生物類課程試驗教學指導書

1、第一局部 生物學根底實驗實驗一 細胞的顯微與亞顯微結(jié)構(gòu)觀察一、相關(guān)根底知識生物體的一切生命活動， 都是以細胞作為根本結(jié)構(gòu)和功能單位來進行的。 由于其內(nèi)在結(jié)構(gòu)和自身表 面張力以及外部機械壓力，細胞表現(xiàn)具有不同的形態(tài)，有圓球形、圓盤形、腎形、多邊形、紡錘形等。 更重要的是， 細胞的形態(tài)與其功能密切相關(guān)， 如紅細胞是圓盤形的， 有利于其在血管內(nèi)流動及氣體交換； 肌細胞按收縮方向是細長的纖維狀結(jié)構(gòu)， 適于細胞的收縮運動。 精子細胞核小， 具有一條能運動的尾或 鞭毛，以利于其受精過程；植物表皮的保衛(wèi)細胞是腎形的，似兩扇大門、通過對不同細胞形態(tài)的觀察， 可以了解執(zhí)行不同生理功能的細胞所具有的不同形態(tài)， 同

2、時還可以認識執(zhí)行同一功能的細胞具有不同形 態(tài)，甚至同一種細胞在不同發(fā)育時期也呈現(xiàn)不同形態(tài)。雖然形形色色的細胞組成了千奇百怪的生物世界， 但細胞卻具有共同的根本結(jié)構(gòu)， 即細胞膜、 細胞 質(zhì)和細胞核。 這些根本結(jié)構(gòu)不是模式化的， 只有對具體的細胞進行分析觀察， 才能正確認識和了解細胞 的結(jié)構(gòu)。細胞的許多結(jié)構(gòu)在自然狀態(tài)下幾乎是無色的， 觀察時， 必須經(jīng)過染色步驟。 不同的結(jié)構(gòu)與不同的染 料有特異性結(jié)合， 使細胞的不同部位染上不同深度或不同種的顏色， 并產(chǎn)生不同的折射率。 將細胞內(nèi)部 各局部的構(gòu)造顯示得更清楚。一般的生物染料不能穿透細胞膜，只有當細胞被化學試劑固定殺生后，膜結(jié)構(gòu)被破壞，染料才 能進入細

3、胞內(nèi)部，附著在被染結(jié)構(gòu)上，顯示其染色作用。因此，我們稱固定劑有“煤染作用。但有一 些活體染料卻能進入活細胞，它們是一些無毒或毒性很小的染色劑。在電化學作用下，染料堆積在 細胞中某些特定的位置上，從而染色，如中性紅染液泡系、健那綠染線立體等?；铙w染色的方法有體內(nèi)活染和離體活組織染色兩種， 體內(nèi)活染通常是將染料用注射、 吸收或吞咽等 方法進入生物有機體內(nèi)進行染色。染色以后， 不影響細胞的生命活動， 不產(chǎn)生任何理化變化。離體活組 織染色是指對已離體的活組織或細胞， 置于相對能保持活性的培養(yǎng)液中， 使其保持生活狀態(tài)， 再進行染 色的方法。活體染色的目的是顯示活細胞的某些結(jié)構(gòu)，用來研究生活狀態(tài)下的細胞結(jié)

4、構(gòu)和生理病理狀態(tài)。二、實驗?zāi)康暮鸵?、觀察各種組織細胞的切片，注意聯(lián)系細胞的形態(tài)與功能的關(guān)系。2、學習一些細胞器的超活染色技術(shù)，觀察植物活細胞內(nèi)線粒體和液泡系的形態(tài)、數(shù)量與分布。三、實驗材料與儀器1、實驗材料 1洋蔥鱗莖內(nèi)表皮；2黃豆根尖；3動植物組織標本。2、器材顯微鏡 刀片 小剪刀 尖頭鑷 載玻片 蓋玻片 擦鏡紙 吸水紙 吸管等3、試劑中性紅 13000 健那綠 0.5 蒸餾水四、實驗方法與步驟1、觀察動植物不同組織的切片 單層扁平上皮；多邊形或不規(guī)那么波浪形彼此邊緣緊密鑲嵌。 單層柱狀上皮：核柱形細胞，形狀高細，排列緊密，似木柵欄狀。 纖毛上皮：假復(fù)層柱狀細胞。是由一層不同形狀、不同高

5、度的細胞構(gòu)成。由于細胞大小不同，核不 在同一水平位置上，故稱為假復(fù)層。骨骼?。洪L圓柱狀細胞，內(nèi)有大量卵圓形細胞核，在肌膜下排成一行，為典型多核細胞。 平滑肌：長棱形細胞，中央有一圓形核。脂肪細胞：圓形細胞，脂滴占據(jù)大局部容積。 軟骨細胞：陷在軟骨陷窩內(nèi)的大小不等的圓形細胞。 人血涂片：觀察不同核形的白細胞及雙凹面形紅細胞。 雞血涂片：卵圓形細胞，與人血涂片比擬其胞形、核形。 運動神經(jīng)元涂片；不規(guī)那么形細胞，胞體為三角形或多邊形。突起由胞體不規(guī)那么延伸。 精巢切片；觀察精巢內(nèi)精細胞在不同發(fā)育階段的不同形態(tài)。 洋蔥根尖；觀察根尖的形態(tài)、區(qū)分根冠區(qū)、分生區(qū)、伸長區(qū)的不同形態(tài)細胞。2、黃豆根尖細胞液泡

6、系的活染及觀察 取一干凈載片，中央滴一滴中性紅染液。用刀片將初生的黃豆根尖切一縱切薄片，置染液中，染 5-10min 。用吸管吸取蒸餾水，滴在染液周圍，使染液沖淡近無色。此時，輕輕蓋一干凈載片，用吸水 紙吸去多余水分。 先觀察分生區(qū)細胞， 尋找染成紅色的圓形小泡， 即初生液泡。 由分生區(qū)向伸長區(qū)觀察， 尋找體積增大的液泡。3、洋蔥表皮細胞線粒體的活染及觀察 取一干凈載片，中央滴一滴健那綠染液。用尖頭鑷從洋蔥鱗片內(nèi)撕下一小片表皮，平鋪在染料上，勿使有氣泡、染 510min。用吸管吸蒸餾水洗去染液，蓋片.吸去多余水分。觀察胞質(zhì)中被染成藍、 綠色的顆粒，即線粒體。五、作業(yè)與討論1. 完成實驗報告。2

7、. 答復(fù)以下問題：顯微鏡觀察為什么要染色？活體染色與常規(guī)染色的異同點在何處？實驗二 線粒體和液泡系的超活染色與觀察、實驗?zāi)康?. 觀 察植物活細胞內(nèi)線粒體、液泡系的形態(tài)、數(shù)量與分布。2. 學習一些細胞器的超活染色技術(shù)。二、實驗原理活體染色是指對生活有機體的細胞或組織能著色但又無毒害的一種染色方法。它的目的是顯示生活細胞內(nèi)的某些結(jié)構(gòu)， 而不影響細胞的生命活動和產(chǎn)生任何物理、 化學變化以致引起細胞的死亡。 活體染 色技術(shù)可用來研究生活狀態(tài)下的細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)和生理、病理狀態(tài)。根據(jù)所用染色劑的性質(zhì)和染色方法的不同， 通常把活體染色分為體內(nèi)活染與體外活染兩類。 體內(nèi)活染是以膠體狀的染料溶液注入植物體內(nèi)。

