生物化學(xué)：第十一章 核酸的生物合成

1、 第 十 章核 酸 的 生 物 合 成第一節(jié) DNA的生物合成 一 DNA的半保留復(fù)制 1953年，Watson與Crick共同提出了DNA雙螺旋模型，并就其復(fù)制過程進(jìn)行了推測： DNA在其復(fù)制過程中，堿基之間的氫鍵要斷裂，雙鏈要解旋分開； 每條單鏈各自作為模板，在其上合成新的互補(bǔ)鏈，從而產(chǎn)生兩條新的DNA雙鏈，它們保持了原DNA鏈上的堿基順序。 因此，DNA的復(fù)制過程就是一個(gè)半保留復(fù)制的過程。 1958年，Meselson與Stahl利用N的同位素標(biāo)記，首先證明了DNA的復(fù)制過程的確就是一個(gè)半保留復(fù)制的過程。 他們先使大腸桿菌長期在以15NH4CL為唯一氮源的培養(yǎng)基中生長，使其DNA全部變成

2、15NDNA。然后再將細(xì)菌轉(zhuǎn)入普通培養(yǎng)基（含14NH4CL）中，并將各代的細(xì)菌DNA抽提出來進(jìn)行氯化銫密度梯度離心。半保留復(fù)制 在DNA的復(fù)制過程中，在酶的催化作用下，堿基之間的氫鍵要斷裂，雙鏈要解旋分開； 按照堿基配對(duì)原則，以四種脫氧核糖核苷三磷酸為底物，每條DNA單鏈各自作為模板，在其上合成新的互補(bǔ)鏈，從而產(chǎn)生兩條新的DNA雙鏈，新的DNA雙鏈保持了原DNA鏈上的堿基順序。參考 DNADNA復(fù)制復(fù)制（ replicationreplication） DNA DNA復(fù)制是指以親代復(fù)制是指以親代DNADNA分子的雙鏈分子的雙鏈為模板，按照堿基配對(duì)的原則，合成出為模板，按照堿基配對(duì)的原則，合成出

3、與親代與親代DNADNA分子相同的兩個(gè)雙鏈分子相同的兩個(gè)雙鏈DNADNA分子分子的過程。的過程。1半保留復(fù)制是雙鏈DNA復(fù)制的普遍形式；2即使是單鏈DNA分子，其復(fù)制過程中也要先形成雙鏈的復(fù)制型（RF）;3要求原DNA雙鏈解開，每一單鏈為模板，依堿基配對(duì)原則，合成另一條互補(bǔ)鏈。關(guān)于“模板”的定義 模板：能提供合成一條互補(bǔ)鏈所需精確信息的核酸鏈。 有學(xué)者提出，模板的定義宜為“用于合成（另）一種大分子所用的大分子模型”； 也有學(xué)者提出，模板的定義宜為“能提能提供合成（另）一種大分子所需精確信息的供合成（另）一種大分子所需精確信息的大分子模型大分子模型”；4復(fù)制、轉(zhuǎn)錄及逆轉(zhuǎn)錄，在形成雙螺旋分子時(shí)均需

4、堿基配對(duì)；5堿基、核苷、核苷酸單體之間不形成堿基對(duì)，而只是在雙螺旋時(shí)因空間關(guān)系而形成。6 DNA半保留復(fù)制機(jī)制可說明DNA在代謝上的穩(wěn)定性。 經(jīng)許多代復(fù)制后，DNA的多核苷酸鏈仍保持完整，并于后代不被分解。 DNA較細(xì)胞的其它成份要穩(wěn)定得多。二復(fù)制的單位 （一）復(fù)制子 1復(fù)制子 復(fù)制子指基因組中能夠獨(dú)立進(jìn)行復(fù)制的單位。 每個(gè)復(fù)制子都含有控制復(fù)制的起點(diǎn)，可能還有終止復(fù)制的終點(diǎn)。 復(fù)制過程是在起始階段受到控制的。 一旦復(fù)制開始，即進(jìn)行下去，直到整個(gè)復(fù)制子完成復(fù)制。2復(fù)制叉 復(fù)制時(shí)復(fù)制時(shí)DNA雙鏈在起點(diǎn)處會(huì)形成叉雙鏈在起點(diǎn)處會(huì)形成叉子樣的結(jié)構(gòu)子樣的結(jié)構(gòu)，此即復(fù)制叉，此即復(fù)制叉。 隨復(fù)制叉的移動(dòng)，完成

5、DNA的復(fù)制過程。 因此，復(fù)制叉也被認(rèn)為是DNA復(fù)制的“生長點(diǎn)”。 由于DNA復(fù)制時(shí)會(huì)形成復(fù)制叉，導(dǎo)致DNA雙鏈在其解鏈區(qū)域看起來象一個(gè)泡狀結(jié)構(gòu)或象一只眼睛，故有時(shí)又將此泡狀結(jié)構(gòu)稱作“復(fù)制泡”或“復(fù)制眼”。3原核生物染色體DNA只有一個(gè)復(fù)制子 原核生物染色體DNA在其復(fù)制時(shí)，一般是頭一次復(fù)制尚未結(jié)束，就又在新生鏈的復(fù)制子的起點(diǎn)開始新一輪復(fù)制。 E.coli的DNA復(fù)制一次需40min。 但在迅速生長的原核生物中，第一次復(fù)制尚未完成，第二次復(fù)制就在同一個(gè)始點(diǎn)上開始，從而，使原核生物可以用更快的速度繁殖。就單個(gè)的復(fù)制叉的移動(dòng)速度而言，就單個(gè)的復(fù)制叉的移動(dòng)速度而言，原核生物的較真核生物的移動(dòng)要快原核

6、生物的較真核生物的移動(dòng)要快 但由于原核生物染色體原核生物染色體DNA只有一個(gè)復(fù)制子，只有一個(gè)復(fù)制子，而真核生物染色體而真核生物染色體DNA卻有多個(gè)復(fù)制子卻有多個(gè)復(fù)制子， 因此真核生物染色體真核生物染色體DNA復(fù)制的總速度反而比復(fù)制的總速度反而比原核生物染色體原核生物染色體DNA復(fù)制的總速度要快復(fù)制的總速度要快。 在真核生物染色體的不同位置上有多個(gè)復(fù)制起點(diǎn)，如在30000個(gè)堿基對(duì)長的果蠅染色體DNA上有20003000個(gè)復(fù)制起點(diǎn)。 從這些起始點(diǎn)開始向相反方向復(fù)制，就形從這些起始點(diǎn)開始向相反方向復(fù)制，就形成多個(gè)復(fù)制泡。成多個(gè)復(fù)制泡。 這一狀況已用電子顯微鏡觀察得到證實(shí)。 4復(fù)制子的大小并非絕對(duì)不變

