非潰瘍性消化不良患者胃竇壁內(nèi)膽堿能、P物質(zhì)能神經(jīng)與胃排空關(guān)系

1、非潰瘍性消化不良患者胃竇壁內(nèi)膽堿能、P物質(zhì)能神經(jīng)與胃排空關(guān)系的研究有研究表明部分非潰瘍性消化不良(non-ulcer dyspepsia,NUD)患者胃竇動力低下、胃排空延遲、神經(jīng)內(nèi)分泌失調(diào)可解釋消化不良的癥狀14。但是否存在局部神經(jīng)異常，神經(jīng)遞質(zhì)與胃排空延遲是否有關(guān)，尚缺乏有力證據(jù)。P物質(zhì)(substance P,SP)是一種胃腸道的肽能神經(jīng)遞質(zhì)，對胃運動和排空有促進(jìn)作用5，乙酰膽堿(acetylcholine,Ach)為一種經(jīng)典的興奮性神經(jīng)遞質(zhì)，對胃腸道有普遍的興奮作用。我們以組織化學(xué)方法顯示膽堿酯酶(acetylcholinesterase,AchE)以表示膽堿能神經(jīng)，以免疫組織化學(xué)PA

2、P法顯示SP能神經(jīng)，來觀察兩種興奮性神經(jīng)在NUD患者胃竇活檢組織中的改變，旨在探討它們在NUD患者胃運動障礙發(fā)生中的作用。一、病例選擇以國際公認(rèn)的診斷標(biāo)準(zhǔn)6，選取NUD患者31例，男14例，女17例，年齡1765歲，平均47.5歲，病程1月5年，平均3.25年。行B超測定胃液體排空功能，方法同以往報道7，其中19例(NUD 1組)胃液體排空正常，男9例、女10例，平均年齡49.7歲，平均病程3.4年；12例(NUD 2組)胃液體排空延遲，男5例、女7例，平均年齡44.3歲，平均病程3.1年；對照組4例為無任何胃部炎癥的胃息肉患者，胃液體排空正常，男女各2例，年齡2254歲，平均42.2歲。二、

3、材料、試劑及儀器以上3組患者經(jīng)胃鏡活檢胃竇粘膜組織(顯微鏡檢確定含粘膜肌)作為研究材料。試劑主要有：碘化乙酰硫代膽堿，四異丙基焦磷酰胺(Iso-OMPA)，均為E.Merk公司產(chǎn)品；SP抗血清為北京中醫(yī)研究院產(chǎn)品。MPAIS-500型彩色像分析儀為同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)太陽公司出品。三、標(biāo)本處理以上標(biāo)本均以4%多聚甲醛4固定624h后，入20%蔗糖溶液中過夜(0.1mol/L PB配制)，AO恒冷箱連續(xù)冰凍切片，20m厚度，應(yīng)用0.01mol/L PBS(pH7.4)漂洗標(biāo)本。同一檢查者的切片同時開始分別行兩種方法染色。改良的Karnovsky-Roots直接法顯示膽堿酯酶8。切片入含有?0.32%醋酸

4、鈉、0.6%醋酸、2.94%枸櫞酸鈉、0.75%硫酸銅、0.165%鐵氰化鉀、0.137%ISO-OMTP以及碘化乙酰硫代膽堿的溶液中37孵育2.5h,標(biāo)本漂洗后，梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片，顯微鏡下觀察，像定量分析。改良Sternberger PAP法顯示SP能神經(jīng)9。將SP抗血清15000，4孵育70h左右，羊抗兔Ig G1:200和兔PAP復(fù)合物1400，37各孵育1h,DAB顯色35min,標(biāo)本漂洗后步驟同上。SP抗血清經(jīng)特異性吸收試驗后，未觀察到陽性免疫反應(yīng)。四、結(jié)果分析首先在Olympus顯微鏡下初步觀察，AchE陽性產(chǎn)物呈深黃色為強陽性，黃色為陽性，淺黃色弱陽性，與背

5、景同色為陰性；SP陽性產(chǎn)物呈棕黃色為陽性，黃色為弱陽性，與背景同色為陰性。陽性產(chǎn)物包括神經(jīng)節(jié)細(xì)胞、神經(jīng)纖維和末梢。然后在像分析儀上應(yīng)用測量軟件測定以下兩個參數(shù)：A表示一個測量窗內(nèi)陽性產(chǎn)物的面積(m2)，M表示其平均光密度。用上述酶反應(yīng)或免疫反應(yīng)產(chǎn)物的面積(A)可反映酶反應(yīng)或免疫反應(yīng)產(chǎn)物分布的數(shù)量，用平均光密度(M)可客觀反映酶反應(yīng)或免疫反應(yīng)的強度。用SAS軟件包對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理。五、結(jié)果1.陽性產(chǎn)物的變化：(1)AchE的變化：AchE陽性纖維在對照組胃竇各層均可見到，在胃竇越近粘膜肌部位AchE陽性纖維越密，著色越深，在粘膜下層易見到AchE陽性神經(jīng)元胞體。NUD1組與對照組基本類似。A

