選修1微生物的利用

1、專(zhuān)題2微生物的利用P191P191一、微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)一、微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)1.1.培養(yǎng)基培養(yǎng)基(1)(1)概念概念: :人們按照微生物對(duì)人們按照微生物對(duì)_的不同需求的不同需求, ,配制出供其配制出供其_的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。(2)(2)營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成: :一般都含有一般都含有_和無(wú)機(jī)鹽。此外還和無(wú)機(jī)鹽。此外還需要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)需要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)_、氧氣以及、氧氣以及_的要求。的要求。(3)(3)種類(lèi)種類(lèi): :按照按照物理物理性質(zhì)可分為性質(zhì)可分為_(kāi)培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基。培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基。營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)生長(zhǎng)繁殖生長(zhǎng)繁殖水、碳源、氮源水、碳源、氮源特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)液體液體pHp

2、HP1912.2.無(wú)菌技術(shù)無(wú)菌技術(shù)(1)(1)含義含義: :指在培養(yǎng)微生物的操作中指在培養(yǎng)微生物的操作中, ,所有防止所有防止_的方法。的方法。(2)(2)關(guān)鍵關(guān)鍵: :防止防止_的入侵。的入侵。(3)(3)不同對(duì)象的無(wú)菌操作方法不同對(duì)象的無(wú)菌操作方法( (連線連線):):雜菌污染雜菌污染外來(lái)雜菌外來(lái)雜菌P1913.3.大腸桿菌的純化培養(yǎng)大腸桿菌的純化培養(yǎng)(1)(1)制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基: :計(jì)算計(jì)算 _ _ 溶化溶化 _ _ _稱(chēng)量稱(chēng)量滅菌滅菌倒平板倒平板P191(2)(2)純化大腸桿菌的方法純化大腸桿菌的方法: :純化培養(yǎng)原理純化培養(yǎng)原理: :想方設(shè)法在培養(yǎng)

3、基上得到由想方設(shè)法在培養(yǎng)基上得到由一個(gè)一個(gè)細(xì)胞繁殖而細(xì)胞繁殖而來(lái)的肉眼可見(jiàn)的菌落來(lái)的肉眼可見(jiàn)的菌落, ,即可獲得較純的菌種。即可獲得較純的菌種。純化大腸桿菌的關(guān)鍵步驟純化大腸桿菌的關(guān)鍵步驟:_:_。常用的微生物接種方法有兩種常用的微生物接種方法有兩種: :a.a.平板劃線法平板劃線法: :是通過(guò)接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面是通過(guò)接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面_,_,將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。b.b.稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法: :是將菌液進(jìn)行一系列的是將菌液進(jìn)行一系列的_,_,然后將然后將_的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面的菌液分別涂布到瓊

4、脂固體培養(yǎng)基的表面, ,進(jìn)行培進(jìn)行培養(yǎng)。養(yǎng)。接種接種連續(xù)劃線連續(xù)劃線的操作的操作梯度稀釋梯度稀釋不同稀釋度不同稀釋度P191(3)(3)菌種的保存方法菌種的保存方法: :對(duì)于頻繁使用的菌種對(duì)于頻繁使用的菌種, ,可以采用可以采用_的方法。的方法。對(duì)于需要長(zhǎng)期保存的菌種對(duì)于需要長(zhǎng)期保存的菌種, ,可以采用可以采用_的方法。的方法。臨時(shí)保藏臨時(shí)保藏甘油管藏甘油管藏P19144-20-20二、土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)二、土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)1.1.分離原理分離原理土壤中細(xì)菌之所以能分解尿素土壤中細(xì)菌之所以能分解尿素, ,是因?yàn)樗鼈兡芎铣墒且驗(yàn)樗鼈兡芎铣蒧,_,這種這種物質(zhì)在把尿素

5、分解成無(wú)機(jī)物的過(guò)程中起到物質(zhì)在把尿素分解成無(wú)機(jī)物的過(guò)程中起到_作用。作用。2.2.統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目統(tǒng)計(jì)樣品中的活菌一般用統(tǒng)計(jì)樣品中的活菌一般用_法。法。3.3.實(shí)驗(yàn)流程實(shí)驗(yàn)流程土壤取樣土壤取樣_微生物的培養(yǎng)與觀察微生物的培養(yǎng)與觀察細(xì)菌的細(xì)菌的_。脲酶脲酶催化催化稀釋涂布平板稀釋涂布平板樣品的稀釋樣品的稀釋計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)P191三、分解纖維素的微生物的分離三、分解纖維素的微生物的分離1.1.纖維素酶纖維素酶(1)(1)組成組成: :纖維素酶是一種纖維素酶是一種_,_,一般認(rèn)為它至少包括三種組一般認(rèn)為它至少包括三種組分分, ,即即_。(2)(2)作用作用: :纖維素纖維素 _ _ _C C1 1

6、酶酶C CX X酶酶葡萄糖苷酶葡萄糖苷酶復(fù)合酶復(fù)合酶C C1 1酶、酶、C CX X酶和葡萄糖苷酶酶和葡萄糖苷酶纖維二糖纖維二糖葡萄糖葡萄糖P1912.2.纖維素分解菌的篩選纖維素分解菌的篩選(1)(1)原理原理: : 纖維素分解菌纖維素分解菌(2)(2)篩選方法篩選方法:_:_染色法染色法, ,即通過(guò)是否產(chǎn)生即通過(guò)是否產(chǎn)生_來(lái)篩選來(lái)篩選纖維素分解菌。纖維素分解菌。(3)(3)培養(yǎng)基培養(yǎng)基: :以以_為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基。為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基。剛果紅剛果紅纖維素纖維素_ _ 紅色消失紅色消失, ,出現(xiàn)出現(xiàn)_纖維素酶纖維素酶紅色復(fù)合物紅色復(fù)合物透明圈透明圈剛果紅剛果紅透明圈透明圈纖維素纖維素

7、P191(4)(4)實(shí)驗(yàn)流程實(shí)驗(yàn)流程: :土壤取樣土壤取樣: :富含富含_的環(huán)境的環(huán)境 選擇培養(yǎng)選擇培養(yǎng): :用用_培養(yǎng)培養(yǎng), ,以以增加纖維素分解菌的濃度增加纖維素分解菌的濃度 _: :制備系列稀釋液制備系列稀釋液 涂布平板涂布平板: :將樣品涂布到將樣品涂布到鑒別鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上纖維素分解菌的培養(yǎng)基上 挑選產(chǎn)生挑選產(chǎn)生_的菌落的菌落纖維素纖維素選擇選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)基梯度稀釋梯度稀釋透明圈透明圈P1921.(20121.(2012北京北京T5C)T5C)將轉(zhuǎn)基因植物的葉片接種到無(wú)菌培養(yǎng)基上將轉(zhuǎn)基因植物的葉片接種到無(wú)菌培養(yǎng)基上, ,應(yīng)應(yīng)該進(jìn)行嚴(yán)格的無(wú)菌操作。該進(jìn)行嚴(yán)格的無(wú)菌操作。( )

