超聲波提取芹菜總黃酮及鑒別

1、超聲波提取芹菜總黃酮及鑒別【摘要】目的為充分利用芹菜食物資源，避免資源的浪費，探討芹菜總黃酮的提取及鑒別方法。方法采用超聲波乙醇浸提法從芹菜中提取黃酮類物質(zhì)，對所提取的黃酮類物質(zhì)進行驗證，并用分光光度法測定含量。結(jié)果測得樣品中總黃酮的含量C=0.2126 mg/ml，回收率為100.3%，其純度和產(chǎn)率均較高。結(jié)論該方法采用全物理過程，無任何污染，是提取芹菜黃酮類物質(zhì)的有效途徑。 【關鍵詞】 超聲波提取 芹菜 總黃酮 鑒別The Total Flavanone of Celery Extraction and the Identification by Ultrasonic WaveZHAO J

2、in，YOU Tingting，LIN Danying，HUANG Suoyi1.Department of Chemistry, Youjiang Medical College for Nationalities，Baise, G uangxi 533000，China；2. Medical Examines Science of 03 grades Undergraduate Student of Youjiang Medical College for Nationalities, Baise, Guangxi 533000，ChinaAbstract：ObjectiveTo make

3、 use of the resources of celery，avoid wasting and approach the extraction of total flavanone of celery.MethodsThe flavonoids were extracted by ethanol as the solvent from celery with ultrasonic wave and ethanol extraction .Using spectrophotometry to extract and check the flavanone of celery.ResultsT

4、he density of the total flavanone of celery was C=0.2126 mg/ml and the rate of recovery was 100.3 %. The outcome and the purity of the flavanone were all very high .ConclusionThis method is a purely physical process and has not any pollution. It is an ideal way to extract the flavanone of celery.Key

5、 words：Ultrasonic wave treatment; Celery; Total flavanone; Identification 芹菜Apium graveolens L屬傘形花科一年生或二年生草本植物，異名藥芹、旱芹。芹菜味辛、甘，性涼，營養(yǎng)豐富。已有研究證實，芹菜含有豐富的黃酮類化合物、多不飽和脂肪酸、礦物元素、丁基苯酞類、萜類、香豆素衍生物、葉綠素、氨基酸與維生素、膳食纖維等1，其中，黃酮類化合物主要成分為水蓼素及7-甲基水蓼素,醫(yī)學證明，這2種黃酮類化合物是治療高血壓的有效成分2。在藥理上，芹菜還具有降壓、安神、降血糖、血脂、軟化血管、增強免疫力、增進食欲和健胃等藥理

6、作用2。還可作為神經(jīng)衰弱、小便熱澀不利、月經(jīng)不調(diào)等癥的食療。芹菜中含有大量膳食纖維素，經(jīng)常食用有促進腸蠕動、防治便秘以及預防大腸癌等3。 有文獻報道芹菜中總黃酮的提取方法采用乙醇提取24，但是，這種方法的提取效率仍然較低。近年來，超聲技術應用于提取植物中的生物堿、苷類、生物活性物質(zhì)、動物組織漿的毒質(zhì)等研究已有報道5，6，表明其具有能耗低、效率高、不破壞有效成分的特點。很多研究表明，利用超聲波產(chǎn)生的強烈振動、高的加速度、強烈的空化效應、攪拌作用等，可加速植物材料中的有效成分進入溶劑，從而增加有效成分的提取率，縮短提取時間，并且還可避免高溫對提取成分的影響6。但超聲技術應用于提取芹菜中黃酮類物質(zhì)的

7、研究尚未見報道，本文報道用超聲波提取芹菜總黃酮及鑒別。1 儀器與試劑1.1 儀器KQ5200DB型數(shù)控超聲波清洗器（超聲工作頻率40kHz、昆山市超聲儀器有限公司）；UV755B紫外可見分光光度計（上海分析儀器總廠）；ZF-I型三用紫外分析儀(上海顧村光電儀器廠)；SHBIII循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長城科工貿(mào)有限公司）。1.2 試劑95%乙醇AR；亞硝酸鈉AR；硝酸鋁AR；氫氧化鈉AR；三氯化鋁AR；鹽酸AR；氨水AR；冰醋酸AR；醋酸乙酯AR；蘆丁標準品（中國藥品生物制品檢定所）；新鮮芹菜買自百色市農(nóng)貿(mào)市場。2 方法與結(jié)果2.1 總黃酮成分提取取新鮮芹菜，烘干，粉碎。稱取芹菜粉末約6 g，

8、加80 ml 95%乙醇，超聲波提取2.5 h，抽濾。濾渣再加80 ml 95 %乙醇，超聲波提取2.5 h，抽濾，合并兩次濾液，減壓回收乙醇至濾液僅剩57 ml為止，放置100 ml容量瓶中，用60%乙醇稀釋至刻度，得樣品液。2.2 測定方法依據(jù)以蘆丁為對照品測定芹菜中總黃酮的含量，加入鋁離子試劑，同時控制適宜pH值，使黃酮化合物與鋁鹽形成絡合物，在可見光區(qū)能獲得穩(wěn)定的特征吸收峰。2.3 定量實驗-總黃酮的含量測定2.3.1 波長的選擇取樣品液適量，在0.30 ml 5%亞硝酸鈉溶液存在的堿性條件下，經(jīng)硝酸鋁顯色后，以試劑為空白參比液在420700 nm波長范圍測定絡合物的吸光度，絡合物于5

