中性粒細胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運載蛋(NGAL)

1、中性粒細胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運載蛋白一、臨床適應(yīng)癥背景狀況 中性粒細胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運載蛋白（Neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL）又稱人脂質(zhì)運載蛋白2(lipocalin2,Ln2)或噬鐵蛋白(siderocalin)，是人脂質(zhì)運載蛋白家族中的一個新成員。近年來，NGAL作為一種新的腎損傷標(biāo)志物倍受關(guān)注。早期急性腎損傷、慢性腎病、心腎綜合癥等疾病血清和尿液中NGAL會顯著上升，且其水平監(jiān)測對病情輕重、療效及預(yù)后推斷具有較好的診斷價值。臨床檢測NGAL主要有免疫層析法、免疫比濁法、速率色散比濁法、乳膠增加免疫比濁法等。膠乳增加免疫比濁法是近

2、年來消滅的一種較為穩(wěn)定、精確的體液蛋白均相免疫比濁檢測方法。腎臟損傷約占全部泌尿生殖道損傷的65%左右。急性腎損傷是一組臨床綜合征， 是指突發(fā)(1-7d內(nèi))和持續(xù)(>24h)的腎功能突然下降，定義為血清肌酐至少上升0.5mg/dl 1，表現(xiàn)為氮質(zhì)血癥、水電解質(zhì)和酸堿平衡以及全身各系統(tǒng)癥狀，可伴有少尿（<400ml/24h或17ml/h）或無尿（<100ml/24h）。腎病的發(fā)病遷延難愈，時間超過三個月，病人尿液和相關(guān)的血液指標(biāo)消滅特別，腎臟病理學(xué)、影像學(xué)發(fā)覺特別，或腎臟的腎小球有效濾過率低于60%，都可統(tǒng)稱為“慢性腎病”。慢性腎病如未能準(zhǔn)時有效救治，導(dǎo)致病情惡化進展，則隨病程

3、遷延，慢性腎病患者將進展成為慢性腎功能不全、腎衰竭，最終形成尿毒癥。心腎綜合征（cardio-renalsyndrome，CRS)即心臟或腎臟對另一器官的損害不能代償時，互為因果,形成惡性循環(huán)，最終加速心臟和腎臟功能的共同損害和衰竭。其發(fā)病率、死亡率高，給社會和患者帶來沉重的負擔(dān)。目前對心腎綜合征的生疏有限，缺乏有效的治療措施，是臨床處理的難題。早期診斷急性腎功能損傷時血、尿NGAL濃度通常會快速上升，2h最為明顯( 比臨界值升十至幾百倍)，血清肌酐、尿酶等傳統(tǒng)指標(biāo)往往要在2472h才后明顯上升，因而NGAL可用于急性腎功能損傷的早期診斷。監(jiān)測病情進展NGAL還可以反映腎功能損傷的嚴(yán)

4、峻程度。評估預(yù)NGAL可作為急性腎功能損傷的預(yù)后指標(biāo)之一。爭辯發(fā)覺，慢性腎病患者的血清、尿NGAL水平顯著高于正常人群，并與腎小球濾過率呈親密負相關(guān)，而血清肌酐與腎小球濾過率的關(guān)聯(lián)程度不及NGAL。因此，慢性腎病患者NGAL水平不僅是優(yōu)于血清肌酐反映腎小球濾過率下降的指標(biāo)，更是評價慢性腎病患者腎臟損傷程度的標(biāo)志物。心腎綜合征是一種心臟和腎臟的病理生理紊亂，即由一個器官的功能不全導(dǎo)致的另一個器官的功能不全，死亡率高，共分為5 個類型。爭辯發(fā)覺血NGAL診斷1型心腎綜合征時，敏感性和特異性分別為100%、86.7%。因此，作為腎損傷的早期診斷指標(biāo)，親密監(jiān)測NGAL水平，有利于臨床醫(yī)生正確評價心腎綜

5、合征中的腎功能損傷程度，并準(zhǔn)時實行干預(yù)治療，削減并發(fā)癥的發(fā)生。3.相關(guān)的臨床或試驗室診斷方法目前臨床檢測NGAL主要有免疫層析法、免疫比濁法、速率色散比濁法、乳膠增加免疫比濁法等. 乳膠增加免疫比濁法具有操作簡潔，可在幾分鐘內(nèi)快速、精確地檢測血清蛋白含量，真實反映病情進展和評估治療效果，對于疾病的早期診斷和治療具有重要的臨床意義；不易受人為操作和外界因素干擾，檢測穩(wěn)定性和重復(fù)性都很好；能利用一般的生化分析儀進行檢測，簡潔實現(xiàn)自動化，可在各級基層醫(yī)療機構(gòu)普及和應(yīng)用等優(yōu)點。二、描述1.技術(shù)原理接受兔抗人中性粒細胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運載蛋白抗體致敏的膠乳顆粒，與待測樣本中中性粒細胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運載蛋白

6、在液相中相遇，馬上形成不溶性抗原-抗體復(fù)合物，并產(chǎn)生肯定濁度。濁度凹凸反映樣本中中性粒細胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運載蛋白濃度的凹凸，通過與同樣處理的校準(zhǔn)品比較，即可計算出樣本中中性粒細胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運載蛋白含量。2.主要原材料來源及制備方法原料名稱規(guī)格/純度性狀三羥甲基氨基甲烷（Tris）AR白色結(jié)晶顆粒兔抗人NGAL抗體致敏膠乳/乳白色懸濁液中性粒細胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運載蛋白(NGAL)/無色或淡黃色液體2.主要生產(chǎn)工藝過程定容溶解原材料質(zhì)檢混合中試稱量封口分裝入庫貼簽成品質(zhì)檢總裝外包材混合標(biāo)簽試劑瓶圖一 試劑工藝流程圖備注：1.“ ”表示關(guān)鍵工序，配制（稱量、溶解、定容）和分裝為關(guān)鍵工序，無特殊工

