畢業(yè)論文A0稿

1、長(zhǎng)沙醫(yī)學(xué)院畢業(yè)設(shè)計(jì)(論文)課 題 名 稱蔓荊子總黃酮中主要化學(xué)成分的研究 學(xué) 生 姓 名陳 小 娟學(xué)號(hào)系、年級(jí)專業(yè)藥學(xué)系、09級(jí)本科藥學(xué)班指 導(dǎo) 教 師李 艷 輝曹麗芝 職 稱 講 師 主任藥師2013 年05 月01 日誠(chéng)信聲明本文鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文，是本人在指導(dǎo)老師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究所取得的成果，成果不存在知識(shí)產(chǎn)權(quán)爭(zhēng)議。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的科研成果。對(duì)本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識(shí)到本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。作者簽名： 日期： 年 月 日目錄中文摘要1Abstract2第一章引言4

2、1.1 蔓荊子化學(xué)成分研究4黃酮類化合物41.1.2 酚類41.1.3 苯丙素類4萜類、甾類化合物51.1.5 揮發(fā)油、氨基酸等其它成分51.2 黃酮類化合物的研究概況51.2.1 黃酮類化合物的分布51.2.2 黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)和分類61.3 黃酮類化合物的生理活性61.3.1 抗氧化及抗自由基作用61.3.2 對(duì)心血管系統(tǒng)的作用61.3.3 抗癌、防癌作用71.3.4 抗炎、抗菌、抗病毒作用71.3.5 瀉下作用81.3.6 降血糖作用81.4 黃酮類化合物的開(kāi)發(fā)與利用81.4.1 市場(chǎng)前景81.4.2 黃酮資源開(kāi)發(fā)91.5 結(jié)語(yǔ)9第二章儀器與試劑102.1試劑與材料102.2儀器10第

3、三章提取分離113.1預(yù)實(shí)驗(yàn)113.2 TLC試驗(yàn)探索洗脫體系123.3 硅膠柱層析分離123.4聚酰胺柱層析分離123.5 硅膠柱層析分離流分1-413第四章結(jié)果與討論16參考文獻(xiàn)17致謝18蔓荊子總黃酮中主要化學(xué)成分的研究陳小娟長(zhǎng)沙醫(yī)學(xué)院2009級(jí)藥學(xué)專業(yè)指導(dǎo)老師：曹麗芝 李艷輝中文 摘 要目的：蔓荊子為馬鞭草科牡荊屬單葉蔓荊(Vitex trifolia L. var. simplicifoliaCham.或Vitex rotundifolia L.)或三葉蔓荊(Vitex trifoliaL.)的干燥成熟果實(shí)，主要產(chǎn)于山東、廣西、云南、江西、浙江、福建、及廣東等地。為常用中藥，具有疏散

4、風(fēng)熱、清利頭目、止痛的功效，臨床上用于治療風(fēng)熱、感冒頭痛、偏頭痛等癥。據(jù)報(bào)道，蔓荊子的主要活性成分是黃酮類化合物，為豐富蔓荊子的應(yīng)用基礎(chǔ)研究成果，為開(kāi)發(fā)和利用傳統(tǒng)中藥蔓荊子,本論文對(duì)蔓荊子藥材中黃酮類化合物進(jìn)行了研究。方法：實(shí)驗(yàn)主要采用有機(jī)溶劑提??；聚酰胺柱層析；硅膠柱層析等方法。結(jié)果：從蔓荊子總黃酮中分離得到了12個(gè)混合組分，并分離出一綠色化合物。結(jié)論：可采用聚酰胺柱層析和硅膠柱層析的方法對(duì)蔓荊子總黃酮中的主要化學(xué)成分進(jìn)行分離。關(guān)鍵詞：蔓荊子；黃酮類化合物；分離純化Studies ontheFlavonoids Constituents oftheFruitsof Fructus Vitic

