正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選熟地黃中5HMF的提取工藝

1、正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選熟地黃中5HMF的提取工藝【摘要】目的：以5羥甲基糠醛(5HMF)含量和熟地黃干膏收得率為指標(biāo)，探討熟地黃中5HMF的提取工藝.方式：采納正交實(shí)驗(yàn)法考察加水量、提取時(shí)刻、提取次數(shù)及醇沉濃度4個(gè)因素對(duì)5HMF含量和干膏收得率的阻礙，并運(yùn)用高效液相法測(cè)定5HMF的含量.結(jié)果：通過(guò)對(duì)正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果的極差分析，得出提取次數(shù)和提取時(shí)刻兩個(gè)因素對(duì)干膏收得率和含量阻礙最大，參考兩種要緊阻礙因素，最終確信8倍量水、提取3次、每次h,700mL/L乙醇沉淀的提取工藝，并對(duì)該工藝進(jìn)行三次重復(fù)性小試實(shí)驗(yàn).5HMF收得率可達(dá)58%以上.結(jié)論：通過(guò)對(duì)上述提取條件的重復(fù)性考察，該方式重復(fù)性好，5HMF收得率穩(wěn)

2、固，為進(jìn)一步中試實(shí)驗(yàn)提供了參考依據(jù).【關(guān)鍵詞】熟地黃；5羥基糠醛；中藥制藥工藝【AbstractAIM:Tooptimizethewaterextractingtechnologyconditionof5HMFfromRehmanniaglutinosalibosch.METHODS:TheextractionprocedureofRehmanniaglutinosaliboschwasstudiedbyorthogonaldesignwithdryextractyieldand5hydroxymethyl2furfura(5HMF)asthedetectiveindices.Effectso

3、ffourfactors(theamoutofwater,extractingtime,themumberoftimesandalcoholconcentration)and3levelsforeachfactoronextractionratewereanalyzed.RESULTS:The5HMFextractionratereachedover58%undertheoptimumextractionconditionwhichwastheadding8foldsofwater,anddecoctingfor3times,honceandtheprecipitationwith700mL/

4、Lalcohol.CONCLUSION:Theoptimumwaterdecoctingconditionisrepeatable,andensurestable5HMFextractionrate.ItcouldbeusedinthefuturemiddlescaledpreparationofRehmanniaglutinosalibosch.Keywordsradixrehmanniaepraeparata;5hydroxymethyl2furfura(5HMF);pharmaceuticaltechnology0引言熟地黃為玄參科連年生草本植物地黃(RehmanniagLutinosa

5、Libosch)的根，經(jīng)加工炮制而成，在臨床上應(yīng)用較為普遍.熟地黃含有梓醇、糖類、忒類和5羥甲基糠醛(5hydroxymethyl2furfura,5HMF)等多種化學(xué)成份.有研究報(bào)導(dǎo)生地黃炮制成熟地黃后5HMF的含量增加20倍左右1,在對(duì)5HMF藥理作用的研究中發(fā)覺(jué)其具有抗氧化、改善血液流變學(xué)等多種對(duì)人體有利的作用2-3.但是關(guān)于對(duì)熟地黃中5HMF的提取工藝卻少見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)，為了更好的發(fā)揮熟地黃的藥用價(jià)值，咱們運(yùn)用正交設(shè)計(jì)法，考察阻礙其提取的因素，挑選5HMF的最正確提取工藝條件.1材料和方式材料美國(guó)產(chǎn)Beckman125型高效液相色譜儀（32KaratTMSoftware色譜工作站），色譜柱

6、為DiamonsiLC18（5UL200Xmm）.BT125D型電子天平（北京Sartorius公司）；DL720型超聲波清洗器（上?？茖?dǎo)超聲儀器）；乙月青為色譜純，其余試劑均為分析純，5HMF對(duì)照品（批號(hào)：111626200503,中國(guó)藥品生物制品檢定所），水（重蒸水），熟地黃藥材.（陜西省藥材總公司）.方式提取工藝設(shè)計(jì)藥材吸水率考察周密稱取熟地黃3份，每份20g.別離加10倍量水浸泡，每30min觀看1次藥材的滲透情形，直至藥材掰開(kāi)無(wú)硬心為止，并記錄浸泡時(shí)刻，用量筒測(cè)量剩余水量，計(jì)算吸水率（表1）.正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)選用L9（34）正交進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，以熟地黃浸膏得率,5HMF含量作為考察指標(biāo)，因素水

7、平安排見(jiàn)表2.稱取熟地黃粗粉9份，每份20g,按正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案條件提取過(guò)濾，歸并濾液，定容到50mL,備用.表1熟地黃吸水率的考察表表2因素水平表的含量測(cè)定溶液制備周密稱取5HMF對(duì)照品適量，置于5mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻制成含mg/L的溶液，作為對(duì)照品溶液.周密稱取藥材提取液mL,蒸干溶劑，殘?jiān)眉状级ㄈ萦?mL容量瓶中，用Um微孔濾膜濾過(guò)，作為供試液.色譜條件的選擇色譜柱：DiamonsiLC18(5uL200Xmm)；流動(dòng)相為乙月青：水(15：85),流速1mL/min,柱溫25測(cè)定波長(zhǎng)280nm.進(jìn)樣量20UL.在上述條件下，樣品HPLC色譜圖中5羥基糠醛與其他峰分