8、( )2.(20122.(2012北京北京T5D)T5D)將土壤浸出液涂布在無(wú)菌的選擇培養(yǎng)基上分將土壤浸出液涂布在無(wú)菌的選擇培養(yǎng)基上分離分解尿素的細(xì)菌離分解尿素的細(xì)菌, ,是否無(wú)菌操作影響較小。是否無(wú)菌操作影響較小。( )( )P1923.3.培養(yǎng)基中一般都含有水、碳源、氮源和無(wú)機(jī)鹽四種成分。培養(yǎng)基中一般都含有水、碳源、氮源和無(wú)機(jī)鹽四種成分。 ( )( )4.4.篩選分解尿素的細(xì)菌應(yīng)以尿素作為培養(yǎng)基中的惟一氮源。篩選分解尿素的細(xì)菌應(yīng)以尿素作為培養(yǎng)基中的惟一氮源。 ( )( )P1925.5.土壤中纖維素分解菌的篩選流程中的土壤中纖維素分解菌的篩選流程中的“選擇培養(yǎng)選擇培養(yǎng)”是必不可是必不可少的

9、。少的。( )( )【分析】【分析】土壤中纖維素分解菌的篩選流程中的土壤中纖維素分解菌的篩選流程中的“選擇培養(yǎng)選擇培養(yǎng)”是是否需要否需要, ,應(yīng)根據(jù)樣品中目的菌株數(shù)量的應(yīng)根據(jù)樣品中目的菌株數(shù)量的多少多少來(lái)確定。來(lái)確定。6.6.在以纖維素為唯一碳源的培養(yǎng)基中加入剛果紅染色劑在以纖維素為唯一碳源的培養(yǎng)基中加入剛果紅染色劑, ,若出若出現(xiàn)透明圈現(xiàn)透明圈, ,則說(shuō)明篩選到分解纖維素的細(xì)菌。則說(shuō)明篩選到分解纖維素的細(xì)菌。( )( )P1927.7.統(tǒng)計(jì)樣品中的活菌一般使用平板劃線法。統(tǒng)計(jì)樣品中的活菌一般使用平板劃線法。( )( )P192考點(diǎn)一考點(diǎn)一 培養(yǎng)基配制培養(yǎng)基配制 1.1.培養(yǎng)基的成分培養(yǎng)基的成

10、分營(yíng)養(yǎng)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)物質(zhì)含義含義作用作用主要來(lái)源主要來(lái)源碳源碳源能提供能提供碳元素碳元素的物質(zhì)的物質(zhì)構(gòu)成構(gòu)成生物體的物生物體的物質(zhì)質(zhì), ,異養(yǎng)生物的異養(yǎng)生物的能能源源物質(zhì)物質(zhì)無(wú)機(jī)物無(wú)機(jī)物:CO:CO2 2、NaHCONaHCO3 3; ;有機(jī)物有機(jī)物: :糖類(lèi)、脂肪酸、糖類(lèi)、脂肪酸、石油、花生粉餅等石油、花生粉餅等P192營(yíng)養(yǎng)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)物質(zhì)含義含義作用作用主要來(lái)源主要來(lái)源氮源氮源能提供能提供氮元素氮元素的物質(zhì)的物質(zhì)合成合成蛋白質(zhì)、核蛋白質(zhì)、核酸以及含氮代謝酸以及含氮代謝產(chǎn)物產(chǎn)物無(wú)機(jī)物無(wú)機(jī)物:N:N2 2、NHNH3 3、氨鹽、硝酸鹽氨鹽、硝酸鹽; ;有機(jī)物有機(jī)物: :尿素、牛肉膏、尿素、牛肉膏、蛋白胨

11、等蛋白胨等生長(zhǎng)生長(zhǎng)因子因子生長(zhǎng)必生長(zhǎng)必不可少不可少的的微量微量有機(jī)物有機(jī)物酶和核酸的成分酶和核酸的成分維生素、氨基酸、堿基維生素、氨基酸、堿基等等P192營(yíng)養(yǎng)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)物質(zhì)含義含義作用作用主要來(lái)源主要來(lái)源水水細(xì)胞生命活細(xì)胞生命活動(dòng)必不可少動(dòng)必不可少的物質(zhì)的物質(zhì)不僅是良好的不僅是良好的溶劑溶劑, ,還是還是結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)物質(zhì)物質(zhì)培養(yǎng)基、大氣、培養(yǎng)基、大氣、代謝產(chǎn)物代謝產(chǎn)物無(wú)無(wú)機(jī)機(jī)鹽鹽提供除碳、提供除碳、氮元素以外氮元素以外的的各種重要各種重要元素元素, ,包括某包括某些大量元素些大量元素細(xì)胞內(nèi)的細(xì)胞內(nèi)的組成組成成分成分, ,生理生理調(diào)節(jié)物質(zhì)調(diào)節(jié)物質(zhì); ;某些化能自養(yǎng)某些化能自養(yǎng)型細(xì)菌的型細(xì)菌的能源能源;

12、 ;酶的激活酶的激活劑劑培養(yǎng)基、大氣培養(yǎng)基、大氣P1922.2.培養(yǎng)基的分類(lèi)培養(yǎng)基的分類(lèi)種類(lèi)種類(lèi)特點(diǎn)特點(diǎn)應(yīng)用應(yīng)用物物理理性性質(zhì)質(zhì)液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基不加凝固劑不加凝固劑工業(yè)生產(chǎn)工業(yè)生產(chǎn)半固體培養(yǎng)半固體培養(yǎng)基基加凝固劑加凝固劑觀察微生物的觀察微生物的運(yùn)動(dòng)運(yùn)動(dòng)、分、分類(lèi)鑒定類(lèi)鑒定固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基微生物的微生物的分離、鑒定分離、鑒定、活菌、活菌計(jì)數(shù)、保藏計(jì)數(shù)、保藏化化學(xué)學(xué)成成分分天然培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基含化學(xué)成分不含化學(xué)成分不明的天然物質(zhì)明的天然物質(zhì)工業(yè)生產(chǎn)工業(yè)生產(chǎn)合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基培養(yǎng)基成分明培養(yǎng)基成分明確或用一定化確或用一定化學(xué)物質(zhì)配制學(xué)物質(zhì)配制分類(lèi)、鑒定分類(lèi)、鑒定P192種類(lèi)種類(lèi)特點(diǎn)特點(diǎn)應(yīng)用

13、應(yīng)用用用途途選擇選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)基添加某物質(zhì)添加某物質(zhì), ,抑制抑制雜菌生長(zhǎng)雜菌生長(zhǎng), ,促進(jìn)促進(jìn)所需微生所需微生物生長(zhǎng)物生長(zhǎng)培養(yǎng)分離出培養(yǎng)分離出特定特定微生物微生物鑒別鑒別培養(yǎng)基培養(yǎng)基根據(jù)微生物的根據(jù)微生物的代謝特點(diǎn)代謝特點(diǎn), ,在在培養(yǎng)基中加入培養(yǎng)基中加入某種某種指示劑指示劑鑒別微生物鑒別微生物P1923.3.培養(yǎng)基的配制原則培養(yǎng)基的配制原則(1)(1)目的要明確目的要明確: :根據(jù)微生物的種類(lèi)、培養(yǎng)目的等選擇原料配制根據(jù)微生物的種類(lèi)、培養(yǎng)目的等選擇原料配制培養(yǎng)基培養(yǎng)基, ,如培養(yǎng)如培養(yǎng)自養(yǎng)型的微生物就不用加入有機(jī)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)自養(yǎng)型的微生物就不用加入有機(jī)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。(2)(2)營(yíng)養(yǎng)要協(xié)調(diào)營(yíng)養(yǎng)要協(xié)調(diào)