5、is Department of Pharmacy, ChangshaMedicalUniversityXiaojuan ChenAdviser: Lizhi Cao Yanhui LiAbstractObjective：Fructus Viticis is the dried and ripe fruits of Vitex trifolia L. Var. simplicifoliaCham.or Vitex rotundifolia L.，which are plants belong to Vitex of Verbenaceae family. It distributes main

6、ly in Shandong，GuangxiYunnan，Jiangxi，Zhejiang，F(xiàn)ujian and Guangdong. It is a traditional Chinese medicine be widely used in clinical treatment. Because it has thefunctions of clearing heat，keeping mind clear and killing pain，so it can be used to treat fever，headache，migraine etc. It is reported that

7、flavonoids are main active constituents in Fructus Viticis. In order to better exploit and make good use of this medicine，in this paper we have made studies on flavonoids in fruits of Vitex trifolia L. var. simplicifoliaCham.Methods: In order to investigate the constituents in this plant, sever meth

8、ods have been used in the process of extraction and separation including polyamide chromatography column(CC), silca-gelCC，pre-TLC and so on. Result：12hybrid components and a pure green componend were isolated fromViticis totalflavonoids. Conclusion：Polyamide column chromatography and silica gel colu

9、mn chromatography methods can be used to separate the main chemical components in total flavonoids of Fructus Viticis.Key words: Fructus Viticis;flavonoids constituents; isolation and Purification第一章引言蔓荊子為馬鞭草科牡荊屬單葉蔓荊(Vitex trifolia L. var. simplicifoliaCham.或Vitex rotundifolia L.)或三葉蔓荊(Vitex trifoli

10、aL.)的干燥成熟果實(shí)，主要產(chǎn)于山東、廣西、云南、江西、浙江、福建、及廣東等地。為辛涼解表常用藥，具有疏散風(fēng)熱、清利頭目、止痛的功效，用于治療風(fēng)熱、感冒頭痛、偏頭痛等癥，民間有“云南天麻”之稱。被收載于1977、1955、1990、2000、2005年中華人民共和國(guó)藥典，系常用中藥。1.1 蔓荊子化學(xué)成分研究關(guān)于蔓荊子化學(xué)成分的研究，據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，從中分離的化學(xué)成分主要有黃酮類、酚類、苯丙素類、萜類和甾類化合物等。1.1.1黃酮類化合物目前從文獻(xiàn)報(bào)道中，黃酮類在蔓荊子中主要有黃酮類、二氫黃酮類及其相應(yīng)的苷類。已分離的黃酮類成分包括紫花牡荊素，3，6，7-三甲氧基槲皮萬(wàn)壽菊素1，木犀草素，Crys

11、osplenol、penduletin及(2S)-5,3-二羥基-6,7,4-三甲氧基二氫黃酮2,木犀草素-7-氧葡萄糖苷，異葒草素，牡荊素等黃酮類和二氫黃酮類化合物, 現(xiàn)代藥理表明，蔓荊子中的黃酮類化合物是蔓荊子中的主要活性成分。1.1.2 酚類目前從蔓荊子中分離出來(lái)的酚類主要有4-hydroxybenzoic acid methyl ester, vanillic acid methyl ester, 4-hydroxy benzaldehyde, 4-hydroxybenzoic acid and ferulic acid, 3,4-二羥基苯甲酸3。1.1.3苯丙素類根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，已

12、從蔓荊子中分離出的苯丙素類化合物有vitrofolal A, vitrofolal B, vitrofolal C, vitrofolal D, dihydro-diconifery -lalc-b-D-(2-O-p-hydroxybenzoyl) glucoside, dihydro-diconifery-lalc -9-O-b-D-glucoside 等4。萜類、甾類化合物萜類化合物在蔓荊子中主要有二萜類和環(huán)烯醚萜類。二萜類化合物是蔓荊子主要的特征成分，至今已從該植物中分離得到多個(gè)此類化合物，其中主要為labdane型結(jié)構(gòu)，亦有部分abitane型二萜。已分離得到的成分有蔓荊呋喃萜(rot

