細胞房注意事項和管理

1、細胞房注意事項和管理一、 常規(guī)操作1. 穿著專用實驗服。自己的白大衣或厚外套，可脫在門外的衣帽架上。2. 穿著專用拖鞋。先在入室間換下自己的鞋子， 穿著綠色拖鞋進入緩沖間； 再在緩沖間換紅色拖鞋。盡量避免在緩沖間走動、停留。3. 細胞房最多可 4 個人同時使用。盡量避免在內(nèi)長時間逗留、交談。4 離開細胞房前，要保證不使用的儀器及時關(guān)閉并拔下插頭（離心機、水 浴鍋、日光燈），超凈臺開啟紫外燈照射 2h 后關(guān)閉。二、值日生工作職責(zé)1. 每周值日生時間從周一開始，至周日結(jié)束。2. 值日周開始時需做的事情：配制消毒用的 75%的酒精，制作酒精棉球， 給細胞房內(nèi)添加足夠的 95%工業(yè)乙醇供酒精燈使用。*

2、 75% 的酒精可用 750ml95%的酒精加去離子水至 950ml 配制而成。3. 值日周內(nèi)每天需做的事情：開大紫外燈消毒細胞房 15-30min 后才能投 入一天的使用， 晚上開啟紫外燈滅菌， 第二天及時關(guān)閉； 檢查滅菌物品的儲備情 況，以便及時補充；及時安排人員清洗回收培養(yǎng)器皿；檢查培養(yǎng)液母液、血清、 酒精等公用試劑的儲備情況； 至少每天傾倒細胞房垃圾、 換垃圾袋； 檢查培養(yǎng)箱 內(nèi)水量是否足夠。4. 值日周結(jié)束前需完成的事情： 星期五全方位打掃細胞房。 包括拖地， 擦 桌子、柜子、清潔和整理抽屜，擦超凈臺、冰箱及桌上的儀器，給水浴鍋加水或 換水，洗細胞房專用的實驗服和拖鞋，紫外消毒細胞房

3、。更換培養(yǎng)箱內(nèi)無菌水、 檢查硫酸銅溶液是否需要更換（一個月更換一次） ！5. 每 2 周清潔一次培養(yǎng)箱： 先將培養(yǎng)箱中的物品取出暫存于超凈臺內(nèi)， 對 于比較敏感的細胞可以暫存于其他細胞房的培養(yǎng)箱；將培養(yǎng)箱內(nèi)的不銹鋼板取 出，包括 4 塊橫板和左右 2 塊立著的架子，用酒精棉球清潔鋼板和培養(yǎng)箱內(nèi)壁； 打開培養(yǎng)箱清潔內(nèi)壁時動作要迅速，避免長時間敞開門使得大量不潔凈空氣進 入，縮短過濾器的壽命；用紫外燈照射培養(yǎng)箱內(nèi)部 15min，手提紫外燈放入培養(yǎng) 箱前要用酒精棉擦拭干凈。培養(yǎng)箱使用注意事項1. 從培養(yǎng)箱取放物品前，用酒精清潔雙手（或手套） ，盡量縮短開門時間 和減少開門次數(shù)。* 培養(yǎng)箱中的空氣是經(jīng)

4、過過濾的潔凈空氣。 長時間敞開或頻繁開關(guān)培養(yǎng)箱， 容易造成污染。2. 培養(yǎng)瓶皿放入培養(yǎng)箱前， 用酒精消毒表面，并稍等至酒精揮發(fā)后再放入， 以免培養(yǎng)箱內(nèi)滯留過多乙醇蒸氣。3. 2-3 人共用一層培養(yǎng)箱，按預(yù)定位置擺放培養(yǎng)器皿，方便查找，以免長 時間敞開培養(yǎng)箱。普通培養(yǎng)中的細胞，若非實驗需要，每瓶 / 板細胞每天只需要 觀察生長狀態(tài)一次， 2 人以上共用的細胞，可約好時間一起觀察。* 頻繁將細胞拿出觀察，容易給培養(yǎng)箱造成污染，同時也會影響細胞生長 條件的恒定。超凈臺操作規(guī)則1. 超凈臺使用前用紫外燈照射 15 分鐘滅菌，使用前、后需用酒精棉球擦 拭工作區(qū)消毒，所有物品放入超凈臺前均應(yīng)用酒精噴拭表面

5、消毒。2. 點燃酒精燈前需檢查瓶中酒精是否足夠，液面應(yīng)占瓶高 1/3-2/3 。* 消毒用 75%的酒精，酒精燈用 95%的酒精，向噴壺或燈內(nèi)添加酒精時請留 意。酒精和酒精棉球由值日生負責(zé)補給， 發(fā)現(xiàn)細胞房內(nèi)存放量不足時請及時通知 值日生。3. 超凈臺中應(yīng)擺放廢液杯和廢品杯各一只，用于實驗時暫時存放廢棄物， 實驗結(jié)束后廢液杯內(nèi)垃圾要隨即清理帶走，廢液杯沖洗、于入室間晾干備用。4. 可回收的移液管、 離心管、培養(yǎng)瓶皿等，放入裝有清水的塑料桶中浸泡， 桶內(nèi)需有足量的清水以沒過浸泡物品。* 可回收器皿初步涮洗后再放入清水內(nèi)，保證浸泡的瓶、管內(nèi)完全被清水 充滿，避免營養(yǎng)物質(zhì)在培養(yǎng)瓶或血清管中過多殘留而

6、滋生微生物。回收器皿洗滌程序 ：洗潔精洗凈，清水沖十次以上去除洗滌劑殘留；烘干； 泡酸缸 48h，盡量瀝干后取出，清水沖洗 10 次，純水沖洗 3 次，超純水 3 次； 烘干/ 晾干；報紙 / 牛皮紙/錫箔紙包裝，高壓濕熱滅菌 121，20min；放入細胞 房備用。顯微鏡使用注意事項1. 顯微鏡使用前，用酒精棉從中間至周圍擦拭載物臺。2. 離開細胞房時或較長時間不需使用時，及時關(guān)上電源，延長燈泡壽命。 盡量避免頻繁開關(guān)顯微鏡電源。培養(yǎng)液、試劑等相關(guān)操作規(guī)則1. 從冰箱取放物品動作要迅速， 關(guān)門時要檢查門是否關(guān)好。 按類別存放試 劑。2. 血清按一定量分裝，分裝好的血清長時間保存于 -20 ，使用前取出需 要的量 4預(yù)解凍。按需解凍，避免反復(fù)凍融。* 從-20 取用血清者需在表格上做好登記， 方便在不夠時及時領(lǐng)取， 以免耽 誤實驗進程。3. 原則上解凍好的血清應(yīng)全部配成含血清的培養(yǎng)基備用， 若有剩余， 則暫 存于 4并盡快使用。盡量不要使用他人開過的血清，以免交叉污染。細胞凍存記錄細胞名稱凍存位置凍存方式凍存管編號細胞來源細胞代數(shù)凍存者凍存日期凍存數(shù)量實驗室冰箱層 / 盒-80°液氮細胞復(fù)