人參皂苷Rh對(duì)荷肺癌小鼠基因表達(dá)的腫瘤特異性調(diào)節(jié)

1、人參皂苷Rh2 對(duì)荷肺癌小鼠基因表達(dá)的腫瘤特異性調(diào)節(jié) 張文靜,包麗華,俞春鶯,張軍毅,趙安,許長(zhǎng)江,賈韋國(guó)Tumor Specif ic Gene Regulation by Ginseng Saponin Rh2 in Mice Bearing Lung CancerZHANG Wen2jing , BAO Li2hua , YU Chun2ying , ZHANG J un2yi , ZHAO An , XU Chang2jiang , J IAWei2guoS hanghai Innovati ve Research Center of TCM , S hanghai 201203 ,

2、ChinaCorres ponding A uthor : J IA Wei2guo , E2mai l :w j iainterchange. ubc. caAbstract :Objective To study gene differential expression profiles by ginsenoside Rh2 in normal and tumor2bearing mice. Methods Gene expression profiles af ter t reatment with Rh2 in normal and tumor2bearing mice were de

3、termined by Oligo chip technology as well as the clustering and statistic analysis of single gene. To further validate the microarray result s ,we used quantitative real2time RT2PCR to examinethe effect of Rh2 on individual genes. Results As compared with normal mice , t reatment with Rh2 changed ge

4、ne expression more potently in mice bearing tumor. Thereps no obvious correlation on the gene expression profiles between the normal and tumor2bearing mice. Treatment with Rh2 was found to be ef2 fectively resistant abnormal gene expression profiles in some major organs that resulted f rom the local

5、 im2 plantation of tumor. Conclusion The data showed that there is specific regulation of gene expression pro2 files related to tumor by Rh2 in mice bearing tumor.Key words :Rh2 ; Oligo chip assay ; Gene expression profile摘要:目的研究人參皂苷Rh2 對(duì)正常和荷肺癌小鼠基因表達(dá)的調(diào)節(jié)差異。方法運(yùn)用寡核苷酸芯片技術(shù),檢測(cè)Rh2 對(duì)正常和荷瘤小鼠的基因表達(dá)調(diào)節(jié),并對(duì)差異基因進(jìn)行聚

6、類(lèi)和統(tǒng)計(jì)分析。為了進(jìn)一步驗(yàn)證芯片結(jié)果,我們使用實(shí)時(shí)熒光定量PCR 方法檢驗(yàn)Rh2 對(duì)基因表達(dá)的作用效果。結(jié)果與正常小鼠相比,Rh2 對(duì)荷瘤小鼠的基因表達(dá)影響更大,二者的主要受調(diào)臟器也不同;Rh2 對(duì)正常和腫瘤小鼠基因表達(dá)調(diào)節(jié)沒(méi)有明顯的相關(guān)性;Rh2 能有效拮抗局部接種腫瘤引起的荷瘤小鼠各臟器基因異常表達(dá)。結(jié)論Rh2 對(duì)荷瘤小鼠的基因表達(dá)調(diào)節(jié)具有腫瘤特異性。關(guān)鍵詞:人參皂苷Rh2 ;基因芯片;基因表達(dá)譜中圖分類(lèi)號(hào):R734. 2 ;Q344 + . 13 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A 文章編號(hào):100028578 (2008) 08205552050 引言 人參(Panax ginseng C. A. mey

7、er) 為五加科多年生草本植物,是有幾千年應(yīng)用歷史的名貴中藥。其效果不僅早為古今中外無(wú)數(shù)醫(yī)學(xué)家肯定,而且為現(xiàn)代科學(xué)研究所證明。最早對(duì)人參藥理功用給予高度評(píng)價(jià)的,首推神農(nóng)本草經(jīng)。書(shū)中明確指出,人參“主補(bǔ)五臟,安精神,止驚悸,除邪氣,明目,開(kāi)心益智”。 人參主要含有皂苷、人參多糖、多肽類(lèi)、氨基酸及維生素等物質(zhì)。人參皂苷是人參中主要的活性有效成分,主要包括原人參二醇組和原人參三醇組。人參皂苷的生理活性,決定了它的食用和藥用價(jià)值。大量研究結(jié)果表明,人參皂苷具有抗疲勞 1 ,2 、提高記憶、延緩衰老 3 ,4 、提高機(jī)體免疫功能 5 及抗腫瘤等多種作用。尤其值得一提的是人參皂苷的抗腫瘤功效。實(shí)驗(yàn)證明,人

