靈芝多糖的藥效學(xué)研究__抗惡性腫瘤_抗血栓和抗凝血作用_百度文庫

1、 續(xù)表3Po s . 1H 13C D EPT 1537. 41C161. 67s 25. 56CH 3171. 13s 31. 85CH 3182. 09s 21. 08CH 3190. 85s 22. 63CH 3204. 82s , 5. 26s 116. 9CH 21175. 7C =O 22. 34m 41. 22CH 31. 62m , 1. 48m 26. 89CH 240. 88m 11. 73CH 351. 12brs 16. 72CH 3OA c2. 18s , 2. 06s , 170. 1, 170. 3, 170. 4CO ×3參考文獻(xiàn)1W ani M C

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5、N G , Yeuk 2chuen L iu and Ch ing 2jer Chang ,T axanes from T axus ×M edia H ick sii , N atural P roduct L etters , 1995; 6(3 :197202靈芝多糖的藥效學(xué)研究. 抗惡性腫瘤、(福建醫(yī)科大學(xué)蛇毒研究所350004(福建中醫(yī)學(xué)院中藥系實(shí)習(xí)生350003摘要本文用1. 靈芝子實(shí)體經(jīng)水提、乙醇沉制得靈芝多糖(GL PS 精品, 用苯酚2硫酸法測其百分含量。2. 應(yīng)用小鼠移植性惡性腫瘤瘤株(S 180、U 14、EA C , 觀察GL PS 對(duì)荷瘤小鼠腫瘤生長的影響。

6、3. 觀察GL PS 對(duì)小鼠全血凝血時(shí)間及出血時(shí)間和大鼠血栓及血液凝固系統(tǒng)的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果1. 用本方法提取GL PS 得率為0. 589±0. 135%。2. GL PS 40m g(kg d . ig ×17d 對(duì)小鼠肉瘤(S 2180 和宮頸癌(U 214 的平均抑瘤率分別為43%和51%, 而對(duì)艾氏腹水癌(EA C 小鼠生命沒有明顯延長作用(P >0. 05 。3. GL PS 20m g (kg d . ig ×10d 或2040m g kg -1. iv 均能明顯延長小鼠的凝血時(shí)間和出血時(shí)間(P <0. 01 。GL PS 40m g(kg

7、 d . ig ×10d 能明顯抑制大鼠的血栓形成(P <0. 01 , 降低纖維蛋白原的含量(P <0. 01 , 同時(shí)能明顯延長部分凝血活酶時(shí)間(KPT T (P <0. 01 。說明GL PS 具有抗腫瘤、抗血栓和抗凝血的作用。關(guān)鍵詞靈芝多糖, 抗腫瘤, 抗血栓, 抗凝血S tud ie s on the P ha r m a co log ica l Effe c ts of the P o lys a ccha ride s of G a node r m a Luc idum. A n tica nce r , A n tith rom bos is a

8、 nd a n ticoa gula tion of b loodC he n J ia nji , W u Zhiq ia ng , e t a l (Fujia n M e d ica l Unive rs ity , L a bo ra to ry of S na ke V e nom Re s e a rch 350004Hu En , L in Zhi w e i e t a l (Fujia n C o lloe ge of T ra d itiona l C hine s e M e d ic ine 350003A bs tra c t Study on the an tica

9、ncer activity and the effect on b lood coagu lati on of Po lysaccharides separatedGanoder m a lucidum (ling zh i w as repo rted in th is pap er . Po lysaccharide of Ganoder m a lucidum (GL PS w as15Strait Phar m aceutical Journal V o l 12N o 12000 sep arated by w ater ex tracti on and ethano l p rec

10、i p itati on . T he yield of GL PS separated from native drug w as abou t 0. 589±0. 139%by pheno l 2su lfu ric acid m ethod . assayed . T he cancer cell line of S 2180and U 214w ere i m p lan ted in to the ax illary subcu taneou s of m ice fo r studying the an ticancer effect . It indicated tha

11、tGlp s GL PS 40m g kg -1. ig . d ×17d decreased the w eigh t of cancer by abou t 43%(S 2180 and 51%(U 214 . T he clo tting and b leeding ti m e of m ice b lood w ere u ses fo r ob serving the effect on coagu lati on . T hean tith rom bo tic effect w as assayed on rats by th rom bo sis test ex v

12、ivo . GL PS 20m g kg -1. d ig ×10d and 2040m g kg -1. iv in to m ice p ro longed the b lood clo tting and b leeding ti m e (P <0. 01 . and GL PS 40m g kg -1. d . ig ×10d in to rats decreased th rom bo sis and fib rinogen level of b lood p las m a (P <0. 01 , thekao lin partial th rom

