2020版《中國(guó)藥典》微生物限度計(jì)數(shù)—酵母菌及霉菌

1、2020版藥典微生物限度計(jì)數(shù)一酵母菌及霉菌2020版本藥典(1)菌液制備取白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物，用0.9%無(wú)菌氣化鈉溶液制成103cfii/m啲菌懸液；取黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物加5ml含0.05% (ml/ml)聚 山梨酯80的0.9%無(wú)菌氣化鈉溶液，將砲子洗脫。然后，使用移液槍 吸出砲子懸液至無(wú)菌試管內(nèi)，用含0.05% (ml/m 1)聚山梨酯80的0.9% 無(wú)菌氣化鈉溶液制成lOcfii/in啲黑曲霉孑包子懸液。菌液制備后保存 在2°C冰箱，在24小時(shí)內(nèi)使用。(2) 計(jì)數(shù)培養(yǎng)基適用性檢査接種不大于lOOcfii的白色念珠菌和黑曲霉的菌液至胰酪大豆腺瓊 脂培養(yǎng)基平板，35°

2、C條件下培養(yǎng)4天；接種不大于lOOcfii的白色念珠 菌和黑曲新的菌液至沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板，25°C條件下培養(yǎng)4 天。每一試驗(yàn)菌株平行制備2管或2個(gè)平皿。同時(shí)，用相應(yīng)的對(duì)照培 養(yǎng)基替代被檢培養(yǎng)基進(jìn)行上述試驗(yàn)。(3) 計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)1) 供試液制備取供試品10g,用胰酪大豆腺液體培養(yǎng)基制備成1:10供試液。2) 接種和稀釋按下列要求進(jìn)行供試液的接種和稀釋，制備微生物回收試驗(yàn)用 供試液。所加菌液的體積不超過(guò)供試液郊積的1%。1、試驗(yàn)組取上述制備好的供試液，加入試驗(yàn)菌液，混勻，使每hill供試液中含菌量不人于lOOcfii o2、供試品對(duì)照組取制備好的供試液，以稀釋液代替菌液同試

3、驗(yàn) 組操作。3、菌液對(duì)照組取不含中和劑及滅活劑的相應(yīng)稀釋液替代供試液， 按試驗(yàn)組操作加入試驗(yàn)菌液并進(jìn)行微生物回收試驗(yàn)。3）供試品中微生物的回收取20ml溫度不超過(guò)45°C的胰酪大豆腺瓊脂或沙氏葡萄糖瓊脂培 養(yǎng)基，注人直徑90mm的無(wú)菌平皿，凝固，制成平板，采用無(wú)菌操作 臺(tái)風(fēng)干的方法使培養(yǎng)基表面干燥。每一平板表面接種上述照“供試 液的制備”和“接種和稀釋”制備的供試液O.linl。胰酪大豆腺瓊脂 培養(yǎng)基平板在35°C條件下培養(yǎng)3天，沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板在25°C 條件下培養(yǎng)4天。同法測(cè)定供試品對(duì)照組及菌液對(duì)照組菌數(shù)。計(jì)算各 試驗(yàn)組的平均菌落數(shù)。（4）供試品檢查沙

4、氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基用于測(cè)定霉菌和酵母菌總數(shù)。按方法適 用性試驗(yàn)確認(rèn)的方法進(jìn)行供試液制備和菌數(shù)測(cè)定，每稀釋級(jí)每種培 養(yǎng)基制備2個(gè)平板。胰酪大豆陳瓊脂培養(yǎng)基平板在35°C培養(yǎng)3天，沙 氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板在25°C培養(yǎng)5天，觀察菌落生長(zhǎng)情況，點(diǎn)計(jì) 平板上生長(zhǎng)的所有菌落數(shù)，計(jì)數(shù)并報(bào)告。陰性對(duì)照試驗(yàn)以稀釋液代 替供試液進(jìn)行陰性對(duì)照試驗(yàn)。（具體流程見(jiàn)下頁(yè)）點(diǎn)擊作者頭像進(jìn)入主頁(yè)下載2020版本藥典其它資料霉菌與酵母菌計(jì)數(shù)方法1試驗(yàn)菌液的制備和使用（以白色念珠菌為示例）白色念珠菌（0）代I傳代培養(yǎng)I實(shí)驗(yàn)菌液的制備：沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基或沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度2025°

5、C,培養(yǎng)時(shí)間23天I計(jì)數(shù)培養(yǎng)基適用性檢査：胰酪大豆豚瓊脂培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度3035C,培養(yǎng)時(shí)間不超過(guò)5天，接種量不大于lOOcfuI計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)：胰酪大豆丿凍瓊脂培養(yǎng)基（MPN法不適用），培養(yǎng)溫度3035°C,培養(yǎng)時(shí)間不超過(guò)5天，接種量不大于lOOcfh注：當(dāng)需用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基測(cè)定雹菌和酵母菌總數(shù)時(shí)，應(yīng)進(jìn)行培養(yǎng)基適用性檢查， 檢查方法同沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基1.1菌種試驗(yàn)用菌株的傳代次數(shù)不得超過(guò)5代（從菌種保藏中心獲得的干燥菌 種為第0代），并采用適宜的菌種保藏技術(shù)進(jìn)行保存，以保證試驗(yàn)菌株的生物學(xué) 特性。1.2菌液制備（按表1規(guī)定程序培養(yǎng)各試驗(yàn)菌株）取白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物I用pH7.0無(wú)菌氯化鈉蛋白腺緩沖液或0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液制成適宜濃度的菌懸液収黑曲焉的新鮮培養(yǎng)物!加入35ml含0.05%聚山梨酯80的pH7.0無(wú)菌氯化鈉蛋白腺緩沖液或0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液