8、參提取物可以預(yù)防治療食管癌、胃癌、肺癌、肝癌等多種癌癥 6 。特別是原人參二醇組皂苷Rh2 ,研究發(fā)現(xiàn)其有較強(qiáng)的抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)作用 7 。 基因芯片技術(shù)被廣泛應(yīng)用于基因表達(dá)及調(diào)控的研究,生物體(組織) 在不同的時(shí)間條件下有不同功能基因表達(dá),通過(guò)從樣品中提取RNA 再反轉(zhuǎn)錄成cDNA ,與含有代表該生物體(或組織) 中所有功能基因的芯片進(jìn)行雜交,就可得到該樣品中功能基因的表達(dá)情況。例如,人類(lèi)基因組中大約編碼100 000個(gè)不同的基因,通過(guò)DNA 芯片技術(shù)進(jìn)行檢測(cè),只需一次就幾乎可以獲得全部的表達(dá)情況。 本文運(yùn)用基因芯片技術(shù)研究了口服人參皂苷Rh2 對(duì)正常和荷瘤小鼠的基因調(diào)節(jié)作用。試驗(yàn)結(jié)果表明:

9、與正常小鼠相比,Rh2 對(duì)荷瘤小鼠的基因表達(dá)影響更大,二者的主要受調(diào)臟器也不同;Rh2 處理后正常和荷瘤小鼠各臟器的基因表達(dá)譜之間沒(méi)有明顯的相關(guān)性;Rh2 能有效拮抗因腫瘤引起的荷瘤小鼠各臟器基因異常表達(dá),表明Rh2 對(duì)荷瘤小鼠的基因表達(dá)調(diào)節(jié)具有腫瘤特異性。1 材料與方法1. 1 試驗(yàn)動(dòng)物C57BL/ 6 小鼠,雌性,1820 g ,購(gòu)自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司。1. 2 主要試劑Trizol 試劑盒( Invit rogen) ; Rneasy Mini 試劑盒(QIA GEN) ;20 ×SSPE 洗液( Invit rogen) ; 20 %N2月桂酰肌氨酸溶液N2Lau

10、roylsarcosine Solution(SIGMA) ; 逆轉(zhuǎn)錄酶MMLV2RT ( Promega) ;寡核苷酸混合物dN TP Mix (A TP、GTP、CTP、U TP)(Amersham) ; aa2U TP (Ambion) ; 溴化鈉Sodiumbricarbonate ( SIGMA) ; 羥胺Hydroxylamine ( SIG2MA) ;Cy3 N HS easter 及Cy5 N HS easter (Amer2sham) ; 穩(wěn)定和干燥溶液Stabilization and DryingSolution (Agilent) ;小鼠寡核苷酸芯片Mouse olig

11、omicroarray (Agilent)1. 3 主要儀器Agilent 掃描儀,Chrom4 熒光定量PCR 儀。1. 4 方法1. 4. 1 小鼠腫瘤模型及取材 總共80 個(gè)小鼠隨機(jī)分成四組,每組20 只,其中兩組為荷瘤小鼠, 于右腋皮下接種0 . 2 ml 共8 ×106Lewis 肺癌(3LL) 細(xì)胞懸液。兩組正常小鼠(非荷瘤小鼠) 分別以溶劑0. 5 %羧甲基纖維素鈉(CMC2Na) 灌胃,作為陰性對(duì)照組(簡(jiǎn)稱(chēng)為NS 組) ,以100mg/ (kg·d) Rh2 (用0. 5 %CMC2Na 溶液配成4 mg/ml 溶液) 灌胃, 簡(jiǎn)稱(chēng)為NR 組; 荷瘤小鼠以溶