14、: :注意各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的濃度和比例。注意各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的濃度和比例。(3)pH(3)pH要適宜要適宜: :各種微生物適宜生長(zhǎng)的各種微生物適宜生長(zhǎng)的pHpH范圍不同。范圍不同。P1924.4.培養(yǎng)基的制備培養(yǎng)基的制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的制備: :計(jì)算計(jì)算依據(jù)配方比例依據(jù)配方比例, ,計(jì)算配制不同體積的培養(yǎng)基時(shí)計(jì)算配制不同體積的培養(yǎng)基時(shí), ,各種成分的用量各種成分的用量稱(chēng)量稱(chēng)量準(zhǔn)確稱(chēng)取各種成分。牛肉膏要放在稱(chēng)量紙上稱(chēng)量準(zhǔn)確稱(chēng)取各種成分。牛肉膏要放在稱(chēng)量紙上稱(chēng)量, ,牛肉膏和蛋白牛肉膏和蛋白胨都易吸潮胨都易吸潮, ,稱(chēng)取時(shí)動(dòng)作要稱(chēng)取時(shí)動(dòng)作要迅速迅速, ,稱(chēng)取后及時(shí)蓋上瓶

15、蓋稱(chēng)取后及時(shí)蓋上瓶蓋熔化熔化將稱(chēng)好的牛肉膏和稱(chēng)量紙一同放入燒杯將稱(chēng)好的牛肉膏和稱(chēng)量紙一同放入燒杯, ,加入少量水加入少量水, ,加熱加熱, ,取出取出稱(chēng)量紙稱(chēng)量紙, ,加入稱(chēng)量好的蛋白胨和氯化鈉加入稱(chēng)量好的蛋白胨和氯化鈉, ,加瓊脂。在熔化時(shí)注意加瓊脂。在熔化時(shí)注意玻璃棒要不斷地?cái)嚢璨ＡО粢粩嗟財(cái)嚢? ,防止瓊脂糊底而導(dǎo)致燒杯破裂防止瓊脂糊底而導(dǎo)致燒杯破裂, ,最后定容最后定容至至100 mL100 mL滅菌滅菌滅菌前滅菌前, ,調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)pHpH; ;高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌倒平板倒平板待培養(yǎng)基冷卻至待培養(yǎng)基冷卻至5050左右左右時(shí)時(shí), ,在酒精燈火焰附近倒平板在酒精燈火焰附近倒平板P193

16、【思維拓展】【思維拓展】不同生物需要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)不同不同生物需要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)不同(1)(1)微生物微生物需要的營(yíng)養(yǎng)成分有水、無(wú)機(jī)鹽、碳源、氮源需要的營(yíng)養(yǎng)成分有水、無(wú)機(jī)鹽、碳源、氮源, ,有些微有些微生物還需要特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)生物還需要特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì), ,如生長(zhǎng)因子。如生長(zhǎng)因子。(2)(2)在在人和動(dòng)物人和動(dòng)物中中, ,營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)包括水、無(wú)機(jī)鹽、糖類(lèi)、脂質(zhì)、蛋營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)包括水、無(wú)機(jī)鹽、糖類(lèi)、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、維生素白質(zhì)、維生素六類(lèi)六類(lèi)。(3)(3)在在植物植物中中, ,營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)包括礦質(zhì)元素、水、二氧化碳營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)包括礦質(zhì)元素、水、二氧化碳三類(lèi)三類(lèi)。P193【拓展延伸】【拓展延伸】消毒和滅菌的比較消毒和滅菌的比較1.

17、1.區(qū)別區(qū)別內(nèi)容內(nèi)容種類(lèi)種類(lèi)主要方法主要方法應(yīng)用范圍應(yīng)用范圍概念概念滅滅菌菌灼燒灼燒滅菌滅菌法法酒精燈火焰灼燒酒精燈火焰灼燒微生物的微生物的接種工具接種工具, ,如接種環(huán)、如接種環(huán)、接種針或其他接種針或其他金屬用具金屬用具等等, ,接種接種過(guò)程中的試管口或瓶口過(guò)程中的試管口或瓶口等等用用強(qiáng)烈強(qiáng)烈的的理化因素理化因素殺死物體殺死物體內(nèi)外的所內(nèi)外的所有微生物有微生物, ,包括芽孢包括芽孢和孢子和孢子在在內(nèi)內(nèi)干熱干熱滅菌滅菌法法干熱滅菌箱干熱滅菌箱160160170170加熱加熱1 h1 h2 h2 h玻璃器皿玻璃器皿( (如吸管、培養(yǎng)皿等如吸管、培養(yǎng)皿等) )、金屬用具等能耐高溫、需要保金屬用具等

18、能耐高溫、需要保持干燥的物品持干燥的物品高壓高壓蒸汽蒸汽滅菌滅菌法法高壓蒸汽滅菌鍋高壓蒸汽滅菌鍋, ,100 kPa,121,100 kPa,121,維持維持15 min15 min30 min30 min培養(yǎng)基培養(yǎng)基等等P193內(nèi)容內(nèi)容種類(lèi)種類(lèi)主要方法主要方法應(yīng)用范圍應(yīng)用范圍概念概念消消毒毒巴氏巴氏消毒消毒法法70707575煮煮30 min30 min或或8080煮煮15 min15 min牛奶、啤酒、果酒和醬油等牛奶、啤酒、果酒和醬油等不不宜進(jìn)行高溫滅菌的液體宜進(jìn)行高溫滅菌的液體用用較為溫較為溫和和的物理的物理或化學(xué)方或化學(xué)方法法, ,殺死物殺死物體表面或體表面或內(nèi)部的部?jī)?nèi)部的部分微生物

19、分微生物煮沸煮沸消毒消毒法法100100煮沸煮沸5 min5 min6 min6 min日常食品、罐裝食品日常食品、罐裝食品紫外紫外線消線消毒法毒法紫外線照射紫外線照射30 min30 min接種室、接種箱、超凈工作臺(tái)接種室、接種箱、超凈工作臺(tái)化學(xué)化學(xué)藥物藥物消毒法消毒法用體積分?jǐn)?shù)為用體積分?jǐn)?shù)為70%70%75%75%的乙醇的乙醇、碘酒涂抹、碘酒涂抹, ,來(lái)蘇水噴灑等來(lái)蘇水噴灑等用于皮膚、傷口、動(dòng)植物組織用于皮膚、傷口、動(dòng)植物組織表面消毒表面消毒、空氣、手術(shù)器械、空氣、手術(shù)器械、塑料或玻璃器皿等塑料或玻璃器皿等P1932.2.聯(lián)系聯(lián)系(1)(1)都需借助理化性質(zhì)營(yíng)造微生物都需借助理化性質(zhì)營(yíng)造微

