新城疫病毒合用中藥黃芪誘生內(nèi)源性干擾素的研究

1、新城疫病毒合用中藥黃芪誘生內(nèi)源性干擾素的研究         08-11-03 14:01:00     作者：沈富兵     編輯：studa20【摘要】  目的 研究新城疫病毒（NDV）合用中藥黃芪在小鼠體內(nèi)誘生內(nèi)源性干擾素-及對(duì)小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用。方法 實(shí)驗(yàn)分3部分，實(shí)驗(yàn)1：分別以NDV、黃芪及二者合用予小鼠口腔噴灑給藥，連續(xù)10日后以ELISA法測(cè)定小鼠唾液中干擾素-和SIgA的含量；實(shí)驗(yàn)2：分別以NDV、黃芪及二者合

2、用予小鼠腹腔注射給藥（黃芪灌胃方式給藥），ELISA法測(cè)定給藥10日后血清干擾素-的含量；實(shí)驗(yàn)3：分為NDV、黃芪及二者合用的高、中、低三種劑量，給藥方法同第二組，6天后MTT法測(cè)定脾臟NK細(xì)胞的活性。每組分別設(shè)置陰性對(duì)照。結(jié)果 NDV和黃芪口腔給藥能升高小鼠唾液干擾素-（35.54±10.20 IU/ml,5.69±1.35 IU/ml）和SIgA含量（68.88±15.47 ng/ml,44.32±9.87 ng/ml），腹腔給藥能誘生血清干擾素-（120.54±29.21 IU/ml,10.69±6.35 IU/ml），并能激活

3、NK細(xì)胞活性(50.4,32.1)。NDV合用黃芪組的誘生效果遠(yuǎn)高于單獨(dú)使用組（98.55±16.95IU/ml,101.31±27.59ng/ml,262.55±26.91IU/ml,75.6%），顯示出較強(qiáng)的協(xié)同作用。結(jié)論 NDV合用黃芪能誘生小鼠內(nèi)源性干擾素，并能發(fā)揮對(duì)小鼠SIgA和NK細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用。 【關(guān)鍵詞】  新城疫病毒NDV 芪 內(nèi)源性干擾素- SIgA NK細(xì)胞    Abstract：Objective To study the induction of endogenous interferon-(

4、IFN-) and immunological regulation of Newcastle Disease Virus(NDV)and Milkvetch Root(MR)combinating administrated in mice.Methods There were 3 parts.Part 1:the IFN- and SIgA concentration in saliva were detected by ELISA after NDV and MR were sprinkled in mouse oral cavity for 10 days.Part 2:the lev

5、el of IFN- in serum were detected but the drug were intraperitoneal administrated.Part 3:the activity of NK cell in spleen were measured by MTT method after the same treatment as group 2 for 6 days.Results The concentration of IFN-(35.54±10.20 IU/ml,5.69±1.35 IU/ml)and content of SIgA（68.8

6、8±15.47 ng/ml,44.32±9.87 ng/ml）in saliva had been promoted after NDV and MR administrated in oral cavity,and the serum level of IFN-（120.54±29.21 IU/ml,10.69±6.35 IU/ml）had been induced and spleen NK cell(50.4,32.1)had been activated after it administrated in abdominal cavity.Whe

7、n NDV and MR combinating administrated,they synergistically enhanced the production of endogenous IFN- and stimulated the immunological regulation, the detected data(98.55±16.95 IU/ml,101.31±27.59 ng/m,262.55±26.91 IU/ml,75.6%)were more higher than they were separated used(P0.05).Conc

8、lusion NDV combinated with MR used in mice showed a strong IFN- inducing capacity,and then it could contributed the immunoregulation action on sIgA and NK cell.    Key words:Newcastle Disease Virus(NDV)；Milkvetch Root(MR)；endogenous IFN-；SIgA； NK cell    干擾素是一類(lèi)在同種細(xì)胞上具有廣

