臨床檢驗(yàn)儀器習(xí)題及參考答案(1)

1、一、名詞解釋：1 .靈敏度：檢驗(yàn)儀器在穩(wěn)態(tài)下輸出量變化與輸入量變化之比,即檢驗(yàn)儀器對單位濃度或質(zhì)量的被檢物質(zhì)通過檢測器時所產(chǎn)生的響應(yīng)信號值變化大小的反響水平,它反映儀器能夠檢測的最小被測量.2 .誤差：當(dāng)對某物理量進(jìn)行檢測時,所測得的數(shù)值與標(biāo)稱值即真值之間的差異稱為誤差,誤差的大小反映了測量值對真值的偏離程度.3 .噪音：檢測儀器在沒有參加被檢驗(yàn)物品即輸入為零時,儀器輸出信號的波動或變化范圍即為噪音.4 .最小檢測量：檢測儀器能確切反映的最小物質(zhì)含量.最小檢測量也可以用含量所轉(zhuǎn)換的物理量來表示.如含量轉(zhuǎn)換成電阻的變化,此時最小檢測量就可以說成是能確切反響的最小電阻量的變化量了.5 .精度：對檢

2、測可靠度或檢測結(jié)果可靠度的一種評價,是指檢測值偏離真值的程度.精度是一個定性的概念,其上下是用誤差來衡量的,誤差大那么精度低,誤差小那么精度高.6 .可靠性：儀器在規(guī)定的時期內(nèi)及在保持其運(yùn)行指標(biāo)不超限的情況下執(zhí)行其功能的水平.它是反映儀器是否耐用的一項(xiàng)綜合指標(biāo).7 .重復(fù)性：在同一檢測方法和檢測條件儀器、設(shè)備、檢測者、環(huán)境條件下,在一個不太長的時間間隔內(nèi),連續(xù)屢次檢測同一參數(shù),所得到的數(shù)據(jù)的分散程度.重復(fù)性與精密度密切相關(guān),重復(fù)性反映一臺設(shè)備固有誤差的精密度.8 .分辨率：儀器設(shè)備能感覺、識別或探測的輸入量或能產(chǎn)生、能響應(yīng)的輸出量的最小值.9 .測量范圍：在允許誤差極限內(nèi)儀器所能測出的被檢測值

3、的范圍.10 .線性范圍：輸入與輸出成正比例的范圍.也就是反響曲線呈直線的那一段所對應(yīng)的物質(zhì)含量范圍二、簡做題：3.臨床檢驗(yàn)儀器具有哪些特點(diǎn)？答：臨床檢驗(yàn)儀器具有以下特點(diǎn)：結(jié)構(gòu)復(fù)雜、涉及的技術(shù)領(lǐng)域廣、技術(shù)先進(jìn)、精度高、對使用環(huán)境要求嚴(yán)格.5 .簡述臨床檢驗(yàn)儀器的開展趨勢.答：由計(jì)算機(jī)技術(shù)和通信技術(shù)相結(jié)合而開展的計(jì)算機(jī)網(wǎng)絡(luò),形成了多用戶共享高精度、高速度、多功能、高可靠性的檢驗(yàn)儀器；臨床檢驗(yàn)儀器正朝著集大型機(jī)的處理水平和小型機(jī)的應(yīng)變能力于一身,超小型、多功能、低價格、更新?lián)Q代頻繁、床邊和家庭型的方向邁進(jìn)；模塊式設(shè)計(jì)形成一個高質(zhì)量多功能的檢驗(yàn)系統(tǒng),實(shí)現(xiàn)了一機(jī)多用；生物傳感器和芯片的應(yīng)用將使檢驗(yàn)儀器

4、小型化,靈活多用,相應(yīng)的檢驗(yàn)儀器正在不斷出現(xiàn)和開展；專家系統(tǒng)技術(shù)更趨完善,使臨床檢驗(yàn)儀器具有更高級的智能；儀器更機(jī)器人化；自動化水平更高.檢驗(yàn)結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)化；儀器更個性化；儀器小型便攜化.6 .臨床檢驗(yàn)儀器常用的性能指標(biāo)有哪些？答：一個優(yōu)良的檢驗(yàn)儀器應(yīng)具有的性能指標(biāo)有：靈敏度好、精度高；噪音、誤差??；分辨率高,可靠性、重復(fù)性好；響應(yīng)迅速；線性范圍寬和穩(wěn)定性好.7 .臨床檢驗(yàn)儀器有哪些主要部件？答：通常,臨床檢驗(yàn)儀器有取樣裝置、預(yù)處理系統(tǒng)、別離裝置、檢測器、信號處理系統(tǒng)、顯示裝置、補(bǔ)償裝置、輔助裝置、樣品前處理系統(tǒng)等主要部件.8 .臨床檢驗(yàn)儀器的維護(hù)應(yīng)從哪幾個方面考慮？答：使用前,操作人員應(yīng)認(rèn)真閱讀

5、儀器操作說明書,熟悉儀器性能,嚴(yán)格根據(jù)操作規(guī)程掌握正確的使用方法,才能使儀器始終保持在良好運(yùn)行狀態(tài)；應(yīng)該有一個符合檢驗(yàn)儀器使用標(biāo)準(zhǔn)的環(huán)境；應(yīng)有良好的供電以保證檢驗(yàn)儀器的精度和穩(wěn)定性；應(yīng)當(dāng)根據(jù)儀器說明書提供的方法和標(biāo)準(zhǔn)圖譜對儀器定期進(jìn)行校驗(yàn)；應(yīng)該認(rèn)真做好儀器的工作記錄.一、名詞解釋1 .光學(xué)顯微鏡：簡稱光鏡,是利用日光照明將小物形成放大影像的精密光學(xué)儀器,由光學(xué)系統(tǒng)、機(jī)械裝置和照明系統(tǒng)三局部組成.光學(xué)系統(tǒng)由物鏡和目鏡組成,其核心是物鏡和目鏡中的兩組透鏡,其放大成像的機(jī)理是先由物鏡形成放大的實(shí)像,再由目鏡進(jìn)一步放大成虛像,最后在人眼中形成實(shí)像.2 .熒光顯微鏡：熒光顯微鏡是以紫外線為光源來激發(fā)生物

6、標(biāo)本中的熒光物質(zhì),產(chǎn)生能觀察到的各種顏色熒光的一種光學(xué)顯微鏡.3 .相襯顯微鏡：是把透過標(biāo)本的可見光的光程差變成振幅差,從而提升了各種結(jié)構(gòu)間的比照度,用于觀察活細(xì)胞和未染色的標(biāo)本的一種特殊顯微鏡.4 .暗視野顯微鏡：是利用特殊的聚光鏡使照明光線斜射而不能直接進(jìn)入物鏡,形成暗視野,那些經(jīng)過標(biāo)本散射的光線才能進(jìn)入物鏡放大,在黑暗的背景中呈現(xiàn)標(biāo)本明亮的輪廓的顯微鏡.5 .偏光顯微鏡：是利用光的偏振特性,對具有雙折射性即可以使一束入射光經(jīng)折射后分成兩束折射光的晶態(tài)、液晶態(tài)物質(zhì)進(jìn)行觀察和研究的重要光學(xué)儀器.6 .激光掃描共聚焦顯微鏡：以單色激光作為光源的一種特殊光學(xué)顯微鏡.具物鏡和聚光鏡互相共焦點(diǎn),使得

7、只有從標(biāo)本焦面發(fā)出的光線聚焦成像,而焦面以外的漫射光不參加成像,改變焦平面,可獲得細(xì)胞或原標(biāo)本不同層次的圖像,從而得到樣品的三維結(jié)構(gòu)圖像.7 .倒置顯微鏡：當(dāng)觀測活體標(biāo)本時,需要把照明系統(tǒng)放在載物臺及標(biāo)本之上,而把物鏡組放在載物臺器皿下進(jìn)行放大成像的顯微鏡,又稱生物培養(yǎng)顯微鏡.8 .紫外光顯微鏡：使用紫外光源進(jìn)行照明的顯微鏡.9 .電子顯微鏡：簡稱電鏡,是利用波長很短的電子束作為照明光源,通過電子流對細(xì)胞樣品的透射或反射及電磁透鏡的多級放大而在熒光屏上成像的大型精密儀器.10 .透射電子顯微鏡：簡稱透射電鏡,是利用電子槍發(fā)出的高速電子束照射超薄的生物樣品,收集透射電子流經(jīng)電磁透鏡的多級放大后成

