轉(zhuǎn)染儀原理及用途

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上一、Nucleofector 細(xì)胞核轉(zhuǎn)染技術(shù)基本工作原理  Amaxa公司的Nucleofector細(xì)胞核轉(zhuǎn)染技術(shù)是非病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染，儀器采用獨(dú)特的電轉(zhuǎn)參數(shù)（包括電流、電壓、電擊時(shí)間長短等）以內(nèi)存的優(yōu)化轉(zhuǎn)染程序名體現(xiàn)，同時(shí)該技術(shù)的核心專利是細(xì)胞類型特異性的細(xì)胞核轉(zhuǎn)染液，即針對不同的原代細(xì)胞和傳代細(xì)胞有各自特異的細(xì)胞類型特異性轉(zhuǎn)染液，為外源基因進(jìn)入細(xì)胞核提供友好界面。結(jié)合優(yōu)化轉(zhuǎn)染程序和細(xì)胞類型特異性轉(zhuǎn)染液進(jìn)行的轉(zhuǎn)染能確保目的基因轉(zhuǎn)入細(xì)胞核的效率。該技術(shù)直接將外源基因送到細(xì)胞核內(nèi)，因此轉(zhuǎn)染效率不再依賴細(xì)胞分裂，可以高效轉(zhuǎn)染分裂增殖較慢甚至于不分裂的細(xì)胞。二、Nu

2、cleofector 細(xì)胞核轉(zhuǎn)染技術(shù)的組成 Nucleofector 細(xì)胞核轉(zhuǎn)染技術(shù)由兩部分組成：     1.Nucleofector Solution轉(zhuǎn)染液  轉(zhuǎn)染過程中，細(xì)胞首先懸浮在轉(zhuǎn)染試劑中，選擇相應(yīng)的轉(zhuǎn)染程序，僅需數(shù)秒鐘，轉(zhuǎn)染結(jié)束，將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)基中培養(yǎng)、觀察。針對不同的轉(zhuǎn)染細(xì)胞都有相應(yīng)的轉(zhuǎn)染試劑，配合相應(yīng)Amaxa轉(zhuǎn)染儀的程序，使DNA直接轉(zhuǎn)入細(xì)胞核內(nèi)，轉(zhuǎn)染效率高，易操作，實(shí)驗(yàn)周期短。     2.Nucleofector Device轉(zhuǎn)染儀  Nucleofector 轉(zhuǎn)染儀的原理是基于細(xì)胞特異性的細(xì)胞核轉(zhuǎn)染液和電穿

3、孔技術(shù)的結(jié)合。細(xì)胞特異性的細(xì)胞核轉(zhuǎn)染液為外源基因進(jìn)入細(xì)胞核提供友好界面，降低轉(zhuǎn)染過程對細(xì)胞的損傷。Nucleofector 轉(zhuǎn)染技術(shù)有一般的電穿孔無法比擬地優(yōu)點(diǎn)，它具有獨(dú)特地電子參數(shù)，每一套電子參數(shù)是作為一種程序去適應(yīng)不同的細(xì)胞類型。由于電子參數(shù)是預(yù)先精心設(shè)計(jì)好的，因此操作者不用進(jìn)行電子參數(shù)的優(yōu)化、轉(zhuǎn)染條件的摸索等繁瑣的工作，您只需按動按鈕選用規(guī)定的程序即可。  三、Nucleofector 細(xì)胞核轉(zhuǎn)染技術(shù)操作步驟  整個操作過程只需四步，非常簡單、高效。 第1步：處理細(xì)胞，精確計(jì)數(shù) 第2步：混合DNA、轉(zhuǎn)染液，重懸細(xì)胞，加入轉(zhuǎn)染杯 第3步：將轉(zhuǎn)染杯放入轉(zhuǎn)染儀，按鍵選擇相應(yīng)

4、程序，按"start"鍵開始轉(zhuǎn)染，10秒鐘左右 第4步：取出細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng) 四、Nucleofector 細(xì)胞核轉(zhuǎn)染技術(shù)應(yīng)用  1、免疫學(xué)/血液學(xué)：Amaxa公司的細(xì)胞轉(zhuǎn)染儀可以轉(zhuǎn)染原代T、B細(xì)胞、免疫細(xì)胞系如，K562，JURKAT或白血病細(xì)胞如CLL或AML等細(xì)胞及單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞或郎格罕氏細(xì)胞、單核細(xì)胞派生或CD34陽性細(xì)胞派生的樹突狀細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)方案也已開發(fā)出來。Amaxa公司現(xiàn)在可以提供以下轉(zhuǎn)染試劑盒：Human B Cells、Human T Cells、Human CD34 Cells、K562 CellsDMSZ）、JURKAT Cells。 2、心