20、生物難以生存的不良環(huán)境難以生存的不良環(huán)境。(2)(2)其作用原理都是通過(guò)使其作用原理都是通過(guò)使蛋白質(zhì)變性蛋白質(zhì)變性來(lái)抑制微生物的生命活來(lái)抑制微生物的生命活動(dòng)或殺死微生物。動(dòng)或殺死微生物。P193【典例【典例1 1】在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中發(fā)現(xiàn)一種被廣泛使用的除草劑在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中發(fā)現(xiàn)一種被廣泛使用的除草劑( (含氮有含氮有機(jī)化合物機(jī)化合物) )在土壤中不易被降解在土壤中不易被降解, ,長(zhǎng)期使用可污染土壤。為修復(fù)長(zhǎng)期使用可污染土壤。為修復(fù)被該除草劑污染的土壤被該除草劑污染的土壤, ,可按下面程序選育能降解該除草劑的可按下面程序選育能降解該除草劑的細(xì)菌細(xì)菌( (已知該除草劑在水中溶解度低已知該除草劑在水中溶解度低

21、, ,含一定量該除草劑含一定量該除草劑的培養(yǎng)的培養(yǎng)基基不透明不透明) )。P193(1)(1)制備土壤浸出液時(shí)制備土壤浸出液時(shí), ,為避免菌體濃度過(guò)高為避免菌體濃度過(guò)高, ,需將浸出液進(jìn)行需將浸出液進(jìn)行處理。處理。(2)(2)要在長(zhǎng)期使用該除草劑的土壤中分離出目的菌要在長(zhǎng)期使用該除草劑的土壤中分離出目的菌, ,從物理性從物理性質(zhì)、用途方面來(lái)看質(zhì)、用途方面來(lái)看, ,上述培養(yǎng)皿中培養(yǎng)基的特點(diǎn)是上述培養(yǎng)皿中培養(yǎng)基的特點(diǎn)是 。(3)(3)在劃線培養(yǎng)時(shí)在劃線培養(yǎng)時(shí), ,只有很少的菌落出現(xiàn)只有很少的菌落出現(xiàn), ,大部分細(xì)菌在此培養(yǎng)大部分細(xì)菌在此培養(yǎng)基上不能生長(zhǎng)的主要原因是基上不能生長(zhǎng)的主要原因是 或有氧條

22、件抑制了這些細(xì)菌或有氧條件抑制了這些細(xì)菌的生長(zhǎng)。的生長(zhǎng)。(4)(4)在固體培養(yǎng)基上形成的菌落中在固體培養(yǎng)基上形成的菌落中, ,無(wú)透明圈菌落利用的氮源主無(wú)透明圈菌落利用的氮源主要是要是, ,有透明圈菌落利用的氮源主要是有透明圈菌落利用的氮源主要是, ,據(jù)此據(jù)此可篩選出目的菌?？珊Y選出目的菌。稀釋稀釋在無(wú)氮固體培養(yǎng)基中添加了該除草劑在無(wú)氮固體培養(yǎng)基中添加了該除草劑培養(yǎng)基中缺少這些細(xì)菌可利用的氮源培養(yǎng)基中缺少這些細(xì)菌可利用的氮源氮?dú)獾獨(dú)庠摮輨┰摮輨㏄193(含一定量該除草劑的培養(yǎng)基不透明含一定量該除草劑的培養(yǎng)基不透明)(5)(5)科研人員用放射線處理該細(xì)菌獲得兩個(gè)突變株科研人員用放射線處理該細(xì)菌

23、獲得兩個(gè)突變株A A和和B,B,然后對(duì)然后對(duì)突變株突變株A A和和B B進(jìn)行實(shí)驗(yàn)進(jìn)行實(shí)驗(yàn), ,結(jié)果如表所示結(jié)果如表所示: :接種的接種的菌種菌種一般培養(yǎng)基一般培養(yǎng)基實(shí)驗(yàn)處理及結(jié)果實(shí)驗(yàn)處理及結(jié)果A A不生長(zhǎng)不生長(zhǎng)添加營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)甲添加營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)甲, ,能生長(zhǎng)能生長(zhǎng)B B不生長(zhǎng)不生長(zhǎng)添加營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)乙添加營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)乙, ,能生長(zhǎng)能生長(zhǎng)A+BA+B能生長(zhǎng)能生長(zhǎng)不添加營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)不添加營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)甲、乙都能生長(zhǎng)甲、乙都能生長(zhǎng)突變株突變株A A不能在一般培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的原因是不能在一般培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的原因是。突變株突變株A A和和B B混合在一起接種于一般培養(yǎng)基中能生長(zhǎng)的最可能原混合在一起接種于一般培養(yǎng)基中能生長(zhǎng)的最可能原因是

24、因是。突變株突變株A缺乏合成營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)甲所需要的酶缺乏合成營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)甲所需要的酶突變株突變株A生長(zhǎng)需要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)甲生長(zhǎng)需要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)甲,突變株突變株B可以提供可以提供;突變突變株株B生長(zhǎng)需要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)乙生長(zhǎng)需要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)乙,突變株突變株A可以提供可以提供P193考點(diǎn)二考點(diǎn)二 微生物的微生物的純化純化培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)技術(shù) 1.1.原理原理在培養(yǎng)基上將細(xì)菌稀釋或分散成單個(gè)細(xì)胞在培養(yǎng)基上將細(xì)菌稀釋或分散成單個(gè)細(xì)胞, ,使其長(zhǎng)成單個(gè)的菌使其長(zhǎng)成單個(gè)的菌落落, ,這個(gè)菌落就是純化的細(xì)菌菌落。這個(gè)菌落就是純化的細(xì)菌菌落。P1932.2.微生物接種方法微生物接種方法(1)(1)平板劃線法平板劃線法: :平板劃線法中細(xì)胞的分

25、離和稀釋過(guò)程發(fā)生在接平板劃線法中細(xì)胞的分離和稀釋過(guò)程發(fā)生在接種環(huán)在固體平板表面上的種環(huán)在固體平板表面上的劃線和移動(dòng)劃線和移動(dòng)過(guò)程中。在線的開(kāi)始部分過(guò)程中。在線的開(kāi)始部分, ,微生物往往連在一起生長(zhǎng)微生物往往連在一起生長(zhǎng), ,隨著線的延伸隨著線的延伸, ,菌數(shù)逐漸減少菌數(shù)逐漸減少, ,最后最后可能形成純種的可能形成純種的單個(gè)菌落單個(gè)菌落。( (如圖所示如圖所示) )P193(2)(2)稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法:10:10倍系列稀釋操作。倍系列稀釋操作。將分別盛有將分別盛有9 mL9 mL水的水的6 6支試管滅菌支試管滅菌, ,并按并按10101 110106 6的順序編號(hào)。的順序編號(hào)。進(jìn)行梯

