組成質(zhì)量分?jǐn)?shù)：81%基礎(chǔ)飼料，2%膽固醇，10%豬油，5%蛋黃，0.5%膽酸鈉，0.1%丙硫氧嘧啶，2%氯化鈉），組為實(shí)驗(yàn)對(duì)照組. 為TFBL治療組（，），分別灌胃0.2, 0.4和0.8 gkg-1. 為陽(yáng)性對(duì)照藥HB419組，給藥量為灌胃0.001 gkg-1. 和組同時(shí)灌胃等容積常用水,上述各組均每日給藥1次，連續(xù)12 wk. 1.2.2檢測(cè)指標(biāo)末次給藥后禁食12 h，取尾靜脈血測(cè)空腹血糖（葡萄糖

11、氧化酶法）. 用口服葡萄糖測(cè)OGTT：灌胃葡萄糖1.5 gkg-1后，0, 30, 60和120 min各尾靜脈取血測(cè)血糖值，以O(shè)GTT（曲線下面積）表示（灌胃葡萄糖后血糖時(shí)間曲線下面積）. 再6 h后乙醚麻醉，頸動(dòng)脈取血，分離血清. 按試劑盒要求測(cè)定TC，TG，HDLC，LDLC，INS，MDA和SOD. 按公式AI=(TC-HDL-C)/HDL-C計(jì)算動(dòng)脈粥樣硬化指數(shù)（AI）3，以Ln(INS.GBF)表示INS敏感指數(shù)(ISI). 取血后迅速取肝臟，以四乙氧基丙烷為標(biāo)準(zhǔn)，按參考文獻(xiàn)3測(cè)定MDA和SOD. 用放免法按文獻(xiàn)5方法測(cè)定肝細(xì)胞膜胰島素受體，以Bq值表示胰島素與膜受體的結(jié)合力.&#

12、160;   統(tǒng)計(jì)學(xué)處理： 用計(jì)算機(jī)Instat軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)，結(jié)果以x±s表示. 2結(jié)果    21TFBL對(duì)糖尿病高脂血癥大鼠血糖和胰島素的影響實(shí)驗(yàn)對(duì)照組血糖和胰島素明顯高于正常對(duì)照組(P<0.01, Tab 1)，說明已形成糖尿病，類似型糖尿病. TFBL具有劑量依賴性地降低血糖，具有劑量依賴性，高劑量組與陽(yáng)性對(duì)照藥HB419相近. TFBL對(duì)胰島素有降低趨勢(shì)，雖無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但能明顯增加ISI及INS與細(xì)胞膜胰島素受體結(jié)合力，與正常對(duì)照組接近. 表1蕎麥葉總黃酮對(duì)糖尿病大鼠空腹血糖、胰島素和INSR的

13、影響(略) 2.2TFBL對(duì)糖尿病高脂血癥大鼠OGTT的影響實(shí)驗(yàn)組OGTT各點(diǎn)血糖值均較正常對(duì)照組高，而TFBL各治療組各點(diǎn)血糖值較實(shí)驗(yàn)對(duì)照組明顯降低，OGTT面積減小（P<0.01），隨著劑量的增加OGTT改善更明顯（Tab 2）. 表2蕎麥葉總黃酮對(duì)糖尿病大鼠耐糖量的影響(略) 2.3FBFL對(duì)糖尿病高脂血癥大鼠血脂的影響各劑量TFBL均能明顯抑制糖尿病高脂血癥大鼠血清脂蛋白的失調(diào)，降低TG，LDLC和AI，特別是降低LDLC更明顯（P<0.01），同時(shí)能升高HDLC， 但對(duì)TC的影響不明顯（Tab 3）. 表3蕎麥葉總黃酮對(duì)糖尿病大鼠血脂的影響(略) 2.4TFBL對(duì)糖尿病高

14、脂血癥大鼠MDA和SOD的影響TFBL能明顯降血清和肝組織中MDA含量，特別對(duì)血清MDA降低作用更明顯（P<0.01）. 中、高劑量TFBL能明顯升高（P<0.01）血清中SOD活性，而對(duì)肝組織SOD活性有升高傾向，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Tab 4）. 表4蕎麥葉總黃酮對(duì)糖尿病大鼠MDA和SOD的影響(略) 3討論 研究表明，糖尿病患者特別是型糖尿病大多數(shù)同時(shí)伴有血脂升高，而高血糖、高血脂與心腦血管危險(xiǎn)性緊密相關(guān)，因此，嚴(yán)格控制血糖的升高、調(diào)控血脂代謝紊亂極為重要. 本實(shí)驗(yàn)用小劑量鏈脲佐菌素和高脂飼料造成血糖、血脂和血清胰島素明顯升高，胰島素受體結(jié)合力明顯降低，表明該模型具有胰島素抵抗.

15、 而用不同劑量TFBL治療后大鼠血糖、血脂水平有不同程度的降低，明顯改善糖耐量，并有劑量依賴性，而對(duì)血清胰島素影響不大. 進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)TFBL能使胰島素受體結(jié)合力和ISI明顯升高，說明TFBL降血糖機(jī)制是通過增加胰島素受體數(shù)量或(和)提高胰島素與受體結(jié)合的敏感性，促進(jìn)組織攝取葡萄糖等受體后效應(yīng)而產(chǎn)生降糖作用的. TFBL對(duì)血脂的影響表現(xiàn)在降低TG，LDL和AI，同時(shí)升高HDL，特別是降低TG和LDL更顯著，表明TFBL具有較強(qiáng)的調(diào)節(jié)血脂代謝的作用. 近年來(lái)研究表明，糖尿病動(dòng)物模型及臨床糖尿病患者均存在著自由基代謝紊亂、MDA升高、SOD降低. 本研究中糖尿病高脂血癥大鼠也存在血清和肝組織中M

16、DA含量明顯升高，血清SOD活性明顯降低. TFBL不僅顯著減少血清和肝組織MDA含量，也顯著提高血清SOD活性，對(duì)肝組織SOD活性無(wú)明顯影響. 黃酮類化合物廣泛存在自然植物中，有多種生物活性6，近年來(lái)國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)其頗為重視. 蕎麥葉含多種黃酮類物質(zhì)，主要有蕓香甙（蘆?。?、槲皮素等. TFBL改善了自由基代謝，減少了組織和血中自由基對(duì)脂蛋白的不飽和脂肪酸殘基的攻擊，減輕了脂質(zhì)過氧化程度，因而降低了自由基在糖尿病高脂血癥的發(fā)生發(fā)展過程中所起的破壞作用，這可能是蘆丁和槲皮素發(fā)揮了重要作用. 【參考文獻(xiàn)】 1 Watanade M, Sato A, Osawa R, Terao J. Anticxi

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18、SY, Lü H, Zhu LS, Liu SM, Ja XR, La WY, Liang YP. Effect of total flavones of buckwheat seed on lowering serum lipid, glucose and antilipid peroxidation. J. Zhongguo Yaolixue Tongbao (Chin Pharmacol Bull), 2001;17(6): 694-696. 4 Wang YY, Mao L, Mo QZ. Model of experimental NIDDM rat J. Zhonghua Neifenmi Daixue Zazhi (Chin J Endocrinol Metab), 1990；6（2）：115-116. 5 Zhang JT. Modern experimental methods in pharmacology M. Beijing: United publisher of Beijing of Medical science University and China Xiehe Me