靜注人免疫球蛋白中白喉抗體效價(jià)對(duì)其Fc段生物學(xué)活性檢測結(jié)果影響的分析.docx

1、論著靜注人免疫球蛋白中白喉抗體效價(jià)對(duì)其Fc段生物學(xué)活性檢測結(jié)果影響的分析張繼鵬，劉曉，李青，張璘，何彥林蘭州生物制品研究所有限責(zé)任公司甘肅省疫苗工程技術(shù)研究中心，甘甫蘭州730046摘要：目的分析靜注人免疫球蛋白(WIG)中白喉抗體效價(jià)對(duì)其Fc段生物學(xué)活性檢測的影響。方法檢測20批IVIG的白喉抗體效價(jià)水平和Fc段生物學(xué)活性結(jié)果,進(jìn)一步探討白喉抗體效價(jià)與Fc段生物學(xué)活性的關(guān)系。結(jié)果20批IVIG中白喉抗體效價(jià)水平均符合中國藥典的要求，在360HAU/g之間，其中有兩批IV1G的白喉抗體效價(jià)水平相對(duì)較高，其他18批IVIG的白喉抗體效價(jià)水平變化趨勢不明顯。20批IVIG的Fc段生物學(xué)活性均較高，

2、在60%-140%之間。白喉抗體效價(jià)水平高者.其Fc段生物學(xué)活性并非高，反之亦然。結(jié)論IVIG的Fc段生物學(xué)活性與其白喉抗體效價(jià)水平無明顯的相關(guān)性。關(guān)鍵詞：靜注人免疫球蛋白(PH4.0)；Fc段生物學(xué)活性；白喉抗體效價(jià)中圖分類號(hào)：R392.33TQ464.56文獻(xiàn)標(biāo)志碼：ADOI：10.13309/ki.pmi.2014.04.013AnalysisoneffectfromtitreofdiphtheriaantibodycontaininginIVIGindetectingforbiologicalpropertiesofFcfragmentofIVIGZHANGJi-peng,LIUXia

3、o,LIQing,ZHANGLin,HEYan-linLanzhouInstituteofBiologicalProductCo.Ltd.CenterforGansuProvincialVaccineEngineeringResearch,Ijanzhou730046,GansuProuince,ChinaCorrespondingauthorLIUXiao：,E-maill:boylx006Abstract:ObjectiveToanalyzetheeffectfromtitreofdiphtheriaantibodycontaininginIVIG(Humanimmuglobulin(pH

4、4.0)forintravenousinjection)indetectingforbiologicalpropertiesofFcfragmentofIVIG.MethodsThetitreofdiphtheriaantibodyandthebiologicalpropertiesofFcfragmentfrom20batchesofIVIGwereanalyzed,andinvestigationwascarriedoutontherelationshipbetweentitreofdiphtheriaantibodyandbiologicalpropertiesofFcfragment.

5、ResultsDiphtheriaantibodytitrefrom20batchesofIVIGisinarange3to60HAU/g,basedonrelatedrequirements,diphtheriaantibodytitrein2batchesofIVIGisgreaterthanthatofotherbatches.BiologicalpropertiesofFcfragmentisinahigherrangebetween60%and140%.ConclusionBiologicalpropertiesofFcfragmentisnotcorrelatedwithtitre

6、ofdiphtheriaantibodycontainimginIVIG.Keywords:Humanimmunoglobulin(pH4.0)forintravenousinjection(IVIG);Fcfragmentbiologicproperties；Titreofdiphtheriaantibody靜注人免疫球蛋白Humanimmunoglobulins(pH4.O)forintravenousinjection,IVIG是一種安全性較好的血液制品，主要用于抗體置換和免疫調(diào)節(jié)，可以治療原發(fā)性免疫球蛋白缺陷癥、細(xì)菌感染、病毒感染、血液系統(tǒng)疾病、川崎病等，臨床效果令人滿意。IVIG的臨