8、像的儀器.11 .掃描電子顯微鏡：簡稱掃描電鏡,是一種主要用于觀察組織細(xì)胞外表或細(xì)胞內(nèi)斷面的電鏡.其工作原理是從電子槍發(fā)出的電子束經(jīng)電磁聚光鏡會聚成極細(xì)的電子探針,并在細(xì)胞樣品外表逐點(diǎn)掃描,收集樣品外表產(chǎn)生的二次電子再經(jīng)轉(zhuǎn)換、放大,最終在熒光屏同步掃描成像.12 .超高壓電子顯微鏡：生成電子束的電壓超過500kV的電子顯微鏡.13 .掃描隧道電子顯微鏡：當(dāng)原子尺度的針尖在不到一個納米的高度上掃描樣品時,此處電子云重疊,外加電壓2mV2V,針尖與樣品之間產(chǎn)生隧道效應(yīng)而有電子逸出,形成隧道電流,通過隧道電流獲取顯微圖像的電子顯微鏡.14 .分辨率：也稱分辨本領(lǐng),指分辨物體細(xì)微結(jié)構(gòu)的的水平.15 .

9、放大率：或稱放大倍數(shù)是指顯微鏡經(jīng)屢次成像后最終所成放大的像的大小相對于原物體大小的比值.16 .數(shù)值孔徑：又叫鏡口率,是物體與物鏡間媒質(zhì)的折射率n與物鏡孔徑角的一半B正弦值的乘積.17 .顯微攝影術(shù)：是利用顯微照相裝置,把顯微鏡視野中所觀察到物件的細(xì)微結(jié)構(gòu)真實(shí)地記錄下來,以供進(jìn)一步分析研究之用的一種技術(shù).18 .景深與焦長：在成一幅清楚像的前提下,像平面不變,景物沿光軸前后移動的距離稱“景深.景物不動,像平面沿光軸前后移動的距離稱“焦長.19 .視野：視野又稱視場,是指通過顯微鏡所能看到的標(biāo)本所在空間的范圍.20 .齊焦：當(dāng)某一物鏡調(diào)焦清楚后,變換其它物鏡時,也能根本保證焦距適當(dāng)、成像清楚.2

10、1 .像差：光學(xué)儀器不可能使物點(diǎn)發(fā)出而進(jìn)入系統(tǒng)的所有光線都是沿著高斯光學(xué)的理想光路成像,從而導(dǎo)致成像在形狀方面的缺陷,稱之為像差.22 .色差：是一種由白光或復(fù)色光在即使嚴(yán)格滿足高斯條件下也存在的特殊類型的成像缺陷.當(dāng)用白光或復(fù)色光經(jīng)透鏡成像時,會因各種色光存在著光程差而造成顏色不同、位置不重合、大小不一致的不同成像效果,從而造成像和物體的較大失真.三、簡做題1 .簡述光學(xué)顯微鏡的工作原理.答：顯微鏡是由兩組會聚透鏡組成的光學(xué)折射成像系統(tǒng),是利用光學(xué)原理,把人眼所不能分辨的微小物體放大成像,供人們提取物質(zhì)微細(xì)結(jié)構(gòu)信息的光學(xué)儀器.把焦距較短、靠近觀察物、成實(shí)像的透鏡組稱為物鏡,而焦距較長,靠近眼

11、睛、成虛像的透鏡組稱為目鏡.被觀察物體位于物鏡的前方,被物鏡作第一級放大后成一倒立的實(shí)像,然后此實(shí)像再被目鏡作第二級放大,得到最大放大效果的倒立的虛像,位于人眼的明視距離處.2 .簡述光學(xué)顯微鏡的結(jié)構(gòu)組成.答：根本結(jié)構(gòu)包括光學(xué)系統(tǒng)和機(jī)械系統(tǒng)兩大局部.光學(xué)系統(tǒng)是顯微鏡的主體局部,包括物鏡、目鏡、聚光鏡及反光鏡等組成的照明裝置.機(jī)械系統(tǒng)是為了保證光學(xué)系統(tǒng)的成像而配置的,包括調(diào)焦系統(tǒng)、載物臺和物鏡轉(zhuǎn)換器等運(yùn)動夾持部件以及底座、鏡臂、鏡筒等支持部件.照明設(shè)置的主要部件有光源、濾光器、聚光鏡和玻片等.3 .物鏡和目鏡在工作條件和技術(shù)要求上有哪些不同？答：顯微鏡的物鏡、目鏡各由數(shù)只組成一套,物鏡和目鏡間的

12、不同組合構(gòu)成不同的放大倍率.物鏡采用轉(zhuǎn)換器調(diào)換,顯微鏡的物鏡應(yīng)滿足齊焦要求,即調(diào)換物鏡后,不需要重新調(diào)焦就能看到物體的像.為此,不同倍率物鏡的共鈍距應(yīng)為常數(shù).目鏡采用插入式調(diào)換,目鏡的相對孔徑很小,一般為1/201/40.顯微鏡的目鏡是在窄光束、大視場的條件下工作的.5 .簡述醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中常用的熒光顯微鏡的原理、結(jié)構(gòu)及用途.答：熒光顯微鏡是以紫外線為光源來激發(fā)生物標(biāo)本中的熒光物質(zhì),產(chǎn)生能觀察到的各種顏色熒光的一種光學(xué)顯微鏡.熒光顯微鏡是由光源、濾色系統(tǒng)和光學(xué)系統(tǒng)等主要部件組成.熒光顯微鏡與普通光學(xué)顯微鏡主要區(qū)別在于光源和濾光片不同.通常用高壓汞燈作為光源,可發(fā)出紫外線和短波長的可見光；濾光片有二

13、組,第一組稱激發(fā)濾片,位于光源和標(biāo)本之間,僅允許能激發(fā)標(biāo)本產(chǎn)生熒光的光通過如紫外線；第二組是阻斷濾片,位于標(biāo)本與目鏡之間,可把剩余的紫外線吸收掉,只讓激發(fā)出的熒光通過,這樣既有利于增強(qiáng)反差,又可保護(hù)眼睛免受紫外線的損傷.光學(xué)系統(tǒng)主要有反光鏡、聚光鏡、目鏡、物鏡、照明系統(tǒng)等組成.熒光顯微鏡可用于觀察檢測細(xì)胞中能與熒光染料特異結(jié)合的特殊蛋白、核酸等,其標(biāo)本染色簡便、熒光圖像色彩鮮亮,而且敏感度較高.6 .簡述熒光顯微鏡的使用考前須知.答：使用熒光顯微鏡時應(yīng)注意以下事項(xiàng)：觀察對象必須是可自發(fā)熒光或已被熒光染料染色的標(biāo)本；載玻片、蓋玻片及鏡油應(yīng)不含自發(fā)熒光雜質(zhì)；選用最好的濾片組；熒光標(biāo)本一般不能長久保

14、存,假設(shè)持續(xù)長霎時間照射尤其是紫外線易很快褪色.因此,如有條件那么應(yīng)先照相存檔,再仔細(xì)觀察標(biāo)本；啟動高壓汞燈后,不得在15分鐘內(nèi)將其關(guān)閉,一經(jīng)關(guān)閉,必須待汞燈冷卻前方可再開啟.嚴(yán)禁頻繁開閉,否那么,會大大降低汞燈的壽命；假設(shè)暫不觀察標(biāo)本時,可拉過阻光光簾阻擋光線.這樣,即可避免對標(biāo)本不必要的長時間照射,又減少了開閉汞燈的頻率和次數(shù)；較長時間觀察熒光標(biāo)本時,最好或能阻擋紫外光的護(hù)目鏡,增強(qiáng)對眼睛的保護(hù).7 .簡述相襯顯微鏡的工作原理、結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及其主要用途.答：相襯顯微鏡的根本原理是把透過標(biāo)本的可見光的光程差變成振幅差,從而提升了各種結(jié)構(gòu)間的比照度,使各種結(jié)構(gòu)變得清楚可見.光線透過標(biāo)本后發(fā)生折射,

