對(duì)蝦白斑綜合征病毒亞單位疫苗研究進(jìn)展.docx

1、對(duì)蝦白斑綜合征病毒亞單位疫苗研究進(jìn)展陳文博微，侯林.劉慶慈"(1.遼寧師范大學(xué)，遼寧大連H6029；2.中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所.山東骨島266071)摘要：對(duì)蝦白斑綜合征病毒(Whitespotsyndromevirus*WSSV)是一種可以引起養(yǎng)殖對(duì)蝦暴發(fā)性死亡的傳染性病原，由于其強(qiáng)烈的傳染性和極高的致死率，使得人們?cè)趹?yīng)對(duì)它時(shí)，必須倒重于早期的防控。近年的研究表明，對(duì)蝦存在類免疫(quasi-immune)機(jī)制,而WSSV的重組蛋白可以誘導(dǎo)對(duì)蝦產(chǎn)生抗病保護(hù)效應(yīng)。目前有關(guān)對(duì)蝦白斑綜合征病毒亞單位疫苗的研究大多圍繞誘導(dǎo)產(chǎn)生高效免疫應(yīng)答能力的灰膜蛋白進(jìn)行免疫接種方式來(lái)展開。文幸

2、對(duì)該領(lǐng)域研究成果做一綜述，旨在為今后WSSV的防控提供參考。關(guān)鍵詞：對(duì)蝦白斑綜合癥病毒；灰膜蛋白；亞單位疫苗中圖分類號(hào)：S945.19文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào):1007-5038(2008)12-0073-04收稿日期：2008-09-01基金項(xiàng)目：國(guó)家高技術(shù)發(fā)展計(jì)劃課M(2OO6AA1OO312),國(guó)家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究項(xiàng)目(2006CB101801)作者簡(jiǎn)介：陳文博(1984-).男.遼寧沈陽(yáng)人.碩士研完生-主要從事海洋生物學(xué)研究.*通訊作者對(duì)蝦白斑綜合征病毒(Whitespotsyndromevirus,WSSV)具有致病性強(qiáng)、危害性大、地域分布和宿主范圍廣泛的特點(diǎn)1992首先在臺(tái)灣暴發(fā)，然后迅

3、速蔓延到東南亞一帶國(guó)家，最后到北美，對(duì)養(yǎng)殖業(yè)造成巨大的損失，同時(shí)也給海洋生態(tài)平衡帶來(lái)了一定的威脅，從而使各國(guó)研究機(jī)構(gòu)掀起了對(duì)該病毒的研究熱潮。目前研究可以確認(rèn)在涉及到的甲殼類動(dòng)物中，對(duì)蝦對(duì)該病毒的抵抗力最弱，而且WSSV有很多的傳染途徑"勺，感染3d10d內(nèi)累計(jì)死亡率可以達(dá)到100%,造成高死亡率的暴發(fā)性病毒病。WSSV是新設(shè)立的Nimaviridae科Whispovirus屬的代表種目前人們對(duì)其致病機(jī)理知之甚少，還不能有效地控制疫情。通常認(rèn)為，對(duì)蝦等無(wú)脊椎動(dòng)物沒有類似于脊椎動(dòng)物的適應(yīng)性免疫系統(tǒng)，應(yīng)用疫苗免疫還存在著很大的爭(zhēng)議，對(duì)蝦疫苗的研究除孤菌疫苗外幾乎沒有其他成功的疫苗。隨著W

4、SSV全基因組序列測(cè)序的完成，對(duì)病毒結(jié)構(gòu)蛋白性質(zhì)與功能的深入研究具有非常重要的意義。尤其對(duì)誘導(dǎo)產(chǎn)生高效免疫應(yīng)答能力的囊膜蛋白進(jìn)行鑒定、克隆與表達(dá)，為最終揭示其發(fā)病和免疫的分子機(jī)理和亞單位疫苗的研制和開展.提供了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。1對(duì)蝦白斑綜合征病毒結(jié)構(gòu)最白病毒蛋白是病毒最主要的組成成分，其中囊膜蛋白在病毒的感染和裝配過程中起著重要的作用。由于WSSV蛋白結(jié)構(gòu)復(fù)雜、成分多樣、信息最大c為分析和定位蛋白結(jié)構(gòu)的多肽組成帶來(lái)一定的難度。WSSV的主要結(jié)構(gòu)蛋白有5個(gè)，即囊膜蛋白VP28、VP19、VP26/P22及核衣殼蛋白VP15、VP24。VP28由ORF1所編碼，其N端有一高度疏水的A2螺旋跨膜區(qū)域，是