7、，這因生物種類而異，也與生長條件、染色體結(jié)構(gòu)等因素有關(guān)，且同一DNA分子上不同復(fù)制子的大小不均一。（二）復(fù)制的方向 復(fù)制的方向可以朝一個(gè)或兩個(gè)方向進(jìn)行。這是由在復(fù)制的起點(diǎn)形成的復(fù)制叉的個(gè)數(shù)決定的： 如果形成一個(gè)復(fù)制叉，則復(fù)制的方向是一個(gè)，這時(shí)的復(fù)制也就是所謂的“單向復(fù)制”； 如果形成二個(gè)復(fù)制叉，則復(fù)制的方向是二個(gè)，這時(shí)的復(fù)制也就是所謂的“雙向復(fù)制”。 復(fù)制的多模式復(fù)制的多模式 單起點(diǎn)、單方向單起點(diǎn)、單方向多起點(diǎn)、單方向多起點(diǎn)、單方向單起點(diǎn)、雙方向單起點(diǎn)、雙方向多起點(diǎn)、雙方向多起點(diǎn)、雙方向 原核生物的染色體與質(zhì)粒DNA、真核生物的細(xì)胞器DNA均為環(huán)狀的雙鏈分子，它們都在一個(gè)固定的起點(diǎn)開始復(fù)制，大

8、多數(shù)為雙向的。 復(fù)制一般是對(duì)稱的，即兩條鏈同時(shí)開始復(fù)復(fù)制一般是對(duì)稱的，即兩條鏈同時(shí)開始復(fù)制。制。 但是，有些則否，即一條鏈復(fù)制后再進(jìn)行另一條鏈的復(fù)制。三 原核生物DNA的復(fù)制（DNA 指導(dǎo)下的DNA合成）（一）DNA的聚合反應(yīng) 1956年，Kornberg首先從大腸桿菌中發(fā)現(xiàn)了DNA聚合酶，此后在不同的生物中都找到了DNA聚合酶。1. DNA的聚合反應(yīng)的條件 （1） DNA模板； （2） 底物dNTP(N=A,G,C,T)； （3） DNA聚合酶及其活性所需要的Mg2+；酶的活性部位緊密結(jié)合Zn2+； （4）與模板DNA互補(bǔ)的一小段多聚核苷酸引物，要露出其3-OH。 引物一般為引物一般為RNA

9、。但是少數(shù)情況是DNA或tRNA。2. 聚合反應(yīng) n1dATP+n2dGTP+n3dCTP+n4dTTP+DNA（模板） DNA-(n1dAMP-n2dGMP-n3dCMP-n4dTMP)+(n1+n2+n3+n4)PPi3 聚合反應(yīng)的機(jī)理 引物上的3-OH對(duì)進(jìn)入的底物dNTP(N=A,G,C,T)上的 -P進(jìn)行親核攻擊，形成3，5-磷酸二酯鍵，并脫下焦磷酸。 所需能量來自 -與 -磷酸基之間的高能鍵的斷裂。 而進(jìn)入的底物dNTP上的堿基要與模板上相應(yīng)的堿基配對(duì)則是DNA聚合酶催化反應(yīng)進(jìn)行的前提。4 聚合反應(yīng)的特點(diǎn) （1） 只能以dNTP(N=A,G,C,T)為底物，而不能是dNDP或dNMP

10、(N=A、G、C、T)； （2） 要有模板的指導(dǎo)，并遵守堿基配對(duì)原則； （3） 要有引物及其上的3-OH存在； DNA聚合酶只能催化dNTP加到引物上的3-OH上，而不能使dNTP自身發(fā)生聚合。 （4） DNA 鏈的生長方向?yàn)?3。 （5） 產(chǎn)物的性質(zhì)與模板的相同。 以不同來源的DNA為模板，同樣引起和促進(jìn)新的DNA的酶促合成。 產(chǎn)物產(chǎn)物DNA的性質(zhì)的性質(zhì)完全不取決于完全不取決于DNA聚合聚合酶的來源，也與四種脫氧核苷酸的比例無關(guān)，酶的來源，也與四種脫氧核苷酸的比例無關(guān)，而而僅僅取決于僅僅取決于DNA模板模板。 產(chǎn)物DNA與模板雙螺旋DNA具有相同的堿基組成，也就是說DNA聚合酶能使兩條模板D

11、NA鏈都進(jìn)行復(fù)制。（二）DNA聚合酶 1 DNA聚合酶 I 大腸桿菌中共有三種DNA聚合酶，這是由Kornberg首先從大腸桿菌中提取的，也是人類發(fā)現(xiàn)的第一個(gè)DNA聚合酶，也叫Kornberg酶。 （1） 只有一條多肽鏈，分子量為109，000，活性部位含有Zn；The search for an enzyme that could synthesize DNA began in 1955. Work by Arthur Kornberg and colleagues led to the purification and characterization of DNA polymerase

12、from E. coli cells, a single-polypeptide enzyme now called DNA polymerase I (Mr 103,000; encoded by the polA gene). Much later, investigators found that E. coli contains at least four other distinct DNA polymerases. （2） 是多功能酶，主要具有以下功能。 a 53聚合酶活性 催化DNA 鏈的合成延長。 與其它DNA聚合酶一樣，只能催化DNA鏈的延長，而不能啟動(dòng)DNA鏈的合成。b 3

13、5核酸外切酶活性 此即從3端向5端水解DNA 鏈的活性。 當(dāng)酶與模板結(jié)合時(shí)酶與模板結(jié)合時(shí)會(huì)引起酶構(gòu)會(huì)引起酶構(gòu)象的變化象的變化，使酶能夠正確識(shí)別進(jìn)入的底物核苷酸與模板核苷酸之間的堿基配對(duì)與否。 一旦在合成過程中有錯(cuò)誤的核苷酸摻有錯(cuò)誤的核苷酸摻入入而不能與模板鏈上的堿基配對(duì)而不能與模板鏈上的堿基配對(duì)時(shí)，此酶便可用其用其35核酸外切酶活性核酸外切酶活性將錯(cuò)誤的核苷酸切除而保證正確合成DNA鏈。 因此，該功能也被認(rèn)為是“校正功能”。該酶的該酶的35外切酶活性只對(duì)單鏈而不是外切酶活性只對(duì)單鏈而不是雙鏈的雙鏈的3-端起作用端起作用 在正常的聚合條件下，該活性受到抑制，而當(dāng)堿基配對(duì)出現(xiàn)錯(cuò)誤時(shí)，該酶的聚合反應(yīng)