5、血管研究：借助于Nucleofector技術(shù)，可進(jìn)行成體干細(xì)胞、CD34陽性細(xì)胞、CD34陽性細(xì)胞派生的干細(xì)胞和間葉干細(xì)胞（MSC）等的轉(zhuǎn)染。Amaxa公司現(xiàn)在可以提供一下轉(zhuǎn)染試劑盒：HUVECs（Human Umbilical Vein Endothelial Cell）、HCAECs、Human AoSMCs、Human CD34 Cells。 3、皮膚醫(yī)學(xué)和組織工程：Nucleofector? 轉(zhuǎn)染技術(shù)能轉(zhuǎn)染人的皮膚纖維原細(xì)胞或人的表皮黑色素細(xì)胞。Amaxa公司現(xiàn)在可以提供一下轉(zhuǎn)染試劑盒：Human Dermal Fibroblasts（轉(zhuǎn)染率>70）、NHEMs。 4、腫瘤研究：

6、 Amaxa公司現(xiàn)在可以提供一下轉(zhuǎn)染試劑盒：HUVECs、NHEms、Human Dendritic Cells、Commonly used cellline（CHO-K1（ATCC）、CHO-K1（DSMZ）、COS-7（DSMZ）、HEK293（ATCC）、293HEK（DSMZ）、HeLa（DSMZ）、HepG2（ATCC）、NIH3T3（DSMZ）等。 5、神經(jīng)生物學(xué)：可以轉(zhuǎn)染原代神經(jīng)細(xì)胞和細(xì)胞系。目前，神經(jīng)干細(xì)胞和星細(xì)胞等的實(shí)驗(yàn)方案正在開發(fā)中。Amaxa公司現(xiàn)可以提供一下轉(zhuǎn)染試劑盒：Mouse neurons Chicken neurons PC-12等。    

7、 五、AMAXA細(xì)胞核轉(zhuǎn)染儀( Nucleofector)技術(shù)參數(shù)及物理參數(shù)  1、電轉(zhuǎn)參數(shù) 電流16 VA/fuse 0.315A 儀器采用獨(dú)特的電轉(zhuǎn)參數(shù)（包括電流、電壓、電擊時(shí)間長短等）以內(nèi)存的優(yōu)化轉(zhuǎn)染程序名體現(xiàn)。 電壓230VAC+10%/-20%  電擊時(shí)間長短根據(jù)選用程序定時(shí)間長短 2、核轉(zhuǎn)染液 針對不同的原代細(xì)胞和傳代細(xì)胞有各自特異的細(xì)胞類型特異性轉(zhuǎn)染液，為外源基因進(jìn)入細(xì)胞核提供友好界面。 3、工作頻率 50-60Hz結(jié)合優(yōu)化轉(zhuǎn)染程序和細(xì)胞類型特異性轉(zhuǎn)染液進(jìn)行的轉(zhuǎn)染，在50-60Hz的工作頻率中，能確保目的基因轉(zhuǎn)入細(xì)胞核的效率。 4、體積重量 30×2

8、3×11cm體積小，且輕便，攜帶方便。 2.5kg 5、轉(zhuǎn)染方式 直接把外源基因?qū)爰?xì)胞核 非病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染 快捷、迅速的轉(zhuǎn)染，能在數(shù)小時(shí)內(nèi)完成從實(shí)驗(yàn)操作到結(jié)果分析全過程 6、轉(zhuǎn)染效率 高效率的轉(zhuǎn)染其它方法難以奏效的傳代細(xì)胞，在神經(jīng)生物學(xué)、腫瘤研究、免疫學(xué)、組織工程學(xué)及心血管疾病研究領(lǐng)域中倍受青睞 大多數(shù)細(xì)胞原代細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率為50-70 某些原代細(xì)胞，如人表皮纖維原細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率超過90 7、轉(zhuǎn)染儀突出優(yōu)勢 世界唯一直接把外源基因?qū)爰?xì)胞核的革命性轉(zhuǎn)染技術(shù) 世界唯一能高效轉(zhuǎn)染原代細(xì)胞和一般方法難以轉(zhuǎn)染細(xì)胞，如神經(jīng)細(xì)胞、血液細(xì)胞的非病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù) 世界唯一能在數(shù)小時(shí)內(nèi)完成從實(shí)驗(yàn)操作到結(jié)果結(jié)果分析全過程的轉(zhuǎn)染技術(shù) 創(chuàng)新的全球共享細(xì)胞優(yōu)化轉(zhuǎn)染程序數(shù)據(jù)庫 高效轉(zhuǎn)染質(zhì)粒DNA，siRNA和Oligo。 8、轉(zhuǎn)染儀基本技術(shù)原理 非病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)，儀器采用獨(dú)特的電轉(zhuǎn)參數(shù)（包括電流、電壓、電擊時(shí)間長短等）以內(nèi)存的優(yōu)化轉(zhuǎn)染程序名體現(xiàn)，同時(shí)該技術(shù)的核心專利是細(xì)胞類型特異性的細(xì)胞核轉(zhuǎn)染液，即針對不同的原代細(xì)胞和傳代細(xì)胞有