7、床療效與其生物學(xué)功能密不可分,IgG分子的各個(gè)結(jié)構(gòu)域在機(jī)體的免疫反應(yīng)中均發(fā)揮作者簡介：張繼鵬，醫(yī)學(xué)生物學(xué)工程師，主要從事血液制品生產(chǎn)工作。通訊作者:劉曉,E-maill:boybd006著重要作用。因此.IVIG的質(zhì)量控制應(yīng)注意對(duì)IgG分子完整性的檢測。IgG的結(jié)構(gòu)域主要包括Fab和Fc段。IVIGFc段能活化補(bǔ)體系統(tǒng),從而有效地殺傷病原體是IVIG非常重要的生物學(xué)功能，在臨床治療中占據(jù)重要的地位。因此VIGFc能否有效地激活補(bǔ)體可作為衡量IV1G制品質(zhì)量的重要質(zhì)控指標(biāo)。國外已建立了較為成熟的IVIG生物學(xué)功能檢測方法。中華人民共和國藥典三部(2010版)也已介紹了Fc生物學(xué)功能檢測方法。藥典

8、推薦IVIG的Fc段生物學(xué)活性檢測依據(jù)激活補(bǔ)體經(jīng)典途徑的原理，使用白喉類毒素抗原致敏紅細(xì)胞與IVIG結(jié)合，此時(shí)IVIC中白喉抗體與白喉類毒素結(jié)合后形成的抗原抗體復(fù)合物，隨后加入適量補(bǔ)體即可發(fā)生補(bǔ)體反應(yīng)，從而il算IVIG激活補(bǔ)體的指數(shù)。由于該方法中推薦使用的抗原為白喉類帝素，為觀察IVIG中白喉抗體效價(jià)能否對(duì)其FC段生物學(xué)活性檢測結(jié)果產(chǎn)生影響，實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步分析rIVIC中白喉抗體水平、IVIG的"段生物學(xué)活性及白喉抗體水平對(duì)Fc段生物學(xué)活性的影響。1材料和方法1.1材料實(shí)驗(yàn)用20批IVIG及15批不同白喉抗體效價(jià)的IVIG,均由蘭州生物制品研究所有限責(zé)任公司血液制劑室提供1.2主要試劑

9、與儀器磷酸狙二鈉、磷酸二氫鈉、敘化鈉、敏化鈣、氛化鎂'狙氧化鈉、單寧酸（糅酸）和敏化銘均為分析純，購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；巴比安鈉購自Signia公司；牛血清白蛋白購自上海伯奧生物科技有限公司；白喉類毒素由蘭州生物制品研究所有限責(zé)任公司菌苗一室提供;人。型血為定西蘭生單采血漿有限公司岷其站提供;豚鼠補(bǔ)體由蘭州生物制品研究所有限赍任公司血液制劑室自行采集制備,效價(jià)為150CHso/mLjU-2001型紫外分光光度計(jì)為HITACHI公司生產(chǎn);ModelJ-6M型離心機(jī)購flBeckman公司、HZS.H型恒溫水浴振蕩器購自哈爾濱市東聯(lián)電子技術(shù)開發(fā)有限公司。1.3白喉抗體效價(jià)及Fc段生

10、物學(xué)活性檢測方法按照中華人民共和國藥典三部（2010版）人免疫球蛋白中白喉抗體效價(jià)和"段生物學(xué)活性檢測方法進(jìn)行檢測1.4探討白喉抗體效價(jià)對(duì)Fc段生物學(xué)活性檢測的影響分析20批IVIC的白喉抗體效價(jià)和Fc段活性結(jié)果，觀察兩者相關(guān)性。另外，將15批不同白喉抗體效價(jià)的IV【G,按照白喉抗體效價(jià)高低分為60.9、30.5、15.1、7.4和3.6HAU/g5組不同效價(jià)水平，分別檢測其Fc段生物學(xué)活性，進(jìn)一步分析白喉抗體效價(jià)與Fc段生物學(xué)活性之間的關(guān)系。2結(jié)果2.120批【V1G的白喉抗體效價(jià)水平20批IVIG白喉抗體效價(jià)趨勢分布結(jié)果顯示,20批IVIG中白喉抗體效價(jià)水平均符合中華人民共和國藥