8、染料的膠粒固定、 堆積在細胞內(nèi)某些特殊結(jié)構(gòu)里， 到達易于識 別的目的。 體外活體染色又稱超活染色， 它是由活的動、 植物別離出局部細胞或組織小塊， 以染料溶液 浸染，染料被選擇固定在活細胞的某種結(jié)構(gòu)上而顯色?；铙w染料之所以能固定、 堆積在細胞內(nèi)某些特殊的局部， 主要是染料的 “電化學 特性起重要作用。 堿性染料的膠粒外表帶陽離子， 酸性染料的膠粒外表帶有陰離子， 而被染的局部本身也是具有陰離子或 陽離子，這樣， 它們彼此之間就發(fā)生了吸引作用。 但不是任何染料皆可以作為活體染色劑之用， 應(yīng)選擇 那些對細胞無毒性或毒性極小的染料， 而且總是要配成稀淡的溶液來使用。 一般是以堿性染料最為適用， 可能

9、因為它具有溶解在類脂質(zhì)如卵磷脂、膽固醇等的特性，易于被細胞吸收。詹納斯綠B Janusgreen B和中性紅neutral red 兩種堿性染料是活體染色劑中最重要的染料，對于線粒體和液泡系的 染色各有專一性。三、實驗用品一器材 顯微鏡、恒溫水浴鍋、解剖盤、剪刀、鑷子、雙面刀片、載玻片、凹面載玻片、蓋玻片、外表皿、 吸管、吸水紙。二試劑0.85g0.25g0.03g1. Ringer 溶液氯化鈉 氯化鉀 氯化鈣蒸餾水100 ml2. 10% 、 1 3000 中性紅溶液稱取0.5g中性紅溶于50ml Rin ger液，稍加熱3040 C使之很快溶解，用濾紙過濾，裝人棕色 瓶于暗處保存，否那么易

10、氧化沉淀，失去染色能力。臨用前，取已配制的 1%中性紅溶液Iml，參加29ml Rin ger溶液混勻。裝入棕色瓶備用。3. 1、 15000詹納斯綠 B 溶液稱取50mg詹納斯綠B溶于 5ml Ringer溶液中，稍加熱3040C,使之溶解，用濾紙過濾后， 即為I %原液。取I %原液Iml參加49ml Rin ger溶液，即成1/5000工作液酒人瓶中備用。最好現(xiàn)用現(xiàn)配，以保持它的充分氧化能力。三材料1 洋蔥鱗莫內(nèi)表皮細胞。 2小麥或黃豆幼根根尖。四、實驗方法一線粒體的超活染色與觀察線粒體是細胞進行呼吸作用的場所， 其形態(tài)和數(shù)量隨不同物種、 不同組織器官和不同的生理狀態(tài)而 發(fā)生變化。詹納斯

11、綠B是毒性較小的堿性染料， 可專一性地對線粒體進行超活染色， 這是由于線粒體內(nèi)的細胞 色素氧化酶系的作用，使染料始終保持氧化狀態(tài)即有色狀態(tài)，呈藍綠色； 而線粒體周圍的細胞質(zhì)中，這些染料被復(fù)原為無色的色基即無色狀態(tài) 。洋蔥鱗莖表皮細胞線粒體的超活染色觀察1. 用吸管吸取1 /5000詹納斯綠B染液，滴一滴于干凈的載玻片上，然后，撕取一小片洋蔥鱗 莖內(nèi)表皮，置于染液中，染色 1015min。2 用吸管吸去染液，加一滴 Ringer 液，注意使內(nèi)表皮組織展平，蓋上蓋被片進行觀察。3 在高倍鏡下， 可見洋蔥表皮細胞中央被一大液泡所占據(jù)，細胞核被擠至一倒貼細胞壁處。 仔細觀察細胞質(zhì)中線粒體的形態(tài)與分布。

12、二液泡系的超活染色與觀狀中性紅為弱堿性染料， 對液泡系 即高爾基體 的染色有專一性， 只將活細胞中的液泡系染成紅色， 細胞核與細胞質(zhì)完全不著色，這可能是與液泡中某些蛋白質(zhì)有關(guān)。小麥根尖細胞液泡系的中性紅染色觀察：1. 實驗前，把小麥種子或黃豆培養(yǎng)在培養(yǎng)皿內(nèi)潮濕的濾紙上，使其發(fā)芽，胚根伸長到 1cm 以上。2. 用雙面刀片把初生的小麥或黃豆幼苗很尖約12cm長小心切一縱切面，放入載玻片上的1/ 3000中性紅染液滴中，染色 510min。3. 吸去染液，滴一滴 Ringer 液，蓋上蓋玻片，并用鑷子輕輕地下壓蓋玻片，使很尖壓扁，利于觀 察。4. 在高倍鏡下， 先觀察根尖局部的生長點的細胞， 可見

13、細胞質(zhì)中散在很多大小不等的染成玫瑰紅色 的圓形小泡， 這是初生的幼小液泡。 然后， 由生長點向延長區(qū)觀察， 在一些已分化長大的細胞內(nèi)， 液泡的染色較淺，體積增大，數(shù)目變少。在成熟區(qū)細胞中，一般只有一個淡紅色的巨大液泡，占 據(jù)細胞的絕大局部，將細胞核擠到細胞一倒貼近細胞壁處。實驗三 葉綠體的別離與熒光觀察葉綠體是植物細胞所特有的能量轉(zhuǎn)換細胞器， 光合作用就是在葉綠體中進行的。 由于具有這一重要 功能， 所以它一直是細胞生物學、 遺傳學和分子生物學的重要研究對象。 葉綠體是植物細胞中較大的一 種細胞器，利用低速離心即可別離集中進行各種研究。一、實驗?zāi)康?. 通 過植物細胞葉綠體的別離，了解細胞器別

14、離的一般原理和方法。2. 觀察葉綠體的自發(fā)熒光和次生熒光，并熟悉熒光顯微鏡的使用方法。二、實驗原理將組織勻漿后懸浮在等滲介質(zhì)中進行差速離心， 是別離細胞器的常用方法。 一個顆粒在離心場中的 沉降速率取決于顆粒的大小、 形狀和密度， 也同離心力以及懸浮介質(zhì)的粘度有關(guān)。 在一給定的離心場中， 同一時間內(nèi)， 密度和大小不同的顆粒其沉降速率不同。 依次增加離心力和離心時間， 就能夠使非均一懸 浮液中的顆粒按其大小、密度先后分批沉降在離心管底部，分批收集即可獲得各種亞細胞組分。葉綠體的別離應(yīng)在等滲溶液0.35 mol / L氯化鈉或0.4 mol /L蔗糖溶液中進行，以免滲透壓的 改變使葉綠體受到損傷。

