實驗立項申請書

1、附件1：項 目編 號實驗室開放項目申請表項目名稱： 周口水果市場獼猴桃軟腐病病害分析 項 目 類 別： 實驗項目設計型 申請人： 劉勇亮 申請人所在學院： 生命科學與農(nóng)學學院 實 驗 室 名 稱： 微生物工程 導師姓名職稱： 填表日期： 2014年3月15日 周口師范學院教務處制填 寫 說 明一、本表要按順序逐項填寫，內(nèi)容要實事求是，表達要明確、嚴謹?？杖表椧睢盁o”。要求一律用A4紙雙面打印，于左側(cè)裝訂成冊。本表一式四份，指導教師、實驗室、院（系）、教務處各一份。二、項目編號由教務處統(tǒng)一編制填寫。項目類別分為以下五種：科技創(chuàng)新型，自選型，實驗項目設計型，參與科研型，參加各種比賽型。三、申請參

2、加周口師范學院實驗室開放項目團隊人數(shù)不得超過10人（1人為項目負責人，參與合作研究者19人），運行周期一般為1年。四、指導教師主持科研項目情況限填兩項；代表性科研成果限填三項，若為論文需按照論文題目、發(fā)表刊物名稱及年、卷、期、頁碼填寫，若為科研成果獎，需按照成果名稱、授獎機構(gòu)及獲獎等級填寫，若為專利，需按照專利名稱、專利性質(zhì)（國家發(fā)明專利或?qū)嵱眯滦蛯＠⑹跈鄼C構(gòu)填寫。以上成果限第一作者或第一完成人。 五、項目所需費用主要用于補貼學生參加開放實驗項目所需的材料消耗、實驗項目設計中必要的設備制作、研制費用，不列支人員勞務等其它費用。 一、項目申請人情況 申請人姓名劉勇亮性別男民族漢學號20130

3、7030023所在學院生命科學與農(nóng)學學院專業(yè)、班級生物技術、2013級生物技術項目名稱周口水果市場獼猴桃軟腐病病害分析項目類別實驗項目設計通訊地址生命科學與農(nóng)學學院2013級生物技術班聯(lián)系電話學歷自何年月至何年月學習單位（高中以上，含高中）任職2010.92013.6汝南高中課代表2013.9至今周口師范學院班長申請人參加科研的經(jīng)歷自何年月至何年月參加項目名稱項目來源擔任的工作取得的成果申請人入校以來的主要專業(yè)必修課成績課程名稱類別成績課程名稱類別成績動物學專業(yè)課90無機化學專業(yè)課95植物學專業(yè)課93微生物學專業(yè)課91生物化學專業(yè)課88免疫學專業(yè)課84有機化學專業(yè)課92項目組其他成員（不包括申

4、請人和導師）姓名性別學號所在學院專業(yè)分工簽名李素平女201307030024生命科學與 農(nóng)學學院生物技術文獻檢索張猛男201307030028生命科學與農(nóng)學學院生物技術參與實驗楊信男201307030042生命科學與農(nóng)學學院生物技術參與實驗校萬瑩男201307030012生命科學與農(nóng)學學院生物技術數(shù)據(jù)收集與分析二、指導教師簡況指導教師性別民族年齡研究方向職稱部門所在實驗室主持科研項目情況起止時間項目名稱項目來源代表性科研成果三、指導教師對申請人的評價對申請人的專業(yè)基礎、工作態(tài)度、學風及研究能力的評價 該同學學習認真，學風端正，成績優(yōu)秀，專業(yè)基礎扎實，實驗操作能力強，具有一定獨立思考解決問題的能

5、力，科研能力強對申請項目的價值、可行性、工作基礎等方面的評價獼猴桃是獼猴桃科獼猴桃屬的落葉纏繞性藤本植物，獼猴桃果實酸甜可口，是一種鮮美而富含營養(yǎng)的水果。每100g果肉中含有Vc100420mg，其Vc含量比柑桔高68倍，比蘋果高32倍以上，此外果肉中還含有機酸1.21.4%，糖814%，蛋白質(zhì)7.6%，脂肪0.3%以及少量的鈣。然而，幾乎所有的鮮食水果都會攜帶真菌進入消費市場，由于這些真菌多為田間潛伏侵染，需要一定的時間才能至腐，往往在果蔬進出口通關時難以用肉眼察覺而被疏漏，所以不斷的對獼猴桃進行深入研究意義重大。獼猴桃性味甘酸而寒，有解熱、止渴、通淋、健胃的功效?？梢灾委煙?、消渴、黃疸、

6、嘔吐、腹瀉、石淋、關節(jié)痛等疾病，而且還有抗衰老的作用。唐代醫(yī)藥學家陳藏器介紹獼猴桃的功效為“調(diào)中下氣、主骨節(jié)風、癱緩不隨、長年白發(fā)”?，F(xiàn)代醫(yī)學研究分析，獼猴桃果實中含有糖類，蛋白質(zhì)中氨基酸豐富，蛋白酶十二種，維生素B1、C、胡蘿卜素以及鈣、磷、鐵、鈉、鉀、鎂氯、色素等多種成分。其維生素C含量是等量柑橘中的五至六倍。有報道稱：獼猴桃能阻斷致癌物質(zhì)亞硝胺合成的活性成分，阻斷率達98%，有抑制癌細胞的作用。所以，獼猴桃是滋補強身，抵抗癌癥的上等果品，是人們生活中常見也很受歡迎一種水果。本研究小組成員具有微生物培養(yǎng)鑒別的相關理論知識和實驗技能，并跟隨老師參加過相關研究的實驗設計、實驗準備及整個實驗過程

