冠心病患者血漿MBL含量測定及分析

1、冠心病患者血漿MBL含量測定及分析        【摘要】  目的:測定冠心病患者與健康對照者血漿中MBL含量,分析其變化情況,從固有免疫的角度探討冠心病的可能致病機(jī)制。方法:采集100例冠心病(CHD)患者空腹靜脈血,健康對照者60例,采用ELISA法對血漿中MBL含量進(jìn)行檢測。結(jié)果:100例冠心病人血漿MBL含量的平均值為3900g/L,標(biāo)準(zhǔn)差為3209;60例健康對照組血漿MBL含量的平均值為2056g/L,標(biāo)準(zhǔn)差為1824。冠心病組血漿MBL含量高于健康對照組,經(jīng)t檢驗(yàn),t=4071,P<001,差別

2、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:冠心病組血漿MBL水平高于健康對照組,二者均值比較差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,血漿MBL參與了冠心病的發(fā)生、發(fā)展過程。    【關(guān)鍵詞】  冠心病;MBL;ELISA;含量    【ABSTRACT】  Objective:The main purpose of this study is to measure the MBL level in plasma with coronary heart disease and try to analyze the possible mechanism of C

3、HDs development from the view of innate immune.Methods:100 blood samples of CHD patients and 60 that of health controls were collected and tested by ELISA.Results:The plasma level of MBL were 3900g/L, SD 3209 in cases, while 2056g/L,SD 1824 in controls. The plasma level of MBL in cases is higher tha

4、n that of controls (t=4071, P<001).Conclusion:The plasma level of MBL is higher in CHD patients than that in controls.    【KEY WORDS】  CHD; MBL;ELISA;Plasma level    冠心病(coronary heart disease,CHD)是一種嚴(yán)重危害人類健康的疾病,其發(fā)病率和死亡率居首位,尤其在發(fā)達(dá)國家更為嚴(yán)重,而在我國也呈逐年上升趨勢1。其病因和發(fā)病機(jī)制尚未完全

5、闡明,近年來,冠心病發(fā)病的炎癥學(xué)說越來越得到重視2,對一些炎性因子和急性期蛋白的研究也越來越深入。甘露聚糖結(jié)合凝集素(mannan binding lectin,MBL)是一種兼有調(diào)理素和直接激活補(bǔ)體功能的免疫分子,參與構(gòu)成抗感染的第一道防線3。國外有些學(xué)者報(bào)道MBL與動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生、發(fā)展有關(guān)47,但國內(nèi)尚無報(bào)道,因此本研究主要測定冠心病患者血漿中MBL含量,并對其變化進(jìn)行分析,從天然免疫的角度探討冠心病的可能致病機(jī)制,為其輔助診斷和治療提供資料。    1  材料與方法    11  實(shí)驗(yàn)材料 

6、60;  主要設(shè)備:低溫冰柜(thermo,美國);酶標(biāo)儀(Star fax 2100,美國);普通高速離心機(jī)(TGL168,上海)    主要試劑:MBL ELISA試劑盒(北京現(xiàn)代高達(dá)生物技術(shù)有限責(zé)任公司)    12  實(shí)驗(yàn)方法    121  標(biāo)本的收集:空腹靜脈血標(biāo)本用EDTAK2抗凝管(2ml)收集。    冠心病(CHD)組:共100例,為河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院20049200510月住院的冠心病患者,男51例,女49例;年齡45

7、70歲,平均(6041±9443)歲。病例均經(jīng)心電圖、心肌酶譜和臨床癥狀等綜合診斷,符合WHO冠心病診斷標(biāo)準(zhǔn)。    健康對照組:60例,為來院進(jìn)行健康體檢者,男性32例,女28例,年齡4371歲,平均(6027±7198)歲,病例無冠心病癥狀、體征,超聲心動(dòng)圖及心電圖均正常。冠心病組與健康對照組組間年齡無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。    122  標(biāo)本的處理    取1ml全血放入15ml離心管中,5000轉(zhuǎn)/min離心5min,分離血漿,-86保存,供測定血漿MBL含量。 &

8、#160;  123  血漿中MBL含量測定    按MBL ELISA試劑盒說明書,基本操作如下:    標(biāo)本及試劑準(zhǔn)備:冠心病、健康對照血漿標(biāo)本從低溫冰柜(-86)中取出,溶解并恢復(fù)至室溫,離心(3500轉(zhuǎn)/min 5min)。取上清2l,用標(biāo)本稀釋液對標(biāo)本進(jìn)行200倍稀釋(加入398l標(biāo)本稀釋液PBS+005%BSA),混勻。所有實(shí)驗(yàn)用試劑均在室溫平衡后使用。    操作步驟:    取100l稀釋標(biāo)本加入酶標(biāo)板中,同時(shí)做對照,第一孔加100l稀釋液

9、作空白,第二孔向后依次加含MBL不同濃度(0,1,2,5,10,25,50,100ng/ml)的標(biāo)準(zhǔn)液各100l,標(biāo)準(zhǔn)孔均作復(fù)空;    置37水浴1h;    將板中的液體棄去,每孔加入150l洗板液進(jìn)行清洗,室溫靜置3min,棄去洗板液,反復(fù)3遍;    清洗后,每孔加入100l酶標(biāo)記的MBL抗體,37 1h,使酶標(biāo)抗體與標(biāo)本充分結(jié)合。    清洗,操作同 ;    清洗后,每孔加入底物A、B各50l,室溫避光15min。每孔加入終止液50l