26、度稀釋后進(jìn)行梯度稀釋后, ,從菌落開(kāi)始從菌落開(kāi)始, ,每次取前面每次取前面1 mL1 mL溶液注入到下溶液注入到下一試管中混勻。一試管中混勻。( (如圖所示如圖所示) )進(jìn)行涂布平板操作。進(jìn)行涂布平板操作。P193【高考警示】【高考警示】(1)(1)兩種接種方法作用不完全相同兩種接種方法作用不完全相同: :平板劃線法和稀釋涂布平板平板劃線法和稀釋涂布平板法都能使細(xì)菌純化法都能使細(xì)菌純化, ,但平板劃線法不易分離出單個(gè)菌落但平板劃線法不易分離出單個(gè)菌落, ,不能計(jì)不能計(jì)數(shù)數(shù); ;稀釋涂布平板法能使單菌落分離稀釋涂布平板法能使單菌落分離, ,便于計(jì)數(shù)便于計(jì)數(shù)。(2)(2)稀釋涂布平板法的缺點(diǎn)稀釋涂

27、布平板法的缺點(diǎn): :稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)樣品中菌落的稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)樣品中菌落的數(shù)目往往比實(shí)際數(shù)目數(shù)目往往比實(shí)際數(shù)目低低。這是因?yàn)?。這是因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起一起時(shí)時(shí), ,平板上平板上觀察到的只是一個(gè)菌落觀察到的只是一個(gè)菌落。P194(3)(3)平板劃線法純化大腸桿菌時(shí)不同階段灼燒接種環(huán)的目的不平板劃線法純化大腸桿菌時(shí)不同階段灼燒接種環(huán)的目的不同同: :第一次操作第一次操作: :殺死接種環(huán)上原有的微生物。殺死接種環(huán)上原有的微生物。每次劃線之前每次劃線之前: :殺死上次劃線后接種環(huán)上殘留的菌種殺死上次劃線后接種環(huán)上殘留的菌種, ,使下次使下次劃線的菌種直接來(lái)源于上次劃線

28、的末端。劃線的菌種直接來(lái)源于上次劃線的末端。劃線結(jié)束后劃線結(jié)束后: :殺死接種環(huán)上殘存的菌種殺死接種環(huán)上殘存的菌種, ,避免細(xì)菌污染環(huán)境和避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。感染操作者。 P194【典例【典例2 2】從自然界微生物中篩選某菌種的一般步驟是從自然界微生物中篩選某菌種的一般步驟是: :采集菌采集菌樣樣富集培養(yǎng)富集培養(yǎng)純種分離純種分離性能測(cè)定。性能測(cè)定。(1)(1)不同微生物的生存環(huán)境不同不同微生物的生存環(huán)境不同, ,獲得理想微生物的第一步是從獲得理想微生物的第一步是從適合的環(huán)境采集菌樣適合的環(huán)境采集菌樣, ,然后再按一定的方法分離、純化。培養(yǎng)然后再按一定的方法分離、純化。培養(yǎng)嗜鹽菌的菌種

29、應(yīng)從嗜鹽菌的菌種應(yīng)從環(huán)境中采集。環(huán)境中采集。(2)(2)富集培養(yǎng)指創(chuàng)設(shè)僅適合待分離微生物旺盛生長(zhǎng)的特定環(huán)境富集培養(yǎng)指創(chuàng)設(shè)僅適合待分離微生物旺盛生長(zhǎng)的特定環(huán)境條件條件, ,使其菌落中的數(shù)量大大增加使其菌落中的數(shù)量大大增加, ,從而分離出所需微生物的培從而分離出所需微生物的培養(yǎng)方法。對(duì)產(chǎn)耐高溫淀粉酶微生物的富集培養(yǎng)應(yīng)選擇養(yǎng)方法。對(duì)產(chǎn)耐高溫淀粉酶微生物的富集培養(yǎng)應(yīng)選擇 的的培養(yǎng)基培養(yǎng)基, ,并在并在條件下培養(yǎng)。條件下培養(yǎng)。海灘等高鹽海灘等高鹽以淀粉為惟一碳源以淀粉為惟一碳源高溫高溫P194(3)(3)接種前要對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行接種前要對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行處理。在整個(gè)微生物的分處理。在整個(gè)微生物的分離和培養(yǎng)中離和培

30、養(yǎng)中, ,一定要注意在一定要注意在條件下進(jìn)行。條件下進(jìn)行。(4)(4)如圖是采用純化微生物培養(yǎng)的兩種接種方法接種后培養(yǎng)的如圖是采用純化微生物培養(yǎng)的兩種接種方法接種后培養(yǎng)的效果圖效果圖, ,請(qǐng)分析接種的具體方法。請(qǐng)分析接種的具體方法。高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌無(wú)菌無(wú)菌P194獲得圖獲得圖A A效果的接種方法是效果的接種方法是, ,獲得圖獲得圖B B效果的接種方法效果的接種方法是是。一同學(xué)用稀釋平板法純化土壤中的細(xì)菌時(shí)。一同學(xué)用稀釋平板法純化土壤中的細(xì)菌時(shí), ,發(fā)現(xiàn)發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上的菌落連成一片培養(yǎng)基上的菌落連成一片, ,最可能的原因是最可能的原因是, ,應(yīng)當(dāng)怎樣操應(yīng)當(dāng)怎樣操作才可避免此現(xiàn)象作才可避免此

31、現(xiàn)象? ?。(5)(5)如果探究溫度對(duì)纖維素酶活性的影響如果探究溫度對(duì)纖維素酶活性的影響, ,自變量是自變量是, ,應(yīng)應(yīng)該保持該保持等不變等不變( (至少答兩項(xiàng)至少答兩項(xiàng)) )。稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法平板劃線法平板劃線法菌液濃度過(guò)高菌液濃度過(guò)高增大稀釋倍數(shù)增大稀釋倍數(shù)(或培養(yǎng)過(guò)程被雜菌污染嚴(yán)格無(wú)菌操作或培養(yǎng)過(guò)程被雜菌污染嚴(yán)格無(wú)菌操作)溫度溫度纖維素的量與濃度、反應(yīng)時(shí)間、纖維素的量與濃度、反應(yīng)時(shí)間、pHP194考點(diǎn)三考點(diǎn)三 微生物的篩選與計(jì)數(shù)微生物的篩選與計(jì)數(shù)1.1.篩選菌株篩選菌株(1)(1)原則原則: :人為提供有人為提供有利于利于目的菌株生長(zhǎng)的條件目的菌株生長(zhǎng)的條件( (包括營(yíng)養(yǎng)、溫

32、包括營(yíng)養(yǎng)、溫度、度、pHpH等等),),同時(shí)同時(shí)抑制或阻止抑制或阻止其他微生物的生長(zhǎng)。其他微生物的生長(zhǎng)。 P194(2)(2)菌株篩選原理的比較菌株篩選原理的比較: :土壤中分解尿素的細(xì)菌土壤中分解尿素的細(xì)菌分解纖維素的微生物分解纖維素的微生物選擇培養(yǎng)基的成分選擇培養(yǎng)基的成分: :尿素尿素作為惟一的氮源作為惟一的氮源鑒定方法鑒定方法: :在培養(yǎng)基中加在培養(yǎng)基中加入入酚紅酚紅指示劑指示劑, ,若指示劑若指示劑變變紅紅,pH,pH升高升高, ,說(shuō)明細(xì)菌能分解說(shuō)明細(xì)菌能分解尿素尿素選擇培養(yǎng)基的成分選擇培養(yǎng)基的成分: :纖維纖維素作為惟一的碳源素作為惟一的碳源鑒定方法鑒定方法: :剛果紅剛果紅染色法染