5、位于病毒囊膜的主要抗原蛋白。基因組上編碼VP19的為ORF182,VP19的氨基酸序列上有兩個(gè)跨膜區(qū)域，使其固定于病毒囊膜上2點(diǎn)。位于()RF153上曾被認(rèn)為是核衣殼蛋白基因的VP26基因，用免疫膠體金技術(shù)在透射電鏡(TEM)下觀察到膠體金顆粒位于病毒粒子的囊膜部位，從而確定VP26/P22為囊膜蛋白t，0VP15基因位于病毒基因組ORF109,其編碼的蛋白是與核衣殼相連的基本DNA結(jié)合蛋白VP24是ORF31編碼的，它也是位于核衣殼上的DNA結(jié)合蛋白購(gòu)。以上5個(gè)主要的結(jié)構(gòu)蛋白均無(wú)糖基化位點(diǎn)，而具有囊膜結(jié)構(gòu)的病毒的某些蛋白常以糖蛋白形式出現(xiàn)，因此推測(cè)WSSV囊膜上存在的次要結(jié)構(gòu)蛋白中可能有糖基

6、化位點(diǎn)。WSSV的次要結(jié)構(gòu)蛋白已發(fā)現(xiàn)有VP281.VP35和VP466,除VP35為核衣殼蛋白外，其余兩個(gè)均為囊膜蛋白。VP281由ORF1050編碼，VP281中存在一細(xì)胞黏附序列(RGD三肽序列)，提示此囊膜蛋白可能在介導(dǎo)WSSV感染時(shí)發(fā)揮重要作用。習(xí)；另一次要囊膜蛋白VP466中第338個(gè)358個(gè)氨基酸殘基構(gòu)成的a螺旋跨膜區(qū)域，可能在介導(dǎo)VP466進(jìn)入核內(nèi)進(jìn)行病毒囊膜裝配過程中發(fā)揮一定的作用口3】。目前對(duì)蝦白斑綜合征病毒亞單位疫苗的研究大多圍繞誘導(dǎo)上述一些能夠產(chǎn)生高效免疫應(yīng)答能力的囊膜蛋白進(jìn)行表達(dá)并進(jìn)行免疫來(lái)展開。2對(duì)蝦白斑綜合征病毒亞單位疫苗針對(duì)對(duì)蝦白斑綜合征病毒的傳統(tǒng)預(yù)防及治療性疫苗

7、，包括滅活疫苗和減毒活疫苗，可是都存在不少缺陷，如滅活疫苗被評(píng)價(jià)認(rèn)為:用強(qiáng)毒株生產(chǎn)安全性差,需嚴(yán)格控制管理生產(chǎn)條件；保護(hù)期短，需每年加強(qiáng)注射;副反應(yīng)率高；疫苗價(jià)格昂?jiǎn)T，而且對(duì)對(duì)蝦白斑綜合征病毒保護(hù)效果不佳等。而減毒活疫苗在減毒過程中必然會(huì)失去某些毒力因子，而使疫苗株的抗原性不夠完全，對(duì)對(duì)蝦白斑綜合征病毒均不能完全保護(hù)?？傮w上說(shuō)，利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)對(duì)蝦白斑綜合征病毒新疫苗才是今后的研究方向。利用基因工程技術(shù)所生產(chǎn)的疫苗包括亞單位疫苗、肽疫苗、DNA疫苗、活體重組疫苗等，在對(duì)對(duì)蝦白斑綜合征病毒的基因防控中，研究成果最為豐富的當(dāng)屬亞單位疫苗。雖然對(duì)蝦等無(wú)脊椎動(dòng)物沒有類似于脊椎動(dòng)物的適應(yīng)性免疫系統(tǒng)，