15、偏離了原來的光路,同時被延遲了1/4入波長,如果再增加或減少1/4入,那么光程差變?yōu)?/2入,兩束光合軸后干預(yù)增強(qiáng),振幅增大或減小,提升反差.相襯顯微鏡的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：環(huán)形光闌annulardiaphragm位于光源與聚光鏡之間,作用是使透過聚光鏡的光線形成空心光錐,聚焦到標(biāo)本上；相位板annularphaseplate在物鏡中加了涂有氟化鎂的相位板,可將直射光或衍射光的相位推遲1/4入,并能吸收直射光背景光的光強(qiáng),使直射光與衍射光的光強(qiáng)趨于一致,能更好地突出干預(yù)的效果.相襯顯微鏡主要用于觀察活細(xì)胞和未染色的標(biāo)本.8 .簡述偏光顯微鏡的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)、工作原理及其主要用途.答：是利用光的偏報(bào)特性,對具有

16、雙折射性即可以使一束入射光經(jīng)折射后分成兩束折射光的晶態(tài)、液晶態(tài)物質(zhì)進(jìn)行觀察和研究的重要光學(xué)儀器.偏光顯微鏡是在一般顯微鏡的根底上增添了使普通光線轉(zhuǎn)變成偏振光和檢測偏振光的裝置或觀察干涉圖樣的特殊透鏡,即光源前有偏振片起偏器,使進(jìn)入顯微鏡的光線為偏振光,鏡筒中有檢偏器一個偏振方向與起偏器垂直的起偏器,這種顯微鏡的載物臺是可以旋轉(zhuǎn)的.當(dāng)載物臺無樣品時,無論如何旋轉(zhuǎn)載物臺,由于兩個偏振片是垂直的,顯微鏡里看不到光線.而放入旋光性物質(zhì)后,由于光線通過這類物質(zhì)時發(fā)生偏轉(zhuǎn),因此旋轉(zhuǎn)載物臺便能檢測到這種物體.移相裝置是偏光顯微鏡在使用過程中不可缺少的附件.全波片、半波片及1/4波片可以使通過波片的偏振光分別

17、延遲2兀、兀和兀/2的相位.而補(bǔ)償器那么可連續(xù)調(diào)節(jié)使通過的偏振光相位發(fā)生連續(xù)改變.移相裝置對觀察光的偏振性質(zhì)是十分必要的.利用偏光顯微鏡可以清楚地觀察到纖維絲、紡錘體、膠原、染色體、卵巢、骨骼、毛發(fā)、活細(xì)胞的結(jié)晶或液晶態(tài)的內(nèi)含物、神經(jīng)纖維、肌肉纖維等的細(xì)微結(jié)構(gòu)等.9 .簡述激光掃描共聚焦顯微鏡的工作原理.答：激光掃描共聚焦顯微鏡利用單色激光掃描束經(jīng)過照明針孔形成點(diǎn)光源,對標(biāo)本內(nèi)焦平面上的每一點(diǎn)進(jìn)行掃描,標(biāo)本上的被照射點(diǎn),在檢測器的檢測針孔處成像,由檢測針孔后的光電倍增管逐點(diǎn)或逐線接收,迅速在計(jì)算機(jī)監(jiān)視器屏幕上形成熒光圖像,照明針孔與檢測針孔相對于物鏡焦平面是共鈍的.焦平面的點(diǎn)同時聚焦于照明針孔

18、和檢測針孔,焦平面以外的點(diǎn)不會在檢測針孔處成像,這樣得到的共聚焦圖像是標(biāo)本的光學(xué)橫斷面,克服了普通熒光顯微鏡圖像模糊的缺點(diǎn).另外在顯微鏡的載物臺上加一個微量步進(jìn)馬達(dá),可使載物臺沿著Z軸上下移動,將樣品各個層面移到照明針孔和檢測針孔的共焦面上,樣品的不同層面的圖像都能清楚地顯示,成為連續(xù)的光切圖像.10 .簡述激光掃描共聚焦顯微鏡的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及其在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的主要用途.答：激光共聚焦顯微鏡是在熒光顯微鏡成像根底上加裝了激光掃描裝置,利用計(jì)算機(jī)進(jìn)行圖像處理,使用紫外或可見光激發(fā)熒光探針,從而得到細(xì)胞或組織內(nèi)部微細(xì)結(jié)構(gòu)的熒光圖像.另外在其載物臺上加一個微量步進(jìn)馬達(dá),可使載物臺沿著Z軸上下移動,將樣品各個

19、層面移到照明針孔和檢測針孔的共焦面上,樣品的不同層面的圖像都能清楚地顯示,成為連續(xù)的光切圖像.激光掃描共聚焦顯微鏡(LaserScanningConfocalMicroscope,LSCM)具有高靈敏度、高分辨率、高放大率等特點(diǎn).在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域主要用于細(xì)胞三維重建、細(xì)胞定量熒光測定、細(xì)胞內(nèi)鈣離子、pH值和其它離子的動態(tài)分析、細(xì)胞間通訊和膜的流動性等過程的研究.11 .電鏡的根本類型有哪些？各有什么特點(diǎn)？答：電鏡的根本類型有透射電子顯微鏡與掃描電子顯微鏡.射電子顯微鏡與掃描電子顯微鏡都用于放大與分辨微小結(jié)構(gòu),這兩種技術(shù)通過標(biāo)本對電子束的影響來探測標(biāo)本結(jié)構(gòu).透射電子顯微鏡的電子束穿過標(biāo)本,聚焦成像于屏

20、幕或顯像屏上,掃描電子顯微鏡的電子束在標(biāo)本外表進(jìn)行掃描,反射的電子聚焦成像于屏幕或顯像屏.透射電子顯微鏡用于研究超薄切片標(biāo)本,有極高分辨率,可給出細(xì)微的胞內(nèi)結(jié)構(gòu).掃描電子顯微鏡可以反映未切片標(biāo)本的外表特征.12 .掃描電鏡與透射電鏡相比有哪些特點(diǎn)？答：能夠直接觀察樣品外表的結(jié)構(gòu),樣品的尺寸可大至120mmx80mmX50mm;樣品制備過程簡單,不用切成薄片；樣品可以在樣品室中作三度空間的平移和旋轉(zhuǎn),因此,可以從各種角度對樣品進(jìn)行觀察；景深大,圖像富有立體感.掃描電鏡的景深較光學(xué)顯微鏡大幾百倍,比透射電鏡大幾十倍；圖像的放大范圍廣,分辨率也比擬高.可放大十幾倍到幾十萬倍,它根本上包括了從放大鏡、

21、光學(xué)顯微鏡直到透射電鏡的放大范圍.分辨率介于光學(xué)顯微鏡與透射電鏡之間,可達(dá)3nm;電子束對樣品的損傷與污染程度較小；在觀察形貌的同時,還可利用從樣品發(fā)出的其他信號作微區(qū)成分分析.13 .電鏡由哪幾個主要局部組成？對成像質(zhì)量影響較大的部件有哪些？電子顯微鏡主要由電子光學(xué)系統(tǒng)電子透鏡和電子槍卜真空系統(tǒng)、供電系統(tǒng)、機(jī)械系統(tǒng)和觀察顯示系統(tǒng)等幾局部組成.對成像質(zhì)量影響較大的部件有電子透鏡和電子槍.電子透鏡存在各種像差,這是影響成像質(zhì)量的主要因素.在實(shí)際設(shè)計(jì)中,是通過適當(dāng)縮小口徑、提升加速電壓、增大電極圓筒或線圈直徑及減低放大率來減少球差,通過降低電子的初速度、提升加速電壓和穩(wěn)定電源電壓來減少色差的.14