33、色法, ,即剛果紅與纖維素形成即剛果紅與纖維素形成紅色紅色復(fù)合物復(fù)合物, ,當(dāng)纖維素被分解后當(dāng)纖維素被分解后, ,培養(yǎng)基出現(xiàn)以纖維素分解菌培養(yǎng)基出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的為中心的透明圈透明圈P194CO(NH2)2+H2O 2NH3+CO2脲酶脲酶用伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基鑒別大腸桿菌，用伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基鑒別大腸桿菌，大腸桿菌菌落呈現(xiàn)黑色大腸桿菌菌落呈現(xiàn)黑色2.2.統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法(1)(1)顯微鏡顯微鏡直接直接計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)法: :原理原理: :利用特定利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板細(xì)菌計(jì)數(shù)板或或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板血細(xì)胞計(jì)數(shù)板, ,在顯微鏡下計(jì)算在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物的數(shù)量。一定容積的樣品中

34、微生物的數(shù)量。方法方法: :用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。缺點(diǎn)缺點(diǎn): :不能區(qū)分死菌與活菌不能區(qū)分死菌與活菌。P194(2)(2)間接間接計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)法( (活菌計(jì)數(shù)法活菌計(jì)數(shù)法):):原理原理: :當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí), ,培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落, ,來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌, ,通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù), ,就就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。計(jì)算公式計(jì)算公式: :每克樣品中的菌株數(shù)每克樣品中的菌株數(shù)=(C=(CV)V)M M, ,其中其中,C,C代表某一代表某

35、一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù),V,V代表涂布平板時(shí)所用的稀代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積釋液的體積(mL),M(mL),M代表稀釋倍數(shù)。代表稀釋倍數(shù)。操作操作: :設(shè)置設(shè)置重復(fù)組重復(fù)組, ,增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力與準(zhǔn)確性說(shuō)服力與準(zhǔn)確性。同時(shí)為了保。同時(shí)為了保證結(jié)果準(zhǔn)確證結(jié)果準(zhǔn)確, ,一般選擇菌落數(shù)在一般選擇菌落數(shù)在3030300300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。P1943.3.設(shè)置對(duì)照設(shè)置對(duì)照(1)(1)目的目的: :排除實(shí)驗(yàn)組中排除實(shí)驗(yàn)組中非測(cè)試因素非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響, ,提高實(shí)提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的驗(yàn)結(jié)果的可信度可信度。(2)(2

36、)方法方法: :證明證明培養(yǎng)基未被污染培養(yǎng)基未被污染, ,用空白培養(yǎng)基作對(duì)照。用空白培養(yǎng)基作對(duì)照。證明選擇培養(yǎng)基的證明選擇培養(yǎng)基的選擇作用選擇作用, ,用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基接種等用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基接種等量同種菌液作對(duì)照。量同種菌液作對(duì)照。P194【高考警示】【高考警示】(1)(1)為了使結(jié)果接近真實(shí)值為了使結(jié)果接近真實(shí)值, ,應(yīng)設(shè)置三個(gè)或三個(gè)以上的平板應(yīng)設(shè)置三個(gè)或三個(gè)以上的平板, ,計(jì)計(jì)算出菌落平均數(shù)。算出菌落平均數(shù)。(2)(2)計(jì)算時(shí)明顯偏離實(shí)際值計(jì)算時(shí)明顯偏離實(shí)際值( (本組實(shí)驗(yàn)其他平板計(jì)數(shù)值本組實(shí)驗(yàn)其他平板計(jì)數(shù)值) )的要的要舍舍棄掉后棄掉后求平均值。求平均值。(3)(3)對(duì)照實(shí)驗(yàn)的設(shè)

37、計(jì)首先要明確設(shè)計(jì)的目的對(duì)照實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)首先要明確設(shè)計(jì)的目的, ,分析出實(shí)驗(yàn)的自變分析出實(shí)驗(yàn)的自變量之后才能準(zhǔn)確設(shè)計(jì)。量之后才能準(zhǔn)確設(shè)計(jì)。P194【典例【典例3 3】下面是探究如何從土壤中分離出自生固氮菌與計(jì)數(shù)下面是探究如何從土壤中分離出自生固氮菌與計(jì)數(shù)的實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn), ,完成下列問(wèn)題完成下列問(wèn)題: :實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理: :農(nóng)田的表層土壤中農(nóng)田的表層土壤中, ,自生固氮菌的含量比較多。將用自生固氮菌的含量比較多。將用表層土壤制成的稀泥漿表層土壤制成的稀泥漿, ,接種到無(wú)氮培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。在這接種到無(wú)氮培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。在這種情況下種情況下, ,只有自生固氮菌才能生長(zhǎng)繁殖。用這種方法只有自生固氮菌才

38、能生長(zhǎng)繁殖。用這種方法, ,可以將可以將自生固氮菌與其他細(xì)菌分離。自生固氮菌與其他細(xì)菌分離。材料用具材料用具: :農(nóng)田的表層土壤、無(wú)氮培養(yǎng)基、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)農(nóng)田的表層土壤、無(wú)氮培養(yǎng)基、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、盛有基、盛有9 mL9 mL無(wú)菌水的試管、無(wú)菌吸管、無(wú)菌涂布器、無(wú)菌培無(wú)菌水的試管、無(wú)菌吸管、無(wú)菌涂布器、無(wú)菌培養(yǎng)皿、盛有養(yǎng)皿、盛有90 mL90 mL無(wú)菌水的錐形瓶、恒溫箱。無(wú)菌水的錐形瓶、恒溫箱。P194(1)(1)方法步驟方法步驟: :倒平板倒平板: :分別將無(wú)氮培養(yǎng)基、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基倒平板分別將無(wú)氮培養(yǎng)基、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基倒平板, ,應(yīng)應(yīng)在在操作。操作。制備土壤稀釋液制備土壤稀

39、釋液: :取土樣取土樣10 g10 g加入盛有加入盛有90 mL90 mL無(wú)菌水的錐形瓶無(wú)菌水的錐形瓶中中, ,充分搖勻。用無(wú)菌吸管吸取上清液充分搖勻。用無(wú)菌吸管吸取上清液1 mL,1 mL,轉(zhuǎn)至盛有轉(zhuǎn)至盛有9 mL9 mL的無(wú)的無(wú)菌水的試管中菌水的試管中, ,依次稀釋到依次稀釋到10107 7稀釋度。稀釋度。涂布涂布: :按照由按照由10107 710103 3稀釋度的順序分別吸取稀釋度的順序分別吸取0.1 mL0.1 mL進(jìn)行平板進(jìn)行平板涂布涂布, ,每個(gè)稀釋度下每個(gè)稀釋度下, ,無(wú)氮培養(yǎng)基應(yīng)至少涂布無(wú)氮培養(yǎng)基應(yīng)至少涂布個(gè)平板個(gè)平板, ,牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基涂布牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基涂布個(gè)。個(gè)。