12、劑0. 5 % CMC2Na 灌胃,簡(jiǎn)稱(chēng)TS 組;以上述同樣劑量的Rh2 灌胃, 簡(jiǎn)稱(chēng)為T(mén)R 組。接種腫瘤24 h 后開(kāi)始灌胃,每日一次連續(xù)21 天。試驗(yàn)結(jié)束后,分別取各小鼠的大腦、心、肺、肝、脾、胸腺和腫瘤組織,其中10 只小鼠的各個(gè)臟器勻漿后分別提取RNA ,得到的RNA 等量同組混合,經(jīng)反轉(zhuǎn)錄為cDNA 后,用于芯片檢測(cè)。1. 4. 2 芯片檢測(cè)(1) 總RNA 抽提及純化應(yīng)用Trizol 試劑盒提取RNA。測(cè)定OD260 和OD280 值,鑒定核酸純度;使用RNeasy   Kit 純化總RNA。(2) cDNA 合成取2g 總RNA ,5l 0. 1g/l T7 promo

13、ter primer ,用水補(bǔ)足體積至11. 5l ,65 保溫10 min ,冰浴5 min ,在該體系中加入4l5 ×First St rand Buffer , 2 l 0 . 1 M DTT , 1 l 10mM dN TP ,1l MMLV2RT ,0 . 5l RNase OU T ,40 保溫2 h 。(3) 熒光標(biāo)記cDNA 合成、純化將合成的cD2NA 在65 保溫15 min ,冰浴5 min 。加入Tran2scription mix (含有5. 7l Rnase2f ree Water ,20l 4×Transcription Buffer , 6

14、l 0. 1 M DTT , 16 ldN TP Mix ( dA TP , dGTP , dCTP , dU TP) , 6. 4 l50 % PEG,0. 5l Rnase OU T ,0 . 6l Inorganic Py2rop hosp hatase , 4 l 25 mM aa2U TP , 0. 8l T7RNA Polymerase 并混勻,40 保溫2 h ,隨后置于冰上。按照RNeasy Mini Protocol 進(jìn)行cDNA 純化。(4) cDNA 探針后標(biāo)記, cDNA 探針純化取4g cDNA , 并濃縮至6. 6l , 加入10 l DMSO(Sigma) ,混勻

15、,加入3. 4l 0. 3M sodium bicarbon2ate buffer (p H 9. 0) ,混勻。將上述20l cDNA 混合物加入到熒光染料中并混勻,放置室溫1 h ,加入9l 4M Hydroxylamine ,混勻, 放置室溫15 min 。按照RNeasy Mini Protocol 進(jìn)行cDNA 探針純化。(5) cDNA 探針定量Cy3 探針濃度(pmol/l)= A552/ 0. 15 , Cy5 探針濃度( pmol/l ) = A650/0. 25 。(6) 芯片雜交對(duì)DNA 進(jìn)行片段化(100 pmolCy3 cDNA ,50 pmol Cy5 cDNA ,

16、 50l 10 ×cont roltarget ,加入RNase2f ree Water 補(bǔ)充體積至240l) ,在其中加入10 l Fragmentation Buffer , 輕輕混勻,60 保溫30 min (不超過(guò)30 min) ,加入250lHybridization Buffer ,輕輕混勻,取490l 雜交溶滴加在蓋玻片上,蓋上芯片并密封芯片于雜交盒中,60 滾動(dòng)雜交16 h 。(7) 芯片洗滌將芯片放入洗液1 ( 700 mlDEPC2H2 O , 300 ml 20 ×SSPE , 0 . 25 ml 20 %N2Lauroyl sarcosine) 中洗

17、滌1 min ,將芯片放入洗液2中(997 ml DEPC2H2 O , 3 ml 20 ×SSPE , 0. 25 ml20 %N2Lauroyl sarcosine) 洗滌1 min ,將芯片放入洗液3 中( Stabilization and Drying Solution) 洗滌30 s。(8) 芯片掃描以及數(shù)據(jù)分析使用Agilent Scanner 來(lái)獲取圖像。掃描像素值: 10 m , PMT( %) 數(shù)值: 100 ,圖像通常是162bit tiff 文件。圖像直接使用Agilent 系統(tǒng)相應(yīng)的圖像分析軟件Fea2t ure Ext raction 進(jìn)行定量分析處理。一