22、 .光學(xué)顯微鏡與電子顯微鏡的主要區(qū)別是什么？答：照明源不同.電鏡所用的照明源是電子槍發(fā)出的電子流,而光鏡的照明源是可見光.由于電子流的波長遠(yuǎn)短于光波波長,故電鏡的放大及分辨率顯著高于光鏡.透鏡不同.電鏡中起放大作用的物鏡是電磁透鏡,而光鏡的物鏡那么是玻璃磨制而成的光學(xué)透鏡.電鏡中的電磁透鏡共有三組,分別與光鏡中聚光鏡、物鏡和目鏡的功能相當(dāng).成像原理不同.在電鏡中,作用于被檢樣品的電子束經(jīng)電磁透鏡放大后打到熒光屏上成像或作用于感光膠片成像.具電子濃淡的差異產(chǎn)生的機(jī)理是,電子束作用于被檢樣品時,入射電子與物質(zhì)的原子發(fā)生碰撞產(chǎn)生散射,由于樣品不同部位對電子有不同散射度,故樣品電子像以濃淡呈現(xiàn).而光鏡

23、中樣品的物像以亮度差呈現(xiàn),它是由被檢樣品的不同結(jié)構(gòu)吸收光線多少的不同所造成.所用標(biāo)本制備方式不同.電鏡觀察所用組織細(xì)胞標(biāo)本的制備程序較復(fù)雜,技術(shù)難度和費(fèi)用都較高,在取材、固定、脫水和包埋等環(huán)節(jié)上需要特殊的試劑和操作,最后還需將包埋的組織塊切成超薄標(biāo)本片.而光鏡觀察的標(biāo)本那么一般置于載玻片上,如細(xì)胞涂片標(biāo)本,細(xì)胞滴片標(biāo)本等.15 .掃描隧道顯微鏡是納米生物學(xué)研究工具,為何能用來觀察活的生物樣品？答：掃描隧道顯微鏡可在真空、大氣、常溫等不同環(huán)境下工作,甚至可將樣品浸在水和其它溶液中,不需要特別的制樣技術(shù).這些特點(diǎn)特別適用于研究生物樣品和在不同實(shí)驗(yàn)條件下對樣品外表的評價.由于沒有高能電子束,探測過程

24、對樣品外表沒有破壞作用如輻射,熱損傷等,所以能對生理狀態(tài)下生物大分子和活細(xì)胞膜外表的結(jié)構(gòu)進(jìn)行研究,樣品不會受到損傷而保持完好.一、名詞解釋1 .離心現(xiàn)象：物體遠(yuǎn)離圓心運(yùn)動的現(xiàn)象稱為離心現(xiàn)象,也叫離心運(yùn)動.2 .重力沉降：液體中的微粒受重力的作用,較重的微粒下沉與液體分開,這個現(xiàn)象稱為重力沉降.3 .沉降速度：在強(qiáng)大離心力的作用下,單位時間內(nèi)物質(zhì)的運(yùn)動的距離.4 .擴(kuò)散現(xiàn)象：在介質(zhì)中,擴(kuò)散是由于微粒的熱運(yùn)動而產(chǎn)生的質(zhì)量遷移現(xiàn)象主要是由于密度差引起的,這種現(xiàn)象稱為擴(kuò)散現(xiàn)象.5 .解釋RCF:相對離心力,是指在離心力場中,作用于顆粒的離心力相當(dāng)于地球重力的倍數(shù),單位是重力加速度“g6 .解釋沉降系數(shù)

25、：是指顆粒在單位離心力場作用下的沉降速度,其單位為秒.7 .K系數(shù)：是用來描述在一個轉(zhuǎn)子中,將粒子沉降下來的效率.也就是溶液恢復(fù)成澄清程度的一個指標(biāo).8 .最大轉(zhuǎn)速：指離心轉(zhuǎn)頭可到達(dá)最大轉(zhuǎn)速,單位是rpm.9 .最大離心力：指離心機(jī)可產(chǎn)生的最大相對離心力場RCF,單位是g。10.最大容量：指離心機(jī)一次可別離樣品的最大體積,通常表示為mxh。11 .調(diào)速范圍：也叫轉(zhuǎn)速設(shè)置范圍,指離心機(jī)轉(zhuǎn)頭轉(zhuǎn)速可調(diào)整的范圍.12 .溫度限制范圍：指離心機(jī)工作時可限制的樣品溫度范圍.13 .工作電壓：一般是指離心機(jī)電機(jī)工作所需的電壓.14 .電源功率：通常是指離心機(jī)電機(jī)的額定功率.三、簡做題1 .什么是離心技術(shù),離

26、心技術(shù)主要用于哪些方面？答：應(yīng)用離心沉降進(jìn)行物質(zhì)的分析和別離的技術(shù)稱為離心技術(shù),實(shí)現(xiàn)離心技術(shù)的儀器是離心機(jī).離心技術(shù)主要用于各種生物樣品的別離、純化和制備,在細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)的每一進(jìn)程中,總可見到離心技術(shù)的運(yùn)用.2 .離心機(jī)的工作原理是什么？答：1離心是利用旋轉(zhuǎn)運(yùn)動的離心力以及物質(zhì)的沉降系數(shù)或浮力密度的差異進(jìn)行別離、濃縮和提純生物樣品的一種方法.2懸浮液在高速旋轉(zhuǎn)下,由于巨大的離心力作用,使懸浮的微小顆粒以一定的速度沉降,從而使溶液得以別離.3顆粒的沉降速度取決于離心機(jī)的轉(zhuǎn)速、顆粒的質(zhì)量、大小和密度.4微粒在重力場下移動的速度與微粒的大小、形態(tài)、密度、重力場的強(qiáng)度及液體的黏度有關(guān).5離心

27、機(jī)就是利用離心機(jī)轉(zhuǎn)子高速旋轉(zhuǎn)產(chǎn)生的強(qiáng)大的離心力,迫使液體中微?？朔U(kuò)散加快沉降速度,把樣品中具有不同沉降系數(shù)和浮力密度的物質(zhì)別離開.3 .怎樣克服微粒在沉降中所發(fā)生的擴(kuò)散現(xiàn)象？答：擴(kuò)散現(xiàn)象是不利于樣品的別離的,離心就是利用離心機(jī)轉(zhuǎn)子高速旋轉(zhuǎn)產(chǎn)生的強(qiáng)大的離心力,迫使液體中微?？朔U(kuò)散加快沉降速度,把樣品中具有不同沉降系數(shù)和浮力密度的物質(zhì)別離開.4 .什么是離心力及離心現(xiàn)象？答：當(dāng)物體所受外力小于運(yùn)動所需要的向心力時,物體將向遠(yuǎn)離圓心的方向運(yùn)動.物體遠(yuǎn)離圓心運(yùn)動的現(xiàn)象稱為離心現(xiàn)象.也叫離心運(yùn)動.6 .什么叫相對離心力？答：是指在離心力場中,作用于顆粒的離心力相當(dāng)于地球重力的倍數(shù),單位是重力加速度“

28、g.7 .什么叫沉降速度？答：指在強(qiáng)大離心力作用下,單位時間內(nèi)物質(zhì)運(yùn)動的距離.8 .什么叫離心沉降？答：1在離心機(jī)中,離心管放于離心轉(zhuǎn)頭里,當(dāng)離心機(jī)開動時,離心管繞離心轉(zhuǎn)頭的軸旋轉(zhuǎn),作圓周運(yùn)動,在離心管內(nèi)的樣品顆粒將同樣運(yùn)動.2對于離心管而言,樣品顆粒由頂位移到了A位,也就是由離心管頂部移到了底部,這與重力場中的由高處落到低處相似.這種顆粒在圓周運(yùn)動時的切線運(yùn)動稱為離心沉降.9 .什么叫最小離心力場及最大離心力場？答：通常稱離心管頂部到旋轉(zhuǎn)中央的距離為最小離心半徑Rmin,該處承受的離心力場為最小離心力場.通常稱離心管底部到旋轉(zhuǎn)中央的距離為最大離心半徑Rmax,該處承受的離心力場稱為最大離心力

