亞硝酸鹽的測定

1、 鹽酸萘乙二胺法測定亞硝酸鹽的含量 1亞硝酸鹽的測定(鹽酸萘乙二胺法)1.1原理 樣品經(jīng)沉淀蛋白質(zhì)、除去脂肪后，在弱酸性條件下，亞硝酸鹽與對(duì)氨基苯磺酸(H2NC6H4-SO3H)重氮化，產(chǎn)生重氮鹽，此重氮鹽再與偶合試劑(鹽酸萘乙二胺)偶合形成紫紅色染料，其最大吸收波長為550nm，測定其吸光度后，可與標(biāo)準(zhǔn)比較定量。1.2儀器和試劑1.2.1儀器    小型粉碎機(jī)。    分光光度計(jì)。    25ml具塞比色管。1.2.2試劑    氯化銨緩沖溶液：在1 000ml容量瓶中加人

2、500ml水，然后準(zhǔn)確加入20.0ml鹽酸，振蕩混勻后，再準(zhǔn)確加入50ml氫氧化銨，用水稀釋至刻度。必要時(shí)用稀鹽酸和稀氫氧化銨調(diào)試pH至9.69.7。    硫酸鋅溶液(0.42mol/L)：稱取120g硫酸鋅(ZnSO4·7H2O)，用水溶解，并稀釋至1000ml。    氫氧化鈉溶液(20g/L)：稱取20g氫氧化鈉用水溶解，稀釋至1 000ml。    對(duì)氨基苯磺酸溶液：稱取10g對(duì)氨基苯磺酸，溶于700ml水和300ml冰乙酸中，置棕色瓶中混勻，室溫保存。  

3、0; 鹽酸萘乙二胺溶液(1g/L)：稱職0.1g鹽酸萘乙二胺，加60%乙酸溶解并稀釋至100ml，混勻后，置棕色瓶中，在冰箱中保存，1周內(nèi)穩(wěn)定。  顯色劑：臨用前，將鹽酸萘乙二胺溶液(1g/L)和對(duì)氨基苯磺酸溶液等體積混合。僅供1次使用。    亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱取250.0mg于硅膠干燥器中干燥24h的亞硝酸鈉，用水溶解后移入500ml容量瓶中，加100ml氯化銨緩沖溶液，用水稀釋至刻度，混勻，在4避光保存。此溶液每毫升相當(dāng)于500g的亞硝酸鈉。    亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液：臨用前，吸取亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1.00ml

4、，置于100ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，混勻。此溶液每毫升相當(dāng)于5.0g的亞硝酸鈉。1.3操作步驟1.3.1樣品的處理  稱取約10.00g(糧食稱取5.00g)經(jīng)絞碎混勻的樣品，置于250ml燒杯中，加。70ml水和12ml氫氧化鈉溶液(20g/L)，混勻，用氫氧化鈉溶液(20g/L)調(diào)樣品pH至8，定量轉(zhuǎn)移至200ml容量瓶中，加l0ml硫酸鋅溶液，混勻。如不產(chǎn)生白色沉淀，可再補(bǔ)加25ml氫氧化鈉溶液，攪拌混勻。置60水浴中加熱10min，取出后冷至室溫，加水至刻度，混勻。放置0.5h，用濾紙過濾，棄去初濾液20ml，收集濾液備用。1.3.2亞硝酸鹽標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 

5、吸取0.0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液(相當(dāng)于0.0、2.5、5.0、10.0、15.0、20.0、25.0g的亞硝酸鈉)，分別置于25ml具塞比色管中。分別加入4.5ml氯化銨緩沖溶液，2.5ml60的乙酸，然后立即加入5.0ml顯色劑，加水至刻度，混勻，在暗處靜置25min，用1cm比色杯(靈敏度低時(shí)可換2cm比色杯)，以零管調(diào)節(jié)零點(diǎn)，于波長550nm處測吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。1.3.3樣品的測定  吸取10.0ml樣品濾液于25ml具塞比色管中，按標(biāo)準(zhǔn)曲線制備程序，自“分別加入4.5ml氯化銨緩沖液”起依法操作。同時(shí)做試劑空白。

6、0; 1.4結(jié)果計(jì)算式中：X樣品中亞硝酸鹽的含量，mg/kg；      m1樣品的質(zhì)量，g；      m2測定用樣液中亞硝酸鹽的質(zhì)量，g；      V1樣品處理液的總體積，ml；      V2測定用樣液體積，ml。結(jié)果以算術(shù)平均值的二位有效數(shù)字表述。1.5說明及注意事項(xiàng)    硫酸鋅溶液作為蛋白質(zhì)沉淀劑使用，也可用亞鐵氰化鉀和乙酸鋅的混合溶液，利用產(chǎn)生的亞鐵氰

7、化鋅與蛋白質(zhì)共沉淀；實(shí)驗(yàn)中使用重蒸水可以減少試驗(yàn)誤差。2硝酸鹽的測定2.1原理    樣品經(jīng)沉淀蛋白質(zhì)、除去脂肪后，將樣品提取液通過鎘柱，使其中的硝酸根離子還原成亞硝酸根離子。在酸性條件下，亞硝酸根與對(duì)氨基苯磺酸重氮化后，再與鹽酸萘乙二胺偶合形成紅色染料，經(jīng)比色測得亞硝酸鹽總量，從還原前后亞硝酸鹽量即可求得硝酸鹽的含量。2.2儀器和試劑2.2.1儀器（1）鎘柱    a.海綿狀鎘粉的制備：投入足夠的鋅皮或鋅棒于500ml200g/L的硫酸鎘溶液中，經(jīng)34h，當(dāng)溶液中的鎘全部被鋅置換后，用玻璃棒輕輕刮下，取出殘余鋅皮，使鎘沉底，傾去上層