15、將勻漿液在 1000r/ min的條件下離心 2min，以去除其中的組織殘渣和一些 未被破碎的完整細胞。然后，在 3000r/ min的條件下離心5min，即可獲得沉淀的葉綠體混有局部細 胞核。別離過程最好在 05C的條件下進行；如果在室溫下，要迅速別離和觀察。熒光顯微術(shù)是利用熒光顯微鏡對可發(fā)熒光的物質(zhì)進行觀測的一種技術(shù)。某些物質(zhì)在一定短波長的光如紫外光 的照射下吸收光能進入激發(fā)態(tài)， 從激發(fā)態(tài)回到基態(tài)時， 就能在極短的時間內(nèi)放射出比照射 光波長更長的光如可見光 ，這種光就稱為熒光。假設(shè)停止供能熒光現(xiàn)象立即停止。有些生物體內(nèi)的物 質(zhì)受激發(fā)光照射后可直接發(fā)出熒光，稱為自發(fā)熒光或直接熒光，如葉綠素的

16、火紅色熒光和木質(zhì)素的黃色熒光等。 有的生物材料本身不發(fā)熒光， 但它吸收熒光染料后同樣也能發(fā)出熒光， 這種熒光稱為次生 熒光或間接熒光 ，如葉綠體吸附吖啶橙后可發(fā)桔紅色熒光。利用熒光顯微鏡對可發(fā)熒光的物質(zhì)進行檢測時，將受到許多因素的影響，如溫度、光、淬滅劑等。因此在熒光觀察時應(yīng)抓緊時間， 有必要時立即拍照。 另外，在制作熒光顯微標本時最好使用無熒光載片、 蓋片和無熒光油。三、實驗用品一器材1. 主要設(shè)備：普通離心機、組織搗碎機、粗天平、熒光顯微鏡。2小型器材：500ml燒杯2個，250ml量筒1個，滴管10支，10ml刻度離心管20支，紗布假設(shè)干，無 熒光載片和蓋片各 4 片。二材料新鮮菠菜三試

17、劑0.35mol/ L 氯化鈉涪液，0.01 % 吖啶橙acridine orange。四、實驗方法一葉綠體的別離與觀察1 .選取新鮮的嫩菠菜葉，洗凈擦干后去除葉梗及粗脈，稱30g 放入 150ml 0.35mol /L NaCl 溶液中，裝人組織搗碎機。2. 利用組織搗碎機低速5000r/min勻漿35min。3. 將勻漿用 6 層紗布過賴于 500ml 燒杯中。4. 取濾液4m1在1000 r/ min下離心2 min。棄去沉淀。5. 將上清液在 3000 r/min 下離心 5min 。棄去上清液，沉淀即為葉綠體 混有局部細胞核 。6. 將沉淀用 0.35mol/L Nacl 溶液懸浮。

18、7. 取葉綠體懸液一滴滴于載片上，加蓋片后即可在普通光鏡和熒光顯微鏡下觀察。 在普通光鏡下觀察。 普通光鏡下， 可看到葉綠體為綠色橄欖形， 在高倍鏡下可看到葉綠體內(nèi)部 含有較深的綠色小顆粒，即基粒。 在熒光顯微鏡下觀察。以O(shè)lympus熒光顯微鏡為例，在選用£ blue激發(fā)濾片、E雙色鏡和O 530 orange阻斷濾片的條件下，葉綠體發(fā)出火紅色熒光。 取葉綠體液一滴滴在無熒光載片上， 再滴加滴 0.01%吖啶橙熒光染料， 加無熒光蓋片后即可 在熒光顯微鏡下觀察。 參加吖啶橙染色后， 葉綠體可發(fā)出桔紅色熒光， 而其中混有的細胞核那么 發(fā)綠色熒光。二菠菜葉手切片觀察用剃須刀將新鮮的嫩菠

19、菜葉切削一斜面置于載片上，滴加I2滴0.35mol/L NaCL溶液，加蓋片后輕壓，置顯微鏡下觀察。1. 在普通光鏡下觀察。在普通光鏡下可以看到三種細胞表皮細胞：為邊緣呈鋸齒形的鱗片狀細胞。保衛(wèi)細跑：為構(gòu)成氣孔的成對存在的腎細胞。葉肉細胞：為排成柵狀的長形和橢圓形細胞。葉綠體呈綠色橄欖形，在高倍鏡下還可以看到綠色的基粒。2. 在熒光顯微鏡下觀察。在熒光顯微鏡下，葉綠體發(fā)出火紅色熒光，但其熒光強度要比游離葉綠體弱。氣孔發(fā)綠色熒光， 兩保衛(wèi)細胞內(nèi)的火紅色葉綠體那么環(huán)繞氣孔排列成一圈。表皮細胞內(nèi)葉綠體數(shù)量要比葉肉細胞少。3. 用同樣方法制片，但滴加12滴0.01%吖啶橙染液染色1min，洗去余液，加

20、蓋片后即可在熒光顯微鏡下觀察。 用吖啶橙染色后， 葉綠體那么發(fā)出桔紅色熒光， 細胞核可發(fā)出綠色熒光， 氣孔仍為綠色。實驗四 減數(shù)分裂一、目的學習生殖細胞的取材和染色體制片，認識減數(shù)分裂各時期的形態(tài)特征。二、原理減數(shù)分裂是形成生殖細胞的一種特殊方式的細胞分裂。 它是遺傳學中一個特別重要的事件， 是維持 大多數(shù)動植物品種染色體數(shù)目世代穩(wěn)定傳遞的根本機制。同時， 基因的別離、 自由組合以及交換無不是通過減數(shù)分裂發(fā)生的。 可以說減數(shù)分裂是經(jīng)典遺傳學的根本， 動植物都是通過減數(shù)分裂形成配子， 所以 減數(shù)分裂通常以植物的花粉母細胞或動物的精巢、 卵巢作材料進行觀察。 減數(shù)分裂的特點是： 連續(xù)進行 兩次核分

21、裂，而染色體僅復(fù)制一次，從而形成四個只含單倍數(shù)染色體的產(chǎn)物生殖細胞或配子 。三、材料1 小麥雄花序。2 蝗蟲精巢。四、器具和試劑鑷子、解剖刀、解剖針、載玻片、蓋玻片、酒精燈、吸水紙、滴瓶、皮頭鉛筆、火柴、顯徽鏡。 卡諾氏固定液，改進苯酚品紅、 70酒精。五、步驟一小麥花粉母細胞涂片觀察1. 取材和固定：當小麥植株開始挑旗，旗葉與下一葉片的葉耳間距約 35cm，花藥長度約2.02.5mm ,氣溫在23C25C時，將穗子剝出，在卡諾氏固定液中固定24小時。如暫不制片可轉(zhuǎn)入 70%酒精中，4C保存。2. 染色和壓片：從穗中部小穗中取出花藥假設(shè)干置于載片上，切去花藥端部，滴兩滴改進苯酚品紅，用 攝子擠