13、undifuran)和前蔓荊呋喃萜(prerotundifuran)，無(wú)羈萜(friedelin)、-谷甾醇、-谷甾醇-D-葡萄糖苷、-谷甾醇-3-O-葡萄糖苷等。日本學(xué)者Ono M5等對(duì)蔓荊子進(jìn)行了較深入的研究，已從蔓荊子中分離到數(shù)十個(gè)二萜類化合物，包括vitexifolin A，vitexifolin B，vitexifolin C，vitexifolin D，vitexifolin E，vitetrifolin D，trisnor -gamma-lactone，iso-ambreinolide等。1.1.5揮發(fā)油、氨基酸等其它成分蔓荊子及其葉中所含揮發(fā)油的主要成分為崁烯(camphene

14、)和蒎烯(pinene)6。同時(shí)，蔓荊子中還含有多種氨基酸。楊潔等對(duì)蔓荊子中各種氨基酸的含量進(jìn)行了測(cè)定，結(jié)果測(cè)得風(fēng)干蔓荊子中含18種氨基酸，其中有異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、苯丙氨酸、擷氨酸、蛋氨酸、蘇氨酸、色氨酸這八種人體必需氨基酸。此外，蔓荊子中亦含有維生素E以及Cu，Zn等無(wú)機(jī)元素7。1.2 黃酮類化合物的研究概況黃酮類化合物的分布 黃酮類化合物是一類低分子量的廣泛分布于植物界的天然植物成分，為植物多酚類的代謝物，數(shù)量之多列天然酚性化合物之首，大多具有顏色。從植物系統(tǒng)學(xué)的角度，植物體產(chǎn)生黃酮的能力與植物體木質(zhì)化性質(zhì)密切相關(guān)。因此黃酮類化合物主要分布在維管束植物中，而在其它較低等的植物類群中

15、分布較少。而其中大多集中于被子植物中，如豆科、薔薇科等。在這些植物中此類化合物的類型最全，結(jié)構(gòu)最復(fù)雜，含量也最高。苔類中含有的黃酮類化合物為數(shù)不多，而藻類、微生物、細(xì)菌中沒(méi)有發(fā)現(xiàn)黃酮類化合物的存在8。有文獻(xiàn)記載約有20%的中草藥中含有黃酮類化合物，可見(jiàn)其資源之豐富。黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)和分類以前，黃酮類化合物主要是指基本母核為2-苯基色原酮的一系列化合物，現(xiàn)在則是泛指兩個(gè)苯環(huán)(A環(huán)與B環(huán))通過(guò)中央三碳原子相互連接而成的一系列化合物。天然的黃酮類化合物幾乎在A、B環(huán)上均有取代基，一般是輕基、甲氧基和異戊烯基等。在植物體中，黃酮類化合物因其所在組織不同，其存在狀態(tài)也呈多樣化。在木質(zhì)部多以昔元形式存在

16、;在花、葉、果實(shí)等器宮多以糖試形式存在。根據(jù)中央三碳鏈的氧化程度、B環(huán)連接位置(2-位或3-位)以及三碳鏈?zhǔn)欠癯森h(huán)狀等特點(diǎn)，可將黃酮類化合物分為黃酮類、二氫黃酮類、黃酮醇類、二氫黃酮醇類、異黃酮類、二氫異黃酮類、黃烷醇類、花色素類、查耳酮類、二氫查耳酮類、雙苯毗酮類、橙酮等。1.3黃酮類化合物的生理活性抗氧化及抗自由基作用 自由基性質(zhì)活潑，有極強(qiáng)的氧化反應(yīng)能力，對(duì)人體有很大的危害性，在體內(nèi)自由基和脂質(zhì)過(guò)氧化作用使多種大分子成分，如核酸、蛋白質(zhì)產(chǎn)生氧化變性，DNA交聯(lián)和斷裂，導(dǎo)致細(xì)胞結(jié)構(gòu)改變和功能破壞，而引起癌癥、衰老及心血管等退變性疾病9。生物體內(nèi)常見(jiàn)的自由基有超氧自由基(O2·-)

