變形桿菌檢驗(yàn)

1、變形桿菌檢驗(yàn)變形桿菌（Proteus）在自然界分布極廣，人和動(dòng)物的糞便帶菌很高，各類食品及用具等均可檢出，雖是常見的腐生細(xì)菌，但在嚴(yán)重污染的食物中，通過(guò)生長(zhǎng)繁殖后，可使食物含有大量此菌，食入后亦易引起食物中毒。對(duì)此菌的實(shí)驗(yàn)室診斷，主要是根據(jù)生物學(xué)特性進(jìn)行鑒別，也可以用血清學(xué)分型，但目前變形桿菌因子血清在國(guó)內(nèi)應(yīng)用尚不普遍，其檢驗(yàn)程序一般是按腸道細(xì)菌檢驗(yàn)方法進(jìn)行。一、檢驗(yàn)方法（一）操作步驟1. 取被檢樣品25g，加225mL滅菌鹽水，用均質(zhì)器打碎或用乳缽磨碎，接種在SS瓊脂平板和EMB瓊脂平板上，經(jīng)37、培養(yǎng)1824h，普通變形桿菌和奇異變形桿菌在弱選擇性的固體培養(yǎng)基上可出現(xiàn)菌落蔓延生長(zhǎng)的特點(diǎn)，S

2、S瓊脂能抑制其蔓延生長(zhǎng)，呈單個(gè)菌落。其他變形桿菌呈半透明圓形菌落。2. 挑取上述可疑菌落，接種三糖鐵斜面培養(yǎng)基，經(jīng)37、24h培養(yǎng)后，斜面產(chǎn)堿不變，底層產(chǎn)酸變黃，多數(shù)產(chǎn)少量氣體，有的產(chǎn)硫化氫或不產(chǎn)硫化氫者均為可疑反應(yīng)。3. 將三糖鐵斜面上可疑反應(yīng)的培養(yǎng)物做尿素酶試驗(yàn)和涂片革蘭氏染色鏡檢。4. 對(duì)尿素酶陽(yáng)性的革蘭氏陰性桿菌，根據(jù)生化特性進(jìn)行分型鑒定。必要時(shí)做血清分型。（二）檢驗(yàn)程序表9-1變形桿菌檢驗(yàn)程序二、結(jié)果分析判定（一）形態(tài)革蘭氏陰性桿菌，形態(tài)大小很不一致，有明顯的多形性，約為12m×0.1-0.5m，有周身鞭毛，不產(chǎn)生芽胞，無(wú)莢膜。（二）培養(yǎng)特性生長(zhǎng)條件與其他腸道細(xì)菌相同，一般

3、培養(yǎng)基都能生長(zhǎng)，有動(dòng)力，運(yùn)動(dòng)活潑，普通變形桿菌和奇異形桿菌在濕潤(rùn)的普通瓊脂培養(yǎng)基上和血瓊脂平板上都能蔓延生長(zhǎng)（或稱游散生長(zhǎng)），在選擇性較弱的如EMB培養(yǎng)基，不能抑制其蔓延生長(zhǎng)，在選擇性較強(qiáng)的SS瓊脂和DC瓊脂培養(yǎng)基上能受到抑制，呈現(xiàn)單個(gè)菌落。莫爾根變形桿菌和雷極變形桿菌呈半透明、圓形、光滑菌落，如果在1瓊脂上或經(jīng)多次移種之后，莫爾根變形桿菌也可看到蔓延生長(zhǎng)現(xiàn)象。（三）生化特性根據(jù)變形桿菌屬的生化學(xué)性狀分為：普通變形桿菌（P.Vulgaria）、奇異變形桿菌（P.mirabilis）莫爾根變形桿菌（P.morganii）和雷極變形桿菌（P.rettgeri），共同的生化學(xué)性狀為：均能迅速水解尿素

4、，苯丙氨酸脫氨酶陽(yáng)性，賴氨酸脫羧酶陰性，精氨酸陰性，不利用丙二酸鹽，能在含氰化鉀（KCN）的肉湯內(nèi)生長(zhǎng)，均不分解乳糖、棉子糖、纖維二糖、阿拉伯糖、衛(wèi)矛醇、山梨醇。葡萄糖產(chǎn)酸，可產(chǎn)生少量的氣體（產(chǎn)氣量一般占倒管的1015），有少數(shù)菌株不產(chǎn)氣。分解糖類的能力較弱，一般只能發(fā)酵少數(shù)幾種糖類，普通變形桿菌和奇異變形桿菌能迅速而豐富的產(chǎn)生大量硫化氫，液化明膠，而莫爾根變形桿菌和雷極變形桿菌無(wú)此特征。奇異變形桿菌和莫爾根變形桿菌能使鳥氨酸脫羧，雷極變形桿菌的絕大多數(shù)菌株能發(fā)酵甘露醇，但其余種別則不能。變形桿菌的主要生化學(xué)性狀見表9-1，變形桿菌族生化試驗(yàn)的鑒別可參考表9-2。表9-1變形桿菌主要生物化學(xué)性

