腫瘤的過繼性細(xì)胞免疫治療

1、腫瘤的過繼性細(xì)胞免疫治療學(xué)習(xí)內(nèi)容與要求掌握腫瘤的過繼性細(xì)胞免疫治療的定義及原理。熟悉LAK、TIL、CD3AK、CIK、CTL細(xì)胞的制備方法及研究進(jìn)展C概述腫瘤的過繼性細(xì)胞免疫治療(Adoptivecellularimmunotherapy,ACI或AIT)是指向腫瘤患者轉(zhuǎn)輸具有抗腫瘤活性的免疫細(xì)胞(特異性的和相對特異性的)直接殺傷腫瘤或激發(fā)機(jī)體免疫反應(yīng)殺傷腫瘤細(xì)胞，達(dá)到治療腫瘤的目的。簡要歷史回顧 20世紀(jì)60年代：發(fā)現(xiàn)細(xì)胞免疫引起組織器官移植排斥啟發(fā)人們應(yīng)用過繼性細(xì)胞免疫治療腫瘤。 20世紀(jì)80年代：85年，Rosenberg報道LAK/IL-2治療晚期惡性腫瘤具有療效。86年，報道TIL

2、。 1991年，斯坦福大學(xué)的SchmidtWolf道了CIK細(xì)胞-)淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞(Lymphokineactivatedkillercells,LAK)DL-2回輸病人外周淋巴細(xì)型激活病人（體外）LAK治療方法優(yōu)點 只對腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞毒性; 基本無毒副作用； 不依賴荷瘤者免疫功能； 可與其他療法聯(lián)合使用； 無免疫抑制作用。LAK細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞的作用機(jī)制 LAK細(xì)胞的異質(zhì)性 LAK細(xì)胞表面存在多種與腫瘤識別相關(guān)的特異性分子。 LAK殺傷腫瘤細(xì)胞不受MHC限制LAK細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞的作用機(jī)制 效靶細(xì)胞結(jié)合后，通過分泌細(xì)胞毒顆粒，在Ca2+存在時，釋放其中的穿孔素、絲氨酸酯酶、TNF樣

3、分子等殺傷介質(zhì)，直接殺傷靶細(xì)胞。 通過LAK細(xì)胞表面的殺傷分子（如m-LT）直接殺傷靶細(xì)胞。 通過分泌其他細(xì)胞因子間接殺傷靶細(xì)胞。同種異體LAK細(xì)胞(A11o-LAK) Allo-LAK細(xì)胞的有效性 Allo-LAK細(xì)胞的安全性LAK細(xì)胞體內(nèi)回輸后組織器官分布LAK細(xì)胞分布特點和臨床療效一致，即對肺、肝、腎等器官腫瘤療效較好，而對其他器官的腫瘤療效不明顯。LAK細(xì)胞的制備LAK細(xì)胞的來源：患者自體外周血、67個月齡的胎兒胸腺和脾臟細(xì)胞、同種異體外周血、臍帶血。細(xì)胞因子對LAK的誘導(dǎo)IL-2/IL-15/IL-7（-）腫瘤浸潤性淋巴細(xì)胞（tumorinfiltratinglymphocyte,T

4、IL）1）腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞（TIL）分離淋巴W2回輸TtimorTIL細(xì)胞的特征 TIL細(xì)胞的異質(zhì)性CD3、CD4、CD8T細(xì)胞 TIL的作用機(jī)理誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡機(jī)制：TIL分泌細(xì)胞因子誘導(dǎo)調(diào)亡；釋放穿孔素引起凋亡。缺乏HLA-1抗原的腫瘤細(xì)胞 細(xì)胞因子低濃度IL-2(10-20 U/ml)IL-2+IL-4GM-CSF+IL-2IL-6IL-7GM-CSF+IL-2抑制因子IL-10+TGF-p前列腺素誘導(dǎo)TIL中CD4+細(xì)胞產(chǎn)生誘導(dǎo)對自身腫摘細(xì)胞的特異性殺傷 促進(jìn)TIL細(xì)胞的增殖促進(jìn)CTL細(xì)胞的增殖促進(jìn)腎癌來源的TIL增殖和特異性與非 特異性的CTL的產(chǎn)生 促進(jìn)TIL的增殖擴(kuò)增TIL和提高