17、、羥自由基(·OH)、烷氧自由基（RO·)。黃酮類化合物具有清除自由基和抗氧化的能力，其作用機(jī)理在于它阻止了自由基在體內(nèi)產(chǎn)生三個(gè)階段:(l)與O2·-反應(yīng)阻斷自由基的引發(fā)連鎖反應(yīng);(2)與金屬離子鰲合阻斷自由基生成;(3)與脂質(zhì)過(guò)氧基(Roo·)反應(yīng)阻斷脂質(zhì)過(guò)氧化過(guò)程。對(duì)心血管系統(tǒng)的作用.1對(duì)血壓的影響 黃酮類化合物對(duì)高血壓引起的頭痛、項(xiàng)強(qiáng)、頭暈、耳鳴等癥狀有明顯的療效，尤以緩解頭痛、項(xiàng)強(qiáng)為顯著。葛根素對(duì)正常和高血壓動(dòng)物都有一定的降壓作用，靜注葛根素能使正常麻醉犬的血壓短暫而明顯地降低，也能顯著降低清醒自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)血壓10。從桑根皮中分得的

18、Morucenin A、C及Kuwanon G、H在大白鼠及家兔身上有明顯的降壓作用11。.2抑制血小板的凝集 黃酮類化合物對(duì)凝血因子具有較強(qiáng)的抑制作用，故表現(xiàn)出較好的抗凝血作用。實(shí)驗(yàn)表明不同濃度的黃酮類化合物可以不同程度地抑制二磷酸腺昔(ADP)誘導(dǎo)的大鼠血小板凝集，對(duì)5-輕色胺和ADP聯(lián)合誘導(dǎo)的家免和綿羊血小板凝集也有同樣的抑制作用12。此外黃酮類化合物還可降低血管內(nèi)皮細(xì)胞輕脯酸代謝，使內(nèi)壁的膠原或膠原纖維含量相對(duì)減少，利于防止血小板粘附凝集和血栓形成，有利于防治動(dòng)脈粥樣硬化。據(jù)報(bào)道，棚皮素等黃酮類化合物對(duì)由ADP、膠原或凝血酶引起的血小板聚集及血栓形成也有抑制作用。這與一些含有黃酮類成分

19、的活血化疲中草藥的作用機(jī)制可能有某種程度的內(nèi)在聯(lián)系13。.3對(duì)外周血管的影響 靜注黃酮類化合物于麻醉犬后，全部動(dòng)物的腦血流量增加且血管阻力相應(yīng)降低，還能使乙酞膽堿引起的腦內(nèi)動(dòng)脈擴(kuò)張和去甲腎上腺素引起的收縮減弱，使處于異常狀態(tài)下的血管功能恢復(fù)上常水平14。此外還可以改善異丙腎上腺素引起的小鼠微循環(huán)障礙，使毛細(xì)血管前小動(dòng)脈管徑增加，流速加快。 抗癌、防癌作用 黃酮類化合物具有較強(qiáng)的抗癌防癌作用，一般可通過(guò)以下三種途徑:(l)對(duì)抗自由基;(2)直接抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng);(3)對(duì)抗致癌促癌因子。陳曉莉等15用MTT快速測(cè)定法及流式細(xì)胞儀分析黃酮類化合物對(duì)靶細(xì)胞人肝癌SMMC-772的抗癌藥效表明，此類物質(zhì)有