8、應(yīng)用疫苗還存在著很大的爭(zhēng)議。但研究發(fā)現(xiàn)，WSSV的重組蛋白可以誘導(dǎo)對(duì)蝦產(chǎn)生抗病保護(hù)效應(yīng)。2.1針對(duì)VP28盤膜蛋白抗原的亞單位疫苗迄今已確定編碼結(jié)構(gòu)蛋白的WSSV基因有40余個(gè)。其中VP28是病毒的主要囊膜蛋白之一，在病毒感染機(jī)體的早期可能起關(guān)鍵作用”，國(guó)內(nèi)外的研究將其作為設(shè)計(jì)免疫預(yù)防性藥物的靶位點(diǎn)。目前，VP28基因已在原核或真核生物表達(dá)系統(tǒng)內(nèi)表達(dá)，并且發(fā)現(xiàn)表達(dá)產(chǎn)物具有顯著的抗病毒保護(hù)效應(yīng)gm,而且比其他的囊膜蛋白有著更好的保護(hù)效應(yīng)，所以以VP28作為免疫的亞單位疫苗優(yōu)勢(shì)明顯皿。WitteveldtJ等3】首先用PET28原核表達(dá)載體表達(dá)VP28蛋白用于制備亞單位疫苗，效果很好，在對(duì)對(duì)蝦免疫

9、接種20d后的第3天和第7天測(cè)定對(duì)蝦的相對(duì)存活率較高，分別為64%和77%,在第21天測(cè)定相對(duì)存活率為21%,結(jié)果顯示亞單位疫苗雖然有較好的保護(hù)效率，但是作用時(shí)間不是很長(zhǎng)，需要經(jīng)常免疫來(lái)增強(qiáng)效果，這是首例在預(yù)防WSSV上應(yīng)用到的亞單位疫苗，為后來(lái)研制防治WSSV起到了帶動(dòng)和啟發(fā)的作用。WitteveldtJ在最后得出“如果疫苗中沒有VP28預(yù)防作用會(huì)很小”，不過這一結(jié)論在以后的研究中很快的被推翻了。接下來(lái)，F(xiàn)uLL等用另一種原核表達(dá)載體PBS-H1在抱子和植被細(xì)胞中表達(dá)來(lái)制備，在抱子表達(dá)的免疫效果顯著高于植被細(xì)胞。經(jīng)過20d免疫后在第3天，第7天和第18天分別測(cè)定對(duì)蝦的累計(jì)死亡率分別約為91.

10、7%和85.0%、83.3%和100%、88.3%和95%,在第14天免疫效果最顯著，累計(jì)存活率分別為51.7%和78.3%,結(jié)果顯示對(duì)WSSV的預(yù)防效率依然很高，直接證實(shí)了WitteveldtJ等在先前的研究。而魏克強(qiáng)等將含有WSSV囊膜蛋白VP28基因的重組桿狀病毒HyNPV-VP28感染家蠶（Bombyxmuri）蛹，免疫35d后進(jìn)行口服攻毒，20d內(nèi)rVP28疫苗組的累積存活率為63.33%,與陽(yáng)性和陰性對(duì)照比差異顯著（P<0.05）,PRP分別達(dá)54.16%和59.26%；注射攻毒后20d內(nèi)rVP28疫苗組的累積存活率與陽(yáng)性和陰性對(duì)照組比差異不顯著（P>0.05）,PRP

11、分別為46.12%和49.99%。第55天對(duì)存活蝦再口服接種攻毒,20d內(nèi)rVP28疫苗組與陽(yáng)性和陰性對(duì)照組比累積存活率差異顯著（P<0.05）,PRP分別為55.80%和63.16%；二次注射攻毒后，rVP28疫苗組的PRP均為31.25%。對(duì)rVP28疫苗組存活蝦的胃、腸和肝胰腺組織進(jìn)行病毒的原位雜交檢測(cè)均呈陰性反應(yīng)，而對(duì)照組死亡蝦組織都呈陽(yáng)性反應(yīng)。這些結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了VP28可以作為亞單位疫苗預(yù)防WSSV。2.2針對(duì)VP19次膜蛋白抗原的亞單位疫苗VP19是病毒的另外一個(gè)主要的囊膜蛋白，VP19在囊膜蛋白的成分中所占含量?jī)H次于VP28,可見其作用也很關(guān)鍵"“J,國(guó)內(nèi)外的研