10、,輕輕混勻20s;     用酶標(biāo)儀比色  測定波長為450nm,參考波長為620nm。在20min內(nèi)完成。    2  結(jié)果    用SPSS 130軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,冠心病組、健康對照組血漿MBL含量的比較,采用兩樣本均數(shù)比較的t檢驗(yàn)。    100例冠心病人血漿MBL含量的平均值為3900g/L,標(biāo)準(zhǔn)差為3209;60例健康對照組血漿MBL含量的平均值為2056g/L,標(biāo)準(zhǔn)差為1824。冠心病組血漿MBL含量高于健康對照組,經(jīng)t檢驗(yàn),t=4071,P

11、<001,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,見表1。表1  冠心病組與對照組MBL含量水平比較    3  討論    人類血清MBL濃度主要受結(jié)構(gòu)基因外顯子1密碼子點(diǎn)突變的影響和啟動(dòng)子區(qū)多態(tài)性的調(diào)控811。國外已有一些MBL基因與冠心病的相關(guān)性研究46,但對血漿MBL濃度與冠心病的相關(guān)性研究很少,只有冰島的一份前瞻性研究報(bào)告7:高濃度的血漿MBL者,尤其是糖尿病病人、高血脂、血沉升高人群患心肌梗死的概率較低,提示MBL可能與清除動(dòng)脈粥樣硬化因素有關(guān)。雷克雅未克Landspitali大學(xué)的瓦爾迪馬森(Helgi Valdim

12、arsson)和同事分析了當(dāng)?shù)氐难芯抠Y料,共納入了1967年以后的近2萬參試者。在對其中987名70歲參試者的橫斷面研究中,作者發(fā)現(xiàn),MBL水平高(>1000mg/L)與水平低相比,心肌梗塞風(fēng)險(xiǎn)下降36%(P<0001)。為證實(shí)此結(jié)論,研究者對另一個(gè)有1309名中年人的人群進(jìn)行了前瞻性分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)MBL水平高和心肌梗塞風(fēng)險(xiǎn)減弱有關(guān)聯(lián)的跡象,但不如前一橫斷面分析中的那樣強(qiáng)烈,對總?cè)巳?、吸煙者或高血壓病人也沒達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。但這次分析證實(shí),高水平MBL對糖尿病人(P=002)或高膽固醇血癥病人(P=0004)與心肌梗塞風(fēng)險(xiǎn)大為減小有關(guān)。鑒于上述在糖尿病人中的結(jié)論“測量MBL可用于心性

13、風(fēng)險(xiǎn)的輔助評估,也可能幫助評估預(yù)防治療的需要”,本研究發(fā)現(xiàn),100例冠心病人血漿MBL含量的平均值為3900g/L;60例健康對照組血漿MBL含量的平均值為2056g/L。經(jīng)t檢驗(yàn),t=4071,P<001,二者均值比較差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,說明血漿MBL可能參與冠心病的發(fā)生、發(fā)展,但具體作用及機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。    參考文獻(xiàn)    1  楊功煥,王俊芳,萬霞,等.影響中國人群疾病死亡因素的定量分析J.中華流行病學(xué)雜志,2005,26(12):934938    2  Gran

14、 K.Inflammation,Atherosclerosis,and Coronary Artery DiseaseNJ.Engl J Med,2005,352:16851695    3  Takahashi K,Ezekowitz RA. The role of the mannose binding lectin in innate immunityJ.Clin Infect Dis,2005,41(7):440444    4  Aittoniemi J,Fan YM,Laaksonen R,et al.

15、The effect of mannanbinding lectin variant alleles on coronary artery reactivity in healthy young menJ.Int J Cardiol.,2004,97(2):317318    5  Robert A,Hegele C.Mannosebinding Lectin Gene Variation and Cardiovascular Disease in Canadian InuitJ.Clin Chem,1999,45:1283  

16、60; 6  Fiane AE,Ueland T,Simonsen S,et al.Low mannosebinding lectin and increased complement activation correlate to allograft vasculopathy,ischaemia,and rejection after human heart transplantationJ.Eur Heart J,2005,26(16):16601665    7  Saedis S,Oskar O O,Thor A,et al.Manna

17、n binding lectin as an adjunct to risk assessment for myocardial infarction in individuals with enhanced riskJ.J Exp Med,2005,201:117125    8  賈天軍,李萍,張庶民,等.漢、蒙古族人MBL基因ExonI 54位密碼子點(diǎn)突變頻率及其血漿含量相關(guān)性研究J.中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志,2004,24(2):115119    9  Kilpatrick DC.Mannanbinding lectin and its role in innate immunityJ.Transfus Med,2002,12(6):335352    10Toralf B, Willemijn B,Nannette B, et al.Functional Consequences of Genetic Variation across the Entire MBL2 Locus: Possible Identification of 3SNPs That Could Modify Circulating Levels of MBLJ.Bl