22、壓花藥，使內(nèi)含物全部擠出，除去藥壁，將擠出的細胞輕輕敲打；如果花藥較小，也可滴兩 滴染液后用鑷子直接將花藥搗碎，去除未碎的組織，然后蓋上蓋玻片，在酒精燈上微微加熱。用左 手拇指及食指固定蓋片與載片，勿使其移動。右手拇指用力壓蓋玻片，使細胞伸展開。3. 鏡檢：由于小麥小穗發(fā)育是以中部小穗最先發(fā)育，然后依次向上、下推移，所以在一個穗子上往往 能找到減數(shù)分裂的假設(shè)干時期。 如果中部花藥尚未進入減數(shù)分裂時期那么需要另選一個更大的穩(wěn)于取花 藥制片。二蝗蟲精巢精母細胞制片觀察1. 取材和固定：捕捉進入繁殖期的雄性蝗蟲，剪開胸腹部體壁，放入卡諾氏固定液中固定24 小時，暫不制片時，可重復(fù)固定一次，轉(zhuǎn)入 70

23、%酒精中4C保存。2. 制片：取蟲體剪去翅膀，在翅的基部前方，相當于腹部前端的背側(cè)，仔細剪干體壁，從精巢中前部 取幾段精細管放在載片上，用解剖針撕碎精細管，除去大塊管壁組織，涂勻。3. 染色觀察：加改進苯酚品紅 35滴，染色 10分鐘必要時可在酒精燈上快速掠幾下加上蓋片和 吸水紙，以指壓法壓片。光鏡下，可以看到減數(shù)分裂的各個時期，以及精子的形成過程。六、作業(yè)1 繪制你所看到的分裂圖，并注明屬什么時期。2 試比擬減數(shù)分裂與有絲分裂過程中，染色體的動態(tài)有何異同。實驗五 植物多倍體細胞的誘導和觀察一、目的 了解和掌握用秋水仙素誘導植物多倍體的原理和一般方法。二、原理 秋水仙素誘導多倍體的機制在于抑制

24、紡錘絲的形成，使每個染色體縱裂后，不能移向兩 極，同時細胞也不能分裂，從而導致細胞染色體數(shù)增加，成為多倍體細胞。三、材料、器具和試劑洋蔥鱗莖 顯微鏡、培養(yǎng)皿、鑷子、載玻片、蓋玻片、吸水紙、指管、水浴鍋、刀片。0.1NHCI、0秋水仙素、卡諾氏固定液、改進苯酚品紅，70%酒精。四、步驟1. 秋水仙素處理：將不定根長至5cm的洋蔥鱗莖置于0.1 %的秋水仙素液中浸沒根尖部，室溫下培 養(yǎng)至根尖膨大，剪取根部、卡諾氏固定液固定24小時，如暫不使用可轉(zhuǎn)入 70%酒精中4C保存。2. 解離：取根尖置于大指管中加 60C預(yù)溫的0.1NHCI , 60C水浴中，解離810分鐘，洗去多余鹽酸。3. 制片：取根尖

25、在載片上，切去延長區(qū)局部，用鑷子將根尖充分壓碎也可用刀片充分切碎涂勻。4. 染色觀察： 加染色液假設(shè)干滴， 染色 5 分鐘加蓋片和吸水紙， 用鉛筆皮頭適當敲打， 光鏡尋找分散好， 背景清晰的圖象觀察。五、作業(yè)觀察多倍體細胞的情況，并選擇你所看到的清晰的圖象繪圖。實驗六 果蠅唾腺染色體的制片與觀察、目的1. 練習別離果蠅幼蟲唾腺的技術(shù)，學習唾腺染色體的制片方法。2 觀察了解果蠅唾腺染色體的特征。、原理雙翅目昆蟲的唾腺細胞發(fā)育到一定階段之后就不再進行有絲分裂， 而停止在分裂間期， 但唾腺染色 體仍不斷復(fù)制而不分開， 從而形成約 1000 一 4000 拷貝的染色體絲， 比其它細胞的中期染色體大得多

26、 約 100150倍所以又稱多線染色體和巨大染色體。唾腺染色體還具有明顯的橫紋， 其數(shù)目、 寬窄和排列順序都具有種的特異性。 同時其“體細胞聯(lián)會 的特點，也為染色體畸變的研究提供了很大的方便。三、材料黑腹果蠅的三齡幼蟲。四、器具和試劑顯微鏡、鑷子、解剖針、載玻片、蓋玻片、吸水紙、皮頭鉛筆。 果蠅幼蟲培養(yǎng)基，改進苯酚品紅、 1NHCl ， 0.7生理鹽水。五、步驟1. 果蠅三齡幼蟲的培養(yǎng)：15C18 C培養(yǎng)果蠅幼蟲，爬至培養(yǎng)瓶壁的幼蟲即為三齡幼蟲。2 染色體制片：1在載玻片上滴一滴生理鹽水， 取三齡幼蟲置于生理鹽水中， 用兩支解剖針， 一支壓住幼蟲末端13 處，另一支小心插入頭部，人盡可能靠近口

27、器處平穩(wěn)快速拉出唾腺一對透明的香蕉狀腺體。2用解剖針剔除脂肪體等其他組織。吸水紙吸去多余生理鹽水，而后加一滴1NHCl ，浸 23分鐘，使腺體組織疏松，易于壓片和獲得清晰圖像。3吸去多余 HCl ，生理鹽水輕輕沖洗。4吸去多余生理鹽水，加數(shù)滴改進本酚品紅染色 10分鐘。5蓋上蓋玻片和吸水紙， 以左手中指和食指固定載片和蓋片，用鉛筆的皮頭適當敲打或用右手拇指用力壓片。3. .觀察：尋找形態(tài)良好、分散適中的圖像仔細觀察各條臂的特點。六、作業(yè)1. 繪制你所看到的清晰的唾腺染色體圖。2. 對實驗成敗原因進行總結(jié)分析。實驗七 青蛙的消化、呼吸、泄殖和神經(jīng)系統(tǒng)一、目的通過蛙或蟾蜍的內(nèi)部解剖和觀察，了解兩棲

28、動物消化、呼吸、泄殖系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)的形態(tài)構(gòu)造 及特點；學習一般解剖技術(shù)。二、內(nèi)容1. 蛙或蟾蜍的解剖及其消化、呼吸和泄殖系統(tǒng)形態(tài)結(jié)構(gòu)的觀察。2 蛙或蟾蜍神經(jīng)系統(tǒng)的示范。三、實驗材料和用具活蛙或蟾蜍 ，蛙或蟾蜍神經(jīng)系統(tǒng)示范標本。 解剖器、蠟盤、鬃毛、大頭針、放大鏡、棉花、乙醚或氯仿等。四、實驗操作及觀察解剖蛙或蟾蜍剪開腹壁時，應(yīng)沿腹中線稍偏左側(cè)剪，以不致?lián)p毀位于腹中線的腹靜脈。同時注 意剪刀尖應(yīng)向上挑，以免損傷內(nèi)臟。將右側(cè)腹壁翻開前，先將腹靜脈從腹壁上剝離開。用雙毀髓法處死活蛙或蟾蜍 ，或使其麻醉致死。 麻醉法：將活蛙或蟾蜍置于裝有浸過乙醚或氯仿棉球的廣口瓶內(nèi)，加蓋靜置至蛙深度麻醉 致死、：將已