13、 b in ti m e w as p ro longed (P <0. 01 . T hese can conclu si on that the GL PS of Ganoder m a lucidum po ssessed the an ticancer , an tith rom bo sis and an ticoagu lati on effects. Ke y w o rds Po lysaccharide of Ganoder m a lucidum , A n ticancer , A n tith rom bo sis , A n ticoagu lati on靈芝赤

14、芝, Ganoder m a L ucidum (L eyys . exF r Karst 為一種靈芝屬的真菌。中國歷代醫(yī)家視為滋補(bǔ)強(qiáng)壯, 扶正固本, 延年益壽之珍品。靈芝多糖是靈芝的主要有效成分之一, 具有多種的生理活性。本文主要對(duì)靈芝多糖抗腫瘤、抗血栓和抗凝血方面的作用進(jìn)行研究。1材料1. 1所; 52(5有限公司產(chǎn)品, (CPM 為上批號(hào)960102; 凍干凝血酶、凝血活酶及部分凝血活酶均為上海醫(yī)大華山醫(yī)院技協(xié)試劑公司的產(chǎn)品, 批號(hào)99035; 纖維蛋白測定酸性緩沖液為寧波市慈城生化試劑廠生產(chǎn), 批號(hào)980819; 52腺苷二磷酸二鈉鹽(AD P 為上海伯奧生物科技有限公司產(chǎn)品。其它試劑

15、均為國產(chǎn)分析純。1. 2動(dòng)物昆明種小鼠體重為1822g , W istar 種大鼠體重為300±20g , 雌雄兼用, 均由福建醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。1. 3瘤株小鼠肉瘤(S 180 、宮頸癌(U 14 及艾氏腹水癌(EA C 均自上海中國科學(xué)院藥物研究所引進(jìn), 在福建醫(yī)科大學(xué)蛇毒所傳代使用。1. 4儀器多功能雙通道血液凝聚儀, 電腦血漿纖維蛋白原測定儀, M R 24型多環(huán)血栓檢測儀均為上海高機(jī)應(yīng)用技術(shù)研究所產(chǎn)品; 8022型離心機(jī)為上海手術(shù)器械廠生產(chǎn); 7520型分光光度計(jì)為上海分析儀器廠生產(chǎn); T G 729C 單盤電光分析天平為上海天平儀器廠生產(chǎn)。2方法和結(jié)果2. 1靈芝

16、多糖的提取及含量測定2. 1. 1提取流程1 2. 1. 2含量測定(2, 3以葡萄糖為標(biāo)準(zhǔn)品, 配制不同濃度(1080g m l -1 的標(biāo)準(zhǔn)液。分別吸取1m l 標(biāo)準(zhǔn)液置于10m l 具塞比色管中, 加入1m l 5%苯酚和5m l 濃硫酸, 搖勻反應(yīng)20m in , 于487nm 處測其吸收值。以葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液濃度為橫坐標(biāo), 吸收值為縱坐標(biāo), 制取標(biāo)準(zhǔn)曲線并求其回歸方程, 結(jié)果見表1。01111115%苯酚(m l 1111111濃硫酸(m l 5555555A 487nm00. 1750. 2620. 4270. 5190. 6480. 795稱取各批靈芝多糖粗品10m g , 配成0.

17、 1m g m l -1的水溶液作為供試液, 各取1m l 依上法測其吸收值(5批GL PS 粗品的A 487nm 分別為0. 697,25海峽藥學(xué)2000年第12卷第1期 0. 682, 0. 670, 0. 656, 0. 671 , 代入回歸方程, 求出靈芝多糖的含量及提取率, 結(jié)果(見表2 。葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程:y =0. 085+0. 0090x (r =0. 9978表2靈芝多糖粗品中靈芝多糖的含量及提取率批號(hào)12345靈芝子實(shí)體干重(g 335376416255274靈芝多糖粗品(g 3. 003. 113. 203. 123. 42靈芝多糖含量(% 68. 066.