8、離良好.線性關(guān)系的考察周密量取對(duì)照品溶液適量，置50mL容量瓶中,加甲醇至刻度，別離吸取對(duì)照溶液4,8,12,16和20UL注入液相色譜儀中，測(cè)定其峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)(A),對(duì)照品的濃度為橫坐標(biāo)(C),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得回歸方程：Y=132034X+284737,R二，5HMF在mg/L范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系.周密度實(shí)驗(yàn)周密吸取10UL對(duì)照品溶液，按上述色譜條件，持續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)得5HMF平均峰面積，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差RSD=%.穩(wěn)固性實(shí)驗(yàn)在相同條件下，周密吸取供試品溶液，在12h內(nèi)，每隔2h測(cè)定1次峰面積，計(jì)算1口為，說(shuō)明本品在12h內(nèi)穩(wěn)固.加樣回收率實(shí)驗(yàn)抽取4號(hào)樣品加入5HMF對(duì)照品適量，

9、混勻，按供試品溶液制備，并按上述色譜條件測(cè)試.按供試品溶液制備方式提取測(cè)定，測(cè)得峰面積并計(jì)算含量，平均回收率,RSD=%.重復(fù)性小試實(shí)驗(yàn)驗(yàn)為進(jìn)一步考察上述提取工藝的穩(wěn)固性，按的實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行3次重復(fù)性小試實(shí)驗(yàn).2結(jié)果通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)極差分析結(jié)果顯示各因素對(duì)出膏率的阻礙依次為提取次數(shù)>提取時(shí)刻>醇沉濃度>加水量（表3）.對(duì)含量的阻礙依次為提取時(shí)刻>提取次數(shù)>醇沉濃度>加水量，通過(guò)極差分析說(shuō)明，提取次數(shù)、提取時(shí)刻對(duì)5HMF的含量和熟地黃浸膏得率的阻礙比較著性，溶媒用量、提取時(shí)刻阻礙較小.綜合分析兩種指標(biāo)，初步確信熟地黃提

10、取的最正確工藝應(yīng)用8倍量的水，每次提取h,提取2次，然后用950mL/L乙醇沉淀至700mL/L.按上述優(yōu)化條件進(jìn)行重復(fù)3次實(shí)驗(yàn)（表4）,5羥基糠醛收得率可達(dá)58%以上.表3正交實(shí)驗(yàn)極差分析表表4熟地黃優(yōu)選提取工藝的重復(fù)性小試實(shí)驗(yàn)3討論熟地黃藥材為炮制品，水提后存在出膏過(guò)量等問(wèn)題，該工藝中引入醇沉凈化方式進(jìn)行處置，在保證含量的前提下，操縱出膏率，可為制劑提供方便.咱們用正交設(shè)計(jì)法對(duì)5HMF的提取工藝進(jìn)行優(yōu)選，通過(guò)直觀、極差分析法選出最正確工藝，為驗(yàn)證此優(yōu)選方案的可行性，咱們又按最正確工藝進(jìn)行了3次重復(fù)性小實(shí)驗(yàn)，結(jié)果穩(wěn)固，5HMF收得率可達(dá)58%以上，初步完成了對(duì)熟地黃藥材的實(shí)驗(yàn)室及小試實(shí)驗(yàn)提取

11、工藝的挑選.關(guān)于熟地黃中5HMF含量的測(cè)定有薄層掃描、高效液相等多種方式4-5.結(jié)合實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有條件，咱們選取高效液相法進(jìn)行測(cè)定.張清波等6和秦向陽(yáng)等7曾報(bào)導(dǎo)HPLC測(cè)定熟地黃中5HMF的含量，但咱們?cè)谄浣o定的流動(dòng)相和檢測(cè)波長(zhǎng)下，以DiamonsiLC18分析柱為色譜柱進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，發(fā)覺(jué)5HMF的色譜峰顯現(xiàn)拖尾和分叉現(xiàn)象，且流動(dòng)相極性太大，出峰時(shí)刻較短，溶劑峰干擾嚴(yán)峻.為此,咱們對(duì)實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行改良.采納DiamonsiLC18(5uL200X)色譜?。灰砸以虑啵核?15:85)為流動(dòng)相，流速1mL/min,柱溫25.測(cè)定波長(zhǎng)280nm,取得了較好的分離成效.采納高效液相色譜法測(cè)定5HMF的含量，可不經(jīng)分離，直接測(cè)定，其方式簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、靈敏，重現(xiàn)性及回收率均符合要求.在本實(shí)驗(yàn)給定的條件下，基線平穩(wěn)“可有效排除溶劑峰的干擾，且峰型較好.【參考文獻(xiàn)】1劉漂亮，白玫，白榮枝，等.熟地黃中5羥甲基糠醛的提取分離及含量測(cè)定J.中草藥，1995,26(1):13-14.2耿放，王喜軍.5羥基糠醛(5HMF)在中藥復(fù)方中的研究現(xiàn)狀及相關(guān)藥效探討J.世界科學(xué)技術(shù)中醫(yī)藥現(xiàn)代化,2005,7(6):52-54.3馮建明，趙仁.三種地黃炮制品現(xiàn)代研究進(jìn)展J.云南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2000,23(12):40-42.4楚文，張昌斌，曹永紅，等.限制5羥甲基糠醛生成條件和探討J.人民軍醫(yī)藥學(xué)?？?，1998,1