29、死的蛙或蟾蜍腹面向上置于蠟盤中，展開四肢，用大頭針于腕部和跗部釘入，以將蛙或 蟾蜍固定在蠟板上。一口腔： 為消化和呼吸系統(tǒng)共同的通道。1 舌：左手持鑷將蛙或蟾蜍的下頜拉下，可見口腔底部中央有一柔軟的肌肉質(zhì)舌，其基部著生在 下頜前端內(nèi)側(cè)，舌尖向后伸向咽部。右手用鑷子輕輕將舌從口腔內(nèi)向外翻拉出展平，可看到蛙的舌 尖分叉蟾蜍舌尖鈍圓，不分叉 ，用手指觸舌面有粘滑感。右手持剪剪開左右口角至鼓膜下方， 令口腔全部露出。2 內(nèi)鼻孔： 1 對橢圓形孔，位于口腔頂壁近吻端處。取一鬃毛從外鼻孔穿入，可見鬃毛由內(nèi)鼻孔穿出。3 齒：沿上頜邊緣有一行細而尖的牙齒，齒尖向后，即頜齒蟾蜍無齒；在 1 對內(nèi)鼻孔之間有兩叢細

30、齒，為犁齒蟾蜍無齒 。4 耳咽管孔：位于口腔頂壁兩側(cè)，頜角附近的1 對大孔。用鑷子由此孔輕輕探入，可通過鼓膜。5 聲囊孔：雄蛙口腔底部兩側(cè)口角處，耳咽管孔稍前方，有1 對小孔即聲囊孔雄蟾蜍無此孔 。6 喉門：為舌尖前方，腹面的具有縱裂的圓形突起。內(nèi)由1 對半圓形杓狀軟骨支持，兩軟骨間的縱裂即喉門，是喉氣管室在咽部的開口。7 食管口：喉門的背側(cè)，咽底的皺襞狀開口。觀察完口腔后，剪開皮膚。然后用鑷子將兩后肢基部之 間的腹直肌后端提起，用剪刀沿腹中線稍偏左自后向前剪開腹壁這樣不致?lián)p毀位于腹中線上的腹 靜脈，剪至劍胸骨處時，再沿劍胸骨的左、右側(cè)斜剪，剪斷烏喙骨和肩呷骨。用鑷子輕輕提起劍 胸骨，仔細剝離

31、胸骨與圍心膜間的結(jié)締組織注意勿損傷圍心膜 ，最后剪去胸骨和胸部肌肉。將 腹壁中線處的腹靜脈從腹壁上剝離開；再將腹壁向兩側(cè)翻開，用大頭針固定在蠟板上。此時可見位 于體腔前端的心臟，心臟兩側(cè)的肺囊，心臟前方的肝臟，以及胃、膀胱等器官，本實驗中暫不仔細 觀察心臟。二消化系統(tǒng)1 肝臟：紅褐色，位于體腔前端，心臟的前方，由較大的左右兩葉和較小的中葉組成。在中葉反面， 左右兩葉之間有一綠色圓形小體，即膽囊。用鑷子夾起膽囊，輕輕向后牽拉，可見膽囊前緣向外發(fā) 出兩根膽囊管，一根與肝管連接，接收肝臟分泌的膽汁，一根與總輸膽管相接。膽汁經(jīng)總輸膽管進 入十二指腸。提起十二指腸，用手指擠壓膽囊，可見有暗綠色膽汁經(jīng)總輸

32、膽管而入十二指腸。2 食管：將心臟和左葉肝臟推向右側(cè)，可見心臟背方有一乳白色短管與胃相連，此管即食管。3 胃：為食管下端所連的一個彎曲的膨大囊狀體，局部被肝臟遮蓋。胃與食管相連處稱賁門；胃與小 腸交接處明顯緊縮，變窄，為幽門。胃內(nèi)側(cè)的小彎曲，稱胃小彎；外側(cè)的彎曲稱胃大彎；胃中間部 稱胃底。4 腸：可分小腸和大腸兩部。小腸自幽門后開始，向右前方伸出的一段為十二指腸；其后向右前方彎 轉(zhuǎn)并繼而盤曲在體腔右下部， 為回腸。 大腸接于回腸， 膨大而陡直， 又稱直腸； 直腸向后通泄殖腔， 以泄殖腔孔開口于體外。5 胰臟：為一條淡紅色或黃白色的腺體，位于胃和十二指腸間的彎曲處。將肝、胃和十二指腸翻折向 前方

33、，即可看到胰臟的反面?？傒斈懝艽┻^胰臟，并接受胰管通入。但胰管細小，一般不易看到。6 脾：在直腸前端的腸系膜上，有一紅褐色球狀物，即脾。它是一淋巴器官，與消化無關(guān)。(三)呼吸系統(tǒng)： 蛙為肺皮呼吸。肺呼吸的器官有鼻腔、口腔、喉氣管室和肺。其中鼻腔和口腔已 于口腔處觀察過。1 喉氣管室：左手持攝輕輕將心臟后移，右手用鈍頭鑷子自咽部喉門處通入，可見心臟背方一短粗略 透明的管子，即喉氣管室，其后端通入肺。2 肺：為位于心臟兩側(cè)的 1 對粉紅色、近橢圓形的薄壁囊狀物。剪開肺壁可見其內(nèi)外表呈蜂窩狀，密 布微血管。(四)泄殖系統(tǒng)： 將消化管移向一側(cè)，仔細觀察以下結(jié)構(gòu)。蛙(或蟾蜍)為雌雄異體，觀察時可互 換不

34、同性別的標本。1泌尿器官：(1) 腎臟：I對紅褐色長而扁平的器官，位于體腔后部，緊貼背壁脊柱的兩側(cè)。將其外表的腹腔膜剝離 開，即清楚可見。腎的腹線有 1 條橙黃色的腎上腺，為內(nèi)分泌腺體。(2) 輸尿管：由兩腎的外緣近后端發(fā)出的1 對壁很薄的細管，它向后伸延，分別通入泄殖腔背壁(蟾 蜍的左右輸尿管末端合并成一總管后通入泄殖腔背壁) 。( 3)膀胱：位于體腔后端腹面中央，連附于泄殖腔腹壁的1 個兩葉狀薄壁囊。膀胱被尿液充盈時，其形狀明顯可見，當膀胱空虛時，用鑷子將它放平展開，也可看到其形狀。( 4)泄殖腔：為糞、尿和生殖細胞共同排出的通道，以單一的泄殖腔孔開口于體外。沿腹中線剪開恥 骨，進一步暴露

