生化實驗二--果蔬中總糖及還原糖含量的測定

1、綜合實驗一：果蔬成分的生化分析果蔬成分的生化分析實驗一實驗一 果蔬中維生素果蔬中維生素C的定量測定（的定量測定（4學(xué)時）學(xué)時）實驗二實驗二 果蔬中總糖及還原糖含量的測定（果蔬中總糖及還原糖含量的測定（4學(xué)時）學(xué)時）實驗三實驗三 果蔬中蛋白質(zhì)含量的測定（果蔬中蛋白質(zhì)含量的測定（4學(xué)時）學(xué)時）實驗四實驗四 果蔬中過氧化物酶分析（果蔬中過氧化物酶分析（12學(xué)時）學(xué)時）實驗材料：實驗材料：冬棗柚子冬棗柚子14組組梨（梨（2個品種）個品種）58組組盤菜蘿卜盤菜蘿卜 912組組 掌握總糖和還原糖含量的測定方法。掌握總糖和還原糖含量的測定方法。 學(xué)習(xí)分光光度計的原理和操作方法。學(xué)習(xí)分光光度計的原理和操作方法

2、。 總糖是指樣品中的還原單糖及在本實總糖是指樣品中的還原單糖及在本實驗條件下能水解成還原單糖的蔗糖、麥芽驗條件下能水解成還原單糖的蔗糖、麥芽糖和可部分水解成葡萄糖的淀粉。糖和可部分水解成葡萄糖的淀粉。 多糖為非還原糖，可用酸將沒有還原性的多糖為非還原糖，可用酸將沒有還原性的多糖和寡糖徹底水解成具有還原性的單糖，再多糖和寡糖徹底水解成具有還原性的單糖，再利用還原糖的性質(zhì)進行測定，這樣就可分別求利用還原糖的性質(zhì)進行測定，這樣就可分別求出總糖和還原糖的含量。出總糖和還原糖的含量。 蒽酮比色法是一個快速而簡便的定糖方法。蒽酮比色法是一個快速而簡便的定糖方法。其原理：糖類在較高溫度下可被硫酸脫水成糠其原

3、理：糖類在較高溫度下可被硫酸脫水成糠醛或糠醛衍生物，再與蒽酮縮合成藍色化合物，醛或糠醛衍生物，再與蒽酮縮合成藍色化合物，在在620nm處有最大吸收。處有最大吸收。 1、植物材料、植物材料2、吸管（、吸管（1.0mL2、5.0mL2、 0.1mL2 、0.2mL2 、0.5mL2 ）3、試管（、試管（1.5cm15cm7）4、分光光度計、分光光度計5、水浴鍋、電爐、水浴鍋、電爐6、電子分析天平、電子分析天平7、容量瓶（、容量瓶（100mL1）、玻璃漏斗）、玻璃漏斗8、量筒、研缽、三角燒瓶、量筒、研缽、三角燒瓶1、蒽酮試劑：、蒽酮試劑：取取2g蒽酮溶于蒽酮溶于1000mL體積分數(shù)為體積分數(shù)為80%

4、的硫酸中，當(dāng)日配制使用。的硫酸中，當(dāng)日配制使用。2、標準葡萄糖溶液、標準葡萄糖溶液（0.1mg/ /mL）：稱取）：稱取100mg葡萄糖，溶于蒸餾水并稀釋至葡萄糖，溶于蒸餾水并稀釋至1000mL（可加幾（可加幾滴甲苯作防腐劑）。滴甲苯作防腐劑）。3、6mol/ /L HCl溶液溶液4、20% NaOH溶液：溶液：稱取稱取20g NaOH固體，溶于固體，溶于蒸餾水并稀釋至蒸餾水并稀釋至100mL。1、葡萄糖標準曲線的繪制：、葡萄糖標準曲線的繪制： 取潔凈試管取潔凈試管6支，按下表進行操作：支，按下表進行操作：012345標準葡萄糖溶液標準葡萄糖溶液/ /mL00.10.20.30.40.5蒸餾水

5、蒸餾水1.00.90.80.70.60.5置冰水浴中置冰水浴中5min蒽酮試劑蒽酮試劑4.04.04.04.04.04.0煮沸煮沸10，冷卻后室溫放置，冷卻后室溫放置10，在，在620nm處比色處比色A620nm步驟步驟管號管號 以吸光度為縱坐標，各標準液濃度以吸光度為縱坐標，各標準液濃度（mg/ /mL）為橫坐標做圖得標準曲線。）為橫坐標做圖得標準曲線。2、樣品中還原糖的提取和測定、樣品中還原糖的提取和測定 冬棗、柚子、梨：取濾液冬棗、柚子、梨：取濾液1mL100mL 盤菜、蘿卜：取濾液盤菜、蘿卜：取濾液10mL100mL 吸取吸取1mL濾液置于試管中，浸于冰浴濾液置于試管中，浸于冰浴中冷卻

6、，再加入中冷卻，再加入4mL蒽酮試劑，沸水浴中蒽酮試劑，沸水浴中煮沸煮沸10min，取出冷卻后比色，其他條件，取出冷卻后比色，其他條件與做標準曲線相同。測得的吸光度值由標與做標準曲線相同。測得的吸光度值由標準曲線查算出樣品液的糖含量。準曲線查算出樣品液的糖含量。3、樣品中總糖的提取、水解和測定、樣品中總糖的提取、水解和測定 冬棗、柚子、梨：取濾液冬棗、柚子、梨：取濾液5mL用蒸餾用蒸餾水定容至水定容至100mL。 盤菜、蘿卜：取濾液盤菜、蘿卜：取濾液10mL用蒸餾水用蒸餾水定容至定容至100mL。 取總糖水解液取總糖水解液1mL同上法進行還原糖同上法進行還原糖測定。測定。 按照下列公式分別計算果蔬中還原糖按照下列公式分別計算果蔬中還原糖和總糖的質(zhì)量分數(shù)（和總糖的質(zhì)量分數(shù)（w）。）。W（還原糖還原糖） 100%C1V1mW（總糖總糖） 0.9100%C2V2m 乘乘0.9是為了從測定出的總糖水解成的單糖中扣除是為了從測定出的總糖水解成的單糖中扣除水解時所消耗的水量。水解時所消耗的水量。式中：式中： W（還原糖還原糖）：）：還原糖質(zhì)量分數(shù)（還原糖質(zhì)量分數(shù)（%） W（總糖總糖）：）：總糖質(zhì)量分數(shù)（總糖質(zhì)量分數(shù)（%） C1：還原糖的質(zhì)量濃度（：還原糖的質(zhì)量濃度（mg/ /mL） C2：水解后