29、場.10 .常用的離心方法分幾類？答：常用的離心方法大致可分為平衡離心法、等密度離心法、經(jīng)典式沉降平衡離心法等三類.11 .什么是差速離心法？答：是利用不同的粒子在離心力場中沉降的差別,在同一離心條件下,通過不斷增加相對離心力,使一個非均勻混合液內(nèi)的大小、形狀不同的粒子分步沉淀的離心方法.所以這個方法又稱為分步離心法.12 .差速離心法的優(yōu)、缺點(diǎn)是什么？答：差速離心法的優(yōu)點(diǎn)：1操作簡單；2別離時間短、重復(fù)性高；3樣品處理量大.缺點(diǎn)：1分辨率有限、別離效果差；2壁效應(yīng)嚴(yán)重；3顆粒被擠壓,離心力過大、離心時間過長會使顆粒變形、聚集而失活.13 .什么是密度區(qū)帶離心法？答：又稱為區(qū)帶離心法,是樣品在

30、一定惰性梯度介質(zhì)中進(jìn)行離心沉淀或沉降平衡,在一定離心力下把顆粒分配到梯度液中某些特定位置上,形成不同區(qū)帶的別離方法.14 .什么是速率區(qū)帶離心法？答：速率區(qū)帶離心方法是根據(jù)別離的粒子在離心力作用下,在梯度液中沉降速度的不同,離心后具有不同沉降速度的粒子處于不同的密度梯度層內(nèi)形成幾條分開的樣品區(qū)帶,到達(dá)彼此別離的目的.15 .什么是等密度區(qū)帶離心法？答：當(dāng)不同顆粒存在浮力密度差時,在離心力場下,顆?；蛳蛳鲁两?或向上浮起,一直沿梯度移動到它們密度恰好相等的位置上即等密度點(diǎn)形成區(qū)帶,稱為等密度區(qū)帶離心法.16 .分析型超速離心機(jī)的工作原理是什么？答：其工作原理與一個普通水平轉(zhuǎn)子相同.分析室有上下兩

31、個平面的石英窗,離心機(jī)中裝有的光學(xué)系統(tǒng)可保證在整個離心期間都能觀察小室中正在沉降的物質(zhì),可以通過對紫外光的吸收如對蛋白質(zhì)和DNA或折射率的不同對沉降物進(jìn)行監(jiān)測.后一方法的原理是：當(dāng)光線通過一個具有不同密度區(qū)的透明液,在這些區(qū)帶的界面上產(chǎn)生光的折射.在分析室中物質(zhì)沉降時重粒子和輕粒子之間形成的界面就像一個折射的透鏡,結(jié)果在檢測系統(tǒng)的照相底板上產(chǎn)出一個“峰,由于沉降不斷進(jìn)行,界面向前推進(jìn),故“峰也在移動,從峰移動的速度可以得到物質(zhì)沉降速度的指標(biāo).17 .分析型超速離心機(jī)的應(yīng)用范圍？答：1測定生物大分子的相對分子重量；2生物大分子的純度估計(jì)；3分析生物大分子中的構(gòu)象變化18 .國際上對離心機(jī)的分類有

32、幾種方法,分成哪些類型？答：通常國際上對離心機(jī)的分類有三種方法：按用途分、按轉(zhuǎn)速分、按結(jié)構(gòu)分.按用途可分為制備型、分析型和制備分析兩用型；按轉(zhuǎn)速分類可分為低速、高速、超速等離心機(jī)；按結(jié)構(gòu)可分為臺式、多管微量式、細(xì)胞涂片式、血液洗滌式、高速冷凍式、大容量低速冷凍式、臺式低速自動平衡離心機(jī)等.19 .低速離心機(jī)、高速離心機(jī)、超速離心機(jī)的應(yīng)用范圍是什么？答：1低速離心機(jī)主要用作血漿、血清的別離及腦脊液、胸腹水、尿液等有形成份的別離；2高速離心機(jī)主要用于臨床實(shí)驗(yàn)室分子生物學(xué)中的DNA、RNA的別離和根底實(shí)驗(yàn)室對各種生物細(xì)胞、無機(jī)物溶液、懸浮液及膠體溶液的別離、濃縮、提純樣品等；3超速離心機(jī)主要用于亞細(xì)

33、胞器的分級別離,還可以別離病毒、核酸、蛋白質(zhì)和多糖等.20 .超速離心機(jī)按用途可分為幾種類型？答：超速離心機(jī)按用途分為制備型、分析型及分析制備兩用型三種.21 .制備型及分析型超速離心機(jī)的用途有哪些？答：制備型超速離心機(jī)主要用于生物大分子、細(xì)胞器和病毒等的別離純化,能使亞細(xì)胞器分級別離,并可用于測定蛋白質(zhì)及核酸的分子量；分析型超速離心機(jī)可以通過光學(xué)系統(tǒng)對測試樣品的沉降過程及純度進(jìn)行觀察.22 .免疫血液離心機(jī)都用于哪些方面？答：是為臨床輸血所設(shè)計(jì)的一種帶有標(biāo)準(zhǔn)化操作程序的專用離心機(jī).用于白細(xì)胞抗原檢測的淋巴細(xì)胞別離、洗滌及細(xì)胞染色體制作的細(xì)胞別離；用于血小板的別離、凝血酶的處理離心；用于抗人球

34、蛋白試驗(yàn)；用于洗滌紅細(xì)胞及血漿的別離等.23 .細(xì)胞涂片離心機(jī)的工作程序是怎樣進(jìn)行的？答：當(dāng)樣品經(jīng)梯度離心分離出雜質(zhì),將細(xì)胞使用離心力從液體懸浮物中別離出來,甩到載玻片上.染液由自動噴霧器的轉(zhuǎn)盤噴到每一張涂片上,用離心的方法除去過剩的染液,細(xì)胞、細(xì)菌分布均勻,無重疊,染色效果好.24 .低速離心機(jī)的大致結(jié)構(gòu)有哪些？答：結(jié)構(gòu)較為簡單,由電動機(jī)、離心轉(zhuǎn)盤(轉(zhuǎn)頭)、調(diào)速器、定時器、離心套管與底座等主要部件構(gòu)成.25 .高速、超速(冷凍)離心機(jī)的結(jié)構(gòu)包括哪幾局部？答：高速(冷凍)離心機(jī)的結(jié)構(gòu)由轉(zhuǎn)動裝置、速度限制系統(tǒng)、溫度限制系統(tǒng)、真空系統(tǒng)、離心室、離心轉(zhuǎn)頭及平安保護(hù)裝置等.超速(冷凍)離心機(jī)主要由驅(qū)動

35、和速度控制、溫度限制、真空系統(tǒng)和轉(zhuǎn)頭四局部組成.26 .離心機(jī)轉(zhuǎn)頭一般可分為幾類、各自用途是什么？答：一般可分為五大類.(1)固定角轉(zhuǎn)頭：用于別離沉降速度有明顯差異的顆粒樣品.(2)甩平式轉(zhuǎn)頭：又分為敞開式和封閉式兩種.敞開式主要用于樣品的初別離.封閉式主要用于線粒體、細(xì)胞核等的別離和密度梯度離心.(3)連續(xù)流動轉(zhuǎn)頭：用于懸浮介質(zhì)中高速別離較小的顆粒物質(zhì).(4)區(qū)帶轉(zhuǎn)頭：用于大容量的密度梯度離心.(5)垂直轉(zhuǎn)頭：用于樣品在短時間作密度梯度離心.27 .簡述區(qū)帶轉(zhuǎn)頭的結(jié)構(gòu)與用途？答：該轉(zhuǎn)頭由四塊葉片的轉(zhuǎn)頭體和密封系統(tǒng)組成為四個扇形小室,葉片上有徑向?qū)Ч?梯度液通過密封管道泵入轉(zhuǎn)子內(nèi),然后通過密封