18、 365. 063. 465. 1靈芝多糖提取率(%0. 6090. 5480. 5000. 4760. 8132. 2靈芝多糖的抗腫瘤作用(4, 52. 2. 1靈芝多糖對(duì)實(shí)體型移植瘤小鼠瘤塊生長的影響每次實(shí)驗(yàn)用同一性別小鼠, 隨機(jī)分為3組:生理鹽水(N S 組、靈芝多糖(GL PS 組和52氟尿嘧啶(52FU 組或環(huán)磷酰胺(CPM 組。GL PS 組提前灌胃(ig 40m g (kg . d 1周后, 給各組小鼠接種瘤塊。在無菌條件下, 從荷瘤1014d 、S 180或U 14瘤塊生長良好的小鼠采取并切成直徑2mm 3mm 的瘤塊, GL PS 組繼續(xù)給藥(i p 20m g kg -14

19、m g kg -12次, 隔日一次, N S ig 。于停藥后處死小鼠, 剝下皮下瘤塊并稱重, 按下式計(jì)算抑瘤率。靈芝多糖對(duì)小鼠S 180和U 14的平均抑瘤率分別為43%和51%, 靈芝多糖組的平均瘤重明顯輕于N S 組(P <0. 01 , 結(jié)果(見表3及圖1和表4及圖2 。抑瘤率=(1-N S 組動(dòng)物平均瘤重×100%表3靈芝多糖灌胃對(duì)小鼠肉瘤(S 180 生長的影響(n =10, X -±S 藥物劑量(瘤重( 抑瘤率( P 值第一次N S-1. 4±0. 4-GL PS40×170. 8±0. 240<0. 0152FU 2

20、0×40. 9±0.421>0. 05第二次N S-2. 4±0. 9-GL PS40×171. 2±0. 747<0. 0152FU 20×41. 8±0.624>0. 05第三次N S-2. 8±0. 8-GL PS40×171. 6±0. 442<0. 012. 2. 2靈芝多糖對(duì)腹水型移植瘤的小鼠存活時(shí)間的影響每次實(shí)驗(yàn)用同一性別小鼠, 隨機(jī)分為3組:(N S 組、靈芝多糖(GL PS 組和環(huán)磷酰胺(CPM 表4靈芝多糖灌胃對(duì)小鼠宮頸癌(U 14 生長的影響(n =

21、10, X -±S 藥物劑量(瘤重( 抑瘤率( P 值第一次N S-3. 8±1. 1-GL PS40×171. 9±0. 749<0. 0152FU 20×42. 4±1.836<0. 01第二次N S-3. 8±1. 0-GL PS40×172. 4±0. 940<0. 01CPM50×20. 1±0. 697<0. 001第三次N S-4. 0±0. 9-GL PS40×172. 3±0. 944<0. 01CPM50&

22、#215;20. 5±0. 588<0. 001第四次N S-3. 6±1. 0-GL PS40×171. 8±0. 550<0. 01GL PS80×171. 7±0. 452<0. 01CPM50×21. 2±0. 467<0. 01 1(S180 生長的影響圖2靈芝多糖灌胃對(duì)小鼠宮頸瘤(U 14 生長的影響組。GL PS 組提前灌胃(ig 40m g(kg . d 1周后。在無菌條件下, 取接種78d 生長良好的艾氏腹水癌(EA C 制成14腫瘤細(xì)胞生理鹽水混懸液, 給每只小鼠接種0.

23、 2m l 。接種后GL PS 組繼續(xù)給藥10d , CPM 組i p CPM 50m g kg -12次, 隔日1次, N S組ig 同一體積的生理鹽水。于停藥后觀察每只小鼠的生存天數(shù), 按下式計(jì)算生命延長率。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次, 與N S 組比較40m g kg -1的GL PS 沒有明顯延長小鼠的生命(P >0. 05 , 平均生命延長率為15%, 結(jié)果(見表5 。生命延長率=(給藥動(dòng)物平均存活天數(shù) 對(duì)照動(dòng)物平均存活天數(shù)-1 ×100%35Strait Phar m aceutical Journal V o l 12N o 12000 表5靈芝多糖灌胃對(duì)艾氏腹水癌(EA C

24、小鼠存活時(shí)間的影響(n =10 藥物劑量(小鼠生存-生命延長率( P 值第一次N S -12. 5±1. 3-GL P 40×1713. 9±0. 711>0. 05CPM50×215. 9±1. 828<0. 01第二次N S -11. 8±1. 5-GL P 40×1713. 8±1. 017>0. 05CPM50×215. 1±2. 927<0. 01第三次N S -11. 8±1. 6-GL P 40×1713. 9±1. 718&g