5、狀菌名 項(xiàng)目 普通變形桿菌 奇異變形桿菌 莫爾根變形桿菌 雷極變形桿菌 尿素酶 硫化氫 明膠 鳥氨酸 靛基質(zhì) 葡萄糖產(chǎn)酸 葡萄糖產(chǎn)氣 d 或 乳糖 麥芽糖 甘露醇 甘露糖 蔗糖 d d 肌醇 側(cè)金盞花醇 d 木糖 或（） 或 鼠李糖 或 注：90以上為陽(yáng)性；90以上為陰性；或大部分菌株為陽(yáng)性，偶有少數(shù)菌株為陰性；或大部分菌株為陰性，偶有少數(shù)菌株為陰性；或（）大部分菌株陽(yáng)性，有少數(shù)菌株遲緩陽(yáng)性；d有不同的反應(yīng)，（），。表9-2 變形桿菌族生化試驗(yàn)的鑒別 變形桿菌屬 普羅菲登斯菌屬 普通 奇異 莫爾根 雷極 產(chǎn)堿 司徒氏 靛基質(zhì) 甲基紅 v-p反應(yīng) 或 檸檬酸鹽 d 或() 硫化氫 尿素酶 氰化鉀

6、 動(dòng)力 明膠（22） 賴氨酸 精氨酸 鳥氨酸 苯丙氨酸 丙二酸鈉 葡萄糖產(chǎn)氣 或 d 或 d 乳糖 蔗糖 d d d ()或 甘露醇 或 d 衛(wèi)矛醇 水楊苷 d d d 側(cè)金盞花醇 d 肌醇 山梨醇 d d 阿拉伯糖 棉子糖 鼠李糖 或 注：變形桿菌屬和普羅菲登斯菌屬產(chǎn)氣量少（一個(gè)小氣泡為1015）。（四）血清學(xué)對(duì)變形桿菌各個(gè)種別的血清學(xué)研究，Perch氏（1948，1950）曾對(duì)普通變形桿菌和奇異變形桿菌建立了一個(gè)抗原表，提出了49和O抗原群和19個(gè)鞭毛抗原。Rauss和Voros（1936，1959）建立了莫爾根變形桿菌的抗原表，該表有29和O群，19個(gè)H抗原和57個(gè)血清型。Namioka

7、和Sakazaki二氏（1958）對(duì)雷極變形桿菌建立的抗原表，有34個(gè)O抗原樣，26個(gè)鞭毛抗原和45個(gè)血清型。能用O和H因子血清做玻片凝集試驗(yàn)以確定其型別。但由于變形桿菌的因子血清在國(guó)內(nèi)尚未供應(yīng)，目前還不能普遍應(yīng)用，一般僅采用生化學(xué)試驗(yàn)進(jìn)行鑒別。為證實(shí)從不同樣品中分離的變形桿菌是否為同一菌型時(shí)，最好是用血清學(xué)的方法進(jìn)行分型，但在沒有因子血清的情況下，也可采用以下幾種方法試驗(yàn)。1. 凝集試驗(yàn)：用兩株菌的免疫血清與兩株細(xì)菌作交叉凝集試驗(yàn)，測(cè)定交叉凝集效價(jià)，觀察兩菌是否相同。2. 吸收試驗(yàn)：用兩株菌的免疫血清與兩株細(xì)菌做相互交叉吸收試驗(yàn)，觀察是否將血清中的凝集素完全吸除，確定兩株細(xì)菌的抗原是否相同。3. 拮抗試驗(yàn)：將兩株不同來(lái)源分離的菌株點(diǎn)種在普通瓊脂平板或血瓊脂平板上，經(jīng)37、24h后觀察結(jié)果，在兩株細(xì)菌菌落交界處出現(xiàn)明顯的分界線時(shí)，為菌株不同出現(xiàn)拮抗現(xiàn)象（即稱為Dienes現(xiàn)象）。如果菌株相同時(shí)，菌株之間無(wú)拮抗現(xiàn)象產(chǎn)生，兩株細(xì)菌的菌落可以融合在一起。但應(yīng)注意也有少數(shù)例外。（五）菌數(shù)測(cè)定方法目前，尚沒有較好的方法準(zhǔn)確測(cè)定變形桿菌對(duì)食品污染的程度，僅可初步了解樣品中大概含量供參考。可將磨碎的樣品懸液，用無(wú)菌鹽水稀釋成不同稀釋度（1:100，1:1000，1:10000等），每個(gè)稀釋度取0.1mL接種在瓊脂斜面底部的凝固水中，經(jīng)37、24h培養(yǎng)后，觀察由