11、典三部（201（）版）要求，在360HAU/g之間;其中2批1VIG的白喉抗體效價(jià)水平相對(duì)較高，其他18批IVIG的白喉抗體效價(jià)水平變化的勢不明顯（圖1）。圖120批IVIG中白喉抗體效價(jià)水*的趨勢圖Fig.1'Hietrendsfromdiphtheriauntilxxlylilrrin20IxatchesIVIG星裝*邪警-Z2.220批IVIG的Fc段生物學(xué)活性結(jié)果20批IVIG的Fc段生物學(xué)活性趨勢分布結(jié)果顯示，IVIG的Fc段生物學(xué)活性均較高，在60%-140%之間（圖2）。2.3白喉抗體效價(jià)對(duì)F（段生物學(xué)活性檢測結(jié)果影響的分析5組不同水平白喉抗體效價(jià)IVIG的Fc段生物學(xué)活

12、性檢測結(jié)果顯示，白喉抗體效價(jià)水平高者，其的段生物學(xué)活性并非高，不呈正比關(guān)系（表I和圖3）。這說明Fc段生物學(xué)活性與IVIG中白喉抗體效價(jià)水平無明顯的相關(guān)性。0',I*1234567891011121314151617181920批次8910II批次1213141516圖220批IV1G的"段生物學(xué)活性情況的趨勢圖Fig.2ThetrendsfrombiologicalpropertiesofFcfragmentof20batchesofIVI(»表15組不同水平白喉抗體效價(jià)IV1G的R段生物學(xué)活性檢測結(jié)果Tab.1Thebiol<>gi<*alpr

13、oprrliesofFcfragmentinfivegroupsofdiphlhrriaanlilMnlywithdifferentlevels白喉抗體效價(jià)(HAU/g)R段生物學(xué)活性()1160.9682231.877330.292429.4843514.892614.562715.292815.193915.6831015.11144II7.465127.4795133.6100143.8112153.598(3H喉抗體效價(jià)(HAU/g).史段生物學(xué)活性()圖320批IVIG白喉抗體效價(jià)與Ec段生物學(xué)活性分析Fig.3ThebiologicalpropertiesofFcfragmenta

14、ndthetilreofdiphtheriaantibodyin20batchesof1GIV3討論中華人民共和國藥典三部(2010版)和歐洲藥典推薦的人免疫球蛋白Fc段生物學(xué)活性測定方法一致，均是依據(jù)激活補(bǔ)體經(jīng)典途徑的原理來檢測,此實(shí)驗(yàn)法干擾少,操作相對(duì)簡單，結(jié)果準(zhǔn)確，但是卻受到很多因素的影響,例如抗原種類及效價(jià)、補(bǔ)體反應(yīng)條件、供試品中抗體效價(jià)等。在檢測1VIG的Fc段生物學(xué)活性中采用的抗原為白喉類毒素，由于其特異抗原的抗體滴度不同、親合力不同，將導(dǎo)致Fc介導(dǎo)不同的生物反應(yīng)。因此，實(shí)驗(yàn)中首先對(duì)20批IVIG的白喉抗體效價(jià)水平進(jìn)行了分析，結(jié)果顯示20批IVIG中白喉抗體效價(jià)水平均符合中國藥典要