20、較強(qiáng)的抗癌活性，與絲裂霉素(MMC)聯(lián)合用藥抗癌活性顯著增強(qiáng)，流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞分裂周期各時(shí)象DNA變化顯示，此類物質(zhì)使S期細(xì)胞明顯減少，增殖指數(shù)降低，并誘導(dǎo)凋亡。據(jù)報(bào)道，牡荊素、漢黃答素等具有抑制腫瘤細(xì)胞的作用。 抗炎、抗菌、抗病毒作用 黃酮類化合物具有明顯的消炎、抗?jié)冏饔谩０坐P梅等16研究表明天然黃酮對(duì)小鼠急性胃潰瘍有明顯的消退作用，肯定了高劑量的黃酮提取物(200mg/mL)能使胃粘液增加并且減輕胃的損傷。蘆丁及其衍生物輕乙基蘆丁、二氫棚皮素以及橙皮昔一甲基查耳酮(HMC)等據(jù)報(bào)道對(duì)角叉菜膠、5-HT及PEG誘發(fā)的大鼠足爪水腫、甲醛引起的關(guān)節(jié)炎及棉球肉芽腫等均有明顯的抑制作用。黃酮類化

21、合物的抗炎作用可能與前列腺素(PEG)生物合成過(guò)程中的脂氧化酶受到抑制有關(guān)17。黃答試、黃答素、木犀草素具有抗菌作用。此外研究表明蘆丁黃酮類化合物具有抗流感病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒的感染和復(fù)制能力。 瀉下作用 如中藥營(yíng)實(shí)中的營(yíng)實(shí)昔A有致瀉作用17。 降血糖作用 黃酮類化合物能夠促使胰島細(xì)胞的恢復(fù)，降低血糖和血清膽固醇，改善糖耐量，對(duì)抗腎上腺素的升血糖作用，并能抑制醛糖還原酶。1.4黃酮類化合物的開(kāi)發(fā)與利用市場(chǎng)前景 隨著食品工業(yè)的發(fā)展和消費(fèi)水平的不斷提高，人們?cè)絹?lái)越注重強(qiáng)身鍵體，改善飲食習(xí)慣，提高生活質(zhì)量。于是保健食品以其天然性、實(shí)效性等特點(diǎn)在世界范圍內(nèi)成為人們追逐的目標(biāo)。在眾多的天然活性成分中黃酮

22、類化合物是極有應(yīng)用潛力的資源之一。 黃酮類化合物在人體不能直接合成，只能從食品中獲得，而黃酮類化合物廣泛存在于植物體中，因此近十多年來(lái)各國(guó)科學(xué)家都積極關(guān)注著從植物體中提取純度高、活性強(qiáng)的天然黃酮成分，并進(jìn)一步加工成具有抗癌、抗衰老、調(diào)節(jié)內(nèi)分泌等特異功能的保健食品和藥品等產(chǎn)品。這些產(chǎn)品可調(diào)節(jié)人體生理功能，提高生命運(yùn)動(dòng)質(zhì)量，為食用者帶來(lái)健康體魄。目前黃酮類化合物一般可采取如下兩種利用方式:(l)直接應(yīng)用含黃酮的植物提取液制成保健品食品;(2)將含黃酮的植物提取液經(jīng)濃縮、分離純化、干燥等精制步驟，制取高純度的黃酮類化合物。黃酮資源開(kāi)發(fā) 黃酮類化合物可用于制備抗心血管病藥物、抗肝臟毒藥物、止咳平喘藥、

