黃芩莖葉總黃酮對大鼠氣囊滑膜炎抗炎作用機制的研究

1、黃芩莖葉總黃酮對大鼠氣囊滑膜炎抗炎作用機制的研究    【摘要】  研究黃芩莖葉總黃酮的抗炎機制。方法：制作大鼠氣囊滑膜炎模型，測定各組大鼠炎性滲出物中蛋白質(zhì)總量。采用酶聯(lián)免疫分析方法，定量檢測白三烯（LTB4 ）的生成量。結(jié)果：黃芩莖葉總黃酮組可明顯抑制炎性滲出物中蛋白質(zhì)及LTB4的生成。結(jié)論：黃芩莖葉總黃酮的抗炎作用機制與抑制5?脂氧合酶活性有關(guān)。 【關(guān)鍵詞】  黃芩莖葉總黃酮 抗炎 蛋白質(zhì)總量 白三烯B4    AbstractObjective:To study the mechanism of

2、the anti?aerocyst arthromeningitis effect of total flavonoids of Baical Skullcap Stem and Leaf.Methods:Rat model of aerocyst arthromeningitis was made and the total proteins and leukotriene B4 in the rat inflammatory exudates using enzyme?linked immuno assay were determined.Results: Total flavonoids

3、 of Baical Skullcap Stem and Leaf could effectively inhibit the formation of LTB4 in polymorphonuclear leucocytes.Conclusion:Its anti?inflammatory action might be resulted from its inhibition of 5?lipoxygenase.    total flavonoids of Baical Skullcap Stem and Leaf; anti?inflammatory ac

4、tion; total protein amount;leukotriene B4    承德的野生黃芩因為質(zhì)地堅實，顏色純正，成為中藥材的優(yōu)勢產(chǎn)品。以其根入藥，中醫(yī)認為黃芩味苦性寒，入肺、心、膽、大腸經(jīng)，有清熱燥濕、瀉火解毒、安胎的功能。從黃芩莖葉中提取的黃芩莖葉總黃酮，實驗研究已經(jīng)證實它具有很強的抗炎作用1，本試驗將進一步對其抗炎機制進行探討，以期為黃芩莖葉總黃酮的開發(fā)利用提供試驗依據(jù)。    1  材料與方法    1.1  實驗動物  健康雄性Wistar大鼠，體重1

5、80200g，由沈陽醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供。    1.2  藥品與試劑  黃芩莖葉總黃酮，純度為66.78 的粉劑，由承德醫(yī)學(xué)院中藥研究所提供；LTB4大鼠檢驗試劑盒（美國ADL）；醋酸、Hank's液、乙醚、磷酸緩沖液(pH=7.4)實驗室配制。    1.3  實驗儀器  全自動酶標儀（西班牙 TRITURUS）；日立7170全自動生化分析儀；德國SIGMA高速臺式冷凍離心機。    14  實驗方法2  隨機將大鼠分成3組，對照組

6、、實驗組1（小劑量黃芩莖葉總黃酮）、實驗組2（大劑量黃芩莖葉總黃酮）。于實驗第1天在各組大鼠背部皮下注射經(jīng)過濾器過濾的空氣20ml，使大鼠背部形成氣囊，待第3天在原氣囊處再注射經(jīng)過濾器過濾的空氣20 ml，同時于當(dāng)天各組大鼠開始腹腔注射給藥，實驗組1給予黃芩莖葉總黃酮60mgkg,實驗組2給予黃芩莖葉總黃酮180mgkg，對照組給予緩沖液，連續(xù)給藥3d。實驗第6天在各組大鼠背部皮下注射經(jīng)過濾器過濾的空氣l0 ml后，再在氣囊內(nèi)注射2甲醛1.5 ml致炎。在致炎24 h后的急性炎癥期，將大鼠斷頭處死，用Hank's液1 ml灌洗氣囊，收集灌洗液，離心3 000r/min，分別收集上清液，

7、供各項指標測定。滲出液中蛋白質(zhì)測定應(yīng)用日立7170全自動生化分析儀。LTB4測定用酶免試劑盒，嚴格按照試劑盒說明書操作。    1.5  統(tǒng)計學(xué)方法  數(shù)據(jù)以均值±標準差（x±s）表示，各組比較采用方差檢驗，以P<0.05為差異有顯著性。     2  結(jié)果    滲出液中蛋白質(zhì)和LTB4測定結(jié)果見表1。表1  氣囊滑膜炎大鼠模型炎性滲出物中 炎癥物質(zhì)含量注：1)與實驗組2比較，P0.05，2）與對照組比較，P0.01 

8、  3  討論    機體損傷、感染和自身免疫性疾病等均程度不等地伴有急慢性炎癥過程，炎癥是機體清除異物和自身傷亡細胞的一種防御反應(yīng)。研究認為，在炎癥反應(yīng)遞質(zhì)中花生四烯酸(arachidonicacid,AA)的氧化旁路起著關(guān)鍵作用。這條旁路經(jīng)環(huán)氧酶和5?脂氧酶兩條途徑分別代謝產(chǎn)生的產(chǎn)物即前列腺素(PGs)、白三烯(LTs)等炎癥遞質(zhì)3。其中前列腺素E2(PGE2)可增加血管通透性，LTB4可致白細胞趨化、聚集、脫顆粒和產(chǎn)生超氧陰離子，引起和加重炎癥反應(yīng)。經(jīng)典的非甾體抗炎藥物如阿司匹林主要抑制環(huán)氧酶途徑，能有效阻斷花生四烯酸5?脂氧合酶途徑代謝

9、的抑制藥尚不多見。    本研究觀察黃芩莖葉總黃酮對大鼠氣囊滑膜炎的抗炎作用，結(jié)果表明：（1）黃芩莖葉總黃酮可降低毛細血管通透性，血管內(nèi)的蛋白質(zhì)成分向組織內(nèi)滲出減少；中性粒細胞和嗜堿性粒細胞在組織中聚集減少；組胺、緩激肽增加血管通透性的物質(zhì)減少,有利于炎癥中血管通透性恢復(fù)正常。（2）通過比較可看出，黃芩莖葉總黃酮的抗炎效果與劑量大小有關(guān)，其作用具有劑量依賴性。故黃芩莖葉總黃酮具有很強的抗炎作用。    LTB4可激活中性白細胞的多種反應(yīng)，其中包括加速炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生，并可促進中性白細胞在微血管內(nèi)皮粘著，進而滲出血管，協(xié)同其它趨化因子使炎癥反應(yīng)擴大。它在依賴中性白細胞的炎癥反應(yīng)中起著一種內(nèi)在放大器的作用，因此尋找LTB4生物合成的有效藥物受到重視，為此我們研究了黃芩莖葉總黃酮對LTB4生物合成的影響，以探討其抗炎作用機理。本實驗證明黃芩莖葉總黃酮對炎癥過程中炎性介質(zhì)LTB4的生成具有明顯的抑制作用，藥效與劑量大小相關(guān)，其作用具有劑量依賴性。由此提示此藥能有效阻斷花生四烯酸5?脂氧合酶代謝途徑，發(fā)揮其強大的抗炎作用，且隨著劑量的增大，抗炎作用亦隨之增強。這一抗炎機理有別于抑制環(huán)氧酶途徑，故黃芩莖葉總黃酮對炎癥的治療有很高的應(yīng)用價值和廣闊的開發(fā)前景。 【參考文獻】  1王瑋，吳瑩瑤，盧瑤