18、般認(rèn)為ratio值在0 . 52 . 0范圍內(nèi)的基因不存在顯著的表達(dá)差異,而在該范圍之外的基因則被認(rèn)為表達(dá)出現(xiàn)顯著改變。1. 4. 3 Real2time PCR按照SYBR Green 試劑盒(Bio2Rad) 進(jìn)行Real2time PCR 實(shí)驗(yàn),所用儀器為MJ Research 生產(chǎn)的Chrom4 Real - time PCR 儀。2actin 用作內(nèi)標(biāo),擴(kuò)增小鼠2actin 的引物為pGCTAC A GCTT CACCACCACA 3p/ 5pCA TCG TACTC CTGCT TGCTG 3p。擴(kuò)增小鼠Ifi202b 、Cidea 、Cdk8 、MMP9 、Calm4的引物分別為

19、5pGGTGTGG GA TAAA G AACA G2CA 3p/ 5pTCAA T GCCAC CACTT GTTTG 3p、5pGCCTG CA GGA ACTTA TCA GC 3p/ 5pTGCTTGCA GA CTGGG ACA TA 3p、5p GA TTC CCTCAACAAC CCA GA 3p/ 5p CGGCT TTCCT TCA TTCTGTT 3p、5p GTGGG TGTAC ACA GG CAA GA3p/ 5p ACTCC TTA TC CACGC GAA TG 3p、5pTGA TG GCAA G A TCA G CTTTG 3p/ 5p CACGGA TCA

20、T GTCCT CCA G 3p。cDNA 制備同“芯片檢測(cè)”方法中描述。PCR 反應(yīng)在20l 體系中完成,包括: 10l iQTM SYBR Green Supermix (Bio2rad) , 0. 1l cDNA , 0. 3m相應(yīng)引物。PCR 反應(yīng)條件為:94 解鏈30 s ;40 個(gè)循環(huán)(94 解鏈30 s ,55 退火30 s ,72 延伸30 s) ;72 延伸10 min。在每個(gè)循環(huán)的延伸步驟之后采集熒光信號(hào),運(yùn)用CT 法計(jì)算結(jié)果。2 結(jié)果2. 1 Rh2 對(duì)正常小鼠若干臟器組織中基因的表達(dá) 調(diào)節(jié)應(yīng)用Agilent 小鼠全基因寡核苷酸芯片(芯片產(chǎn)品目錄號(hào): G4121

21、A ,60 mer Oligo Microarray ,共有20 868個(gè)基因信息) 檢測(cè)Rh2 對(duì)正常小鼠各臟器組織的基因表達(dá)調(diào)節(jié)。以NS 組為對(duì)照組,NR 組為實(shí)驗(yàn)組檢測(cè),以期了解Rh2 對(duì)正常組織器官基因的潛在調(diào)節(jié)作用。 Rh2 對(duì)正常小鼠各臟器的基因表達(dá)影響較小,表現(xiàn)在其調(diào)節(jié)各臟器的差異基因數(shù)較少。其對(duì)正常小鼠基因的表達(dá)調(diào)節(jié)主要集中在脾臟和肺,同時(shí)其對(duì)大腦、心臟、胸腺、肝中的基因也有一定調(diào)節(jié),見(jiàn)圖1 。2. 2 皮下局部移植性腫瘤對(duì)正常小鼠若干臟器組織的基因表達(dá)調(diào)節(jié) 運(yùn)用Agilent 小鼠全基因寡核苷酸芯片檢測(cè)皮下局部移植性腫瘤對(duì)正常動(dòng)物的基因表達(dá)調(diào)節(jié)。以NS 組為對(duì)照組, TS 組