9、10 nm波長處有最大吸收，故測定時選用此波長。2.3.2 標準曲線的繪制分別精密吸取蘆丁對照液（0.13 mg/ml）0.00，0.50，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00 ml于10.00 ml容量瓶中，分別加入5%亞硝酸鈉溶液0.30 ml，搖勻，靜置6 min；再加10%硝酸鋁溶液0.30 ml，搖勻，靜置6 min；再加4%氫氧化鈉溶液4.00 ml，用60%乙醇稀釋至刻度，搖勻，靜置12 min，以試劑作空白參比液，于510 nm處測定吸光度，結(jié)果見表1。表1 紫外可見分光光度計測定吸光度（略） 根據(jù)上表得回歸方程：A=3.619103+12.34C，r=0.9 99

10、9。2.3.3 提取物含量的測定精密吸取樣品液0.50 ml，置10.00 ml容量瓶，按標準曲線的制備方法測定其吸光度A=0.137，根據(jù)回歸方程：A=3.619103+12.34C，計算樣品中總黃酮的含量C=0.216 2 mg/ml。2.3.4 回收率實驗精密量取樣品液1.00 ml，加入標準蘆丁對照品1.00 ml（0.13 mg/ml），同前樣品測定方法操作測定吸光度，求出回收率為100.3% 。2.4 定性實驗-總黃酮的鑒別2.4.1 顏色反應紫外光下呈色反應：取該樣品溶液點在濾紙上，在可見光下呈灰黃色，在紫外光下呈灰褐色并有熒光斑點。 濃氨水反應：取該樣品溶液點在濾紙上，將濾紙在

11、氨水上方熏30 s，立即在紫外光下觀察，呈極明顯的黃褐色熒光斑點。 三氯化鋁反應：取樣品溶液點在濾紙上，滴加三氯化鋁乙醇溶液，吹干。在可見光下呈灰黃色，在紫外光下呈黃色熒光斑點。 乙酸鎂反應：取樣品溶液點在濾紙上，滴加1%乙酸鎂甲醇溶液，吹干，紫外光下呈黃色斑點。 鹽酸-鎂粉反應：取乙醇提取液1 ml于試管中加鎂粉，再加入濃鹽酸數(shù)滴（1次加入），在泡沫處呈紫紅色。2.4.2 紙層析取樣品溶液10 l點在濾紙上。用正丁醇醋酸水=415（體積比）為展開劑，上行展開5 h，取出晾干。噴1%氯化鋁乙醇溶液。吹干后于紫外光下，可見熒光斑點。3 討論3.1 實驗結(jié)果表明，本實驗方法工藝簡單，回收率為100

12、.3%，利用本文所提供的超聲波提取、純化方法而得到的黃酮類物質(zhì)其純度較高。超聲波可以強化乙醇浸提法，達到省時、高效、節(jié)能的目的，此方法采用全物理過程，無任何污染，是一條理想的提取黃酮類物質(zhì)的途徑，具有廣闊的應用前景。3.2 黃酮類化合物是一大類天然產(chǎn)物，廣泛存在于植物界，是許多中草藥的有效成分。在自然界中最常見的是黃酮和黃酮醇，其它包括雙氫黃（醇）、異黃酮、雙黃酮、黃烷醇、查爾酮、橙酮、花色苷及新黃酮類等7。天然來源的生物黃酮分子量小，能被人體迅速吸收，能通過血腦屏障，能進入脂肪組織，進而體現(xiàn)出如下功能：消除疲勞、保護血管、防動脈硬化、擴張毛細血管、疏通微循環(huán)、抗脂肪氧化、抗衰老、活化大腦及其

13、他臟器細胞的功能。 黃酮類化合物具有抗癌、抗腫瘤、抗心腦血管疾病、抗炎鎮(zhèn)痛、免疫調(diào)節(jié)、降血糖、治療骨質(zhì)疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗輻射等作用813。近年來，世界上掀起了植物藥開發(fā)的熱潮，植物藥以其天然低毒的特點倍受青睞，而黃酮類化合物以其廣譜的藥理作用引人矚目，芹菜分布廣泛，本文實驗結(jié)果表明，芹菜中含有黃酮。因此，芹菜具有廣泛開發(fā)和利用價值，值得綜合利用加強資源開發(fā)。【參考文獻】 1高金燕，陳紅兵. 芹菜中活性成分的研究進展J.中國食物與營養(yǎng)，2005，（7）：28.2嚴建剛，張名位，楊公明，等.芹菜黃酮的提取條件及其抗氧化活性研究J.西北農(nóng)林科技大學學報，2005，33 (1):13

14、1.3魏秀儉. 芹菜與人類健康J.中國果菜，2005，1:48.4張 桂，暢天獅. 從芹菜中提取黃酮類物質(zhì)的研究J. 食品科學，2002，23 (8):121.5劉祥義.超聲波提取元寶楓葉總黃酮方法研究J.云南化工，2003，30（1）：27.6謝明杰，宋 明，鄒翠霞，等. 超聲波提取大豆異黃酮J.大豆科學，2004，23(1):75.7夏杏洲，張 輝，魏傳晚.榕樹葉中黃酮類化合物的提取條件研究J.食品研究與開發(fā)，2002，23(5):35.8華光軍，郭 勇.黃酮類化合物藥理研究進展J.廣東藥學，1999，9（4）：9.9黃河勝，馬傳庚，陳志武.黃酮類化合物藥理作用研究進展J.中國中藥雜志，2000，