9、譜抗病毒活性的細(xì)胞因子，除具有廣譜抗病毒作用外，還有免疫調(diào)節(jié)、抗病毒、抗腫瘤作用。臨床使用的干擾素多為基因工程產(chǎn)品，工藝復(fù)雜，價(jià)格昂貴，且副作用多，易產(chǎn)生自身抗體，療效也越來(lái)越差1。使用誘導(dǎo)劑誘生機(jī)體產(chǎn)生內(nèi)源性干擾素替代重組干擾素用于病毒性疾病的治療是一種值得推薦的選擇，因?yàn)檎T導(dǎo)劑價(jià)廉，效果穩(wěn)定，副作用小。干擾素誘生劑的研究已有很多年，一些誘生劑藥物也已用于臨床。本實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑谟诳疾煨鲁且卟《韭?lián)用黃芪誘生小鼠內(nèi)源性干擾素-的能力，并觀察其對(duì)小鼠口腔粘膜SIgA和脾臟NK細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用，以提供一種新的干擾素誘生方式。    1  材料與方法 &

10、#160;  1.1  實(shí)驗(yàn)藥品    新城疫病毒（NDV）Lasota株：購(gòu)自中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)研究所，在10日齡雞胚尿囊腔傳代，接種后72 h收獲尿囊液，以雞紅細(xì)胞在血凝板上檢測(cè)，終效價(jià)為1 280血凝單位（HAU）。黃芪（黃芪甲甙，西安鴻生生物技術(shù)有限公司出品）。     1.2  試劑與儀器    0.01%匹羅卡品注射液購(gòu)自成都市第一人民醫(yī)院；羊抗鼠IgA抗體,生物素標(biāo)記羊抗鼠IgA抗體,親和素-酶及小鼠IgA標(biāo)準(zhǔn)品均購(gòu)自美國(guó)Sigma公司；Yac

11、-1細(xì)胞為四川大學(xué)華西醫(yī)學(xué)中心免疫室傳代培養(yǎng)的細(xì)胞株；小鼠干擾素-定量檢測(cè)試劑盒購(gòu)自北京博奧森科技發(fā)展有限公司。酶標(biāo)儀（BIO-RAD680）；洗板機(jī)（BIO-RAD 1575）；超凈臺(tái)（ESCO公司產(chǎn)品）；二氧化碳培養(yǎng)箱(JOUAA公司產(chǎn)品)；倒置顯微鏡(LEICA公司產(chǎn)品)；96孔培養(yǎng)板（NUNCTM公司產(chǎn)品）；1000 l、200 l、20 l微量加樣器（EPPENDORF產(chǎn)品）。    1.3  試驗(yàn)動(dòng)物    58周齡，雌雄各半，SPF級(jí)，由四川大學(xué)華西動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。    1.4

12、  NDV和黃芪口腔給藥誘生局部干擾素及SIgA實(shí)驗(yàn)    將32只Balb/c小鼠分為4組，分別為陰性對(duì)照組（生理鹽水NS），黃芪組（黃芪甲甙9 g/鼠），NDV組（NDV 50 HAU/鼠），復(fù)方組（NDV 50 HAU/鼠黃芪甲甙9 g/鼠），每組8只小鼠。NDV和黃芪甲甙分別用生理鹽水配制成所需劑量，以口腔噴霧方式給藥，每日上、下午各1次,連續(xù)給藥10天。    于給藥后第14天取各組小鼠唾液。方法是：0.01%匹羅卡品腹腔注射，注射量為300 l/只，3分鐘后取口腔流出的唾液，置于0.5 ml EP管中，-20中保

13、存。用小鼠干擾素-ELISA試劑盒測(cè)定各組小鼠唾液中干擾素-的含量，依說(shuō)明書(shū)中操作步驟進(jìn)行；以文獻(xiàn)2的ELISA檢測(cè)方法檢測(cè)各組小鼠唾液中SIgA含量。    1.5  NDV和黃芪腹腔給藥誘生內(nèi)源性干擾素實(shí)驗(yàn)    動(dòng)物分組同上。黃芪甲甙用生理鹽水配制成懸液狀后灌胃給藥，每日2 次；NDV液體劑腹腔注射給藥，每日1次，連續(xù)給藥10日。于給藥后14天摘眼球采血，離心（4 000 r/min），取上清。用小鼠干擾素-ELISA試劑盒測(cè)定各組小鼠血清中干擾素-的含量。    1.6  NDV和黃芪激活小鼠NK細(xì)胞實(shí)驗(yàn)