36、組件中央輸液管參加樣品.主要用于大容量的密度梯度離028 .對使用離心方法的選擇要求是什么？答：差速離心法的選擇：假設(shè)樣品中存在兩種以上質(zhì)量和密度不同的樣品顆粒,可采用差速離心法.密度梯度離心法的選擇：對于有密度梯度差異的樣品介質(zhì),可采用密度梯度離心法,使沉降系數(shù)比擬接近的物質(zhì)得以別離.等密度梯度離心法的選擇：假設(shè)不同樣品顆粒的密度范圍在離心介質(zhì)的密度梯度范圍內(nèi),離心時密度不同的物質(zhì)顆粒因浮力差異或向下沉降,或向上漂浮,一直移到它們各自密度恰好對應(yīng)的位置(等密度點(diǎn)),形成區(qū)帶.可采用等密度梯度離心.29 .離心機(jī)別離樣本時的離心時間、溫度和pH確實(shí)定,其意義是什么？答：離心時間確實(shí)定依據(jù)離心方

37、法的不同有所差異.對于差速離心來說,是指某種顆粒完全沉降到離心管底的時間；對等密度梯度離心而言,是指顆粒完全到達(dá)等密度點(diǎn)的平衡時間；密度梯度離心所需的離心時間那么是指形成界限清楚的區(qū)帶的時間.溫度和pH值確實(shí)定是為了預(yù)防欲別離物質(zhì)的凝集、變性和失活,除了在離心介質(zhì)的選擇方面加以注意外,還必須限制好溫度及介質(zhì)溶液的pH值等離心條件.30 .在使用離心機(jī)時應(yīng)注意哪些問題？答：(1)使用各種離心機(jī)時,必須事先平衡離心管和其內(nèi)容物,要對稱放置,轉(zhuǎn)頭中絕對不能裝載單數(shù)的管子,以便使負(fù)載均勻地分布在轉(zhuǎn)頭的周圍：(2)裝載溶液時,使用開口離心機(jī)時不能裝得過多,以防離心時甩出,造成轉(zhuǎn)頭不平衡、生銹或被腐蝕.制

38、備型超速離心機(jī)的離心管,那么要求必須將液體裝滿,以免離心時塑料離心管的上部凹陷變形.嚴(yán)禁使用顯著變形、損傷或老化的離心管：(3)離心過程中應(yīng)隨時觀察離心機(jī)上的儀表是否正常工作,如有異常的聲音應(yīng)立即停機(jī)檢查,及時排除故障.未找出原因前不得繼續(xù)運(yùn)轉(zhuǎn).31 .簡述離心機(jī)轉(zhuǎn)頭的使用、消毒及保養(yǎng)方式.答：轉(zhuǎn)頭是離心機(jī)中須重點(diǎn)保護(hù)的部件,每次使用前要嚴(yán)格檢查孔內(nèi)是否有異物和污垢,以保持平衡；每次使用后,必須仔細(xì)檢查,并用溫水(500C-600C)及中性洗滌劑浸泡清洗或定期用消毒液消毒(每周消毒一次),最后用蒸儲水沖洗,軟布擦干后用電吹風(fēng)吹干、上蠟、枯燥保存.每一轉(zhuǎn)頭都應(yīng)有使用檔案,記錄累積的使用時間,假設(shè)

39、超過了該轉(zhuǎn)頭的最高使用時限,那么須按規(guī)定降速使用.32 .怎樣對離心機(jī)進(jìn)行保養(yǎng)？答：在日常使用離心機(jī)的過程中,每隔三個月應(yīng)對主機(jī)校正一次水平度,每使用5億轉(zhuǎn)處理真空泵油一次,每使用1500小時左右,應(yīng)清洗驅(qū)動部位軸承并加上高速潤滑油脂,轉(zhuǎn)軸與轉(zhuǎn)頭接合部應(yīng)經(jīng)常涂酯防銹,長期不用時應(yīng)涂防銹油加油紙包扎,平時不用時,應(yīng)每月低速開機(jī)12次,每次0.5小時,保證各部位的正常運(yùn)轉(zhuǎn).33 .離心機(jī)電機(jī)不轉(zhuǎn)時應(yīng)怎樣進(jìn)行檢查？答：1主電源指示燈不亮,檢查保險絲是否熔斷,電源線、插頭、插座是否接觸良好.2主電源指示燈亮而電機(jī)不能啟動.檢查波段開關(guān),瓷盤變阻器損壞或其連接線是否斷脫.檢查磁場線圈的連接線斷脫或線圈內(nèi)

40、部短路檢查真空泵表及油壓指示值.34 .離心機(jī)機(jī)體震動、響聲異常,常見的原因有哪些？答：1離心管重量不平衡,放置不對稱；2轉(zhuǎn)頭孔內(nèi)有異物,負(fù)荷不平衡或使用了不合格的試管套；3轉(zhuǎn)軸上端固定螺帽松動,轉(zhuǎn)軸摩擦或彎曲；4電機(jī)轉(zhuǎn)子不在磁場中央會產(chǎn)生噪音；5機(jī)座上減震彈簧的固定螺絲松動或其中一根彈簧斷裂；6轉(zhuǎn)子本身損傷.35 .簡述使用Ficoll梯度液直接別離外周血單個核細(xì)胞的原理.答：紅細(xì)胞、粒細(xì)胞比重大,離心后沉于管底；淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞的比重小于或等于分層液比重,離心后漂浮于分層液的液面上,也可有少局部細(xì)胞懸浮在分層液中.吸取分層液液面的細(xì)胞,就可以從外周血中別離到單個核細(xì)胞.36 .簡述快速氯

41、化艷密度梯度離心法提取別離大質(zhì)粒DNA的原理.答：用氯化艷密度梯度離心別離核酸時,在高濃度氯化艷溶液中和澳化乙錠EB過量的情況下,EB-DNA絡(luò)合物的浮力密度發(fā)生改變,改變的大小與EB結(jié)合量成反比.因此,用氯化艷密度梯度超速離心法,可別離雙鏈RNA和單鏈RNA.也可別離共價閉合環(huán)狀DNA與線形或帶缺口的環(huán)狀DNA.同時,EB-DNA絡(luò)合物在紫外光下能產(chǎn)生熒光,可見到離心后形成的區(qū)帶,便于收集DNA,所得的EB-DNA絡(luò)合物用異戊醇抽提去EB,即可回收所需的DNA.此法得到的DNA純度很高.答：離心別離技37 .離心別離技術(shù)在實(shí)際工作中應(yīng)用的范圍大致有哪些?術(shù)已成為常規(guī)的別離、純化、鑒別各種生物

42、大分子的不可缺少的方法.高超速離心機(jī)已成為生物、醫(yī)學(xué)、化學(xué)、農(nóng)業(yè)實(shí)驗(yàn)室必不可少的實(shí)驗(yàn)設(shè)備.在生物化學(xué)領(lǐng)域,超速離心技術(shù)廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)、酶、激素、核酸和病毒的研究.38 .簡述國內(nèi)外新型離心機(jī)的類型及應(yīng)用特點(diǎn).答：我國研制的SS型三足式離心機(jī)是一種過濾式離心機(jī),結(jié)構(gòu)簡單、操作方便、別離時顆粒不易破壞,已廣泛應(yīng)用于各行業(yè)和科研實(shí)驗(yàn)室.國外研制的P2離心機(jī)將擁有更強(qiáng)大的轉(zhuǎn)子,旋轉(zhuǎn)速度更快,濃縮水平更強(qiáng)的新式離心機(jī).俄羅斯利薩馬拉醫(yī)科大學(xué)的專家,已研制了使下肢骨折患者更快地康復(fù)的新型醫(yī)用離心機(jī)并應(yīng)用于臨床治療.39 .離心方法目前開展的現(xiàn)狀是什么？答：目前,離心方法已逐漸走向標(biāo)準(zhǔn)化、標(biāo)準(zhǔn)化、專業(yè)化.

