優(yōu)勢醋酸菌的分離篩選論文版

1、優(yōu)勢醋酸菌的分離篩選焦文娟 王花秀 李鮮鮮 彭浩然 焦曉陽 周口師院07生物工程（2）班摘要: 利用液醋分離篩選出的數(shù)株較優(yōu)醋酸菌,同時對這數(shù)株醋酸菌的產(chǎn)酸速度、耐酒度、耐溫度、耐食鹽能力、酒精轉(zhuǎn)化率等性能及果汁發(fā)酵產(chǎn)生果醋進(jìn)行研究。關(guān)鍵詞醋酸菌;果醋;耐酸度;耐溫度（-）研究的意義及現(xiàn)在的進(jìn)展：果醋作為一種酸性發(fā)酵健身飲料,含有豐富的維生素、無機(jī)鹽、氨基酸和有機(jī)酸類,且風(fēng)味獨(dú)特,因而深受廣大消費(fèi)者歡迎。在果醋生產(chǎn)中,醋酸菌的性能對產(chǎn)品質(zhì)量、發(fā)酵效率有很大影響。所以,選育產(chǎn)酸快、耐酒度、耐高溫、耐食鹽、酒精轉(zhuǎn)化率高、適合果醋生產(chǎn)的醋酸菌是一項十分重要的工作。此外，因醋酸菌的活動將乙醇氧化為乙酸

2、即醋酸，可用于食品釀造中。食醋的釀造大體上可分為表面發(fā)酵法和深層發(fā)酵法。這兩種發(fā)酵方法主要都是依靠醋酸菌的活動將乙醇氧化為醋酸。國外對醋酸菌優(yōu)質(zhì)菌株的選育和醋酸發(fā)酵機(jī)理的研究非常重視,做了大量工作。國內(nèi)對醋酸菌優(yōu)良菌種的應(yīng)用也日益重視起來, 并積累了不少有關(guān)醋酸菌分類鑒定及性能研究的資料。目前我國應(yīng)用于液體醋生產(chǎn)的醋酸菌為（1）有惡臭醋酸桿菌混濁變種。最適培養(yǎng)溫度28300c。最適pH值3.5-6.0 ,耐乙醇能力小于0.08,最高產(chǎn)量7090g/L。能進(jìn)一步將醋酸氧化為二氧化碳和水過氧化反應(yīng)。(2)滬釀1.01:羅旺醋酸桿菌,是上海醋廠從丹東速釀醋中分離到的一株優(yōu)良醋酸菌,也是我國釀醋行業(yè)普

3、遍使用的菌種。(3)滬釀1.079:是1984年從上海醋廠老法發(fā)酵醋酷中分離到的一個新菌株。在0.1乙醇時產(chǎn)酸達(dá)到63.6g/L,而且耐乙醇能力達(dá)到0.17乙醇時仍能產(chǎn)酸。（二）材料與方法1 實驗材料液醋:由大連調(diào)味食品廠提供;濃縮蘋果汁:由大連真愛果汁公司提供。葡萄酒酵母:由大連輕工業(yè)學(xué)院微生物教研室提供。2 實驗方法培養(yǎng)基的制作、酸度測定、醋酸定性試驗.一 基礎(chǔ)培養(yǎng)基 1%酵母膏,1%葡萄糖。pH 4.5，5MPa 滅菌30min。使用前加入0.03無水乙醇。二 產(chǎn)酸試驗培養(yǎng)基 (1) 基礎(chǔ)培養(yǎng)基臨用前加入0.07無水乙醇,分裝于500ml三角瓶,每瓶50ml; (2)酵母膏1%,pH4.