12、究將其作為設(shè)計(jì)免疫預(yù)防性藥物的靶位點(diǎn)。目前，VP19基因已在原核或真核生物表達(dá)系統(tǒng)內(nèi)表達(dá)，并且發(fā)現(xiàn)表達(dá)產(chǎn)物具有顯著的抗病毒保護(hù)效應(yīng)U8】，保護(hù)效應(yīng)次于VP28囊膜蛋白。賈啟軍等U8：用PET32表達(dá)載體表達(dá)融合蛋白Trx-VP19,注射純化Trx-VP19蛋白組的螯蝦8d后累計(jì)死亡率為50%,注射純化Trx蛋白組的螯蝦8d后積累死亡率為95%,說(shuō)明注射重組蛋白Trx-VP19可以明顯的提高抗WSSV的感染力，而投喂試驗(yàn)顯示沒有明顯的差異。陽(yáng)性對(duì)照組的螯蝦在感染W(wǎng)SSV9d后累計(jì)死亡率達(dá)到100%,并在3d5d達(dá)到死亡高峰.而注射了TNbuffer的陰性對(duì)照組整蝦無(wú)任何病理現(xiàn)象。由此試驗(yàn)證實(shí)了V

13、P19也可以作為亞單位疫苗應(yīng)用于預(yù)防WSSV。間接否定了了WitteveldtJ等g"如果疫苗中沒有VP28預(yù)防作用會(huì)很小”這一結(jié)論。2.3 針對(duì)VP28囊膜蛋白抗原與VP19囊膜蛋白抗原組成雙價(jià)抗原的亞單位疫苗針對(duì)VP28和VP19的各自的亞單位疫苗對(duì)白斑綜合征病毒都很有效這一結(jié)論，進(jìn)一步研制VP28囊膜蛋白抗原與VP19囊膜蛋白抗原組成雙價(jià)抗原的亞單位疫苗，結(jié)果證實(shí)雙價(jià)抗原的亞單位疫苗對(duì)白斑綜合征病毒有更好的預(yù)防作用5加。魏克強(qiáng)等以重組桿狀病毒HyNPV-VP28和HyNPV-VP19感染的家蠶蛹研制成白斑綜合征病毒(WSSV)囊膜蛋白rVP28和rVP19亞單位疫苗，并對(duì)克氏原

14、螯蝦持續(xù)口服免疫接種75d,觀察其對(duì)WSSV的抗病保護(hù)能力。免疫接種35d后進(jìn)行口服攻毒，rVP28、rVP28+rVP19疫苗組的累積死亡率與對(duì)照組比較差異顯著(PV0.05),免疫保護(hù)率(RPS)均達(dá)59.26%'注射攻毒后，rVP28疫苗組的累積死亡率比陽(yáng)性對(duì)照組降低40%。第2次口服攻毒，rVP28、rVP28+rVP19疫苗組呈更顯著的保護(hù)作用，RPS分別達(dá)到63.16%、68.42%；第2次注射攻毒，各疫苗組的累積死亡率比對(duì)照組降低30%。魏克強(qiáng)等制備的rVP19和rVP28抗血清也在不同程度上抑制WSSV的感染。RajeevKJ等2。)也在最近更加深入的研究得到VP28和

15、VP19囊膜蛋白不同的方式，結(jié)果顯示無(wú)論那種方式得到的蛋白組合都可以有效地抑制WSSV的侵染。2.4 針對(duì)其他結(jié)構(gòu)蛋白抗原的亞單位疫苗鑒于VP28和VP19對(duì)白斑綜合征均有很好的預(yù)防效果，有些研究人員著手研究其他的一些結(jié)構(gòu)蛋白是否也可以對(duì)白斑綜合征病毒產(chǎn)生免疫的效果。而結(jié)果也證實(shí)了當(dāng)初的設(shè)想，已經(jīng)證實(shí)的如VP187和VP292都可以有效地抑制白斑綜合征病毒的感染岫.LiDF等技2表達(dá)了VP187作為亞單位疫苗應(yīng)用于試驗(yàn)，結(jié)果顯示VP187可以作為亞單位疫苗應(yīng)用于WSSV的預(yù)防。VaseeharanB也表達(dá)了VP292作為亞單位疫苗預(yù)防WSSV,試驗(yàn)結(jié)果顯示在30d內(nèi)，通過注射的方法免疫接種，累