14、停止，而35核酸外切酶活性出現(xiàn)并切除錯(cuò)配的堿基，然后此外切酶活性停止而恢復(fù)酶的聚合酶活性以繼續(xù)合成DNA鏈。 可見，在DNA復(fù)制的時(shí)候，堿基配對(duì)受到雙重的核對(duì)： 聚合酶對(duì)堿基的選擇作用聚合酶對(duì)堿基的選擇作用和和35核酸核酸外切酶活性對(duì)錯(cuò)配堿基的校正作用外切酶活性對(duì)錯(cuò)配堿基的校正作用。c. 53核酸外切酶活性從5端向3端水解DNA 鏈而得到核苷酸或寡核苷酸 它只作用于雙鏈DNA中的單鏈。有時(shí)還可有時(shí)還可以跳過幾個(gè)核苷酸起作用以跳過幾個(gè)核苷酸起作用，如切除紫外照射引起的嘧啶二聚體。 該酶一般在切除引物或修復(fù)DNA損傷時(shí)起作用。它也被稱為修復(fù)酶。 有學(xué)者提出該酶在DNA成熟過程中起作用。d. 將DN

15、A聚合酶 I 用枯草桿菌蛋白酶或胰蛋白酶有限水解 可以得到分子量分別為75，000和36，000的兩個(gè)片段。 大片段具有聚合酶活性與35核酸外切酶活性； 小片段則具有53核酸外切酶活性。Protease cleavage DNA polymerase I has three enzymatic activities in a single polypeptide chain, which can be cleaved into two functional parts by mild protease treatment.2.DNA聚合酶 II只有一條多肽鏈，分子量120，000 有有53聚合

16、酶活性和聚合酶活性和35外切酶活性外切酶活性（即具有校正功能）（即具有校正功能），但無無53外切酶活性外切酶活性。 該酶催化合成DNA的特點(diǎn)與DNA聚合酶I基本相同。需要Mg2+、NH4+的激活。如果要使其催化DNA合成的速度達(dá)到最大，則需要有缺口的雙鏈DNA為模板-引物，且此缺口需約長達(dá)50-200bp（似應(yīng)為核苷酸？）。此缺口不能過大，否則酶活性會(huì)下降。 該酶也不是復(fù)制酶，而是修復(fù)酶。3. DNA聚合酶 III 目前認(rèn)為它是大腸桿菌細(xì)胞中真正負(fù)責(zé)催化DNA 鏈的合成延長的酶。具有多個(gè)亞基。是多功能酶。 有有5353聚合酶活性；有聚合酶活性；有3535外切酶外切酶活性（即具有校正功能）活性（

17、即具有校正功能）；無無5353外切酶外切酶活性活性。 它與DNA聚合酶 II 都最適宜作用于帶有小片段缺口（小于100bp）的雙鏈DNA，而DNA聚合酶I則最適宜作用在具有大段單鏈區(qū)的雙鏈DNA乃至于帶有很短引物的單鏈DNA。原核生物原核生物DNA-pol DNA-pol DNA-pol 功功能能5 3 聚合活性聚合活性+3 5 外切酶活性外切酶活性+5 3 外切酶活性外切酶活性+-分子量分子量109 000120 000140 000每個(gè)菌體中所含每個(gè)菌體中所含的酶分子數(shù)的酶分子數(shù)4004020聚合速率聚合速率（核苷酸數(shù)（核苷酸數(shù)/分分/酶）酶）100060 000 滯后鏈合成的模板形成環(huán)，

18、復(fù)制叉上的二聚滯后鏈合成的模板形成環(huán)，復(fù)制叉上的二聚體體DNA聚合酶聚合酶全酶同時(shí)合成兩條子鏈。全酶同時(shí)合成兩條子鏈。（三）DNA連接酶 DNA聚合酶只能催化DNA鏈的合成延長，并不能催化DNA 鏈之間的連接 催化連接兩條DNA 鏈的功能由DNA連接酶來行使。 I. E（哺乳動(dòng)物與噬菌體感染的大腸桿菌）+ATP =E-AMP +PPi E （大腸桿菌）+ NAD+ = E-AMP + NMNII. E-AMP + 3ATGT5 5TA-OH P-CA 3AT-GT5= 5TA-OH AMP-P-CA3 III. 3AT GT5 5TA-OH AMP-P-CA3 =3A-T-G-T5 5T-A-

19、C-A3 DNA連接酶催化DNA雙鏈之切口處的5-磷酸基與3-羥基之間形成3，5-磷酸二酯鍵。 對(duì)切口處的核苷酸殘基是什么堿基組成DNA連接酶并無要求， 而只要求切口處的只要求切口處的5-磷酸基與磷酸基與3-羥基應(yīng)羥基應(yīng)當(dāng)位于相鄰位置當(dāng)位于相鄰位置。 在反應(yīng)中要消耗能量，在大腸桿菌中由在反應(yīng)中要消耗能量，在大腸桿菌中由NAD+提供，提供，而哺乳動(dòng)物與噬菌體感染的大腸而哺乳動(dòng)物與噬菌體感染的大腸桿菌中則由桿菌中則由ATP提供提供。 DNA連接酶不能連接游離的兩條連接酶不能連接游離的兩條DNA。 T4 DNA連接酶則可以作用于上述切口處，而且可以連接無單鏈粘性末端的平頭雙鏈DNA，但是不能連接游離

20、的單鏈DNA。（四）DNA的半不連續(xù)復(fù)制 1. 半不連續(xù)復(fù)制和岡崎片段 （1）半不連續(xù)復(fù)制 DNA 雙鏈在其復(fù)制過程中，所產(chǎn)生的兩條子代DNA 雙鏈里，有一條的互補(bǔ)鏈?zhǔn)前?3方向（與復(fù)制叉的移動(dòng)方向相同）連續(xù)合成的。 此為前導(dǎo)鏈（又叫先導(dǎo)鏈）前導(dǎo)鏈（又叫先導(dǎo)鏈）； 而另一條的互補(bǔ)鏈?zhǔn)前?3方向（與復(fù)制叉的移動(dòng)方向相反）不連續(xù)合成的，即先合成若干短片段，再經(jīng)酶的作用將這些短片段連起來而形成大片段直到形成完整的互補(bǔ)鏈。 此為滯后鏈（或隨后鏈）滯后鏈（或隨后鏈）。 由于產(chǎn)生的兩條子代DNA 雙鏈中的互補(bǔ)鏈的合成過程從總的來看是一條連續(xù)而一條不連續(xù)，因此DNA 的復(fù)制過程也是一個(gè)半不連續(xù)復(fù)制的過程。