43、各種專用離心機(jī)不斷出現(xiàn),對所別離樣品由計(jì)算機(jī)自動限制程序設(shè)定了一定的轉(zhuǎn)速、相對離心力及離心時間等.一、名詞解釋1 .激發(fā)光譜：將激發(fā)光的光源用單色器分光,連續(xù)改變激發(fā)光波長,固定熒光發(fā)射波長,測定不同波長的激發(fā)光照射下,物質(zhì)溶液發(fā)射的熒光強(qiáng)度的變化,以激發(fā)光波長為橫坐標(biāo),熒光強(qiáng)度為縱坐標(biāo)作圖,即可得到熒光物質(zhì)的激發(fā)光譜.從激發(fā)光譜圖上可找出發(fā)生熒光強(qiáng)度最強(qiáng)的激發(fā)波長入ex.2 .熒光光譜：選擇入ex作激發(fā)光源,并固定強(qiáng)度,而讓物質(zhì)發(fā)射的熒光通過單色器分光,測定不同波長的熒光強(qiáng)度.以熒光波長作橫坐標(biāo),熒光強(qiáng)度為縱坐標(biāo)作圖,便得熒光光譜.熒光光譜中熒光強(qiáng)度最強(qiáng)的波長為入em.熒光物質(zhì)的最大激發(fā)波長

44、入ex和最大熒光波長入em是鑒定物質(zhì)的根據(jù),也是定量測定中所選用的最靈敏的波長.3 .光譜分析：對物質(zhì)發(fā)射輻射能的能譜分析或?qū)椛淠芘c物質(zhì)相互作用引起的能譜改變的分析均稱為光譜分析.4 .吸收光譜：光照射到物質(zhì)時,一局部光會被物質(zhì)吸收.在連續(xù)光譜中某些波長的光被物質(zhì)吸收后產(chǎn)生的光譜被稱作吸收光譜.每一種物質(zhì)都有其特定的吸收光譜,因此可根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜來分析物質(zhì)的結(jié)構(gòu)和含量.5 .發(fā)射光譜：一局部物質(zhì)分子或原子吸收了外來的能量后,可以發(fā)生分子或原子間的能級躍遷,所產(chǎn)生的光譜稱為發(fā)射光譜,包括線狀光譜、帶狀光譜及連續(xù)光譜.通過測定物質(zhì)發(fā)射光譜可以分析物質(zhì)的結(jié)構(gòu)和含量.6 .摩爾吸光系數(shù)e:摩爾吸

45、光系數(shù)表示在一定波長下測得的液層厚度為1cm,溶液濃度c為1mol/L時的稀溶液吸光度值.吸光系數(shù)與入射光波長、溶液溫度、溶劑性質(zhì)及吸收物質(zhì)的性質(zhì)等多種因素有關(guān).當(dāng)其它因素固定不變時,吸光系數(shù)只與吸收物質(zhì)的性質(zhì)有關(guān),可作為該物質(zhì)吸光水平大小的特征數(shù)據(jù).7 .分光光度計(jì)：能從含有各種波長的混合光中將每一單色光別離出來并測量其強(qiáng)度的儀器稱為分光光度計(jì).它具有分析精密度高、測量范圍廣、分析速度快和樣品用量少等優(yōu)點(diǎn).根據(jù)所使用的波長范圍不同可分為紫外光區(qū)、可見光區(qū)、紅外光區(qū)以及萬用全波段分光光度計(jì)等.8 .熒光：某些物質(zhì)吸收光能量后,可發(fā)射波長與激發(fā)光波長相同或不同的光,當(dāng)激發(fā)光源停止照射試樣,再發(fā)射

46、過程立即停止,這種再發(fā)射的光稱為熒光.根據(jù)來源不同可分為分子熒光和原子熒光.熒光的發(fā)生和強(qiáng)度與物質(zhì)的分子或原子結(jié)構(gòu)有著密切的關(guān)系.通過測定物質(zhì)分子產(chǎn)生的熒光強(qiáng)度可進(jìn)行物質(zhì)的定性與定量分析.9 .朗伯-比爾定律：是比色分析的根本原理,表達(dá)了物質(zhì)對單色光吸收程度與溶液濃度和液層厚度之間的定量關(guān)系.當(dāng)用一束單色光照射吸收溶液時,其吸光度A與液層厚度b及溶液濃度的乘積c成正比,此即朗伯-比爾定律.數(shù)學(xué)表達(dá)式為：A=kbc.它適用于分子吸收和原子吸收.10 .單色器：將來自光源的復(fù)合光分解為單色光并別離出所需波段光束的裝置,是分光光度計(jì)的關(guān)鍵部件.主要由入射狹縫、出射狹縫、色散元件和準(zhǔn)直鏡組成.11 .

47、吸收池：又稱為比色皿、比色杯、樣品池或液梢等,是用來盛放被測溶液的器件,同時也決定著透光液層厚度,可用塑料、玻璃、石英或熔凝石英制成.在可見光范圍內(nèi),常用無色光學(xué)玻璃或塑料制作；在紫外區(qū),需用能透紫外線的石英或熔凝石英制作.12 .外光電效應(yīng)：光照射在某些金屬外表,會有光電子從金屬外表逸出,這種光電效應(yīng)稱為外光電效應(yīng).利用外光電效應(yīng)可以制成光電管和光電倍增管.13 .內(nèi)光電效應(yīng)：光深入到物體內(nèi)部,將物體內(nèi)部原子中的一局部束縛電子激發(fā)成自由電子,但這些電子并不逸出物體,而是留在物體內(nèi)部從而使物體導(dǎo)電性增強(qiáng),這種效應(yīng)稱為內(nèi)光電效應(yīng).利用內(nèi)光電效應(yīng),可制成光敏電阻阻值隨光照強(qiáng)度而明顯改變、光敏二極管

48、二極管接上反向電壓,沒有光照時呈反向截止?fàn)顟B(tài),有光照射時,反向電流明顯增大,經(jīng)三極管放大后再推動繼電器工作以及光電池.14 .光電管：利用堿金屬的外光電效應(yīng)制成的光電轉(zhuǎn)換元件.按電極結(jié)構(gòu)不同可分為中央陽極式、中央陰極式和平行平板式幾種,按管內(nèi)充氣與否又可分為真空光電管與充氣光電管兩種.光電管的質(zhì)量取決于陰極靈敏度、線性范圍、最大、最小可測能量等幾個重要技術(shù)指標(biāo).15 .光電倍增管：利用外光電效應(yīng)與多級二次發(fā)射體相結(jié)合而制成的光電元件,由一個外表涂有光敏材料的陰極和假設(shè)干個通常為9個13個二級電子發(fā)射極打拿極組成,其靈敏度比光電管高200多倍.有三個重要指標(biāo)：波長效應(yīng)、靈敏度和噪聲水平.16 .

49、光電二極管陣列：檢測器為多道光檢測器,可同時檢測多個波長的光強(qiáng)度.它是由一行光敏區(qū)和二行讀出存放器構(gòu)成.光電二極管陣列不怕強(qiáng)光、耐振動、耐沖擊、重量輕、耗電少、壽命長、光譜響應(yīng)范圍寬、量子效率高、可靠性高、讀出速度快.17 .光電池：某些半導(dǎo)體材料受光照射時,背光面和受光面之間會產(chǎn)生電位差.在兩面之間可檢測到電流.這種光電轉(zhuǎn)換元件即為光電池.常用的有硒光電池、硅光電池等.光電池所產(chǎn)生的光電流與入射光強(qiáng)成正比.光電池的優(yōu)點(diǎn)是結(jié)實(shí)、廉價、使用方便,不用外接電源,只要受光照射,便能產(chǎn)生電流,應(yīng)用起來很方便.缺點(diǎn)是容易受潮而使其產(chǎn)生的電流大小不穩(wěn)定.18 .電荷耦合器件：一種新型固體多道光學(xué)檢測器件,

50、是在大規(guī)模硅集成電路工藝根底上研制而成的模擬集成電路芯片.它可以借助必要的光學(xué)和電路系統(tǒng),將光譜信息進(jìn)行光電轉(zhuǎn)換、儲存和傳輸,在其輸出端產(chǎn)生波長-強(qiáng)度二維信號,信號經(jīng)放大和計(jì)算機(jī)處理后在末端顯示器上同步顯示出人眼可見的圖譜,無須感光板那樣的沖洗和測量黑度的過程.19 .波長準(zhǔn)確度：指儀器波長指示器上所示波長值與儀器此時實(shí)際輸出的波長值之間的符合程度.可用二者之差來衡量分光光度計(jì)的準(zhǔn)確性.20 .波長重復(fù)性：是指在對同一個吸收帶或發(fā)射線進(jìn)行屢次測量時,峰值波長測量結(jié)果的一致程度.通常取測量結(jié)果的最大值與最小值之差來作為衡量分光光度計(jì)的準(zhǔn)確性指標(biāo)之一.21 .光度準(zhǔn)確度：指儀器在吸收峰上讀出的透射