16、計(jì)存活率可以達(dá)到52%,這也證實(shí)了其他的一些結(jié)構(gòu)蛋白可以應(yīng)用于WSSV的預(yù)防。2.5 針對(duì)其他結(jié)構(gòu)蛋白組成的雙價(jià)或多價(jià)抗原的亞單位疫苗鑒于對(duì)VP28囊膜蛋白等亞單位疫苗的研究，有學(xué)者研究了其他各種結(jié)構(gòu)蛋白組成的亞單位疫苗在對(duì)防治白斑綜合征病毒產(chǎn)生免疫的效果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)很多雙價(jià)或多價(jià)抗原的亞單位疫苗在預(yù)防中起到很顯著的效果6*24OLiLJ等串聯(lián)表達(dá)了VP36A,VP36B和VP31用于試驗(yàn)，結(jié)果顯示.在體內(nèi)試驗(yàn)中，這些蛋白并未表現(xiàn)出很好的效果，累積死亡率依然很高。但在體外中和試驗(yàn)中，VP36B和VP31都有很強(qiáng)的抑制WSSV的作用，具體原因還在研究當(dāng)中。Nami-koshiA等饋分別表達(dá)rVP2

17、6和rVP28作為亞單位疫苗應(yīng)用于試驗(yàn)，結(jié)果顯示rVP26也對(duì)WSSV有抑制作用，累計(jì)存活率可以達(dá)到56%,rVP28一起應(yīng)用時(shí)，能夠達(dá)到95%,可以作為亞單位疫苗應(yīng)用于預(yù)防WSSV的侵染。3結(jié)語(yǔ)由于WSSV具有廣泛的宿主范圍，在甲殼綱和昆蟲綱動(dòng)物中均有其敏感的宿主，以蝦、蟹等十足目類為多。目前，普遍認(rèn)為WSSV存在水平傳播(經(jīng)口感染或浸泡感染)及垂直傳播兩種傳播途徑，可獨(dú)立在動(dòng)物中流行，因此難于在短期內(nèi)徹底消除。而WSSV為暴發(fā)性傳染病。該病感染率和死亡率都極高，所以研究針對(duì)WSSV的全新預(yù)防用的安全有效疫苗，實(shí)屬當(dāng)務(wù)之急?；蚬こ桃呙缂夹g(shù)是一項(xiàng)新興的具有應(yīng)用前景的生物技術(shù)，在我國(guó)生物技術(shù)的

18、發(fā)展雖然面臨許多問題，但從長(zhǎng)遠(yuǎn)來(lái)看前途還是光明的。研制WSSV疫苗的首要原則就是要獲得巨大的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益，并且研究人員利用現(xiàn)代最先進(jìn)的分子生物學(xué)技術(shù)，構(gòu)建基因重組WSSV亞單位疫苗已經(jīng)取得了可喜的進(jìn)展，雖然大部分還處在試驗(yàn)階段，相信實(shí)際應(yīng)用于臨床已為期不遠(yuǎn)。參考文獻(xiàn)：13LighmerDV.AhandbookofshrimppathologyanddiagnosticproceduresfordiseaseofculturedpenaeidshrimpM.BatonRougeLouisianaUSAiWorldAquacultureSociety.1996(304.2 VanHulten

19、MC,WittevcldtJ,PeterS,etaLThewhitespotsyndromevirusDNAgenomesequenceJ,Virology.2001,286,7-22.3 FlegelTW.Majorviraldieasesoftheblacktigerprawn(Penaeusmonodon)inThailandJ.JMicrobiolBiotechoi*1997,13:433-442.4張家松，置雙林，田相利，等.浮游微藻攜帶和傳播WSSV的研究海洋環(huán)境科學(xué).2007.26(3),221-224,51張俊濡，劉荷.王清印，等.中國(guó)對(duì)蝦雄性生殖系統(tǒng)感染W(wǎng)SSV在其垂直傳播中

20、的作用門.海洋水產(chǎn)研究,2007.26(3),1-7.6NamikoshiA,WuJL.YamashitaT,etal.VaccinationtrailswithPenaeusjaponicustoinduceresistancetowhitespotsyndromevirusJl.Aquaculture,2004.229125-35.7jAlabiAO»JonesDA.LatchfordJW.Theefficacyofimmersionasopposedtoora!vaccinationofPenacu$indicuslarvaea-gainstVibrioharveyiJ.Aqu