35、泄殖腔。剪開泄殖腔的側(cè)壁并展開腔壁，用放大鏡觀察腔壁上輸尿管、膀胱，以及雌蛙 輸卵管通入泄殖腔的位置。2雄性：( 1)精巢： 1 對，位于腎臟腹面內(nèi)側(cè)，近白色，卵圓形(蟾蜍的精巢常為長柱形)，其大小隨個體和季節(jié)的不同而有差異。( 2)輸精小管和輸精管：用鑷子輕輕提起精巢，可見由精巢內(nèi)側(cè)發(fā)出的許多細管即輸精小管，它們通 入腎臟前端。所以雄蛙(或蟾蜍)的輸尿管兼輸精。( 3)脂肪體：位于精巢前端的黃色指狀體，其體積大小在不同季節(jié)里變化很大。胸蟾蜍精巢前方，有 1對扁圓形的畢氏器，為退化的卵巢。在腎臟外側(cè)各有 1 條細長管，為退化的輸卵管，其前端漸細而封 閉，后端左右合一，開口于泄殖腔。3雌性：(

36、1)卵巢： 1 對，位于腎臟前端腹面，形狀大小因季節(jié)不同而變化很大。在生殖季節(jié)極度膨大，內(nèi)有 大量黑色卵，未成熟時淡黃色。( 2)輸卵管：為 1 對長而迂曲的管子，乳白色，位于輸尿管外側(cè)。以喇叭狀開口于體腔；后端在接近 泄殖腔處膨大成囊狀，稱為“子宮 。“子宮開口于泄殖腔背壁(蟾蜍的左右“子宮合并后，通入泄 殖腔)。( 3)脂肪體： 1 對，與雄性的相似，黃色，指狀，臨近冬眠季節(jié)時體積很大。雌蟾蜍的卵巢和脂肪體 之間有橙色球形的畢氏器，為退化的精巢。五、示范蛙(或蟾蜍)的神經(jīng)系統(tǒng)標本，觀察蛙(或蟾蜍)腦和脊用的結(jié)構(gòu)，了解外周神經(jīng)與中樞神經(jīng)的關(guān) 系。六、作業(yè)1. 根據(jù)觀察繪出蛙或蟾蜍口腔內(nèi)的結(jié)構(gòu)

37、，注明各結(jié)構(gòu)的名稱。2. 根據(jù)解剖觀察，繪制蛙或蟾蜍泄殖系統(tǒng)結(jié)構(gòu)圖，注明各器官的名稱。3. 思考題：兩棲動物的消化、呼吸系統(tǒng)及感覺器官的哪些方面表現(xiàn)出陸生脊椎動物的特征?實驗八 反射時的測定及反射弧的分析、目的要求學習反射時的測定方法，了解反射弧的組成。二、根本原理完整的反射弧是反射的結(jié)構(gòu)根底，反射弧任何一局部損壞，原來的反射便不再出現(xiàn)。反射時是刺激信息通過反射弧所用的時間。本實驗選用毀腦的脊蛙或脊蟾蜍為對象，測定比擬簡單的脊髓反射的反射時。三、動物與器材蟾蜍或蛙、支架、蛙嘴夾、蛙板、蛙腿夾、小燒杯、小培養(yǎng)皿、常用手術(shù)器械、濾紙片、棉花、秒 表、紗布、0.5 %和1 %硫酸溶液、2%普魯卡因、

38、水。四、方法與步驟1. 取一只給蟾蜍或蛙，只毀腦稱脊蛙或脊蟾蜍，腹位固定于蛙板上。剪開右側(cè)股部皮膚，別離出坐骨神經(jīng)穿線備用。2. 取下蛙腿夾，用蛙嘴夾夾住脊蟾蜍下頜，懸掛于支架上。將蟾蜍右后肢的最長趾浸入0.5%硫酸溶液中23mm 浸入時間最長不超過10s,立即記下時間以秒計算。當出現(xiàn)屈反射時，那么停止計時，此為屈反射時。立即用清水沖洗受刺激的皮膚并用紗布擦干。重復(fù)測定屈反射時3次，求出圖1.1反射弧分析均值作為右后肢最長趾的反射時。用同樣方法測定左后肢最長趾的 反射時。3. 用手術(shù)剪自右后肢最長趾基部環(huán)切皮膚，然后再用手術(shù)攝剝凈長趾 上的皮膚。用硫酸刺激去皮的長趾，記錄結(jié)果。4. 改換右后肢

39、有皮膚的趾，將其浸入硫酸溶液中，測定反射時，記錄 結(jié)果。5. 取一浸有1%硫酸溶液的濾紙片， 貼于蟾蜍右側(cè)背部或腹部，記錄擦 或抓反射的反射時。6. 用一細棉條包住別離出的坐骨神經(jīng)，在細棉條上滴幾滴 2%普魯卡因 溶液后，每隔2min重復(fù)步驟4 記錄加藥時間。7. 當屈反射剛剛不能出現(xiàn)時記錄時間，立即重復(fù)步驟 5。每隔2min重復(fù)一次步驟 5，直到擦或抓反射不再出現(xiàn)為止記錄時間 。記錄加藥至屈反射消失的時間及加藥至察或抓反射消失的時間，并記錄反射時的變化。8 將左側(cè)后肢最長趾再次浸入0.5%硫酸溶液中條件不變記錄反射時有無變化。毀壞脊髓后再重復(fù)實驗，記錄結(jié)果。五、考前須知1每次實驗時，要使皮膚

40、接觸硫酸的面積不變，以保持相同的刺激強度。2 刺激后要立即洗去硫酸，以免損傷皮膚。六、思考題以實驗結(jié)果為根據(jù)，以嚴密的邏輯推理方式說明反射孤的幾個組成局部。實驗九 ABO血型鑒定、目的要求掌握ABO血型的鑒定方法和原理，觀察紅細胞凝集現(xiàn)象。二、根本原理根據(jù)紅細胞膜外外表是否存在特異性抗原A和B ,將人的血型分為A、B、AB、O四個類型。血清中含有分別與抗原 A和抗原B 起反響的抗體或凝集素a , 3凝集素。當抗體與相應(yīng)的抗原起 反響時，紅細胞發(fā)生凝集，最后溶解。為確保平安輸血，臨床上在 輸血前必須注意鑒定血型。三、實驗器材顯微鏡、雙凹載玻片、消毒牙簽、刺血針、A型和B型標準血清、生理鹽水、酒精

41、棉球。四、方法與步驟1 取一塊清潔玻片，用蠟筆劃上記號，左上角寫A字，右上角寫B(tài)字。2. 用小滴管吸A型標準血清抗 B 一滴參加左側(cè)，用另一小滴 管吸B型標準血清抗 A 一滴參加右側(cè)。3. 穿刺手指取血，玻片的每側(cè)各放入一小滴血，用牙簽攪拌，使 每側(cè)抗血清和血液混合。每邊用一支牙簽，切勿混用。A煙血清圖1.2血型的檢驗?zāi)疽鈭D血tL幗 胞4. 靜置室溫下1015min后，觀察有無疑集現(xiàn)象， 假設(shè)只是A側(cè)發(fā)生凝集，那么血型為B型；假設(shè)只是B 側(cè)凝集，那么為A型；假設(shè)兩邊均凝集，那么為 AB型；假設(shè)兩邊均未發(fā)生凝集，那么為O型。這種凝集反響的強度因人而異，所以有時需借助顯微鏡才能確定是否出現(xiàn)凝集