23、天然抗氧化劑、無(wú)公害農(nóng)藥等。1.5 結(jié)語(yǔ)通過(guò)以上綜述，我們可以看出國(guó)內(nèi)外對(duì)蔓荊子的化學(xué)成分以及黃酮類化合物的藥理作用進(jìn)行了大量的研究工作，這為我們的進(jìn)一步研究提供了方便。同時(shí)我們也可以看到蔓荊子黃酮類成分值得進(jìn)一步研究，但由于蔓荊子藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)仍不夠規(guī)范和先進(jìn)，這嚴(yán)重影響了蔓荊子及其制劑的質(zhì)量評(píng)價(jià)系統(tǒng)的建立和產(chǎn)品質(zhì)量的提高。為了更好地開(kāi)發(fā)利用該植物豐富的天然資源，建立規(guī)范、先進(jìn)的蔓荊子質(zhì)量評(píng)價(jià)體系，我們有必要深入進(jìn)行化學(xué)成分及藥理活性研究，為綜合開(kāi)發(fā)利用本植物提供理論依據(jù)。第二章 儀器與試劑2.1試劑與材料正丁醇 化學(xué)純CP 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司甲醇 分析純AR 天津市福晨化學(xué)試劑廠

24、乙酸乙酯 分析純AR 天津市福晨化學(xué)試劑廠三氯甲烷 分析純AR 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司石油醚（60-90） 分析純AR 天津市富宇精細(xì)化工有限公司柱層析用聚酰胺（30-60，80-100目） 浙江省臺(tái)州市路橋四甲生化塑料廠柱層析用硅膠（100-200 ，300-400目） 青島海浪硅膠干燥劑廠蔓荊子總黃酮 湖南師范大學(xué)醫(yī)學(xué)院天然藥物化學(xué)教研室提供2.2儀器電子天平 JY2002 上海良平儀器儀表有限公司旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀R-1001N 鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司低溫冷卻液循環(huán)泵 鄭州長(zhǎng)盛實(shí)驗(yàn)儀器有限公司HH-S恒溫水浴鍋 江蘇金壇縣醫(yī)療儀器廠循環(huán)水式真空泵 鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司ZF-2型三用紫外儀 上

25、海市安亭電子儀器廠202型電熱恒溫干燥箱 北京中興偉業(yè)儀器有限公司第三章提取分離3.1預(yù)實(shí)驗(yàn)1) 取1g蔓荊子總黃酮樣品于50ml圓底燒瓶中。2) 加入30ml氯仿，于75水浴加熱回流提取1.5小時(shí)，過(guò)濾，回收濾液，再加入30ml氯仿加熱回流提取1小時(shí)，過(guò)濾，收集濾液，合并兩次濾液即得氯仿萃取液。3) 經(jīng)氯仿萃取后的濾渣用同樣的方法再分別依次用乙酸乙酯、正丁醇加熱回流提取，收集濾液，分別得到乙酸乙酯萃取液和正丁醇萃取液。4) 將三種萃取液經(jīng)減壓濃縮，干燥后得固體粉末，再分別稱重，各部分重量依次為0.19g、0.06g、0.11g，最后殘留的固體粉末為0.05g。5) 對(duì)三種提取物做TLC檢識(shí)，

26、用氯仿和乙酸乙酯以合理的比例作展開(kāi)劑，經(jīng)試驗(yàn)探索，當(dāng)氯仿與乙酸乙酯比例為10:2時(shí)，氯仿提取部分中各成分分離效果較好，在紫外燈下觀察有四個(gè)以上的明顯斑點(diǎn)，并在Rf值小于0.17的范圍內(nèi)有拖尾現(xiàn)象，而其他兩部分中各成分未能分離?？偨Y(jié)：由于經(jīng)氯仿、乙酸乙酯、正丁醇分別提取得到的固體重量比例為4:2:1，氯仿提取物所占比重最大，且用氯仿和乙酸乙酯為展開(kāi)劑做TLC檢識(shí)時(shí)，氯仿提取物分離效果較好，因考慮到實(shí)驗(yàn)的完成期限，故本實(shí)驗(yàn)僅對(duì)氯仿提取部分各成分進(jìn)行研究。3.2總黃酮主要成分的提取分離提取分離流程圖圖3.1提取分離流程圖3.2.2TLC試驗(yàn)探索洗脫體系經(jīng)實(shí)驗(yàn)探索，發(fā)現(xiàn)當(dāng)使用氯仿-乙酸乙酯（10:0.