15、求(360HAU/g之間)，其中有2批IVIG的白喉抗體效價(jià)水平相對(duì)較高，其他18批IVIG的白喉抗體效價(jià)水平變化趨勢不明顯。IVIG中白喉抗體效價(jià)水平主要與供漿者血漿中白喉抗體效價(jià)的水平有關(guān)。周海云等分析了不同來源血漿對(duì)靜注人免疫球蛋白中抗白喉抗體效價(jià)的影響，認(rèn)為不同地區(qū)來源的血漿白喉抗體效價(jià)有差異但不明顯，均符合國家規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)實(shí)驗(yàn)中20批IVIG的Fc段生物學(xué)活性進(jìn)行分析表明JVIG的Fc段生物學(xué)活性較高，均在60%-140%之間，說明其生產(chǎn)工藝較為穩(wěn)定。為進(jìn)一步探討IVIG中白喉抗體效價(jià)對(duì)Fc段生物學(xué)活性的影響，將15批不同白喉抗體效價(jià)水平的IVIG分為5蛆,分別對(duì)5組IVIG進(jìn)行F

16、c段生物學(xué)活性檢測，結(jié)果顯示，白喉抗體效價(jià)水平高者，其Fc段生物學(xué)活性并非高，不呈正比關(guān)系，反之亦然。說明Fc段生物學(xué)活性與IVTG中白喉抗體效價(jià)水平無明顯的相關(guān)性。這主要是由于血液制品生產(chǎn)過程中,需將來源于不同采集地區(qū)的原料血漿進(jìn)行混合，不同批的混合血漿中白喉抗體效價(jià)水平差異并不明顯。對(duì)于實(shí)驗(yàn)結(jié)果中白喉抗體效價(jià)高的IVIG,其Fc段生物學(xué)活性反而低，可能與IVIG的生產(chǎn)工藝和儲(chǔ)存時(shí)間有關(guān),該影響因素還有待進(jìn)一步的探討。參考文獻(xiàn)1JoliesS,SewellWA,MisbahSA.ClinicalusesofintravenousimmunoglobulinJ.ClinExpImmunol,2

17、005,142(1)：1-11.2_RadosevichM,BumoufT.IntravenousimmunoglobulinG：trendsinproductionmethods,qualitycontrolandqualityassuranceJ.VoxSang,2010,98(l)：12-28.3 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典(三部)SJ.北京：中國醫(yī)藥科技出版社,2010.4 周海云，張安山,何彥林，等.不同來源血漿對(duì)靜注人免疫球蛋白中抗-HBs、白喉抗體效價(jià)的影響J.微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展,2008,36(1):40-42.收稿日期：2014-03-18修回日期：2014-05-0

18、8編輯:王祖森公念公公公公公公公公分公0公公公公分公公公會(huì)會(huì)會(huì)公分公公公公公公公公分公公公分公公公公公公公分分公公公.文摘*從516名中國病人分離的乙肝病毒的完整基因組分析作者研究了具有不同臨床征象的病人其乙肝病毒突變的特征及臨床意義。在這項(xiàng)研究中總共登記了516名病人，包括130名病人患急性乙型肝炎，239名病人患慢性乙型肝炎以及146名病人患慢急性肝功能衰竭。通過對(duì)病毒的全基因組進(jìn)行序列分析而分析HBV的基因型和突變?；蛐虰2、C1、C2和D1分別占22.2%J.6%.74.6%和1.6%。在那些患急性乙型肝炎的患者中，其基因型B的出現(xiàn)頻率要比患慢性乙肝和慢急性肝功衰竭的病人中的高。測定了缺失突變，主要發(fā)生在前S1區(qū)和前S2區(qū)，對(duì)于急性乙肝病人、慢性乙肝病人以及慢急性肝功衰竭病人而言，其缺失率分別為3.8%、19.7%和24.7%0在基礎(chǔ)核心啟動(dòng)子區(qū)域發(fā)生的T53C(preSlF53L)、G1613A(polR841K)、G1775A和A1762T+G1764A的點(diǎn)突變的發(fā)生率，以及在前核區(qū)域的G1896A和G1899A點(diǎn)突變的發(fā)生率，及核