22、為實(shí)驗(yàn)組檢測(cè)。左圖為大腦、心臟、肺、胸腺、肝、脾各臟器中上調(diào)和下調(diào)的基因數(shù)右圖為各個(gè)臟器中差異基因數(shù)占所有臟器差異基因數(shù)的百分比圖1 Rh2 對(duì)正常小鼠的基因表達(dá)調(diào)節(jié)皮下移植生長(zhǎng)的腫瘤作為一個(gè)局部的病灶能很大程度地影響動(dòng)物各臟器的基因表達(dá),對(duì)于機(jī)體的主要功能器官心臟、肺、肝及免疫器官胸腺和脾臟的基因表達(dá)都有很大程度的影響,同時(shí)對(duì)于控制神經(jīng)功能的大腦的基因表達(dá)也有調(diào)節(jié),見(jiàn)圖2 。上述結(jié)果說(shuō)明一個(gè)局部的腫瘤病灶對(duì)整體遠(yuǎn)端的各個(gè)器官的基因表達(dá)都有顯著影響, 從而說(shuō)明局部的病灶可能擾亂整體的正常功能,這與傳統(tǒng)中醫(yī)用整體的觀念來(lái)治療局部疾病的指導(dǎo)思想具有一致性。左圖為大腦、心臟、肺、胸腺、肝、脾各臟器中

23、上調(diào)和下調(diào)的基因數(shù)右圖為各個(gè)臟器中差異基因數(shù)占所有臟器差異基因數(shù)的百分比圖2 皮下局部移植性腫瘤對(duì)正常小鼠的基因表達(dá)調(diào)節(jié)2. 3 Rh2 對(duì)荷瘤小鼠若干臟器組織中基因的表達(dá)調(diào)節(jié) 運(yùn)用Agilent 小鼠全基因寡核苷酸芯片檢測(cè)Rh2 對(duì)荷瘤小鼠若干臟器組織的基因表達(dá)調(diào)節(jié)。以TS 組為對(duì)照組, TR 組為實(shí)驗(yàn)組檢測(cè), 以期了解Rh2 對(duì)荷瘤小鼠各組織器官基因的影響。Rh2 對(duì)荷瘤小鼠的基因表達(dá)調(diào)節(jié)與其對(duì)正常小鼠的基因表達(dá)調(diào)節(jié)有很大差異,一是調(diào)節(jié)的基因數(shù)量大為增加,二是主要調(diào)節(jié)的臟器有所不同。Rh2對(duì)荷瘤小鼠的基因表達(dá)調(diào)節(jié)主要發(fā)生在心臟,胸腺及大腦,同時(shí)其對(duì)肺、肝、脾,見(jiàn)圖3 。由此可見(jiàn)Rh2明顯改

24、變了荷瘤小鼠大腦和心臟的基因表達(dá),而對(duì)正常小鼠的大腦和心臟沒(méi)有很大影響。2. 4 由芯片數(shù)據(jù)分析比較Rh2 對(duì)正常小鼠和荷瘤 小鼠各臟器基因表達(dá)調(diào)節(jié)的相關(guān)性 通過(guò)比較Rh2 對(duì)荷瘤和正常小鼠基因表達(dá)的調(diào)節(jié)(NR/ NS vs TR/ TS) ,發(fā)現(xiàn)Rh2對(duì)荷瘤小鼠和正常小鼠各臟器基因表達(dá)的調(diào)節(jié)是不同的,見(jiàn)表1 。在荷瘤小鼠被Rh2 上調(diào)的基因中只有1. 45 %在正常小鼠中亦被Rh2 上調(diào)。正常和荷瘤小鼠中同時(shí)被Rh2 下調(diào)的基因也只占Rh2 下調(diào)荷瘤小鼠基因的2. 44 %。說(shuō)明對(duì)正常小鼠和荷瘤小鼠Rh2 所調(diào)節(jié)的基因沒(méi)有明顯的相關(guān)性。提示Rh2 對(duì)荷瘤小鼠的基因表達(dá)調(diào)節(jié)具有腫瘤依賴(lài)性。2.

