2022年細胞核熒光染料

1、細胞核常用熒光染料有：吖啶橙Acridine Orange，AO、溴化乙錠Ethidium Bromide，EB和碘化丙啶Propidium Iodide，PI，DAPI、Hoechst染料、EthD III、7-AAD、RedDot1、2 等等。透膜的染料如下：AO：具有膜通透性，能透過細胞膜，將核DNA和RNA分別染成綠色和紅色，因此使細胞核呈綠色或黃綠色熒光。EB：一種高度靈敏的熒光染色劑，在標準302nm處激發(fā)出橙紅色信號。DAPI：藍色一種可以穿透細胞膜的藍色熒光染料，其與DNA結(jié)合后可以產(chǎn)生比DAPI自身強20多倍的熒光，而與單鏈DNA結(jié)合無熒光的增強。DAPI對雙鏈DNA的染色靈

2、敏度要高于EB和PI，熒光強度比Hoechst低，但光穩(wěn)定性高于Hoechst。Hoechst染料：藍色一類在顯微觀察中標記DNA的熒光染料，最常見的兩種是Hoechst33342和Hoechst33258。這兩種染料都在紫外350nm處被激發(fā)，在461nm處最大發(fā)射光附近發(fā)射青/藍色熒光。與DAPI相比，Hoechst33342加有乙基，具有更強的親脂性，因此能更好的透過完整的細胞膜，并且細胞毒性更小。RedDot 1染料： 紅色，超強的細胞核選擇性，其光譜相似于Draq?5 和 Draq?7。RedDot?染料可被幾種常見的激光激發(fā)并可在遠紅外區(qū)激發(fā)熒光。RedDot? 的紅色近

3、紅外熒光有效的與其他常用熒光探針區(qū)分開來。不透膜的染料，如下：PI：不同通過活細胞膜，但卻能穿過破損的細胞膜而對核染色。PI作為紅色熒光復染劑首選，PI經(jīng)常與Calcein-AM或者FDA等熒光探針合用，區(qū)分死/活細胞。EthD III、7-AAD、RedDot 2： 不能透過細胞膜，但能將壞死細胞區(qū)分開來；更適合凋亡壞死實驗的檢測；細胞核熒光染料PI DAPI Hoechst33342細胞核熒光染料PI碘化丙啶簡稱PI是一種常用的細胞核熒光染色劑。它不能透過完整的細胞膜，但PI能透過凋亡中晚期的細胞和死細胞的膜而將細胞核染紅，PI在綠色光540nm波長的激發(fā)下，會在600nm紅色光處發(fā)出明亮

4、的熒光，與細胞核中的DNA結(jié)合的PI發(fā)出的熒光，與未結(jié)合的PI相比，強度會增強20-30倍。40016Propidium iodide(PI)100mg40017Propidium iodide, 1.0mg/1mL solution in water10mL碘化丙啶 英文名：Propidium iodide, Propidium diiodide; PI 分子式：C27H34I2N4 分子量：668.39 外觀：紅棕SF末 應用：DNA染色 染色原理： 碘化丙啶(PI)是一種溴化乙啶的類似物，它在嵌入雙鏈DNA后釋放紅色熒光。盡管PI不能通過活細胞膜，但卻能穿過破損的細胞膜而對核染色。PI經(jīng)

5、常被用 來與Calcein-AM或者FDA等熒光化合物一起使用，能同時對活細胞和死細胞染色。 光譜性質(zhì)：PI-DNA復合物的激發(fā)和發(fā)射波長分別為535nm和 615nm。 染色過程： 1 用PBS或適當?shù)木彌_液制備1050M的PI溶液。a) 2 將1/10培養(yǎng)基體積的PI溶液參加到細胞培養(yǎng)基中。b) 3 在37培養(yǎng)細胞10-20分鐘。 4 用PBS或適宜的緩沖液洗滌細胞兩次。 5 用535nm激發(fā)波長，615nm發(fā)射波長的濾光器的熒光顯微鏡觀察細胞。 a) 由于PI可能具有致癌性，請小心操作。 b) 也可以用1/10濃度的PI緩沖液代替培養(yǎng)基。 保存條件：4避光保存 對人體有刺激性，請注意適當