21、這種現(xiàn)象究其原因在于DNA聚合酶只能催化合成53DNA新鏈，而不能催化合成35DNA新鏈。（2） 岡崎片段 1968年，岡崎發(fā)現(xiàn)DNA 復(fù)制時(shí)首先合成的是小片段DNA，接著才出現(xiàn)較大的DNA片段，證明DNA 的復(fù)制過程是一個(gè)半不連續(xù)復(fù)制的過程。 因此，將DNA 復(fù)制時(shí)首先合成的小片段命名為岡崎片段。2 岡崎片段和引物RNA合成 岡崎片段的合成不僅需要dNTP(N=A,G,C,T)等底物，還需要一個(gè)與模板DNA堿基順序互補(bǔ)的短片段引物RNA。 （1） 引物RNA的合成 a. 引發(fā)：引物RNA的合成過程。 b. 引發(fā)體：引物RNA的合成系統(tǒng)。 c. 引物酶（引物合成酶）：催化合成引物RNA的酶。為

22、一單鏈，是引發(fā)體的成分之一，只在其中起作用。 d. 岡崎片段合成時(shí)，引發(fā)體沿滯后鏈的模板移動(dòng)，與復(fù)制叉的移動(dòng)方向一致，而與岡崎片段合成的方向相反。 移動(dòng)到一定位置上即可引發(fā)引物RNA的合成。 移動(dòng)和引發(fā)均需由ATP供給能量。 e. 引物RNA以5-三磷酸結(jié)尾。 f. 岡崎片段的合成不需特異的起始部位，因?yàn)閷槠沃痪哂袝簳r(shí)的功能。 在復(fù)制后期，岡崎片段將連接成DNA大分子。 （2） 岡崎片段和滯后鏈的形成 引發(fā)體引發(fā)體沿模板朝復(fù)制叉的移動(dòng)方向移動(dòng)，斷斷續(xù)續(xù)地引發(fā)滯后鏈的引物RNA的合成。 DNA聚合酶聚合酶 III在引物的3-OH端逐個(gè)加上與模板堿基配對(duì)的脫氧核苷酸以合成岡崎片段。 再以DNA

23、聚合酶聚合酶 I 的53核酸外切核酸外切酶活性酶活性逐個(gè)清除引物RNA上的核苷酸單位（也有學(xué)者提出由RNase H來行使此功能），并立即以前面的岡崎片段為引物，由DNA聚合酶聚合酶 I 的53聚合酶活性聚合酶活性補(bǔ)上與模板堿基配對(duì)的脫氧核苷酸單位; 最后，由DNA連接酶連接酶連接切口而形成完整的互補(bǔ)鏈。 DNA雙鏈形成雙螺旋不需要能量（？）3 DNA 雙鏈的分離 （1） DNA解鏈酶（DNA解螺旋酶） 該酶在復(fù)制叉的前方解開DNA 雙鏈一小段。 每解開一個(gè)堿基對(duì)，要消耗兩個(gè)ATP， 即使2ATP2ADP+2Pi （2） 單鏈結(jié)合蛋白（SSB） 它與解開螺旋的DNA 單鏈結(jié)合，可以穩(wěn)定解開的DN

24、A 單鏈，并防止復(fù)性，保護(hù)DNA 單鏈部分不被核酸酶降解。 它主要結(jié)合在A-T堿基對(duì)較密集的部位。 有學(xué)者提出，SSB能降低天然DNA的熔解溫度，促進(jìn)DNA解鏈。 原核生物的單鏈結(jié)合蛋白與DNA 單鏈的結(jié)合有正協(xié)同效應(yīng)，即當(dāng)?shù)谝粋€(gè)單鏈結(jié)合蛋白與DNA 單鏈結(jié)合后，后續(xù)的單鏈結(jié)合蛋白與DNA 單鏈的結(jié)合則越加容易。而真核生物的則否。（3）DNA旋轉(zhuǎn)酶（Gyrase） 又稱DNA拓樸異構(gòu)酶2（Type II topoisomerase），由兩個(gè)A亞基（105，000）和兩個(gè)B亞基（95，000）組成。 它兼有內(nèi)切酶和連接酶活力，能迅速使DNA鏈斷開又接上。 當(dāng)ATPADP+Pi供能時(shí)，該酶使松馳態(tài)

25、的DNA轉(zhuǎn)變?yōu)槌菪龖B(tài)。 無ATP時(shí)，又可使超螺旋態(tài)DNA轉(zhuǎn)變?yōu)樗神Y態(tài)?？蓞f(xié)助解鏈酶使DNA模板解旋。（4）DNA復(fù)制體（Replisome） 在DNA合成的生長點(diǎn)，即復(fù)制叉上，分布著各種各樣與復(fù)制有關(guān)的酶和輔助因子，在DNA鏈上形成離散的復(fù)合物，彼此配合，進(jìn)行高度精確的DNA復(fù)制。這一結(jié)構(gòu)即為DNA復(fù)制體。 DNA復(fù)制體只是與復(fù)制叉DNA特殊結(jié)構(gòu)相結(jié)合的蛋白質(zhì)復(fù)合物。 DNA聚合酶、解鏈酶、旋轉(zhuǎn)酶、引發(fā)體等均為其組成成份。 （5）復(fù)制的終止不需特定信號(hào)，也不需特殊的蛋白質(zhì)參與。關(guān)于關(guān)于 復(fù)復(fù) 制制 的的 終終 止（參考）止（參考） 大腸桿菌為環(huán)形大腸桿菌為環(huán)形DNADNA。 復(fù)制叉遇到多重拷