8、清液，以蒸餾水用傾斜法洗滌，然后移入組織搗碎機(jī)中，加500ml水。搗碎約2s，用水將金屬細(xì)粒洗至標(biāo)準(zhǔn)篩上，取2040目之間的部分。置試劑瓶中，用水封蓋保存，備用。b.鎘柱裝填：如圖83所示。用蒸餾水裝滿鎘柱玻璃管，并裝入2cm高的玻璃棉作墊。將玻璃棉壓向柱底，并將其中所包含的空氣全部排出，在輕輕敲擊下加入海綿狀鎘至810cm高，上面用1cm高的玻璃棉覆蓋，上置一個(gè)儲(chǔ)液漏斗，末端穿過橡皮塞與鎘柱玻璃管緊密連接。 圖83鎘柱裝置示意圖    如無上述鎘柱玻璃管，也可用25ml酸式滴定管代用。    當(dāng)鎘柱填裝好后，先用25ml鹽

9、酸(0.1mol/L)洗滌，再以蒸餾水洗2次，每次25ml，鎘柱不用時(shí)用水封蓋，隨時(shí)都要保持水平面在鎘層之上，不得使鎘層夾有氣泡。鎘柱每次使用完畢后，應(yīng)先以25ml鹽酸(0.1mol/L)洗滌，再以水洗2次，每次25ml，最后用水覆蓋鎘柱。2.2.2試劑    氨緩沖溶液(pH9.69.7)：量取20ml鹽酸加50ml蒸餾水，混勻后加50ml氨水，用水定容至1 000ml。    稀氨緩沖溶液：取50ml氨緩沖溶液，用水定容至500ml。    對(duì)氨基苯磺酸溶液(4g/L)。  

10、60; 鹽酸萘乙二胺溶液(2g/L)。    鹽酸溶液(0.1mol/L)：吸取8.4ml鹽酸，用水稀釋至1 000ml。    硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱取0.123 2g硝酸鈉(已于110120干燥至恒重，相當(dāng)于0.1000g亞硝酸鈉)，以重蒸水溶解，移于500ml容量瓶中并定容。此液濃度為200g/ml亞硝酸鈉。    硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液：臨用時(shí)吸取標(biāo)準(zhǔn)液2.50ml置于100ml容量瓶中，加水定容。此液濃度為5mg/ml亞硝酸鈉。    亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液同亞硝酸鹽的測定

11、。2.3操作步驟2.3.1樣品的處理。同亞硝酸鹽測定。2.3.2鎘柱還原效率的測定        先以25ml稀氨緩沖溶液沖洗鎘柱，流速控制在35ml/min(以滴定管代替的，可控制在23ml/min)。    吸取20ml硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液，加入5ml稀氨緩沖溶液，混勻，注入儲(chǔ)液漏斗，使流經(jīng)鎘柱還原，以原燒杯收集流出液，當(dāng)儲(chǔ)液中溶液流完后，再加5ml水置換柱內(nèi)留存溶液。將全部收集液如前經(jīng)鎘柱再還原一次，第二次流出液收集于100ml容量瓶中，再用20ml水洗滌鎘柱，共洗滌3次，洗滌液收集于同一容量瓶中，加水

12、至刻度，混勻。    吸取10.00ml還原后的標(biāo)準(zhǔn)液(相當(dāng)于10mg亞硝酸鈉)于50ml比色管中，加人2.0ml對(duì)氨基苯磺酸溶液(4g/L)，混勻，靜置35min，各加入1.0ml鹽酸萘乙二胺溶液(2g/L)，加水至刻度，混勻，靜置15min，用2cm比色杯，于538nm處測定吸光度并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算測得結(jié)果。還原效率大于98%為符合要求。        式中：X還原效率，；        A測得亞硝酸鹽的含量

13、，g；        10測定用溶液相當(dāng)于亞硝酸鹽的含量，g。2.3.3樣品中亞硝酸鹽總量測定     樣液還原：吸取20ml樣品處理液于50ml燒杯中，加5ml氨緩沖溶液，混勻后注入儲(chǔ)液漏斗中，使流經(jīng)鎘柱還原，以下按鎘柱還原效率測定操作進(jìn)行，收集還原后的樣液于100ml容量瓶中并定容。    吸取1020ml還原后的樣液于50ml比色管中，以下按鎘柱還原效率測定操作進(jìn)行，測得吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出亞硝酸鹽量。2.3.4亞硝酸鹽測定   吸取40ml樣品處理液于50ml比色管中，按亞硝酸測定操作進(jìn)行，測定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出亞硝酸鹽含量。2.4結(jié)果計(jì)算         式中：X硝酸鹽含量，mg/kg；        A1經(jīng)鎘柱還原后測得的亞硝酸鹽量，g；        A2不經(jīng)鎘柱還原直接測得的亞硝酸鹽量，g；