6、防護DAPI即4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole)是一種能夠與DNA中大局部A，T堿基相互結(jié)合的熒光染料常用與熒光顯微鏡觀測。因為DAPI可以透過完整的細胞膜它可以用于活細胞和固定細胞的染色。在熒光顯微鏡觀察下，DAPI染劑是利用紫外光波長的光線激發(fā)。當DAPI與雙股DNA結(jié)合時，最大吸收波長為358nm，最大發(fā)射波長為461nm，其發(fā)散光的波長范圍含蓋了藍色至青綠色。DAPI也可以和RNA結(jié)合，但產(chǎn)生的熒光強度不及與DNA結(jié)合的結(jié)果，其發(fā)散光的波長范圍約在400nm左右。DAPI的發(fā)散光為藍色，且DAPI和綠色熒光蛋白(

7、Green fluorescent protein, GFP)或Texas Red染劑(紅色熒光染劑)的發(fā)散波長，僅有少局部重疊，研究員可以善用這項特性在單一的樣品上進展多重熒光染色。DAPI能快速進入活細胞中與DNA結(jié)合，因此DAPI對生物體而言，也被視為一種毒性物質(zhì)與致癌物。使用過程中應注意操作與拋棄的處理程序。DAPI 為一種熒光染料，可以穿透細胞膜與細胞核中的雙鏈DNA結(jié)合而發(fā)揮標記的作用，可以產(chǎn)生比DAPI自身強20多倍的熒光，和EB相比，對雙鏈DNA的染色靈敏度要高很多倍。顯微鏡下可以看到顯藍色熒光的細胞，熒光顯微鏡觀察細胞標記的效率高(幾乎為100 %) ，且對活細胞無毒副作用。

8、DAPI染色常用于細胞凋亡檢測，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細胞儀檢測。DAPI也常用于普通的細胞核染色以及某些特定情況下的雙鏈DNA染色。細胞經(jīng)熱激處理后用DAPI染色3分鐘，在熒光顯微鏡下可以看到到細胞核的形態(tài)變化。Hoechest 33258 是膜透性的,因此在活細胞時候能輕松進入;DAPI是半透性的,有選擇性的進入.因此Hoechest 33258 一般用來染活細胞,可以長驅(qū)直入;DAPI一般是染固定細胞.2、兩者都可以用紫外看，參見以下的激發(fā)發(fā)射波長Hoechst 33258的最大激發(fā)波長為346nm，最大發(fā)射波長為460nm；Hoechst 33258和雙鏈DNA結(jié)合后，最大激發(fā)波

9、長為352nm，最大發(fā)射波長為461nm。DAPI的最大激發(fā)波長為340nm，最大發(fā)射波長為488nm；DAPI和雙鏈DNA結(jié)合后，最大激發(fā)波長為364nm，最大發(fā)射波長為454nm。Hoechst 33342/PI雙染色法1懸浮生長的細胞在培養(yǎng)狀態(tài)下參加Heochst 33342，終濃度為1g/ml；帖壁生長的細胞用含有0.02EDTA的0.25胰蛋白酶消化成單細胞懸液，離心，棄上清，用1ml全培養(yǎng)液重懸細胞，參加Heochst 33342，終濃度為1g/ml，37孵育710min。24 5001000r/min離心棄去染液。3參加1.0ml PI染液，4避光染色15min。 &#

10、160;碘化丙啶染色     1原理  碘化丙啶(propidium iodide，PI)不能穿人完整的活細胞膜中，即正常細胞和凋亡細胞在不固定的情況下對PI拒染，而壞死細胞由于失去膜的完整性，PI可進入細胞內(nèi)與DNA結(jié)合，根據(jù)此特點，使用PI染色可鑒別死細胞。如果對活細胞染色必須在染色前進展固定，以增加細胞膜對染料的通透性。     2溶液配制  使用001molLPBS(pH 74)配制終濃度為05mgml的PI工作液。     3染色程序    (1)單層細胞培養(yǎng)標本經(jīng)預冷70乙醇固定1小時，4；    (2)001molLPBS(pH 74)沖洗；    (3)瀝干后參加PI工作液，室溫孵育15分鐘；    (4)沖洗后封片。     結(jié)果：PI最大激發(fā)波長和最大發(fā)射波長分別為488nm和630nm，熒光顯微鏡觀察，DNA呈紅色熒光。內(nèi)容總結(jié)1細胞核常用熒光染料有：吖