26、貝復(fù)制叉遇到多重拷貝TerTer（20bp20bp）后，）后，TusTus與與TerTer結(jié)合，復(fù)制叉停止前進(jìn)。結(jié)合，復(fù)制叉停止前進(jìn)。 兩個(gè)復(fù)制叉間的幾百個(gè)兩個(gè)復(fù)制叉間的幾百個(gè)DNADNA以一種未知的機(jī)以一種未知的機(jī)制復(fù)制。制復(fù)制。 由拓?fù)洚悩?gòu)酶由拓?fù)洚悩?gòu)酶將連環(huán)體分開。將連環(huán)體分開。四 真核生物DNA的合成 由于真核生物的情況比較復(fù)雜，因此總的研究不如原核生物的詳細(xì)。 （一） DNA聚合酶 現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)了幾種，都需要以dNTP(N=A,G,C,T)為底物，需Mg 2+激活，也需要模板和具有3-OH的引物鏈，DNA 鏈的生長方向也為53。 在DNA聚合酶、中，只有DNA聚合酶有35核酸外切酶活性，

27、此外就絕無其它外切酶活性。DNA-pol DNA-pol 延長后隨鏈延長后隨鏈DNA-pol DNA-pol 可能是可能是DNADNA修復(fù)修復(fù)酶酶DNA-pol DNA-pol 參與參與線粒體線粒體DNADNA復(fù)制復(fù)制DNA-polDNA-pol 延長前導(dǎo)鏈延長前導(dǎo)鏈DNA-pol DNA-pol 校讀、修復(fù)、填補(bǔ)缺口校讀、修復(fù)、填補(bǔ)缺口真核生物中真正負(fù)責(zé)復(fù)制作用：真核生物中真正負(fù)責(zé)復(fù)制作用：DNADNA聚合酶聚合酶- -， （二） DNA連接酶 以ATP為能量來源，與大腸桿菌中的作用機(jī)制相似。 （三） 在DNA的合成過程中，也存在岡崎片段，拓?fù)洚悩?gòu)酶、單鏈結(jié)合蛋白等。關(guān)于DNA序列的測定酶法

28、 關(guān)于關(guān)于DNADNA測序的測定測序的測定化學(xué)法化學(xué)法 化學(xué)法測序由化學(xué)法測序由MaxamMaxam、和、和GilbertGilbert于于19771977年所發(fā)明。其基本原理是用特異的年所發(fā)明。其基本原理是用特異的化學(xué)試劑作用于化學(xué)試劑作用于DNADNA分子中不同堿基，然分子中不同堿基，然后用哌啶切斷反應(yīng)堿基的多核苷酸鏈。后用哌啶切斷反應(yīng)堿基的多核苷酸鏈。用用4 4組不同的特異反應(yīng)，就可以使末端標(biāo)組不同的特異反應(yīng)，就可以使末端標(biāo)記的記的DNADNA分子切成不同長度的片段，其末分子切成不同長度的片段，其末端都是該特異的堿基。經(jīng)變性膠電泳和端都是該特異的堿基。經(jīng)變性膠電泳和放射自顯影得到測序圖譜

29、。放射自顯影得到測序圖譜。 4 4組特異的反應(yīng)如下組特異的反應(yīng)如下: : (1) G (1) G反應(yīng)反應(yīng) 用硫酸二甲酯用硫酸二甲酯(dirnethyl sulfate,DMS)(dirnethyl sulfate,DMS)使鳥嘌呤的使鳥嘌呤的N N7 7原子甲基化，加熱引起甲基化鳥嘌呤脫原子甲基化，加熱引起甲基化鳥嘌呤脫落，多核苷酸鏈可在該處斷裂。落，多核苷酸鏈可在該處斷裂。 (2) G+A(2) G+A反應(yīng)反應(yīng) 用甲酸使用甲酸使A A和和G G嘌呤環(huán)嘌呤環(huán)上的上的N N原子質(zhì)子化，從而使其糖首鍵變得原子質(zhì)子化，從而使其糖首鍵變得不穩(wěn)定，再用哌啶使鍵斷裂。不穩(wěn)定，再用哌啶使鍵斷裂。 (3)T+

30、C(3)T+C反應(yīng)反應(yīng) 用肼使用肼使T T和和C C的嘧啶環(huán)斷的嘧啶環(huán)斷裂，再用哌啶除去堿基。裂，再用哌啶除去堿基。 (4) C(4) C反應(yīng)反應(yīng) 當(dāng)有鹽存在時(shí)，只有當(dāng)有鹽存在時(shí)，只有C C與與肼反應(yīng)，并被哌啶除去。肼反應(yīng)，并被哌啶除去。PCR技術(shù)的原理第二節(jié) DNA的損傷與修復(fù) 有些物理化學(xué)因子，如紫外、電離輻射、化學(xué)誘變劑等可使細(xì)胞DNA受到損傷，引起生物的突變或致死。 一 光復(fù)活修復(fù) （一） 紫外照射此起的DNA損傷 紫外照射可使同一單鏈DNA中相鄰的兩個(gè)嘧啶之間產(chǎn)生一個(gè)環(huán)形丁烷，因而形成嘧啶二聚體，其中以胸腺嘧啶二聚體（TT）為主要。 DNA中所含T越多，尤其是排列中相鄰的機(jī)會(huì)越多，紫

31、外線劑量越大，所形成的TT量越多，這會(huì)導(dǎo)致DNA復(fù)制和轉(zhuǎn)錄功能受到阻礙，則細(xì)菌對(duì)紫外作用越敏感，（二） 光復(fù)活修復(fù) 由光復(fù)活酶來完成。 光復(fù)活酶在暗處即可識(shí)別、結(jié)合DNA上的受損傷部位嘧啶二聚體，形成酶-DNA復(fù)合物。經(jīng)可見光照射，酶便活化，將二聚體切開，酶再釋放，受損部位得以修復(fù)。 光復(fù)活作用是一種高度專一的修復(fù)方光復(fù)活作用是一種高度專一的修復(fù)方式。式。它只作用于紫外線引起的它只作用于紫外線引起的DNADNA嘧啶二聚嘧啶二聚體體。 光復(fù)活酶在生物界分布很廣，從低等光復(fù)活酶在生物界分布很廣，從低等單細(xì)胞生物一直到鳥類都有，而單細(xì)胞生物一直到鳥類都有，而高等的哺高等的哺乳類卻沒有乳類卻沒有。 這