7、，為開展本課題研究奠定了良好的基礎。實驗所用儀器的使用方法及生理指標的測定方法已經(jīng)熟練掌握，無技術問題。四、 項目說明及評審意見實驗項目內(nèi)容、創(chuàng)新點1. 周口水果市場獼猴桃軟腐病病害分析步驟選取材料 表面殺菌 平板培養(yǎng) 分離純化 對比鑒定2. 實驗設計2.1實驗材料：腐爛的獼猴桃，PDA+鏈霉素平板培養(yǎng)基，恒溫培養(yǎng)箱，解剖刀，次氯酸鈉，70%酒精，無菌水，秒表，吸水紙2.2實驗方法：取材及表面消毒選擇典型的單個病斑，用解剖刀從病源邊病組織數(shù)塊（每個果實4小塊，一共5個果實），于70%酒精中浸泡30秒，無菌水沖洗一次，次氯酸鈉浸泡1分鐘，無菌水沖洗3次，吸水紙吸干組織表面的水。平板培養(yǎng)： 將組織

8、塊移至PDA+鏈霉素的平板培養(yǎng)基上，每皿放4塊，25恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)。選取生長旺盛的菌落一個或幾個，用打孔器取邊緣的菌絲，移至新的PDA+鏈霉素的培養(yǎng)基中，分別在25恒溫培養(yǎng)基中培養(yǎng)。分離純化： 待菌落接觸前，分別取含菌落邊緣菌絲的菌蝶數(shù)塊，移至新PDA平板純化，每板1個菌碟，得到一純，25下，全黑暗培養(yǎng)。在菌落長至2/3平板時，用打孔器取菌落邊緣菌碟，移至新PDA平板純化，每板一個培養(yǎng)基塊，得到二純，25下，全黑暗培養(yǎng)。此后，在菌落長滿至2/3平板時，重復獲得二純的方法進行培養(yǎng)，獲得純化的菌株后進行后續(xù)實驗。設置空白對照組對比鑒定由實驗結(jié)果看出，有三種菌的菌落有差異：1. 病原菌在25PDA培養(yǎng)

9、基上生長迅速，4d即長到大約6cm，6d即長滿整個平板，生長初期呈白色絮狀菌絲體，菌落邊緣不清晰，有大量新生的菌絲，呈絨毛狀，大約5d后菌落轉(zhuǎn)變?yōu)榛野咨鯛?。氣生菌絲有隔，分生孢子單胞，無色，橢圓形，培養(yǎng)期間未見有性孢子產(chǎn)生。經(jīng)查閱參照真菌鑒定手冊得知，此種菌有可能為草莖點霉。2. 另一種在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)5天的菌落呈粉紅色，邊緣呈毛絨狀。初生菌絲為黃色，慢慢均轉(zhuǎn)變?yōu)榧t色。顯微鏡下可觀察到菌絲的形態(tài)為絲狀。光學顯微鏡下可以觀察到菌絲的形態(tài)為長絲狀。經(jīng)查閱參照真菌鑒定手冊，此種菌可能為三線鐮刀菌。3. PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)5天的菌落正面中央部分呈灰黑色，邊緣為白色。背部中央部分色素為墨黑色，邊緣

10、為色素淡黃，邊緣蓬松呈毛絨狀。光學顯微鏡下可觀察到孢子的形態(tài)為手榴彈狀。根據(jù)菌落和孢子形態(tài)，參照真菌鑒定手冊，初步判斷此菌可能屬于鏈格孢菌。進度安排2015年3月-2015年4月 利用數(shù)據(jù)庫進行數(shù)據(jù)整理與分析2015年5月-2015年8月 進行平板培養(yǎng)對照試驗，并對比得出結(jié)論2015年9月-2015年10月 統(tǒng)計數(shù)據(jù)，整理論文實驗開展的措施 課題組成員進行合理分工，明確課題研究的具體內(nèi)容，探究實驗方案，制定實驗步驟。指導老師負責對實驗方案的認真審閱，提出不足和建議并與學生討論，制定出更加合理的實驗方案：指導老師參與到實驗過程，隨時進行指導。課題組成員在完成自己工作的同時，要協(xié)助其他同學，加強團隊合作，對實驗過程、實驗結(jié)果的記錄和分析以及出現(xiàn)的問題探討出有效的解決方法，使實驗順利完成，達到預期的目的。預期目標 本項目的完成將對周口水果市場獼猴桃的儲存銷售提供一定的理論依據(jù)。通過本項目的研究，可以延長獼猴桃的儲存時間，獲得更大利潤，并在核心期刊上發(fā)表研究性論文1篇。實 驗 條 件主要儀器設備名稱場 地主要實驗耗材名 稱數(shù) 量恒溫培養(yǎng)箱微生物實驗室獼猴桃10