42、。五、思考題1 根據(jù)自己的血型，說明你能接受和輸血給何種血型的人，為什么？2 如何區(qū)別血液的凝集與凝固，其機理是否一樣？實驗十 家兔系統(tǒng)解剖與觀察一、實驗?zāi)康呐c內(nèi)容1掌握家兔的處死方法與解剖技術(shù)2通過解剖觀察家兔的內(nèi)部結(jié)構(gòu)，了解家兔消化系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、排泄及生殖系統(tǒng)、動脈與靜脈系 統(tǒng)及心臟的結(jié)構(gòu)，進而掌握哺乳類動物內(nèi)臟形態(tài)結(jié)構(gòu)特征。二、教學要求 通過實驗使學生掌握家兔的解剖技術(shù)， 掌握家兔的外形特征和內(nèi)部解剖各系統(tǒng)的根本結(jié)構(gòu)特征、 機 能特點。使學生對哺乳動物的根本特征有一更深入的了解和認識。三、實驗材料和用具實驗材料 : 活家兔 .實驗用具 : 解剖剪、 解剖刀、鑷子、解剖盤、骨剪 , 注射

43、器及針頭、棉花等。四、實驗作業(yè),并注明各部位名稱。根據(jù)解剖觀察繪制家兔消化系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、排泄及生殖系統(tǒng)圖第二局部 根底土壤學實驗實驗一 土壤含水量的測定土壤含水量是研究土壤水分物理性質(zhì)的一項主要指標。 測定土壤含水量的方法很多， 烘干法是測定 土壤含水量方法中最常用的一種經(jīng)典方法，測定結(jié)果比擬準確可靠。 稱取一定的待測土樣放在105110度的烘箱中烘烤足夠的時間， 土壤中的水分就會變成水汽被排除， 稱量干土重后， 其損失的水分重即為 土壤的含水量，通常用占烘干土重的百分數(shù)表示。1 儀器用品烘箱、 枯燥器、 天平感量 0.01g 、 鋁盒等。2 操作步驟 1 先將鋁盒稱重，在田間選點，每點取土

44、 10g 左右，分別放入重量的鋁盒中，蓋好，帶回室內(nèi)稱重。(2) 揭開鋁盒蓋，套在盒下面，放入105110度的烘箱內(nèi)烘68小時。(3) 把烘干的盛土鋁盒取出放入枯燥器中，待冷卻后稱重(一般冷卻時間約20分鐘左右。(4) 再將鋁盒放入烘箱中烘23小時，取出稱重，直至前后兩次重量相差不超過O.OIg為止。3結(jié)果計算(1) 以烘干土為基數(shù)的水分百分數(shù)：W(%)= (G1-G2)/(G2-G0) X100(2) 以風干土或自然濕土為基數(shù)的水分百分數(shù)(通常用于化學分析計算之用)：W(%)= (G1-G2)/(G1-G0) X100式中 W 含水量(%; G0鋁盒重(g); G1鋁盒十濕土重(g) ; G

45、2 鋁盒十烘干 土重(g)。為便于計算和檢查，可采用表2.1形式進行記載。表2.1烘干法測定土壤含水量記載表取土取土取土深盒號 盒重盒+濕土盒+干土干土水分含水時間地點度(cm)(g)重(g)重(g)重(g)重(g)量(%)實驗二 土壤水分常數(shù)的測定吸濕系數(shù)的測定儀器用品天平、烘箱、枯燥器、鋁盒、10% HzSQ或 15% K2SO4飽和液。二、操作步驟1. 稱取通過1mm篩孔的風干土樣 5-10克放入重量的鋁盒中，并平鋪于盒底。2. 將鋁盒放入盛有10% H2SO4(或K2SO4飽和液)的枯燥器內(nèi)的白瓷板上。加蓋密封后放在溫度恒定 的地方。3. 放置34天后，取出鋁盒，蓋好枯燥器蓋，迅速在天

46、平上稱重，記下重量。然后重新將鋁盒放回枯燥器中。使其繼續(xù)吸濕。而后每隔23天稱重一次(注意保持枯燥器中的HSQ溶液濃度)，直至恒重為止。4. 將到達恒重的土樣置于105110C的烘箱中烘至恒重。按照烘干法測定土壤含水量的計算方法計算出土壤的最大吸濕量。凋萎系數(shù)的測定一、實驗?zāi)康募罢f明凋萎系數(shù)(又稱萎蔫系數(shù))指作物開始永久凋萎，并在飽和水氣中也不能恢復(fù)膨壓時的土壤含水量。 此時所含的水分形態(tài)為全部吸濕水和局部膜狀水， 有局部水仍可被作物吸收， 但因補給極慢， 難以維持 作物正常需水要求而導致作物萎蔫。 不同土壤由于質(zhì)地、 結(jié)構(gòu)、腐殖質(zhì)含量的差異， 其萎蔫系數(shù)也不同； 不同作物種類和同一作物不同生

47、育階段其萎蔫系數(shù)也有一定的差異。一般凋萎系數(shù)至田間持水量之間的土壤含水量都屬有效水。 有效水量是指從田間測得的土壤自然含 水量減去該土壤的凋萎系數(shù)含水量，即為有效水量。土壤有效水量 % =土壤自然含水量 %凋萎系數(shù) %土壤最大有效水量 %= 田間持水量 %凋萎系數(shù) %二、測定原理凋萎系數(shù)的測定一般有兩種方法，一是間接測定法；二是直接測定法。一 間接測定法 根據(jù)不同土壤質(zhì)地和水分常數(shù)計算求得。通常用最大吸濕水含量乘以一個系數(shù)而 得。其系數(shù)為 1.34 1.52.0，假設(shè)土質(zhì)偏砂乘以 1.34；壤質(zhì)乘以 1.5；粘質(zhì)乘以 2.0。有人建議乘 以 1.5 即可。這種計算法只能求得其近似值，不能反映作

48、物本身的多樣性。二 直接測定法 也叫生物測定法。直接用植物生長做試驗求出凋萎系數(shù)。1. 測定幼苗的凋萎系數(shù) 即當幼苗發(fā)生永久萎蔫時， 測定其土壤的含水量即為幼苗的凋萎系數(shù)。 這種 方法能較準確的反映不同作物的特點，但不能反映作物在不同發(fā)育階段的特殊性。2. 測定作物孕蕾開花階段的凋萎系數(shù)三、測定方法及步驟幼苗法1. 將土樣通過2mm孔徑的風干土均勻裝滿燒杯 杯高6 7cm，直徑45cm，杯中插入一直徑 0.5cm ,長為 8cm 的玻璃管，以便澆水時空氣由此排出。每一樣品重復(fù)4次。2. 澆水或營養(yǎng)液 ，用塞有棉花的漏斗均勻滴加水，浸濕土壤空氣可由玻管排出 。3. 準備幼苗 在裝土前幾天， 選好