6、chE陽性纖維在NUD2組胃竇各層稀少、著色淺，在粘膜下層中難以見到AchE陽性神經(jīng)元胞體，與對照組和NUD1組相比較有明顯的差異。表1顯示AchE陽性產(chǎn)物的像分析結(jié)果。NUD2組胃竇粘膜肌內(nèi)AchE陽性纖維及末梢的面積較對照組和NUD1組明顯減小(P0.01)，NUD 1組與對照組差異無顯著意義(P0.05)；結(jié)果還提示NUD2組胃竇粘膜肌內(nèi)AchE陽性纖維及末梢的平均光密度值較對照組和NUD1組明顯減小(P0.01)，NUD1組與對照組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 表1NUD1組、NUD2組、對照組AchE陽性產(chǎn)物的像分析結(jié)果(s)組別例數(shù)A(m2)MNUD1組 191260.637

7、3.20*0.190.08*NUD2組12對照組4注：NUD1：非潰瘍性消化不良胃排空正常；NUD2：非潰瘍性消化不良胃排空延遲；AchE：乙酰膽堿酯酶；A：一個測量窗內(nèi)陽性產(chǎn)物的面積；M：平均光密度；?(2)SP的變化：SP陽性神經(jīng)纖維在對照組胃竇各層均可見到，但未見到SP陽性神經(jīng)的胞體，NUD1組的陽性纖維的分布與對照組大致一樣。SP陽性纖維在NUD2組胃竇粘膜肌層十分稀少，與對照組和NUD1組有明顯的差異。表2顯示SP陽性纖維及末梢的面積，NUD2組較對照組和NUD1組顯著減小(P0.01)，NUD1組與對照組間未發(fā)現(xiàn)統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)，NUD2組胃竇粘膜肌內(nèi)SP陽性神經(jīng)纖維及末梢

8、的平均光密度值明顯小于對照組及NUD1組(P0.01)，NUD1組與對照組差異無顯著性意義(P0.05)。表2NUD1組、NUD2組、對照組P物質(zhì)陽性產(chǎn)物的像分析結(jié)果(s)組別例數(shù)A(m2)MNUD1組19414.3413.44*0.200.03*NUD2組12對照組4注：NUD1：非潰瘍性消化不良胃排空正常；NUD2：非潰瘍性消化不良胃排空延遲；A：一個測量窗內(nèi)陽性產(chǎn)物的面積；M：平均光密度；2.胃排空與神經(jīng)成分的關(guān)系：將31例NUD患者和4例對照組胃半排空時間(T1/2)與胃竇粘膜肌中的AchE、SP陽性產(chǎn)物的面積(A)、平均光密度(M)值進(jìn)行相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，T1/2與粘膜肌中AchE、SP

9、陽性產(chǎn)物的面積呈明顯的負(fù)相關(guān)(相關(guān)系數(shù)分別為-0.62、-0.73，P0.01)；與粘膜肌中AchE、SP陽性產(chǎn)物的平均光密度值也有良好的負(fù)相關(guān)性(相關(guān)系數(shù)分別是-0.57、-0.92，P0.01)。討論我們的研究發(fā)現(xiàn)胃液體排空延遲的NUD患者胃竇粘膜肌內(nèi)AchE陽性纖維顯著少于胃液體排空不延遲的NUD患者及對照組，粘膜下層難以見到AchE陽性纖維的胞體，AchE陽性纖維的顏色也較淺，從而提示胃液體排空延遲與膽堿能神經(jīng)分布和神經(jīng)遞質(zhì)的釋放機制改變密切相關(guān)，而且像分析的結(jié)果也說明膽堿能神經(jīng)功能在胃排空中的作用減弱，并顯示T1/2與AchE陽性纖維的面積、平均光密度值呈負(fù)相關(guān)，進(jìn)一步支持我們的結(jié)論

10、。Hang等10發(fā)現(xiàn)NUD患者迷走神經(jīng)張力降低，與胃竇運動減弱、消化不良癥狀有關(guān)；Undeland等11也認(rèn)為部分NUD患者存在迷走神經(jīng)功能低下，而支配胃的迷走神經(jīng)節(jié)后纖維就是膽堿能神經(jīng)纖維，所以部分NUD患者胃局部膽堿能神經(jīng)的功能降低。我們的研究還提示了胃液體排空延遲的NUD患者胃竇粘膜肌內(nèi)SP陽性纖維較胃液體排空正常的NUD患者及對照組顯著減少，且染色也較淺，表明胃液體排空延遲與SP能神經(jīng)分布及興奮性的改變密切相關(guān)，況且像分析結(jié)果為我們的結(jié)論提供了量的支持，T1/2與SP陽性纖維的面積、平均光密度值呈負(fù)相關(guān)性，依然說明了NUD患者胃竇壁內(nèi)SP能神經(jīng)的異常改變與胃液體排空延遲相關(guān)。Kanek

11、o?等3應(yīng)用放射免疫方法測定了NUD患者胃粘膜SP含量后發(fā)現(xiàn)，運動障礙組胃粘膜SP含量顯著低于對照組及潰瘍樣組。由此可見，部分NUD患者胃竇壁內(nèi)膽堿能、SP能興奮性神經(jīng)的分布減少、活性減弱，這種異常與NUD患者胃液體排空延遲有關(guān)，表明其在NUD患者胃動力障礙產(chǎn)生中可能有作用。作者單位：侯曉華、謝小平、熊漢華430022 同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)協(xié)和醫(yī)院消化內(nèi)科余躍現(xiàn)在湖北省黃石市第五醫(yī)院消化科茹立強、曹福元同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)神經(jīng)生物教研室參考文獻(xiàn)1Kawakami H.Personality devatiation and gastric motility in pa-tients with functiona

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