杜仲提取物的亞慢性毒理學(xué)研究

1、杜仲提取物的亞慢性毒理學(xué)研究                作者：劉月鳳，陳建文，龔朋飛，袁慧  【關(guān)鍵詞】  杜仲；亞慢性毒性摘要：目的研究不同劑量的杜仲提取物水溶液對小鼠亞慢性毒性作用，為臨床應(yīng)用提供依據(jù)。方法給實(shí)驗小鼠灌服不同劑量的杜仲提取物水溶液。在實(shí)驗中、末期停藥后24 h，分別取血測定血液學(xué)、血液生化和主要臟器指標(biāo)，并作病理切片。結(jié)果灌胃中、低劑量（2.06 g/kg，0.69 g/kg）的杜仲提取物水溶液，能夠提高小鼠血紅

2、蛋白含量和紅細(xì)胞數(shù)（P0.01），對白細(xì)胞分類計數(shù)無影響，同時能夠提高小鼠體重、總蛋白及白蛋白含量（P0.01），對脾臟、肝臟、心臟、肺臟、腎、性器官指數(shù)及血清酶活性無影響（P0.05）。結(jié)論杜仲提取物對受試動物未見有明顯毒性作用。關(guān)鍵詞：杜仲；  亞慢性毒性Studies on the Subchronic Toxicology of Eucommia ulmoides ExtractAbstract：ObjectiveTo research the effect of Eucommia ulmoides extract solution on mice subchronic to

3、xicity,to provide basis for clinical use.MethodsGave experiment mice different doses of Eucommia ulmoides extract solution,in mediumterm and after administration for 24 h, blood physiological, blood chemistry,the main viscera coefficient were tested.ResultsBy gastrogavage,the middle and low dose of

4、Eucommia ulmoides extract solution improved the content hemoglobin(Hb) and red blood cell count,but had no effect on white blood cell count (P0.01). It increased mice weigt、total protein content、white protein content (P0.01) ,but had no effect on indexes of spleen, live, heart, lung, kidney, sexual

5、organ and the activation of serum enzyme (P0.05) .ConclusionEucommia ulmoides extract has no toxicity to mice.Key words:Eucommia ulmoides;  Subchronic toxicity   我國對杜仲（Eucommia ulmoides）的利用歷史悠久，近幾年我國學(xué)者在杜仲的生物學(xué)、化學(xué)成分、生理生化等方面做了許多研究，已知杜仲的化學(xué)成分主要有：（1）木脂素類；（2）環(huán)烯醚萜類；（3）酚類化合物等，唐建軍1、李家實(shí)等2認(rèn)為，杜仲中有

6、效成分對動物血壓有雙向調(diào)節(jié)功能。唐建軍等1報道：杜仲含有豐富的VE和 -胡蘿卜素，有延緩衰老、增強(qiáng)機(jī)體免疫體力作用。為了更好地開發(fā)利用杜仲，我們探索了張家界產(chǎn)杜仲提取物（以下簡稱杜仲提取物）對動物亞慢性毒性作用，并為臨床應(yīng)用提供一定的理論依據(jù)。1  材料1.1  藥品與動物杜仲提取物：主要成分：80%氯原酸，由張家界恒興生物科技公司提供。昆明種小鼠，雌雄各半，體重（20±2）g，8周齡，購于湖南中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗動物中心，批號：990218。1.2  儀器ES-C300A電子天平，湘儀天平儀器廠。MD-100自動生化分析儀器儀。美國 Leyte Drive T

7、orranle化學(xué)儀器公司生產(chǎn)。2  方法與結(jié)果2.1  小鼠最大耐受量采用最大給藥量3法，在預(yù)試基礎(chǔ)上，取小鼠100只，雌雄各半，體重（20±2）g，隨機(jī)分成5組，分次灌服不同劑量杜仲提取物水溶液0.5 ml/次，觀察7 d內(nèi)動物死亡數(shù)，同時觀察動物一般狀況及活動情況。結(jié)果見表1。動物在7 d內(nèi)均無異常反應(yīng)，考慮到杜仲的濃度以及小鼠的灌胃容積都已達(dá)到最大，因此，杜仲提取物的小鼠灌胃最大給藥量應(yīng)大于18.52 g/kg。按小鼠的平均體重為20 g，成人平均體重60 kg，成人每日用量69 g4計算，小鼠的最大耐受倍數(shù)=18.52×60/9=124（倍），