40、酒精燈火焰旁酒精燈火焰旁31P194培養(yǎng)培養(yǎng): :放入恒溫箱內(nèi)放入恒溫箱內(nèi), ,在在28283030下培養(yǎng)下培養(yǎng)3 d3 d4 d4 d。細(xì)菌的計(jì)數(shù)細(xì)菌的計(jì)數(shù): :當(dāng)菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)當(dāng)菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí), ,選取菌落數(shù)在選取菌落數(shù)在 的平的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。如果測(cè)定的平均值為板進(jìn)行計(jì)數(shù)。如果測(cè)定的平均值為50,50,則每克樣品中的菌落數(shù)則每克樣品中的菌落數(shù)是是。( (稀釋度是稀釋度是10105 5) )(2)(2)預(yù)期結(jié)果預(yù)期結(jié)果: :相同稀釋度下相同稀釋度下, ,牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上的菌落數(shù)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上的菌落數(shù)( (選填選填“多于多于”或或“少于少于”) )無(wú)氮培養(yǎng)基上的數(shù)目。原無(wú)氮培養(yǎng)基上的

41、數(shù)目。原因是因是_ _ _。5 510107 730300多于多于無(wú)氮培養(yǎng)基上只有土壤中的自生固氮菌能生存繁殖無(wú)氮培養(yǎng)基上只有土壤中的自生固氮菌能生存繁殖,而牛而牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上幾乎允許土壤中所有菌類(lèi)生存肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上幾乎允許土壤中所有菌類(lèi)生存(50(500.1)0.1)10105 5=5=510107 7P195【互動(dòng)探究】【互動(dòng)探究】(1)(1)據(jù)上題可知據(jù)上題可知, ,在稀釋涂布平板法中在稀釋涂布平板法中, ,為何需涂布三個(gè)平板為何需涂布三個(gè)平板? ?提示提示: :對(duì)照作用、減少實(shí)驗(yàn)誤差等。一是作為對(duì)照作用、減少實(shí)驗(yàn)誤差等。一是作為對(duì)照對(duì)照實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn), ,判斷實(shí)判斷實(shí)驗(yàn)操作的準(zhǔn)確性

42、驗(yàn)操作的準(zhǔn)確性; ;二是作為重復(fù)實(shí)驗(yàn)二是作為重復(fù)實(shí)驗(yàn), ,統(tǒng)計(jì)時(shí)取平均值統(tǒng)計(jì)時(shí)取平均值, ,以減少以減少實(shí)驗(yàn)誤差。實(shí)驗(yàn)誤差。(2)(2)用稀釋涂布平板法來(lái)統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目用稀釋涂布平板法來(lái)統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目, ,其結(jié)果與實(shí)際其結(jié)果與實(shí)際值相比如何值相比如何? ?提示提示: :比實(shí)際值低。培養(yǎng)基上的一個(gè)菌落也可能是相連的兩個(gè)比實(shí)際值低。培養(yǎng)基上的一個(gè)菌落也可能是相連的兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞或多個(gè)細(xì)胞, ,而統(tǒng)計(jì)結(jié)果一般用菌落數(shù)來(lái)表示而統(tǒng)計(jì)結(jié)果一般用菌落數(shù)來(lái)表示, ,因此統(tǒng)計(jì)的菌落因此統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)要少于活菌的實(shí)際值。數(shù)要少于活菌的實(shí)際值。P195【變式訓(xùn)練】【變式訓(xùn)練】植物的秸稈、枝葉等纖維物質(zhì)是地

43、球上最多的可植物的秸稈、枝葉等纖維物質(zhì)是地球上最多的可再生資源再生資源, ,以纖維素類(lèi)物質(zhì)生產(chǎn)燃料乙醇的研究越來(lái)越受重視。以纖維素類(lèi)物質(zhì)生產(chǎn)燃料乙醇的研究越來(lái)越受重視。纖維素酶糖化法是目前常用的方法纖維素酶糖化法是目前常用的方法, ,其操作過(guò)程如圖所示其操作過(guò)程如圖所示: :P195(1)(1)該方法中該方法中, ,常用的微生物常用的微生物Y Y是是, ,若從土壤中獲得微生物若從土壤中獲得微生物X,X,請(qǐng)寫(xiě)出分離的流程圖請(qǐng)寫(xiě)出分離的流程圖: :。為了鑒別微生物為了鑒別微生物X,X,培養(yǎng)基的成分為培養(yǎng)基的成分為CMC-NaCMC-Na、酵母膏、酵母膏、KHKH2 2POPO4 4、瓊脂、土豆汁等

44、瓊脂、土豆汁等; ;在該培養(yǎng)基中在該培養(yǎng)基中,CMC-Na,CMC-Na的作用是的作用是。酵母菌酵母菌土壤取樣土壤取樣選擇培養(yǎng)選擇培養(yǎng)梯度稀釋梯度稀釋將菌液涂布到特定的選擇培將菌液涂布到特定的選擇培養(yǎng)基上養(yǎng)基上挑選產(chǎn)生透明圈的菌落挑選產(chǎn)生透明圈的菌落提供碳源提供碳源(或便于鑒別或便于鑒別)P195是天然纖維素經(jīng)化學(xué)改性后得到的纖維素衍生物 (2)(2)若經(jīng)選擇若經(jīng)選擇, ,微生物微生物X X為木霉為木霉, ,則其內(nèi)分解纖維素的酶至少包括則其內(nèi)分解纖維素的酶至少包括_三種組分三種組分, ,這三種酶為協(xié)同作用這三種酶為協(xié)同作用, ,將纖維素分解為葡萄糖。將纖維素分解為葡萄糖。(3)(3)在操作過(guò)程

45、中在操作過(guò)程中, ,過(guò)程過(guò)程需需以保證乙醇的產(chǎn)生。以保證乙醇的產(chǎn)生。(4)(4)操作發(fā)現(xiàn)操作發(fā)現(xiàn), ,糖液濃度過(guò)高時(shí)糖液濃度過(guò)高時(shí), ,葡萄糖的產(chǎn)生會(huì)受到抑制葡萄糖的產(chǎn)生會(huì)受到抑制, ,其原其原因是因是。C C1 1酶、酶、C Cx x酶、葡萄糖苷酶酶、葡萄糖苷酶密閉發(fā)酵密閉發(fā)酵產(chǎn)物產(chǎn)物(葡萄糖葡萄糖)過(guò)多過(guò)多,反饋抑制了分解秸稈的酶的活性反饋抑制了分解秸稈的酶的活性P1951.1.下表是一種培養(yǎng)基的配方下表是一種培養(yǎng)基的配方, ,請(qǐng)回答請(qǐng)回答: :牛肉膏牛肉膏蛋白胨蛋白胨NaClNaCl瓊脂瓊脂水水0.5 g0.5 g1 g1 g0.5 g0.5 g2 g2 g200 mL200 mL(1)