49、所需種子 如大麥種子 ，著手開始催芽， 發(fā)芽 3 4天后即可使用。4. 種植 在濕潤的土表下 2cm處種入56粒已發(fā)芽的種子，蓋土后稱重記載，杯口用厚紙蓋住，以 免土表蒸發(fā)以后每杯選留 3 株。5. 培育 將杯放在光線充足處防止烈日直射 ，待幼苗生長到與杯口齊平時，杯口用臘紙封住，紙 上有孔，幼苗即可由此長出。紙與杯壁接合處，封上石臘，然后在蠟紙上蓋一薄層石英砂，防止土 表蒸發(fā)，排氣的玻管口用棉花塞上。6. 觀察、管理 在生長過程中，每天早、中、晚觀察室溫和生長情況，并每隔56天稱重一次如杯內(nèi)水分蒸發(fā)過多， 可進行第二次灌水。 當?shù)诙~子長得比第一片葉子較長時， 證明幼苗根已分 布于杯內(nèi)的整

50、個土體，此時可進行試驗也可最后灌一次水 。然后將杯移到?jīng)]有陽光直射處，直 到第一次凋萎葉子下垂 。當植株出現(xiàn)凋萎后，將杯移入木箱內(nèi)，經(jīng)一晝夜觀察，如凋萎現(xiàn)象消失，即把杯放回原處，待 凋萎現(xiàn)象再次出現(xiàn)后，再把杯置入箱內(nèi)， 如此反復(fù)觀察， 直到植株不能復(fù)原，就可認為幼苗已到達 永久凋萎。7. 取樣分析 去除石臘封面、土表 2cm 的土層，植株及根系，測定杯中土壤的含水量即為凋萎系數(shù)。在分析天平上稱取風干土樣 5g10g 二份，分別放入重量的小鋁盒或稱量皿中，稱時將蓋蓋上；放入烘箱內(nèi)，將蓋翻開斜放旁邊或盒底。調(diào)節(jié)烘箱溫度至105 110C，連續(xù)烘烤8小時在烘烤期間不要隨意翻開烘箱，以免影響烘箱內(nèi)溫度

51、升降變化或使土壤吸濕。 8 小時后翻開烘箱，用坩堝鉗將蓋蓋好， 迅速放入枯燥器內(nèi)冷卻， 至室溫后稱重。 然后再翻開蓋， 重新放入烘箱內(nèi)， 繼續(xù)烘烤 2 小時， 取出冷卻稱重。 兩次稱重到達恒重 即兩次稱重相差不超過 0.003 克即可。 如未達恒重，那么需反復(fù)烘烤，直至恒重為止。然后按最后一次稱重，計算其土壤吸濕水含量準確 至小數(shù)點后兩位 。四、結(jié)果計算土壤吸濕水含量%=風干樣品重一烘干樣品重烘干樣品重X 100五、儀器、試劑木箱內(nèi)放濕鋸木末，使箱內(nèi)水汽飽和、作物種子、溫度計；1/1000和1/100天平、小鋁盒、烘箱。營養(yǎng)液：2.8克磷酸氫銨NH4H2PO4、3.5克硝酸鉀KNO3、5.4克

52、硝酸銨NH4NO3溶于1 升水中。六、作業(yè)題1土壤凋萎系數(shù)的含義是什么？它與作物吸水有何關(guān)系？2. 凋萎系數(shù)含水量有哪幾種水分形態(tài)？其性質(zhì)如何？3. 測定凋萎系數(shù)有幾種方法？幼苗法測定凋萎系數(shù)的關(guān)鍵問題是什么?實驗三田間持水量的測定一、實驗?zāi)康募罢f明田間持水量關(guān)系到植物的生長發(fā)育，是一個很重要的水分常數(shù)，也是確定灌水量的重要依據(jù)。田間持水量在外界不同水源的作用下的概念是不同的。地下水位淺的時候，下過大雨后，整個土層的全部孔隙都被水充滿，到達飽和，此時的土壤水分叫飽和水。降雨停止后，排水溝排除土壤中多余的水分，這樣土壤中大孔隙中的水分，因受重力作用向左右及向下移動，孔隙中由毛管力保持在毛細管中的

53、最大水分含量叫毛管持水量，也就是在田間狀態(tài)下， 高水位土壤自然排水后的含水量，就代表了高水位情況下的田間持水量，也叫最大持水量。在地下水深的地方， 地下水上升不到地面，但下雨或灌溉后，上層土壤也可到達飽和，但不與地下水相接，所以土壤中的重力水首先從大孔隙中消失，較細毛管內(nèi)靠毛管力保持在土壤中的水分為毛管懸著水，它所含的最大水量， 代表土壤在田間狀態(tài)下， 經(jīng)過自然排水而保存在上層土壤中的水分，也叫田間持水量，在數(shù)量上包括吸濕水、膜狀水和毛管懸著水。 不過它所代表的田間持水量比毛管持水量要小，因此也叫最小持水量。 還可以把它定義為， 在田間自然條件下，地表沒有蒸發(fā)和蒸騰損失時，土壤所保持的最大持水

54、量，叫做田間最大持水量或田間持水量。二、測定原理和方法基于上面田間持水量的定義和概念，測定田間持水量的方法都是利用灌水或降雨后，土壤被水充分濕潤，多余的水分在重力的作用下向下滲漏而排出，這時土壤的水分狀況就相當于田間持水量。此時土壤中的水分狀態(tài)根本上是相對穩(wěn)定的，處于不流動或?qū)嶋H小不流動的狀態(tài)，這時的土壤水分對于植物來說是有效水的最高限。地下水埋深大于 3m的土層所保持的主要是毛管懸著水、系真正的田間持水量。 當?shù)叵滤粶\到測定土層處于毛管支持水范圍時，測得的田間持水量就大， 故測定結(jié)果必須注明地下水的深度。三、主要儀器木框，正方形，框內(nèi)面積為1m2,框高2025cm，下端削成楔形，并用白鐵皮

55、包成刀刃狀，便于插入土內(nèi)。水桶；鋁盒；土鉆；鐵鍬；1/100天平；電熱枯燥箱；塑料布正方形，面積約為5m2;青草或干草；盒卷尺；木板等。四、操作步驟在田間選擇一塊面積為 4m2有代表性的比擬平坦的地塊，仔細平整土面。在地塊中央插入木框，一般插入10cm深或達犁底層，框內(nèi)為測試區(qū)。在其周圍筑一正方形的堅實土硬，埂高40cm、埂頂寬30cm，框與土埂間為保護區(qū)。在測試區(qū)附近挖一土壤剖面，觀察土壤剖面特征，按發(fā)生層次在剖面壁采樣測定各層土壤自然含水量、容量和比重。根據(jù)測得的土壤含水量算出待測土層約1米左右中的總貯水量，沉著重和比重的結(jié)果算出待測土層中孔隙總?cè)莘e，從中減去現(xiàn)有的總貯水量，求出待測土層全部孔隙為水充滿所需補充灌入的水量。為了保證土壤濕透并到達預(yù)測深度，實際灌水量將為計算出的水量的1.5倍。按下式計算測試區(qū)和保護區(qū)的灌水量：Q=H aWx dyX Sx h式中 Q灌水量m3a土壤飽和含水量%W土壤自然