25、t;0. 0550×216. 0±1. 736<0. 012. 3靈芝多糖對(duì)小鼠全血凝血時(shí)間及出血時(shí)間的影響2. 3. 1靈芝多糖對(duì)小鼠全血出血時(shí)間的影響(6取小鼠50只, 隨機(jī)分為4組, GL PS 組和一組N S組。GL PS 組 GL PS 20m g (kg . d . ig ×10d 。N S 組ig 同體積的生理鹽水。GL PS 組 、 、 分別GL PS 40、30、20m g kg -1. iv 后1h , 用利剪將小鼠距尾尖3mm 處剪斷, 隔30S (N S :靈芝多糖能明顯延長小鼠的出血時(shí)間(P <0. 01 , (見表6 。表6

26、靈芝多糖對(duì)小鼠凝血和出血時(shí)間的影響(n =10, X -±S 組別藥物劑量及途徑(出血時(shí)間( 凝血時(shí)間( N S 組-185±7475±22GL PS 組 40×10. ig 872±4633172±4333GL PS 組 40. iv 780±5033116±2733GL PS 組 30. iv 720±4033115±1533GL PS 組20. iv720±4033108±1433與N S 組比較, 33:P <0. 012. 3. 2靈芝多糖對(duì)小鼠全血凝血時(shí)間的

27、影響(7取測定出血時(shí)間的各組小鼠, 用彎鑷迅速摘去一側(cè)眼球, 于載玻片兩端各滴1滴直徑5mm 的血滴。立即用秒表記時(shí), 每隔一定時(shí)間用清潔針頭自血滴邊緣向里輕輕挑動(dòng)1次, 觀察有無血絲挑起。從采血開始至挑起血絲為止, 所歷時(shí)間即為凝血時(shí)間。另取1滴血作為正常凝血情況判別對(duì)照。記錄各小鼠的凝血時(shí)間, 進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)。結(jié)果表明:靈芝多糖能顯著延長小鼠的凝血時(shí)間(P <0. 01 , (見表6 。2. 4靈芝多糖對(duì)大鼠血栓形成及血液凝固系統(tǒng)的影響。取大鼠20只, 隨機(jī)分成N S 組、GL PS 組。GL PS 組ig GL PS 40m g(kg . d ×10d , N S 組ig

28、 同體積的生理鹽水。給藥10d 后, 用20%烏拉坦按0. 5m l 100g -1體重i p 麻醉后, 打開大鼠胸腔, 暴露心臟采血3m l , 其中0. 5m l 直接用M R 24型多環(huán)血栓測定儀測定血栓長度和濕重(Chandler 氏法 。另2. 5m l 血加入0. 3m l (按91 枸櫞酸鈉(3. 8% 混勻, 100R PM 離心5m in , 吸取0. 1m l 富血小板血漿(PR P 于特制的小試管中, 用多功能雙通道血液凝聚儀測定血小板數(shù)目。再以3000R PM 離心10m in , 吸取0. 1m l 貧血小板血漿(PPP , 加入相應(yīng)的酶試劑后, 用多功能雙通道血液凝

29、聚儀分別檢測凝血活酶時(shí)間(PT 、凝血酶時(shí)間(T T 、部分凝血活酶時(shí)間(KPT T 。另在小試管中加入2m l 纖維蛋白原酸性緩沖液和0. 1m l PPP , 混勻, 置入電腦。結(jié)果表明:, (P <0. 01 , 明 (P <0. 01 (見圖3 。圖3靈芝多糖(40m g kg . d . ig ×10d 對(duì)大鼠血液凝固系統(tǒng)的影響3討論靈芝多糖是靈芝的主要有效成分之一, 我們用水提、醇沉法提取靈芝多糖, 并經(jīng)透析除去分子量1萬以下的成分, 得到靈芝多糖粗品。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明:靈芝多糖具有抗腫瘤、抗血栓及抗凝血的作用。本所實(shí)驗(yàn)證明GL PS 對(duì)試管培養(yǎng)的癌細(xì)胞無直接

30、殺傷作用, 故靈芝多糖抗腫瘤作用可能是通過增強(qiáng)機(jī)體免疫功能而實(shí)現(xiàn)的810。靈芝多糖能降低纖維蛋白原含量, 減弱部分凝血活酶的活性使其影響內(nèi)源性凝血途徑, 并能抗血栓和抗凝血, 其機(jī)理尚待探討。45海峽藥學(xué)2000年第12卷第1期 參考文獻(xiàn)1何云慶等, 靈芝扶正固本有效成分靈芝多糖的化學(xué)研究北京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)1989; 21(3 :2252272D ubo is M , et al :co lar m etric m ethod fo r defer m inati on of sugarsand related substances, A nal Chem , 1956, 28:3503523方

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