25、 5 由芯片數(shù)據(jù)分析比較Rh2 治療前后荷瘤小鼠( TR/ TS) 以及皮下接種腫瘤后小鼠( TS/ NS) 各臟器的基因表達(dá)調(diào)節(jié)的相關(guān)性Rh2 治療前后的荷瘤小鼠各臟器基因表達(dá)變化情況與皮下接種腫瘤后小鼠各臟器基因表達(dá)變化情況進(jìn)行比較( TR/ TS vs TS/ NS ,見(jiàn)表2 ,我們發(fā)現(xiàn)Rh2 對(duì)于荷瘤小鼠的大腦和胸腺的基因調(diào)節(jié)與局部接種腫瘤導(dǎo)致的基因調(diào)節(jié)有很大的相關(guān)性。Rh2 具有明顯回復(fù)調(diào)節(jié)因接種腫瘤導(dǎo)致大腦和胸腺組織基因表達(dá)異常。在胸腺中有29 . 85 %因腫瘤下調(diào)的基因在Rh2 治療后上調(diào); 在胸腺中有18 . 60 %因腫瘤上調(diào)的基因在Rh2 治療后下調(diào)。有趣的是, Rh2

26、在大腦中對(duì)于受腫瘤影響而上調(diào)的基因具有比較顯著的作用, 但是Rh2 對(duì)大腦受腫瘤影響而下調(diào)的基因似乎作用不大, 表現(xiàn)在有29 . 13 %因腫瘤上調(diào)的基因在Rh2 治療后下調(diào),僅有2 . 25 %的被腫瘤下調(diào)的基因因?yàn)镽h2 而趨于恢復(fù)。這些基因的調(diào)節(jié)變化可能與Rh2 的治療有相應(yīng)的關(guān)系, Rh2 對(duì)荷瘤小鼠的基因表達(dá)調(diào)節(jié)極具腫瘤特異性。2. 6 Rh2 治療后荷瘤小鼠腫瘤組織的基因表達(dá)對(duì)Rh2 治療后荷瘤小鼠腫瘤組織的基因表達(dá)的基因芯片檢測(cè)發(fā)現(xiàn)Rh2 使得腫瘤組織中的48 個(gè)基因得到上調(diào),105 個(gè)基因得到下調(diào)。在這些上調(diào)的基因中包括了具有抑制轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子與抑制細(xì)胞增殖功能的基因和凋亡誘導(dǎo)基

27、因, 而在下調(diào)的基因中則包括了細(xì)胞周期的調(diào)節(jié)基因和與細(xì)胞轉(zhuǎn)移相關(guān)的基因。上述研究結(jié)果表明Rh2 在腫瘤組織中通過(guò)調(diào)節(jié)與腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、凋亡以及轉(zhuǎn)移相關(guān)的基因在一定程度上抑制了腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。2. 7 用Real time PCR 技術(shù)驗(yàn)證Rh2 治療后荷瘤 小鼠腫瘤組織的基因表達(dá)差異 運(yùn)用SYBR Green 實(shí)時(shí)PCR 相對(duì)定量技術(shù),以Actin 為內(nèi)參基因,對(duì)芯片檢測(cè)到的腫瘤生長(zhǎng)相關(guān)基因進(jìn)行RNA 表達(dá)水平的檢測(cè)。運(yùn)用CT 法計(jì)算結(jié)果,見(jiàn)表3 ,可以看到在治療21 天的腫瘤組織中Ifi202b 上調(diào)了65. 8倍,Cidea 上調(diào)了15. 3倍,Cdk8 下調(diào)了約6 倍,MMP9 下調(diào)了約