8、故認(rèn)為本藥具有較大的安全性。2.2  杜仲提取物對小鼠的亞慢性毒性實(shí)驗5，6取健康小鼠80只，體重為（20±2） g，雌雄各半，分籠顆粒飼料喂養(yǎng)，將小鼠隨機(jī)分為3個劑量組6.17，2.06，0.69 g/kg和1個對照組（生理鹽水）。各組分別以0.5 ml/次容量灌胃：1次/ d，連續(xù)8周，每周停藥2 d，期間每周稱重，并根據(jù)體重調(diào)整藥量。同時觀察動物的一般體征。實(shí)驗中、末期停藥后24 h，測定血液學(xué)指標(biāo) Hb，RBC，WBC和白細(xì)胞分類計數(shù)（DC）及血液生化指標(biāo)（TP，ALB，AST，ALT，BUN，ALP和GLu），兩次采血后分兩批處死動物，對（心、肝、脾、肺、腎、性腺

9、）主要臟器計算臟器重量系數(shù)，并做病理切片檢查。表1  小鼠灌胃給藥最大耐受量（MTD）的測定(略)         表2  小鼠平均體重變化(略)每組均與對照組比較，*表示5%的顯著水平，*表示1%的極顯著水平（下同）表3  小鼠血液學(xué)指標(biāo)(略)動物數(shù)上排為給藥后4周，下排為第8周停藥后2 d（下同）表4  小鼠血液生化指標(biāo)(略)表5  小鼠主要器官指數(shù)(略)3  討論通過MTD實(shí)驗觀察，小鼠精神狀態(tài)良好，無死亡發(fā)生，給藥后的第8天處死動物，肉眼觀察心、肝

10、、脾、肺、腎等均無異常發(fā)生，說明小鼠對杜仲提取物MTD應(yīng)大于18.52 g/kg，相當(dāng)于體重為60 kg的成人用量（69 g）的124倍。根椐有關(guān)資料7，中藥的安全性以小鼠能耐受人用量的100倍以上為安全，故認(rèn)為本品具有很大的安全性。對小鼠體重檢測表明：中、低劑量（2.06，0.69 g/kg）的杜仲提取物水溶液能極顯著提高小鼠的體重（P0.01），高濃度的杜仲提取物長時間飼喂小鼠無增重作用。王介慶等8用杜仲活性成分提取液對肉雞增重實(shí)驗中也有增重，本研究結(jié)果證實(shí)了這一點(diǎn)。血液學(xué)指標(biāo)檢測表明：中、低劑量杜仲提取物水溶液能極顯著提高小鼠的 Hb含量和RBC（P0.01）。高劑量（6.17 g/kg

11、）的杜仲提取物水溶液在第4周時顯著提高小鼠的紅細(xì)胞數(shù)、血紅蛋白含量（P0.05），第8周時則無此作用。杜仲提取物對小鼠WBC及WBC的分類計數(shù)無明顯影響。血液生化檢測結(jié)果表明：中、低劑量杜仲提取物水溶液能極顯著提高TP，ALB的含量，對血清酶AST，ALT的活性無明顯影響，這說明機(jī)體的新陳代謝加強(qiáng)，對養(yǎng)分的利用率升高，從而促進(jìn)了小鼠的生長。高劑量杜仲提取物水溶液在第4周時能提高TP，ALB含量，第8周時則無此作用，但卻提高了AST，ALT的活性，結(jié)合有關(guān)資料9，推測高劑量的杜仲提取物有可能影響了肝臟的功能，從而使機(jī)體的養(yǎng)分利用降低。BUN的含量在杜仲提取物濃度為2.06，0.69 g/kg時無

12、顯著性差異，在高劑量作用下，明顯升高，推測高劑量時有可能使腎機(jī)能受到影響。實(shí)驗期對ALP及GLu的含量無明顯影響，說明6.17 g/kg劑量以下的杜仲提取物對ALP及GLu無影響。臟器指數(shù)檢測結(jié)果表明：本品對脾臟、肺臟、心臟、腎臟、性器官指數(shù)無明顯影響，說明杜仲提取物在6.17 g/kg劑量水平以下，不損害以上臟器。以上實(shí)驗結(jié)果可知，張家界產(chǎn)杜仲提取物對受試動物無明顯毒性作用。1  唐建軍，張祿源，何鳴筱，等.杜仲的研究與應(yīng)用進(jìn)展J.植物學(xué)通報，1998，（15）6：47.2  李家實(shí)，閻玉凝.杜仲皮與杜仲葉化學(xué)成分初步研究J.中藥通報，1986，11（8）：41.3  中華人民共和國衛(wèi)生部藥政管理局.中藥新藥研究指南（藥學(xué)、藥理學(xué)、毒性學(xué)分冊）M.1994：205.4  國家藥典委員會.中國藥典，部S.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2000：131.5  陳  奇.中藥藥理研究方法學(xué)M.北京：人民衛(wèi)生出版社，1993：113.6  張  銑，劉毓谷.毒理學(xué)M.北京：北京醫(yī)科大學(xué)，中國協(xié)和醫(yī)科大