21、culture(1999«17811-11.8VanHultenMCW.WitteveldtJ*SnippeM,etal.WhitespotsyndromevirusenvelopeproteinVP28isinvolvedinthesystemicinfectionofshrimpQJl.Virology,2001.2851228-233.9'VanHultenMCW,ReijnsMVcrmceschAMG>ctal.IdentificationofVP19and'P15ofwhitespotsyndromevirus(WSSV)andglycosylatio

22、nstatusoftheWSSVmajorstructuralprotcinsJ.JGenVirol.2002.83,257-265.10ZhangXB.HuangCH.XuX.etal.Transcriptionandidentificationofanenvelopeproteingene(p22)fromshrimpwhitespotsyndromevirusfjj.JGenVirol.2002.831471-477.f11MarksH.Mcnnen«»M.VakJM.eial.Transcriptionalanalysisofthewhitespotsyndrome

23、virusmajorvirionproteingcne<J.JGenVirol.2003.8-1：1517-1523.12 HuangCH.ZhangXB.LinQSctai.Characierizationufanovelenvelopeprotein(VP281)ofshrimpwhitespotsyndromevirusbymassspectrometryJj.JGeneralVirology.2002,83：2385-2392.13 HuangCH,ZhangXB.LinQSetal.Proteomicanalysisofshrimpwhitespotsyndromeviralp

24、roteinsandcharacterizationof£novelenvelopeproteinVP466J.Molecular&CellularProteomics*2002*li223-231.14 YiG.WangZ.QiY,ctal.'p28ofwhitespotsyndromevirusisinvolvedintheattachmentandpcretrationintoshrimpJBiochemMolBoil.2004.37,726-73-i.15 WittcveldtJ.CifuentesCC,VlakJM,einl.ProtectionofPena

25、eusrnonudunagainstwhitespotsyndromevirusbyoralvaccination。.JVirol*2OO4«78(4)12057-2061.16 魏克強(qiáng).許梓榮.家奈蛹表達(dá)的重蛆V|>28度帝旬克氏說(shuō)整蝦的抗病毒保護(hù)效應(yīng)Jj.實(shí)騎生物學(xué)IU.2005.38(3),190-198.17 FuLl.»LiWFtDuHH«etal.OralvaccinationwithenvelopeproteinVP28againstwhitespotsyndromevirusinProcamltarusclarkiiusingBacillus

26、subtilisasdeliveryvehiclesJ,LettApplMicrobiol.2008.46s581-586.C18賈啟軍，滋小林.徐進(jìn)平.等.對(duì)蝦白班綜合癥病毒囊膜蚩口VP19的砸合表達(dá)及箕:抗病毒感染作用J.2006.21(6):585-588.191超克強(qiáng)，許樣榮.家眾蛹表達(dá)對(duì)蝦白斑嫁合征病毒囊膜蛋白Vp28和Vpl9的免疫原性J1.中國(guó)牲醫(yī)學(xué)2006,26(4),360*362.20RnjecvKJ.XuZR.BaiSJ.etal.ProtectionofPruiamburuidarkiiagainstwhitespotsyndromevirususingrecombin

27、antoralvaccineexpressedinPichiapantunsJIFishShellfishImmunol,2007,22(4),295-307.21ChengQing-yu.MengXino-iin.XuJin-ping,ctal.Developmentoflateral-flowimmunoassayforWSSVwithpolyclonalantibodiesraisedagainstrecombinantVP(19+28)fusionproteinJI.VirulogicaSinica»2007,22(1)«61-67.22LiDF.ZhangMC.Y

28、angHJ,ctal.p-integrinmediatesWSSVinfectionfj.Virology,2007,368：122-132.23 *asccharanB.PrcmT.AnandT«ctal.MuruganshrimpvaccinationtrialswiththeVP292proteinofwhilespotsyndromevirusJlLettApplMicrobiol.2006.43(2)«137-M2.24 LiLJ.YuanJF.CaiCA.etal.Multipleenvelopeproteinsarcinvolvedinwhitespotsyndromevirus(WSSV)infectionin