5、TIL的聚傷活性抑制TIL生長和殺傷活性抑制TIL的轉(zhuǎn)化影響因素作用抗原福射滅活的自身腫瘤抗原刺激TIL生長高水平表達(dá)HLA1抗原的腫瘤細(xì)胞誘導(dǎo)TIL中CD4+CTL細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞毒藥物對TIL的影響化療藥物對TIL毒性大于對腫瘤細(xì)胞的殺傷性，因而在應(yīng)用TIL過繼免疫治療時不宜同時使用化療藥物.TIL細(xì)胞的制備方法 TIL來源：手術(shù)切除或活檢的瘤體組織；癌性胸水、腹水中淋巴細(xì)胞；轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)。 TIL體外激活：（1）白介素系統(tǒng)；（2）TNF-oc與IL-2的協(xié)同作用；（3）TIL與自身瘤細(xì)胞、自身淋巴細(xì)胞共同培養(yǎng)；（4）淋巴因子基因轉(zhuǎn)導(dǎo)TIL;（5）雙功能抗體導(dǎo)向TIL。TIL的臨床應(yīng)用及展望 T

6、IL細(xì)胞的臨床應(yīng)用受到許多因素制約發(fā)展方向：增強(qiáng)TIL細(xì)胞增殖力以及特異性殺傷腫瘤細(xì)胞活性；與其它細(xì)胞因子聯(lián)合治療，提高療效；改變TIL細(xì)胞的輸注途徑，縮短距離，使TIL細(xì)胞能更有效地達(dá)到并聚集瘤體處；提高T細(xì)胞分泌Thl型細(xì)胞因子的能力，抑制分泌Th2型細(xì)胞因子。抗CD3McAb激活的殺傷細(xì)胞(CD3AK) CD3AK細(xì)胞是指用特定的抗CD3McAb激發(fā)免疫活性細(xì)胞的增殖并誘導(dǎo)相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)和分泌，從而產(chǎn)生的可有效攻擊腫瘤的殺傷細(xì)胞,故稱之為抗CD3MeAb激活的殺傷細(xì)胞(anti-CD3McAbactivatedkillercells,CD3AK)oCD3AK細(xì)胞的免疫學(xué)特征 CD3A

7、K細(xì)胞中含有高比例的CD3+細(xì)胞和CD56+或CD57+細(xì)胞。 通過自體輔佐細(xì)胞（單核或巨噬細(xì)胞）提呈處理過的抗原作用于TCR可激活T細(xì)胞。作用于TCR-CD3復(fù)合物的抗CD3McAb可模擬這種效應(yīng)。CD3AK細(xì)胞制備 人外周血單個核細(xì)胞（淋巴細(xì)胞）加入CD3 McAb再加入低劑量的IL-2CD3AK細(xì)胞治療腫瘤的優(yōu)點 CD3AK細(xì)胞選擇性地殺傷腫瘤細(xì)胞 CD3AK細(xì)胞具有更為廣譜的殺傷腫瘤作用 CD3AK細(xì)胞增殖能力大大優(yōu)于LAK細(xì)胞 CD3AK細(xì)胞的增殖和維持可以不依賴或少依賴外源的IL-2多種細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(cytokinesinducedkillers,CIK)將人外周血或骨髓

8、單個核細(xì)胞在體外用多種細(xì)胞因子與CD3McAb共同培養(yǎng)一段時間后獲得的殺傷細(xì)胞，即細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷名田月包(cytokines-inducedkillercells,CIK細(xì)胞)高效擴(kuò)增(IL-2, Anti-CD3McAb, IFN-y,PHA) 收集CIK/TIL,全身/局部回輸CIK細(xì)胞的制備外周血分離獲取外周血單個核細(xì)胞誘導(dǎo)活化(IL2,Anti-CD3McAbJFN-y,PHA)，細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(cytotoxicTlymphocyteCTL)T淋巴細(xì)胞通過TCR-CD3復(fù)合物、MHC分子、抗原肽及協(xié)同刺激分子共同刺激，增強(qiáng)丁淋巴細(xì)胞增殖及效應(yīng)。CTL細(xì)胞的制備分離腫瘤細(xì)胞；調(diào)