51、率或吸光度與真實(shí)透射率或吸光度之間的偏差.該偏差越小,光度準(zhǔn)確度越高.22 .光度線性范圍：指儀器光度測量系統(tǒng)對于照射到接收器上的輻射功率與系統(tǒng)的測定值之間符合線性關(guān)系的功率范圍,也就是儀器的最正確工作范圍.在此范圍內(nèi)測得的物質(zhì)的吸光系數(shù)才是一個常數(shù).這時候儀器的光度準(zhǔn)確度最高.23 .分辨率：指儀器對于緊密相鄰的峰可分辨的最小波長間隔,它是分光光度計(jì)質(zhì)量的綜合反映.單色器輸出的單色光的光譜純度、強(qiáng)度以及檢測器的光譜靈敏度等是影響儀器分辨率的主要因素.24 .光譜帶寬：指從單色器射出的單色光實(shí)際上是一條光譜帶最大強(qiáng)度的1/2處的譜帶寬度.它與狹縫寬度、分光元件、準(zhǔn)直鏡的焦距有關(guān),可以認(rèn)為是單色

52、器的線色散率的倒數(shù)與狹縫寬度的乘積.25 .雜散光：指除了所需波長以外的其余所有光.它是測量過程中的主要誤差來源,會嚴(yán)重影響檢測準(zhǔn)確度.有兩種原因引起的雜散光：儀器中光學(xué)、機(jī)械零件的反射和散射等原因使所采用的測定波長的光偏離正常光路,在不通過樣品的情況下直接照射到單色器.這種雜散光波長與測定波長相同；由儀器的光學(xué)系統(tǒng)設(shè)計(jì)制作缺陷引起.如不必要的反射面、光束孔徑不匹配、光學(xué)元件外表的擦痕、光學(xué)系統(tǒng)的像差、不均勻色散以及由于機(jī)械零部件加工不良、位置錯移、儀器內(nèi)壁防眩黑漆脫落等.26 .基線穩(wěn)定度：指在不放置樣品的情況下,分光光度計(jì)掃描100%T或0%T時讀數(shù)偏離的程度,是儀器噪聲水平的綜合反映.一

53、般取最大的峰縫之間的值作為絕對噪聲水平.如果基線穩(wěn)定度差,光度準(zhǔn)確度就低.27 .基線平直度：指在不放置樣品的情況下,掃描100%T或0%T時基線傾斜或彎曲的程度,是分光光度計(jì)重要性能指標(biāo)之一.在高吸收時,0%線的平直度對讀數(shù)的影響大；在低吸收時,100%線的平直度對讀數(shù)的影響大.光學(xué)系統(tǒng)的失調(diào)、兩個光束不平衡、儀器振動等都影響基線平直度.基線平直度不好,可使樣品吸收光譜中各吸收峰間的比值發(fā)生變化,給定性分析造成困難.28 .原子化器：原子化器是在原子吸收光譜儀中提供能量將液態(tài)試樣中的待測元素枯燥蒸發(fā)使之轉(zhuǎn)變成原子態(tài)蒸氣的部件.常用的有火焰原子化器和無火焰原子化器兩種.火焰原子化器常用的是預(yù)混

54、合型原子化器,無火焰原子化器常用的是石墨爐原子化器.29 .特征濃度：指產(chǎn)生1%吸收或0.0044吸光度時所對應(yīng)的被測元素的濃度或質(zhì)量.可作為原子吸收光譜儀對某個元素在一定條件下的分析靈敏度.特征濃度S值越小,表示分析靈敏度越高.30 .檢出限：表示在選定的實(shí)驗(yàn)條件下,被測元素溶液能給出的測量信號3倍于標(biāo)準(zhǔn)偏差時所對應(yīng)的濃度單位：mg/L.無火焰光譜法中常用絕對檢出限表示,單位為g.它是原子吸收光譜法中一個很重要的綜合性技術(shù)指標(biāo),既反映儀器的質(zhì)量和穩(wěn)定性,也反映儀器對某元素在一定條件下的檢出水平.檢出限越低,說明儀器性能越好,對元素的檢出水平越強(qiáng).31 .原子發(fā)射光譜法：根據(jù)處于激發(fā)態(tài)的待測元

55、素原子回到基態(tài)時發(fā)射的特征譜線對待測元素進(jìn)行分析的方法.32 .攝譜儀：用光柵或棱鏡做色散元件,用照相法記錄光譜的原子發(fā)射光譜儀器.根據(jù)色散元件的不同把攝譜儀分為棱鏡攝譜儀和光柵攝譜儀兩種.33 .光電直讀光譜儀：用光電倍增管接收和記錄譜線的原子發(fā)射光譜儀器稱為光電直讀光譜儀.光電直讀光譜儀與攝譜儀的區(qū)別在于用光電倍增管和有關(guān)電子電路代替感光板.分為多道直讀光譜儀、單道掃描光譜儀和全譜直讀光譜儀三種.前兩種儀器采用光電倍增管作為檢測器,后一種采用固體檢測器.34 .原子熒光光譜分析法：利用原子熒光譜線的波長和強(qiáng)度進(jìn)行物質(zhì)的定性與定量分析的方法.在一定實(shí)驗(yàn)條件下,被測元素的濃度與熒光強(qiáng)度成正比,

56、因而可據(jù)此對物質(zhì)進(jìn)行定量分析.三、簡做題1 .簡述光吸收定律的物理意義及使用范圍.答：光的吸收定律即朗伯-比爾定律,是比色分析的根本原理,表達(dá)了物質(zhì)對單色光吸收程度與溶液濃度和液層厚度之間的定量關(guān)系.其內(nèi)容是：當(dāng)用一束單色光照射溶液時,具吸光度A與液層厚度b及溶液濃度c的乘積成正比.即A=kbc.朗伯-比爾定律的適用條件為：入射光為單色光.波長范圍越大,單色光純度越低,對朗伯-比耳定律的偏離越大；溶液中鄰近分子的存在并不改變每一給定分子的特性,即分子間互不干擾.當(dāng)溶液濃度很大時,由于溶液分子的相互干擾,該定律不再成立.2 .何為吸收光譜和發(fā)射光譜？答：在連續(xù)光譜中某些波長的光被物質(zhì)吸收后產(chǎn)生的

57、光譜被稱作吸收光譜.每種物質(zhì)的吸收光譜取決于物質(zhì)本身的結(jié)構(gòu),包括分子吸收光譜和原子吸收光譜.物質(zhì)所發(fā)射的光稱為發(fā)射光譜.物質(zhì)的發(fā)射光譜有三種：線狀光譜、帶狀光譜及連續(xù)光譜.線狀光譜由原子或離子被激發(fā)而發(fā)射；帶狀光譜由分子被激發(fā)而發(fā)射；連續(xù)光譜由炙熱的固體或液體所發(fā)射.3 .紫外-可見分光光度計(jì)的根本結(jié)構(gòu)及各局部功能是什么？答：紫外-可見分光光度計(jì)根本結(jié)構(gòu)由光源、單色器、樣品池、檢測器和放大顯示系統(tǒng)等五局部組成.光源提供入射光,單色器的作用是將來自光源的復(fù)合光分解為單色光并別離出所需波段光束.吸收池用來盛放被測溶液,檢測器作用是把光信號轉(zhuǎn)換為電信號,信號顯示系統(tǒng)是把放大的信號以適當(dāng)?shù)姆绞斤@示或記錄下來.4 .影響紫外-可見分光光度計(jì)的因素有哪些？答：由于單色器的類型和質(zhì)量不同造成的單色性不純,由儀器中光學(xué)、機(jī)械零件的反射和散射以及由儀器的光學(xué)系統(tǒng)設(shè)計(jì)制作缺陷引起的雜散光,