27、8）洗脫系統(tǒng)時(shí)樣品中各成分分離效果最佳。3.3 硅膠柱層析分離1) 拌樣：將棕色固體29g進(jìn)行硅膠柱層析，先將固體溶于氯仿中，再加入100-200目的硅膠50g攪拌均勻，減壓回收溶劑，取出樣品，自然揮干殘留溶劑。2) 裝柱： 將300g硅膠（300-400目）用氯仿濕法裝柱（柱子直徑=7.5cm，H=120cm），待沉降完全后，測(cè)得硅膠的高度為20cm，上樣后樣品硅膠高度為5cm。3) 洗脫：用氯仿:乙酸乙酯=10:0.8的混合洗脫液洗柱，收集各流分。但從開(kāi)始加入洗脫液后流速越來(lái)越慢，后完全停滯，以致最后不出流分流分收集失敗。分析原因：可能是由于室溫過(guò)低，樣品在氯仿-乙酸乙酯系統(tǒng)中溶解度較低而

28、導(dǎo)致結(jié)晶析出，化合物的結(jié)晶形成堅(jiān)固的實(shí)體,溶劑不易把結(jié)晶層滲透,故柱子幾乎不會(huì)有溶劑滴出（柱口處有結(jié)晶）。4) 回收樣品：將流動(dòng)相，上樣硅膠，裝柱硅膠取出，用甲醇提取回收樣品，干燥后稱重，得棕色固體25g。3.4聚酰胺柱層析分離1) 拌樣：將棕色固體25g進(jìn)行聚酰胺柱層析，先將固體溶于氯仿中，加入30-60目聚酰胺40g攪拌均勻，減壓回收溶劑，取出樣品，自然揮干殘留溶劑。2) 裝?。簩?0-100目聚酰胺300g用乙酸乙酯濕法裝柱，待沉降完全后，聚酰胺高度為20cm，上樣樣品高度為5cm。3) 洗脫-濃縮：依次用乙酸乙酯：甲醇=20:1、18:1梯度洗脫柱子，共接流分11分，每份50-100m

29、l，最后用甲醇洗脫。4) TLC檢識(shí)（氯仿:乙酸乙酯=10:0.8）：合并相同流分，1-4、5-6、7、 8、9、10、11，發(fā)現(xiàn)流分1-4在紫外燈下斑點(diǎn)明顯且清晰，同時(shí)由于時(shí)間關(guān)系，因此先對(duì)流分1-4（極性較小）進(jìn)行下一步分離。3.5 硅膠柱層析分離流分1-41) 探索洗脫系統(tǒng)及洗脫劑的比例： 當(dāng)石油醚:乙酸乙酯=5:4時(shí)，各成分分離效果較好，故選擇石油醚-乙酸乙酯溶劑系統(tǒng)比例為5:4。2) 稱樣，拌樣： 樣品量為5.5g，用硅膠（100-200目）10g加乙酸乙酯拌樣，減壓回收溶劑，取出樣品，自然揮干殘留溶劑。3) 上柱：分兩根柱子上柱（因沒(méi)有合適大小的柱子，故選擇兩個(gè)柱子同時(shí)上柱）a.