32、說明在生物進(jìn)化過程中該作用逐漸這說明在生物進(jìn)化過程中該作用逐漸被別的修復(fù)系統(tǒng)所取代，并丟失了這個(gè)酶。被別的修復(fù)系統(tǒng)所取代，并丟失了這個(gè)酶。二切除修復(fù) 不需見光，屬DNA損傷的暗復(fù)活作用。這是一個(gè)暗過程。在一系列酶的作用下，將DNA分子中的受損傷部位切除，以完整的一條鏈為模板，合成出被切去的部份，再使DNA恢復(fù)正常結(jié)構(gòu)。 此過程共分四個(gè)步驟： （1）由專一的核酸內(nèi)切酶識(shí)別嘧啶二聚體的部位后，在靠近二聚體5-端處切斷單鏈DNA，露出3-OH（不含二聚體）； （2）DNA聚合酶以完整的互補(bǔ)鏈為模板，在斷口處進(jìn)行局部的修復(fù)合成； （3）5-核酸外切酶切去含嘧啶二聚體的寡核苷酸片段； （4）連接酶將新合

33、成的DNA鏈與原來的DNA鏈連在一起。 此為“先補(bǔ)后切”過程，而“先切后補(bǔ)”則為（2）和（3）步互換。 大腸桿菌DNA聚合酶I兼有53核酸外切酶活性，故切除、修復(fù)可為同一種酶承擔(dān)。第三節(jié) 細(xì)菌的限制（聚）修飾系統(tǒng) 一細(xì)菌的限制性核酸內(nèi)切酶 細(xì)菌體內(nèi)能識(shí)別DNA特定核苷酸順序的核酸內(nèi)切酶，即細(xì)菌的限制性核酸內(nèi)切酶。 它是分析DNA的解剖刀，是DNA體外重組的重要工具，是分析巨大DNA分子的重要手段。二細(xì)菌的修飾作用 即細(xì)菌DNA上的某些堿基，在修飾酶作用下發(fā)生改變，此即細(xì)菌的修飾作用。這種作用有嚴(yán)格的種的特異性，從而不被自身的限制核酸內(nèi)切酶降解。 常見的修飾作用為甲基化作用，主要的修飾酶為甲基化

34、酶。此作用在宿主細(xì)胞中往往多次出現(xiàn)，并在整個(gè)細(xì)胞生活期中保持完整。三細(xì)菌的限制修飾系統(tǒng) 該系統(tǒng)由限制性核酸內(nèi)切酶和修飾酶組成，它可以降解入侵的異種DNA而不降解自身的DNA，從而可以防止異種DNA侵入自身細(xì)胞后的復(fù)制與轉(zhuǎn)錄，穩(wěn)定自身的遺傳性 .第四節(jié) RNA的生物合成 一原核生物的轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后加工 (一) 轉(zhuǎn)錄（DNA指導(dǎo)下的RNA合成） 即以DNA為模板，在酶的作用下合成RNA的過程。 （二） 原核生物的轉(zhuǎn)錄特點(diǎn) 1 底物NTP(N=A,G,C,U)； 2 RNA聚合酶(RNA polymerase)，純酶活性基團(tuán)的有效部分結(jié)合有Zn2+； 3 模板DNA； 4 合成方向 在單核苷酸的3-O

35、H上逐個(gè)加上與模板堿基配對(duì)的核苷酸，與模板的方向相反，朝53方向延長RNA鏈。 5 不需要引物。6 轉(zhuǎn)錄時(shí)的聚合反應(yīng) n1ATP+ n2GTP+n3CTP+n4UTP +DNA（模板） （n1AMP-n2GMP-n3CMP-n4UMP） +(n1+n2+n3+n4)PPi + DNA（模板）7 只以雙鏈DNA中的一條單鏈作為模板進(jìn)行轉(zhuǎn)錄 其中，能夠作為轉(zhuǎn)錄模板的DNA單鏈叫做模板鏈(template strand )或反意義鏈(antisense strand)、（-）鏈(minus strand)。 而另一條DNA單鏈則叫做非模板鏈(nontemplate strand)或有意義鏈(sens

36、e strand)、（+）鏈(plus strand)、編碼鏈(coding strand)。 轉(zhuǎn)錄時(shí)并非全部DNA都要轉(zhuǎn)錄是有選擇性的、不對(duì)稱的。同一染色體上各基因的模板鏈并不是都在同一條單鏈DNA上。 8 RNA聚合酶無校正功能。 9 合成的第一個(gè)核苷酸常常是GTP(pppG)或ATP(pppA)，其5-三磷酸基在轉(zhuǎn)錄過程中保持完整，不產(chǎn)生PPi。 大腸桿菌中以GTP為多。（三） RNA聚合酶的組成與功能 1 完整的RNA聚合酶的亞基組成 2全酶； 起始因子； 2核心酶； 不同的細(xì)菌中，、 亞基分子量較恒定，而因子分子量變化較大。 從亞基組成形式來看，從亞基組成形式來看，大腸桿菌中只大腸桿

37、菌中只有一種有一種RNA聚合酶。聚合酶。2 各亞基的功能 （1） 亞基：有二聚體，參與RNA聚合酶的裝配。 （2）亞基：具有促進(jìn)RNA合成過程中磷酸二酯鍵的生成的作用，尤其是與促進(jìn)第一個(gè)磷酸二酯鍵的形成有關(guān)。 （3）亞基：主要負(fù)責(zé)酶和模板的結(jié)合。各亞基的功能（參考） （1） 亞基：與模板的結(jié)合、酶的滑動(dòng)及堿基識(shí)別有關(guān)。 （2）亞基：與因子同核心酶的結(jié)合有關(guān)，并參與RNA合成的引發(fā)、延伸，與促進(jìn)第一個(gè)磷酸二酯鍵的形成有關(guān)。 （3）亞基：參與酶和底物的結(jié)合，參與因子與核心酶的結(jié)合，此外還結(jié)合兩個(gè)酶必需的Zn原子。 （4）因子：本身無催化活性，也不能單獨(dú)與DNA結(jié)合，但可識(shí)別DNA上的RNA合成的起

38、始信號(hào)，在RNA合成中起起動(dòng)作用。原核生物的原核生物的RANRAN聚合酶聚合酶亞亞 基基分子量分子量功能功能36 51236 512決定那些基因被轉(zhuǎn)錄決定那些基因被轉(zhuǎn)錄150 618150 618 與轉(zhuǎn)錄全過程有關(guān)（催化）與轉(zhuǎn)錄全過程有關(guān)（催化） 155 613155 613結(jié)合結(jié)合DNADNA模板（開鏈）模板（開鏈）70 26370 263辨認(rèn)起始點(diǎn)辨認(rèn)起始點(diǎn)（5）核心酶的功能 單獨(dú)的核心酶也能催化單獨(dú)的核心酶也能催化RNA的合成，的合成，但片段長短不一但片段長短不一，因?yàn)檗D(zhuǎn)錄的起點(diǎn)不固定，它與它與DNA的結(jié)合無序列特異性的結(jié)合無序列特異性。 加入因子，則可使之在特定部位結(jié)合。 因?yàn)橐蜃涌梢?/p>