7、序。2.“ ” 表示物料、半成品、成品流向。3.“ ”配制（稱量、溶解、混合、定容）、分裝和封口為在十萬級凈化車間操作的工序。三、其他1. 同類產(chǎn)品在國內(nèi)外批準(zhǔn)上市狀況 目前，經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理總局（CFDA）批準(zhǔn)注冊的同類產(chǎn)品,國產(chǎn)39個，如：上?？迫A生物工程股份有限公司的中性粒細胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運載蛋白測定試劑盒(膠乳增加免疫比濁法)。進口4個，如：雅培的尿中性粒細胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運載蛋白測定試劑盒(化學(xué)發(fā)光微粒子免疫檢測法)。2.相關(guān)產(chǎn)品所接受的技術(shù)方法及臨床應(yīng)用狀況臨床檢測NGAL主要有以下方法：免疫層析法、免疫比濁法、速率色散比濁法、乳膠增加免疫比濁法等。因其方法簡便，技術(shù)純熟，

8、現(xiàn)大多接受膠乳增加免疫比濁法。本公司接受乳膠增加免疫比濁法研制生產(chǎn)的中性粒細胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運載蛋白測定試劑盒(膠乳增加免疫比濁法)檢測結(jié)果精確、精密度高、穩(wěn)定性好，且可自動化批量分析，能廣泛應(yīng)用于臨床。3. 與國內(nèi)外同類產(chǎn)品的比較內(nèi)容波音特生物九強生物方法膠乳增加免疫比濁法膠乳增加免疫比濁法預(yù)期用途本試劑盒用于人血清中中性粒細胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運載蛋白的體外定量測定。用于體外定量測定血漿或尿液中中性粒細胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運載蛋白（NGAL）的含量。原理樣本中的NGAL在甘氨酸緩沖液中與超敏化的抗NGAL乳膠顆粒試劑反應(yīng)形成免疫復(fù)合物。其濁度的變化量與樣本中NGAL濃度成函數(shù)關(guān)系。樣本中NGAL與

9、超敏化的抗NGAL乳膠顆粒試劑反應(yīng)形成免疫復(fù)合物。其濁度的變化量與樣本中NGAL濃度成函數(shù)關(guān)系。主要組成成分R1：甘氨酸緩沖液： 50mmol/L穩(wěn)定劑(Tween-20) 0.1%防腐劑（ProClin300） 0.01%R2：抗NGAL乳膠顆粒懸浮液 0.20%（W/V）防腐劑（ProClin300） 0.01%R1：甘氨酸緩沖液： 50mmol/L穩(wěn)定劑防腐劑R2：膠乳試劑：抗NGAL乳膠顆粒懸浮液 0.20%（W/V）防腐劑儲存條件及有效期本試劑盒在28密閉保存穩(wěn)定12個月；開啟后在28保存穩(wěn)定30天。1. 試劑在28密閉避光保存，有效期為12個月。2. 試劑不行冷凍，不同批號試劑不行

10、混用。3. 已經(jīng)開啟的試劑留意避開污染，在28的條件下可穩(wěn)定4周。靈敏度測定600ng/ml的被測物時，吸光度之差（A）應(yīng)在0.020.15之間。樣品濃度為600ng/ml時，其吸光度變化在0.02000.1500之間。試劑空白波長570nm，光徑10mm，測的試劑吸光度值A(chǔ)1.6.線性范圍【505000】ng/ml，在此線性范圍內(nèi)：a) 線性相關(guān)系數(shù)r0.990；b) 在【50500】ng/ml范圍內(nèi)，線性確定偏差的確定值50.0ng/ml；在【5005000】ng/ml范圍內(nèi)，線性相對偏差的確定值10.0%。在50-5000ng/ml范圍內(nèi)，線性相關(guān)系數(shù)r2應(yīng)0.99，在50-100ng/

11、ml范圍內(nèi)測定的確定偏差應(yīng)30ng/ml，在100-5000ng/ml范圍內(nèi)測定的相對偏差應(yīng)10.0%。精密度重復(fù)性CV10.0%；批間相對偏差10.0%。a) 重復(fù)性使用同一血漿樣品重復(fù)測定10次，其測定值的變異系數(shù)（CV%）應(yīng)10.0%；b) 批間差隨機抽取三批試劑盒的批間差應(yīng)10.0%。精確度相對誤差10.0%。a) 型式檢驗比對試驗：相關(guān)系數(shù)r20.95，相對偏差應(yīng)不超過±15. %；b) 出廠檢驗使用質(zhì)控品進行測定，精確性偏差應(yīng)不超過±10%。參考文獻：1. 陳佩.急性腎衰竭患者血清NGAL測定的臨床意義J.臨床醫(yī)學(xué), 2011，（5）：01.2. 龔淑文 沈水娟 何劍霧.NGAL的結(jié)構(gòu)功能及其在慢性腎病中的作用J.中國中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志.2013，（14）；354-355.3. 劉長海.急性腎損傷新的標(biāo)記物N