9、變腫瘤細(xì)胞：用直接導(dǎo)入方法或逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)移方法向腫瘤細(xì)胞導(dǎo)入B7基因，并檢測腫瘤細(xì)胞表達(dá)B7分子的情況；誘導(dǎo)CTL：用調(diào)變修飾后的腫瘤細(xì)胞與效應(yīng)細(xì)胞共同培養(yǎng)，誘導(dǎo)高活性的CTL;分離CTL用于臨床治療。過繼性免疫療法存在的問題 由于腫瘤細(xì)胞的不均一性及效應(yīng)細(xì)胞的異質(zhì)性造成療效的不確定性； 體外大量擴(kuò)增過繼免疫細(xì)胞技術(shù)有待開發(fā)； 輸注的細(xì)胞向腫瘤組織的聚集性弱； 體內(nèi)過繼免疫機(jī)制的進(jìn)一步明確； 與其它腫瘤治療方法的有機(jī)整合需要進(jìn)一步完善； 缺乏統(tǒng)一的能指示臨床轉(zhuǎn)歸的的免疫檢測指標(biāo)；單克隆抗體與腫瘤分子靶向治療 腫瘤分子靶向治療：利用腫瘤組織或細(xì)胞所具有的特異性（或相對特異的）結(jié)構(gòu)分子作為靶

10、點，使用某些能與這些靶分子特異結(jié)合的抗體、配體等達(dá)到直接治療或?qū)蛑委熌康牡囊淮箢愔委煼椒ā７肿影邢蛑委煹陌悬c細(xì)胞受體信號轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞周期血管生成Biologic targets for NSCLC therapy1. Growth factors and growth-factor receptore 的UMl VEGFR CdhSCFRTumor cell5. Cell-eunrival pathways Oyctn-dipendect mTDR.6. Extracellular matrix/ angiogenic pathways3 TumoxgMEed artlgenc/marker5

11、cangnoyoes. cat WG 020,00222 Signal lran$duction pathways RM.raf,MAPK.MD(,E9X, peace X3R C, PMC4 Proteascme單克隆抗體在腫瘤分子靶向治療中的地位 腫瘤抗體靶向治療的發(fā)展歷史 腫瘤單克隆抗體靶向治療的作用機(jī)制腫瘤抗體靶向治療的發(fā)展歷史 鼠源性多克隆抗血清是最早被用于治療腫瘤的抗體分子 1975年利用雜交瘤技術(shù)成功地制備McAb,大大推動了腫瘤生物靶向治療的進(jìn)展近十年來已研究制備出人鼠嵌合抗體、人源化抗體和完全人源抗體抗體的結(jié)構(gòu)和功能免疫球蛋白的功能區(qū)抗體作為腫瘤的靶向治療得益于抗體兩個關(guān)鍵性

12、技術(shù)的突破：人鼠嵌合抗體、人源化抗體和完全人源抗體技術(shù)及制備技術(shù)的成熟，基本上可以克服鼠源性抗體用于人體產(chǎn)生抗抗體的問題抗體庫的建立和篩選以及多價重組抗體制備技術(shù)的發(fā)展，使人們能夠直接獲得特異性強(qiáng)和親和力高的單克隆抗體。人一鼠嵌合抗體(ChimericAntibodies)人一鼠嵌合抗體是將鼠源單抗的可變區(qū)與人抗體的恒定區(qū)融合而得到的抗體Q構(gòu)建嵌合抗體的大致過程是，將鼠源單抗的可變區(qū)基因克隆出來，連到包含有人抗體恒定區(qū)基因及表達(dá)所需的其它元件（如啟動子、增強(qiáng)子、選擇標(biāo)記等）的表達(dá)載體上，在哺乳動物細(xì)胞（如骨髓瘤細(xì)胞、CHO細(xì)胞）中表達(dá)。盡管嵌合抗體的免疫原性已降低很多，但有時它仍可能引發(fā)較強(qiáng)的

13、免疫反應(yīng)。為了進(jìn)一步降低抗體的鼠源成分，發(fā)展出CDR移植技術(shù)。CDR移植即把鼠抗體的CDR序列移植到人抗體的可變區(qū)內(nèi)，所得到的抗體稱CDR移植抗體或改型抗體，也就是人源化抗體。完全人源化抗體單克隆抗體靶向治療由于抗體技術(shù)的發(fā)展，至今全球已報道的抗體有10多萬種，其中基因工程抗體有1000多種，人源化抗體200多種。目前國際上已有500多種抗體用于診斷和治療，F(xiàn)DA至今已批準(zhǔn)18種抗體上市，其中8種是用于治療腫瘤的靶向抗體。年份V鐘醫(yī)皿、署asA至2000年底，在美國藥品市場上生物技術(shù)藥物有76種,其中抗體藥物有15種 2003年治療用單抗的銷售總額已超過52億美元； 2006年預(yù)計5060個治療性單抗上市； 2010年預(yù)計單抗銷售額200億美元； 美國已占全球單抗市場90%支獨秀； 完全人源化單抗現(xiàn)有多個處于臨床前階段。腫瘤單克隆抗體靶向治療的作用機(jī)制直接作用 ADCC作用