39、改變酶與DNA之間的親和力（即靜電結(jié)合力靜電結(jié)合力，酶為堿性蛋白，酶為堿性蛋白，DNA為酸性分子為酸性分子），使酶與DNA上的特定部位即啟動(dòng)子結(jié)合的親和力增強(qiáng)，使核心酶能夠特異結(jié)合在DNA上的特定部位即啟動(dòng)子上。 全酶與不同的啟動(dòng)子序列間的結(jié)合能力不一樣，這導(dǎo)致不同的基因有不同的轉(zhuǎn)錄效率。 不同的因子導(dǎo)致RNA聚合酶（應(yīng)為核心酶？）識(shí)別不同的啟動(dòng)子，從而表達(dá)不同的基因。參考 另外，細(xì)菌的RNA聚合酶 可有單體=聚合體互變，這與離子強(qiáng)度有較大關(guān)系。 在低離子強(qiáng)度下具有可逆的凝聚作用。（四） 轉(zhuǎn)錄的過程 1 啟動(dòng)子與轉(zhuǎn)錄因子 （1） 啟動(dòng)子 指RNA聚合酶識(shí)別、結(jié)合及開始轉(zhuǎn)錄的一段DNA序列。 （

40、至少）包括三個(gè)部位。 a 開始識(shí)別部位：RNA聚合酶的識(shí)別信號(hào)，于-35bp附近。 b 牢固結(jié)合部位：酶的緊密結(jié)合點(diǎn)，于-10bp左右，此處A-T堿基對(duì)較多，有助于DNA雙鏈局部解開。 c 轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)：模板與酶的辨認(rèn)結(jié)合模板與酶的辨認(rèn)結(jié)合 RNA RNA聚合聚合酶保護(hù)區(qū)酶保護(hù)區(qū) （2）轉(zhuǎn)錄因子 參與RNA聚合酶所進(jìn)行的轉(zhuǎn)錄活動(dòng)的輔助因子（蛋白質(zhì)）。 2 終止子及終止因子、抗終止因子 （1）終止子 提供轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)的DNA序列。 （2）終止因子 協(xié)助RNA聚合酶識(shí)別終止信號(hào)的輔助因子（蛋白質(zhì)）。 （3）抗終止因子 能阻止終止子的作用，使酶得以越過終止子而繼續(xù)轉(zhuǎn)錄的蛋白質(zhì)。 RNA聚合酶能越過終止

41、子繼續(xù)轉(zhuǎn)錄，這種現(xiàn)象叫通讀 。（4）終止子的類型 a 不依賴于rho（）的終止子 它又稱簡單終止子簡單終止子，或者是，或者是內(nèi)部終止子內(nèi)部終止子。它只靠自身的序列即可終止轉(zhuǎn)錄它只靠自身的序列即可終止轉(zhuǎn)錄。 該終止子區(qū)域含有一個(gè)富含G-C堿基對(duì)的回文結(jié)構(gòu)，以該終止子區(qū)域?yàn)槟０遛D(zhuǎn)錄出來的RNA之3-端有一個(gè)polyU，可能提供信號(hào)使RNA聚合酶脫離模板，其后即為轉(zhuǎn)錄的終點(diǎn)。 可以分析到，在轉(zhuǎn)錄的最后階段，由轉(zhuǎn)錄出來的RNA之3-polyU序列與模板之間形成的rU-dA堿基配對(duì)極弱，導(dǎo)致該RNA-DNA雜交鏈在RNA聚合酶于終止子區(qū)域暫停時(shí)解開。b 依賴于rho（）的終止子 該終止子區(qū)域含有一個(gè)不富

42、含G-C堿基對(duì)的回文結(jié)構(gòu)，且以該終止子區(qū)域?yàn)槟０遛D(zhuǎn)錄出來的RNA之3-端無polyU。3 RNA聚合酶催化的轉(zhuǎn)錄過程 總的分為起始，延伸和終止三個(gè)階段。 （1） 起始 RNA聚合酶全酶與DNA上的啟動(dòng)子結(jié)合后，DNA雙螺旋局部解鏈。 此時(shí)，模板鏈根據(jù)堿基配對(duì)原則與進(jìn)入的核糖核苷酸互補(bǔ)識(shí)別結(jié)合。 一般將轉(zhuǎn)錄時(shí)DNA上第一個(gè)核苷酸摻入的位置叫作轉(zhuǎn)錄起點(diǎn)，以“+1”表示。 轉(zhuǎn)錄進(jìn)RNA的第一個(gè)核苷酸多為pppA或pppG。 第一個(gè)核苷酸摻入后，在DNA 上轉(zhuǎn)錄的啟動(dòng)子區(qū)域即形成一個(gè)啟動(dòng)子-RNA聚合酶全酶-核糖核苷三磷酸復(fù)合物，轉(zhuǎn)錄正式開始。 當(dāng)?shù)诙€(gè)核糖核苷酸與模板結(jié)合后，即在RNA聚合酶的催化下

43、與第一個(gè)核苷酸反應(yīng)結(jié)合，脫下PPi。 此時(shí)即生成了新生RNA鏈上的第一個(gè)磷酸二酯鍵。（2） 延伸 當(dāng)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物長達(dá)9-10個(gè)核苷酸時(shí)，因子即離開RNA聚合酶的核心酶，轉(zhuǎn)錄的起始階段即告結(jié)束。 （注：曾經(jīng)認(rèn)為，當(dāng)在RNA聚合酶作用下生成了RNA中的第一個(gè)磷酸二酯鍵后，因子即離開RNA聚合酶的核心酶。） 這時(shí)，因子的離開使核心酶的構(gòu)象發(fā)生變化，以至于核心酶失去了專一性識(shí)別、核心酶失去了專一性識(shí)別、結(jié)合結(jié)合DNA特異序列的能力，與模板結(jié)合不特異序列的能力，與模板結(jié)合不緊密緊密，易于沿模板移動(dòng)，并按堿基配對(duì)原則依照模板序列來選擇核苷酸合成RNA。 從第一個(gè)磷酸二酯鍵的形成到因子的離開，這一時(shí)段叫做啟動(dòng)子