4、5使用前按需要量加入無水乙醇,分裝于500mL三角瓶,每瓶70mL,以上培養(yǎng)基用冰乙酸調(diào)pH值。三 分離和斜面保藏培養(yǎng)基: 100mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入2%瓊脂,滅菌后加入5%無菌碳酸鈣和0.03無水乙醇,為分離培養(yǎng)基。分裝試管,滅菌后擺成斜面即為保藏培養(yǎng)（三）研究方案1 醋酸菌篩選液醋增殖培養(yǎng)稀釋分離選取單菌落純化試管斜面培養(yǎng)液體試管培養(yǎng)液體三角瓶培養(yǎng)測酸確定菌株。2 分離篩選初篩(透明圈法) :取不同發(fā)酵時間液態(tài)醋20mL,加入50 mL增殖培養(yǎng)基,30增殖培養(yǎng)34d。稀釋至10- 410- 7倍,各取0.2mL ,涂到平板分離培養(yǎng)基,30培養(yǎng)3d ,待長出菌落后,挑菌落較小、透明圈較大、邊

5、緣整齊的單菌落移植試管培養(yǎng)。復(fù)篩:取經(jīng)初篩培養(yǎng)成的斜面菌落,接入液體試管(裝液量10mL酒精體積分?jǐn)?shù)3%) 30培養(yǎng)24h后,接入500mL液體三角瓶(裝液40mL),接種量為1支試管接1支三角瓶。最后酒精體積分?jǐn)?shù)為6% ,30靜止培養(yǎng),每日測定酸度,選出產(chǎn)酸快、酒精轉(zhuǎn)化率高的菌株并做醋酸定性試驗。純化:確定產(chǎn)酸快、酒精轉(zhuǎn)化率高的較優(yōu)菌株,反復(fù)純化獲得純種。純化方法同分離方法。（四）定性實驗1 產(chǎn)酸速度及酒精轉(zhuǎn)化率 經(jīng)過反復(fù)分離篩選,初篩選出的透明圈較大菌株,移入試管培養(yǎng);復(fù)篩選出幾株產(chǎn)酸快、酒精轉(zhuǎn)化率高的較優(yōu)菌株，記錄這兩株菌在酒精體積分?jǐn)?shù)為6%的液體三角瓶中產(chǎn)酸情況。2 酒精度對產(chǎn)酸的影響

6、將初篩的菌株于液體三角瓶中,在酒精體積分?jǐn)?shù)分別為3%、5%、7%、9%、11%、13%的溶液中30靜止培養(yǎng)。記錄產(chǎn)酸情況。3 溫度對產(chǎn)酸的影響將初篩的菌株于液體三角瓶中,酒精體積分?jǐn)?shù)為3%分別在25、30、35、40下靜止培養(yǎng)6 d ,記錄產(chǎn)酸情況。4 食鹽濃度對產(chǎn)酸的影響將初篩的菌株于液體三角瓶中,酒精體積分?jǐn)?shù)為3% ,分別加入不同量食鹽,30靜止培養(yǎng)6d ,記錄產(chǎn)酸情況。5 產(chǎn)醋酸定性試驗將上述斜面菌種接種于含0.03乙醇,1%酵母膏,1.5%碳酸鈣的培養(yǎng)液中,30靜置淺層培養(yǎng)3到5天后,取除去菌體液,2.5mol/LNaOH溶液中和至pH7.0。加5%氯化鐵溶液5一6滴,形成紅褐色沉淀者

7、為產(chǎn)醋酸細(xì)菌。（五）結(jié)論通過菌種分離篩選獲得的菌株挑選酒精轉(zhuǎn)化率更高、耐酒度上更好一些的菌株培養(yǎng)保存，即為我們所希望分離的菌株。（六）可行性分析醋酸菌是專性好氧細(xì)菌, 其氧化乙醇為乙酸的作用是由于它的細(xì)膜上含有高活性的乙醇脫氫酶和乙醛脫氫酶合復(fù)體，所以當(dāng)在培養(yǎng)基中加入乙醇時。醋酸菌能氧化乙醇為乙酸，進(jìn)而根據(jù)相應(yīng)的生理生化反應(yīng)，可以用于分離篩選優(yōu)良醋酸菌。（七）參考文獻(xiàn)1 恒順調(diào)味品研究所. 鎮(zhèn)江香醋醋酸菌的分離篩選報告. 江蘇副食調(diào)味品 1990 (1) : 9122 上海市釀造科學(xué)研究所. 發(fā)酵調(diào)味品生產(chǎn)技術(shù):下冊. 北京:輕工業(yè)出版社 1979. 233 2423 中國科學(xué)院微生物研究所菌種