28、5 倍。可見(jiàn)實(shí)時(shí)熒光定量PCR 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與芯片結(jié)果保持高度一致性。3 討論 綜合以上結(jié)果,我們可以看到Rh2 對(duì)荷瘤小鼠的基因表達(dá)調(diào)節(jié)極具腫瘤特異性:首先Rh2 對(duì)正常小鼠各臟器的基因表達(dá)影響較小,受調(diào)基因數(shù)較少,調(diào)節(jié)主要集中在脾臟和肺,而Rh2 對(duì)荷瘤小鼠的各臟器的基因表達(dá)影響相對(duì)較多,受調(diào)基因數(shù)大為增加,調(diào)節(jié)的臟器主要集中在心臟、胸腺及大腦;其次Rh2 對(duì)荷瘤小鼠和正常小鼠各臟器的基因表達(dá)調(diào)節(jié)是不同的,只有4 %的基因相同;再次,在胸腺和大腦中相當(dāng)多因腫瘤生長(zhǎng)而異常表達(dá)的基因得到有效拮抗;最后,荷瘤小鼠經(jīng)Rh2 治療后,腫瘤組織中相當(dāng)多基因的表達(dá)受到調(diào)控,作用原理在于抑制細(xì)胞生長(zhǎng)、誘導(dǎo)細(xì)胞

29、凋亡、影響腫瘤轉(zhuǎn)移等。所以,Rh2對(duì)荷瘤小鼠的基因表達(dá)調(diào)節(jié)極具腫瘤特異性。Rh2對(duì)正常器官的基因表達(dá)的微小影響, 解釋了人參皂苷多年來(lái)所顯示的無(wú)毒副作用的臨床觀察。而局部腫瘤種植所引起的機(jī)體各臟器基因表達(dá)的顯著改變, 也許是腫瘤細(xì)胞或者腫瘤周?chē)M織及機(jī)體免疫系統(tǒng)所釋放的眾多因子的作用, 而Rh2 對(duì)這些由于腫瘤而導(dǎo)致的各臟器(尤其是腦、心臟和胸腺) 基因表達(dá)異常的恢復(fù)作用, 驗(yàn)證了傳統(tǒng)中醫(yī)在人參的臨床使用中扶邪歸正的功能。參考文獻(xiàn): 1 Masuno H ,Kitao T ,Okuda H. Ginsenosides increase secretionof lipoprotein lipas

30、e by 3 T32L1 adipocytes J . Biosci BiotechBiochem ,1996 ,60 (12) :196221965. 2 Kim HS , Lee J H , Goo YS , et al . Effect s of ginsenosides onCa2 + channels and membrane capacitance in rat adrenal chro2maffin cellsJ . Brain Res Bull ,1998 ,46 (3) :2452251. 3 Mook2J ung I , Hong H S ,Boo J H. et al .

31、 Ginsenoside Rb1 andRg1 improve spatial learning and increase hippocampal synap2tophysin level in mice J . J Neurosci Res , 2001 , 63 ( 6) : 5092515. 4 Rudakewich M ,Ba F ,Benishin CG. Neurot rophic and neuro2protective actions of ginsenosides Rb (1) and Rg(1) J . PlantaMed ,2001 ,67 (6) :5332537.5

32、Berek L ,Szabo D ,Pet ri I B. Effect s of naturally occurring glu2cosides , solasodine glucosides ,ginsenosides and parishin deriv2atives on multidrug resistance of lymphoma cells and leukocytefunctionsJ . In vivo ,2001 ,15 (2) :1512156. 6 Yun TK,Choi SY. Preventive effect of ginseng intake againstv

33、arious human cancers :a case2cont rol study on 1987 pairsJ .Can Epidemiol Biomarkers Prev ,1995 ,4 (4) :4012408. 7 Lee KY, Park JA ,Chung E ,et al . Ginsenoside2Rh2 blocks t hecell cycle of SK2HEP21 cells at t he G1/ S boundary by selec2tively inducing t he protein expression of p27kip1 J . CancerLe

34、t t ,1996 ,110 (122) :1932200. 8 Min W, Ghosh S , Lengyel P. The interferon2inducible p202protein as a modulator of t ranscription : inhibition of NF2kappaB ,c2Fos ,and c2J un activities J . Mol Cell Biol ,1996 ,16 (1) :3592368. 9 Choubey D , Gut terman JU. The interferon2inducible growt h2inhibitory p202 protein :DNA binding properties and identifica2tion of a DNA binding domainJ . Biochem Biophy