44、清空。 在合成RNA時(shí)，核心酶結(jié)合的DNA區(qū)域雙鏈打開，呈泡狀結(jié)構(gòu)，常稱之為轉(zhuǎn)錄鼓泡轉(zhuǎn)錄鼓泡。 新生的新生的RNA鏈區(qū)域會(huì)在鼓泡中與模鏈區(qū)域會(huì)在鼓泡中與模板板DNA結(jié)合形成結(jié)合形成RNA-DNA雜交鏈雜交鏈。 隨著轉(zhuǎn)錄鼓泡的前進(jìn)，RNA鏈不斷合成、延長并被置換出來。 一般講，在DNA上核心酶覆蓋約長達(dá)60bp的區(qū)域，DNA雙鏈的解鏈區(qū)約長達(dá)17bp，而RNA-DNA雜交鏈約長達(dá)12bp。 隨著核心酶的移動(dòng)，DNA雙螺旋在轉(zhuǎn)錄方向的前方不斷解開，而后面的模板DNA的互補(bǔ)DNA鏈則不斷取代RNA-DNA雜交鏈中的RNA鏈以恢復(fù)DNA雙螺旋。 實(shí)驗(yàn)表明，大腸肝菌實(shí)驗(yàn)表明，大腸肝菌RNARNA聚合酶以

45、大聚合酶以大約每秒鐘約每秒鐘50-9050-90個(gè)核苷酸的速度合成個(gè)核苷酸的速度合成mRNAmRNA。 RNARNA聚合酶缺乏核酸外切酶活性，不聚合酶缺乏核酸外切酶活性，不具備核對(duì)功能，因此具備核對(duì)功能，因此RNARNA轉(zhuǎn)錄的準(zhǔn)確性比轉(zhuǎn)錄的準(zhǔn)確性比DNADNA復(fù)制（誤差率約在復(fù)制（誤差率約在1010-9-9-10-10-10-10）要求低）要求低得多，其誤差率約在得多，其誤差率約在1010-4-4-10-10-5-5范圍內(nèi)。范圍內(nèi)。（3） 終止 當(dāng)核心酶沿模板DNA轉(zhuǎn)錄到終止子區(qū)域時(shí)，終止子對(duì)核心酶的轉(zhuǎn)錄活動(dòng)產(chǎn)生終止作用。 由于原核生物中的終止子有兩種類型，因而終止子的終止作用有不同的特點(diǎn)。a

46、. 簡單終止子的轉(zhuǎn)錄 其序列特點(diǎn)是在轉(zhuǎn)錄終點(diǎn)前有一段序列的模板鏈富含A，而在這一段的前面又有一段富含GC堿基對(duì)的回文序列。 當(dāng)該終止子區(qū)域作為模板進(jìn)行轉(zhuǎn)錄后，所得RNA產(chǎn)物中相應(yīng)于模板回文序列的區(qū)域會(huì)發(fā)生鏈內(nèi)的GC配對(duì)而形成較為牢固的發(fā)夾結(jié)構(gòu)，這個(gè)結(jié)構(gòu)足以使核心酶的移動(dòng)減慢或暫停RNA的合成； 所得RNA產(chǎn)物內(nèi)相應(yīng)于模板鏈中富含A的區(qū)域則為一段富含U的序列，這段序列與模板鏈之間的結(jié)構(gòu)較弱，容易導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物RNA脫離模板DNA。b. 依賴于因子的終止子的轉(zhuǎn)錄 它雖然也有一段回文序列，但其中并不富含GC堿基對(duì)，而且在轉(zhuǎn)錄終點(diǎn)前方?jīng)]有一段富含A的模板鏈。 該終止子區(qū)域作為模板轉(zhuǎn)錄出來的產(chǎn)物RNA，雖

47、然也能形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)，但不牢固。 它不象上面以簡單終止子區(qū)域?yàn)槟０宓霓D(zhuǎn)錄產(chǎn)物那樣有一段富含U的序列，因而它與模板之間的結(jié)合不算弱。 這種轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物雖然能夠使核心酶的移動(dòng)暫停，但還另外需要因子的幫助才能最終終止轉(zhuǎn)錄過程。 大腸桿菌的蛋白具有RNA-DNA解螺旋酶活性和依賴于RNA的NTPase活性。它為六聚體，亞基分子量約46KD。 它可以結(jié)合在新生的RNA鏈上，利用其NTPase活性水解NTP獲得能量，沿著RNA鏈向核心酶移動(dòng)。 當(dāng)它與暫停在終止子區(qū)域的核心酶結(jié)合并相互作用后，則轉(zhuǎn)錄終止，并使RNA-DNA雜交鏈解鏈，將產(chǎn)物RNA、因子與核心酶釋放。（五） 轉(zhuǎn)錄后加工 原核生物的mRNA不需要加工

48、，轉(zhuǎn)錄尚未結(jié)束，蛋白質(zhì)的生物合成就已經(jīng)開始，即所謂邊轉(zhuǎn)錄邊翻譯邊轉(zhuǎn)錄邊翻譯。 原核生物的mRNA一般為多順反子mRNA，即它作為模板時(shí)可以編碼多條多肽鏈。 真核生物的則為單順反子mRNA，即它作為模板時(shí)只能編碼一條多肽鏈。二 真核生物的轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后加工 （一） RNA聚合酶 真核生物的RNA聚合酶的性質(zhì)總的來說與原核生物的相似，但有其特點(diǎn)。 一般根據(jù)-鵝膏覃堿對(duì)酶的抑制程度而將RNA聚合酶分成以下三種。酶的名稱 對(duì)-鵝膏覃堿的 分布 催化合成的前體 敏感程度RNA聚合酶I（A） 不敏感 核仁 rRNA前體RNA聚合酶II（B） 敏感 核質(zhì) mRNA前體 （對(duì)低濃度的） （hnRNA）RNA聚合酶III（C） 中度敏感 核質(zhì) tRNA前體與 （對(duì)高濃度的） 5SRNA真核生物真核生物RNARNA聚合酶聚合酶PolPolPol 對(duì)終止子的情況了解不多，也有啟動(dòng)子。有轉(zhuǎn)錄因子。 線粒體與葉綠體中也有RNA聚合酶，其也有類似的起始因子以及與大