46、該培養(yǎng)基從物理性質(zhì)來(lái)說(shuō)該培養(yǎng)基從物理性質(zhì)來(lái)說(shuō),屬于屬于培養(yǎng)基。培養(yǎng)基。固體固體P195(2)(2)無(wú)菌操作是微生物培養(yǎng)最基本的要求無(wú)菌操作是微生物培養(yǎng)最基本的要求, ,其中滅菌指的是其中滅菌指的是 _。對(duì)于培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、實(shí)驗(yàn)操作者的雙手、空氣、牛對(duì)于培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、實(shí)驗(yàn)操作者的雙手、空氣、牛奶所采用的滅菌和消毒方法依次是奶所采用的滅菌和消毒方法依次是。( (填代號(hào)填代號(hào)) )化學(xué)消毒化學(xué)消毒 灼燒滅菌灼燒滅菌 干熱滅菌干熱滅菌紫外線滅菌紫外線滅菌 高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌 巴氏消毒法巴氏消毒法(3)(3)在平板劃線法中在平板劃線法中, ,每次灼燒接種環(huán)后每次灼燒接種環(huán)后, ,

47、為什么要等其冷卻后為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線再進(jìn)行劃線? ?。以免接種環(huán)溫度太高以免接種環(huán)溫度太高,殺死菌種殺死菌種使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物,包括芽孢和孢子包括芽孢和孢子P195(4)(4)稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí)稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí), ,一般選擇菌落數(shù)在一般選擇菌落數(shù)在_的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)的平板進(jìn)行計(jì)數(shù), ,在某一稀釋度下平板上的平均菌落數(shù)為在某一稀釋度下平板上的平均菌落數(shù)為100100個(gè)個(gè), ,所用稀釋液的體積為所用稀釋液的體積為0.2 mL,0.2 mL,稀釋倍數(shù)為稀釋倍數(shù)為10105 5時(shí)時(shí), ,則每毫升樣品則每毫升

48、樣品中的菌落數(shù)為中的菌落數(shù)為。(5)(5)以尿素為惟一氮源的培養(yǎng)基中加入以尿素為惟一氮源的培養(yǎng)基中加入指示劑指示劑, ,培養(yǎng)某培養(yǎng)某種細(xì)菌后種細(xì)菌后, ,如果如果pHpH升高升高, ,指示劑將指示劑將, ,利用這一特點(diǎn)利用這一特點(diǎn), ,可準(zhǔn)可準(zhǔn)確地鑒定該種細(xì)菌能夠分解尿素。確地鑒定該種細(xì)菌能夠分解尿素。5 510107 730300酚紅酚紅變紅變紅(100(1000.2)0.2)10105 5 =5=510107 7。P1952.2.大腸桿菌是大腸桿菌是“明星菌明星菌”, ,在生物技術(shù)上常被稱(chēng)為在生物技術(shù)上常被稱(chēng)為“工程菌工程菌”。某生物小組的同學(xué)利用實(shí)驗(yàn)室提供的某品系大腸桿菌及其他必某生物小

49、組的同學(xué)利用實(shí)驗(yàn)室提供的某品系大腸桿菌及其他必需材料需材料, ,對(duì)該品系大腸桿菌進(jìn)行了培養(yǎng)、計(jì)數(shù)。對(duì)該品系大腸桿菌進(jìn)行了培養(yǎng)、計(jì)數(shù)。(1)(1)大腸桿菌在生長(zhǎng)過(guò)程中對(duì)各種營(yíng)養(yǎng)成分所需的量不同大腸桿菌在生長(zhǎng)過(guò)程中對(duì)各種營(yíng)養(yǎng)成分所需的量不同, ,故制故制備培養(yǎng)基時(shí)各營(yíng)養(yǎng)成分要有合適的備培養(yǎng)基時(shí)各營(yíng)養(yǎng)成分要有合適的 。(2)(2)在制備固體培養(yǎng)基進(jìn)行倒平板操作時(shí)在制備固體培養(yǎng)基進(jìn)行倒平板操作時(shí), ,平板冷凝后平板冷凝后, ,甲同學(xué)甲同學(xué)將平板倒置將平板倒置, ,其原因是其原因是 。(3)(3)乙同學(xué)采用平板劃線法接種乙同學(xué)采用平板劃線法接種, ,獲得單菌落后繼續(xù)篩選獲得單菌落后繼續(xù)篩選, ,在每在每

50、次劃線之前都要灼燒接種環(huán)次劃線之前都要灼燒接種環(huán), ,其目的是其目的是。比例比例 培養(yǎng)皿上會(huì)凝有水珠培養(yǎng)皿上會(huì)凝有水珠,平板倒置可防止水珠平板倒置可防止水珠落入培養(yǎng)皿中而造成污染落入培養(yǎng)皿中而造成污染,還可使培養(yǎng)皿表面的水分更好的揮發(fā)還可使培養(yǎng)皿表面的水分更好的揮發(fā) 殺死上次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種殺死上次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種P195(4)(4)丙、丁同學(xué)用稀釋涂布平板法測(cè)定同一土壤樣品中的細(xì)菌丙、丁同學(xué)用稀釋涂布平板法測(cè)定同一土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)。在對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為數(shù)。在對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為10106 6的培養(yǎng)基中的培養(yǎng)基中, ,得到以下兩種統(tǒng)計(jì)結(jié)果得到以下兩種統(tǒng)計(jì)結(jié)果: :丙同學(xué)在該濃度

51、下涂布了一個(gè)平板丙同學(xué)在該濃度下涂布了一個(gè)平板, ,統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)為統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)為230;230;丁同丁同學(xué)在該濃度下涂布了學(xué)在該濃度下涂布了3 3個(gè)平板個(gè)平板, ,統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別為統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別為2121、212212、256,256,然后取其平均值然后取其平均值163163作為統(tǒng)計(jì)結(jié)果。請(qǐng)?jiān)u價(jià)這兩位同學(xué)的作為統(tǒng)計(jì)結(jié)果。請(qǐng)?jiān)u價(jià)這兩位同學(xué)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果的有效性實(shí)驗(yàn)結(jié)果的有效性: :丙同學(xué)的結(jié)果丙同學(xué)的結(jié)果, ,原因是原因是。丁同學(xué)的結(jié)果丁同學(xué)的結(jié)果, ,原因是原因是。(5)(5)戊同學(xué)在測(cè)定大腸桿菌的密度時(shí)發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上還有其他雜戊同學(xué)在測(cè)定大腸桿菌的密度時(shí)發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上還有其他雜菌的菌落菌的菌落, ,由此他判斷該品系大腸桿菌被污染了。他的判斷是由此他判斷該品系大腸桿菌被污染了。他的判斷是否確切否確切? ?為什么為什么? ? 。不確切。因?yàn)椴荒艽_定雜菌是來(lái)自培養(yǎng)基還是來(lái)自培養(yǎng)過(guò)程不確切。因?yàn)椴荒艽_定雜菌是來(lái)自培養(yǎng)基還是來(lái)自培養(yǎng)過(guò)程無(wú)效無(wú)效無(wú)效無(wú)效沒(méi)有設(shè)置重復(fù)組實(shí)驗(yàn)沒(méi)有設(shè)置重復(fù)組實(shí)驗(yàn),結(jié)果不具有說(shuō)服力結(jié)果不具有說(shuō)服力一個(gè)平板上的菌落計(jì)數(shù)結(jié)果與另外兩個(gè)相差太大一個(gè)平板上的菌落計(jì)數(shù)結(jié)果與另外兩個(gè)相差太大P1953.3.白僵菌高孢粉是國(guó)家林業(yè)局推廣的高效生物殺蟲(chóng)劑之一白僵菌高孢粉是國(guó)家林業(yè)局推廣的高效