(完整word版)發(fā)酵與酶實驗考試題目111

1、1 培養(yǎng)基配好后，為什么必須馬上進行高壓蒸汽滅菌？如不能及時滅菌，應將培養(yǎng)基暫時放至何處？為什么？答：如果不馬上進行高壓蒸汽滅菌的話， 在配制培養(yǎng)基過程中落入培養(yǎng)基中的微生物，即我們說的雜菌就會開始利用培養(yǎng)基中的營養(yǎng)物質開始生長繁殖， 這是我們不想要的，因為這就造成了培養(yǎng)基的污染。 所以我們一般要在配制完培養(yǎng)基之后馬上滅菌。暫放在冰箱里，低溫保存，延緩了雜菌的生命活動。2. 在發(fā)酵罐使館滅菌結束時，為什么在溫度沒有降到常溫就要通入無菌氣體？答：通常降到常溫容易再次被染菌 滅菌不徹底3.在分批發(fā)酵中， 單細胞微生物的生長一般經歷那四個時期？各個時期的特點有什么？其中，第一個期是什么原因造成的？答

2、：延滯期、對數(shù)生長期、穩(wěn)定期、衰亡期延滯期的特點是：分裂遲緩，代謝活躍。對數(shù)生長期的特點是：細菌數(shù)量以幾何級數(shù)增加。穩(wěn)定期的特點是：新增殖的細胞數(shù)與老細胞的死亡數(shù)幾乎相等。衰亡期的特點是；活菌數(shù)按幾何級數(shù)下降。延滯期出現(xiàn)的原因， 可能是為了重新調整代謝。 當細胞接種到新的環(huán)境后， 需要重新合成必需的酶類、 輔酶或某些中間代謝產物， 以適應新的環(huán)境而出現(xiàn)生長的延滯期。4. 在發(fā)酵液糖的測定中，我們配置了什么顯色液，如何配制，簡述配制過程？答：將 50ml 濃硫酸緩緩加入 10ml 水中冷卻至室溫，加入 0.6g 苯酚晶體攪拌使其溶解配成顯色液。5. 乙醇沉淀純化蛋白質的原理是什么？操作過程中應該

3、注意什么問題？據(jù)你所知還有其他粗分離蛋白質的方法嗎？答： 1、有機溶劑能降低溶液的介電常數(shù)，增加蛋白質分子上不同電荷的引力，使蛋白質溶解度下降； 2、有機溶劑與水作用，能破壞蛋白質的水化膜，使蛋白質的溶解度下降。此法分辨力比鹽析高，但蛋白質較易變性，應在低溫下進行。鹽析法、等電點沉淀法6. 簡要說明本實驗固定化蔗糖酶原理和步驟？答：原理：通過物理或化學的方法，將水溶性的酶與水不溶性載體結合，使酶固定在載體上，并在一定的空間范1. 殼聚糖載體的制備及戊二醛的偶聯(lián)（ 1）稱取 3 g 殼聚糖溶于 98 mL蒸餾水中，攪拌均勻，再滴加2 mL冰醋酸，攪拌至均勻的粘稠狀。（ 2）稱取 8 g NaOH

4、 置大燒杯中，加入 180 mL 蒸餾水及 20 mL 甲醇。（ 3）將拔出推塞的注射器架在鐵架臺上，倒入粘稠狀的殼聚糖溶液，使殼聚糖溶液從 20 cm 高的注射器出口滴入大燒杯中，以制備殼聚糖微球載體。（ 4）殼聚糖溶液滴加完畢后，靜止片刻，待微球完全沉入燒杯底部時，反復水洗多次至 pH 值中性，瀝干水分。加入 1%戊二醛溶液 100 mL，靜置 2 h ，使戊二醛偶聯(lián)于殼聚糖載體上。2. 固定化酶的制備（ 1）將靜置 2 h 后的殼聚糖微球載體中的戊二醛溶液倒掉，再用蒸餾水洗滌5次，以除去多余的戊二醛。（ 2）將實驗一純化得到的酵母蔗糖酶酶液1 mL 用蒸餾水稀釋至100 mL, 與偶聯(lián)戊

5、二醛的殼聚糖載體混合， 靜置偶聯(lián)過夜。圍內進行催化反應的酶稱為固定化酶。7. 人們進行酶的化學修飾的一般目的是什么？本實驗的化學修飾劑對蔗糖酶的修飾作用呈現(xiàn)什么樣的效果？從實驗結果你能得出什么樣的結論？答：目的： 1. 研究酶的結構與功能的關系。 2. 認為改變天然酶的某些性質，擴大酶的應用范圍。 提高酶的生物活性增強酶的穩(wěn)定性消除抗原性產生新的催化能力N-溴代琥珀酰亞胺（NBS）能特異地修飾蛋白質分子中色氨酸殘基的吲哚基團，使吲哚基氧化成羥吲哚衍生物， 從而改變吲哚基的化學性質。 若色氨酸殘基是酶活性中心的必需基團， 那么經 NBS修飾后，酶活性喪失的程度與修飾劑的濃度有化學計量關系，且在底

6、物存在的情況下，修飾劑 NBS不影響酶的活力。不同濃度的 NBS對酵母蔗糖酶活力影響不同。8. 你認為該如何評價一種固定化酶的效果？分別測游離酶、固定化酶以及殘留酶液的酶活力活力回收 =固定化酶總活力數(shù)×100% 、相對活力溶液酶總活力數(shù)固定化酶總活力數(shù)=×100%9. 進行溫度對酶活性影響測定時，操作上有什么要注意的？答：順序為：底物、控制溫度、酶，低溫不會導致酶失活，只是酶活性極低甚至可以為零，但溫度升高仍可復性，也就是說一旦先加酶，后加常溫的底物，在低溫下的酶在常溫的底物作用下就可以復性，仍可催化淀粉水解。10. 酶學性質研究一般要做哪些相關參數(shù)的測定？答：酶活力的測定、酶比活力、酶活回收率、酶比活力提高比也就是純化倍11. 回收率和純化倍數(shù)怎樣計算得到？答：總活力的回收率純化后總活力 / 純化前總活力 *100%。純化倍數(shù) =酶制劑的比活力 / 抽提液的比活力12. 假設測定酶活時得到的吸光值大于 1，將如何改進實驗，使得