30、=3cm的柱子，取60g硅膠（300-400目）用石油醚濕法上柱，待沉降完全后高度為30.5cm，取10g已拌樣品加入，高度為3.5cm，開(kāi)始用洗脫液洗柱，接流分，每管15-25ml。b. =2.5cm的柱子，取45g硅膠（300-400目）用石油醚濕法上柱，待沉降完全后高度為32cm，將剩下的已拌樣品加入，高度為3.7cm，開(kāi)始用洗脫液洗脫，接流分，每管15-25ml。4) TLC檢識(shí)：=3cm的柱子共接流分51份，經(jīng)TLC檢識(shí)（ 展開(kāi)劑為石油醚:乙酸乙酯=5:4 ），合并的相同流分為1-5、6-9、10-12、13-16、20-22、23-30、31-32、33-41、42-51； 部分T

31、LC檢識(shí)結(jié)果如圖： 展開(kāi)劑 石油醚：乙酸乙酯（5:4）圖3.2流分（1-6）、（7-9）、（10-12）、（13-16）、17-23 圖3.3流分23-35圖3.4流分35-50=2.5cm的柱子共接流分28份，經(jīng)TLC檢識(shí)合并的相同流分為5-7、8-9、10-12、13-16、18-23、24-28。部分TLC檢識(shí)結(jié)果如圖：展開(kāi)劑 石油醚：乙酸乙酯（5:4）圖3.5流分1-13 圖3.6流分13-26展開(kāi)劑石油醚：乙酸乙酯(4:6）圖3.7流分（18-23）、(24-28)、29-395) 經(jīng)TLC檢識(shí)，可將23-30（=3cm）與13-16 （=2.5cm）、33-41（=3cm）與18-

32、23 （=2.5cm）、42-51（=3cm）與24-28 （=2.5cm）合并，然后減壓濃縮。6) 將兩根柱子繼續(xù)洗脫，接流分52-64（=3cm）、29-39（=2.5cm）7) 做TLC檢識(shí)，將相同流分合并，分別為52-53、54-64（=3cm）和30-39（=2.5cm），然后減壓濃縮。層析分離流程圖如下：a. =3cm的柱子；b.=2.5cm的柱子圖3.8=3cm的柱子圖3.9=2.5cm的柱子第四章 結(jié)果與討論本實(shí)驗(yàn)采用氯仿加熱提取，通過(guò)聚酰胺柱粗分離，將蔓荊子總黃酮中不同極性的化合物分離開(kāi)并富集，再使用硅膠柱對(duì)分離得到的物質(zhì)進(jìn)行進(jìn)一步的細(xì)分，由于時(shí)間的關(guān)系，本實(shí)驗(yàn)先選擇極性較小

33、的部分化合物（聚酰胺柱流分1-4）進(jìn)行分離。將流分42-51（=3cm）與24-28 （=2.5cm）合并，減壓濃縮后，自然揮干溶劑，得到一綠色物質(zhì)，總重為220mg，經(jīng)TLC檢識(shí)，為單一物質(zhì)。TLC檢識(shí)結(jié)果如圖所示 （展開(kāi)劑石油醚：乙酸乙酯=1:3，Rf值為0.53）圖3.10TLC檢識(shí)結(jié)果圖此外，圖3.本次試驗(yàn)還得到了12個(gè)混合組分，由于時(shí)間的關(guān)系沒(méi)能繼續(xù)下一步的分離工作，這些混合組分大部分可以繼續(xù)進(jìn)行柱層析分離，得到單體。所以本試驗(yàn)也為以后的工作提供了方便，同時(shí)打下了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。參考文獻(xiàn)1曾憲儀、方乍浦等.蔓荊子化學(xué)成分研究 J .中國(guó)中藥雜志，1996，21(3):16.72徐諾譯.蔓

34、荊子(單葉蔓荊)中舒張血管的藥理活性成分研究 J .國(guó)外醫(yī)學(xué)中醫(yī)中藥分冊(cè)，1999，21(5):413Takeo Yoshioka, Tomohisa Inokuchi, Shozo Fujioka, et al. Phenolic Compounds and Flavonoids as Plant Growth Regulators from Fruit and Leafof Vitex rotundifolia. Z.Naturforsch.2004,59c:509-5144 Qiong Gu, Xue-Mei Zhang, Jun Zhou, et al. One new dihydrobenzofuran lignan from Vitex trifoliaJ. Journal of Asian Natural Products Research,20