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1、題目：蛋白質沉淀反應一、實驗目的v掌握幾種使蛋白質沉淀的方法；v掌握蛋白質可逆沉淀與不可逆沉淀的區(qū)別；v理解蛋白質變性和沉淀的關系。二、原理v蛋白質是親水膠體，正常狀態(tài)下，蛋白質分子表面具有水化膜和電荷層，能保持其膠體溶液的穩(wěn)定性，在一定因素 的影響下，蛋白質會失去電荷和脫水沉淀。 v蛋白質的變性與沉淀之間沒有必然聯(lián)系 蛋白質沉淀反應（一）蛋白質的鹽析作用 （二）乙醇沉淀蛋白質 （三）重金屬鹽類沉淀蛋白質 （四）生物堿試劑沉淀蛋白質 （一）蛋白質的鹽析作用v加鹽類如硫酸銨、硫酸鈉、氯化鈉等可以破壞蛋白 質膠體周圍的水膜，同時又中和了蛋白質分子的電 荷，因此使蛋白質產(chǎn)生沉淀，這種加鹽使蛋白質沉

2、淀析出的現(xiàn)象稱鹽析。 v鹽溶現(xiàn)象為低鹽濃度可使蛋白質的溶解度增加，實 驗時要加足夠量的鹽。 v蛋白質的鹽析作用是可逆過程，用鹽析方法沉淀蛋 白質時，較少引起蛋白質變性，經(jīng)透析或用水稀釋 時又可溶解。（二）乙醇沉淀蛋白質v有機溶劑如酒精、丙酮等可使蛋白質產(chǎn)生沉淀，這 是由于這些有機溶劑和水有較強的作用，破壞了蛋 白質分子周圍的水膜，因此發(fā)生沉淀作用。若及時 將蛋白質沉淀與丙酮或乙醇分離，蛋白質沉淀則可 重新溶解于水中。 （三）重金屬鹽類沉淀蛋白質v溶液pH在蛋白質等電點以上時，重金屬鹽類(如 Pb2+、Cu2+、Hg2+及Ag+等)易與蛋白質結合成不 溶性鹽而沉淀。 v重金屬鹽類沉淀蛋白質通常比

3、較完全，故常用重金 屬鹽除去液體中的蛋白質。但應注意，在使用某些 重金屬鹽(如硫酸銅或醋酸鉛)沉淀蛋白質時，不可 過量，否則將引起沉淀再溶解。此時的溶解為生成 憎水膠體的緣故。 （四）生物堿試劑沉淀蛋白質v生物堿是植物中具有顯著生理作用的類含氮的堿 性物質。凡能使生物堿沉淀，或能與生物堿作用產(chǎn) 生顏色反應的物質，稱為生物堿試劑。如鞣酸、苦 味酸和磷鎢酸等。 v當?shù)鞍踪|溶液pH值低于其等電點時，蛋白質為陽離 子，能與生物堿試劑的陰離子結合成性鹽而沉淀。 v溶液中的蛋白亦能被有機酸沉淀，其中以三氯醋酸 的作用最為靈敏而且特異。因此被用于蛋白質的首 選沉淀劑，只能沉淀蛋白質，不能沉淀其水解產(chǎn)物， 加熱可除去。 三、實驗材料v實驗材料： 雞卵清蛋白液，吸管（1mlx4，2mlx4，0.5mlx1， 5mlx2），試管（1.5x15cmx14），水浴鍋，滴管，電爐 v實驗試劑： 苯酚（0.5%），硫酸

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