食品分析與檢驗重要實驗

1、實驗一：食品中亞硝酸鹽的測定一、實驗目的1. 掌握鹽酸萘乙二胺比色法測定亞硝酸鹽的原理2. 掌握分光光度計的使用、標準曲線的繪制及計算方法3. 了解分光光度計的構造二、實驗原理樣品經沉淀蛋白質，除去脂肪后，在弱酸條件下，亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸重氮化，再與鹽酸萘乙二胺偶合形成紫紅色染料，其最大吸收波長為538 nm，可測定吸光度并與標準比較定量。 三、儀器與試劑1. 儀器（1）分光光度計（2）小型膠肉機（3）恒溫水浴鍋2試劑（1）亞鐵氰化鉀溶液(106g/L)：稱取106.0g亞鐵氰化鉀，用水溶解，并稀釋至1000 mL。（2）乙酸鋅溶液(220g/L)：稱取220.0 g乙酸鋅，先加30mL冰

2、醋酸溶解，用水稀釋至1000 mL。（3）飽和硼砂溶液(50g/L)：稱取5.0g硼酸鈉，溶于100mL熱水中，冷卻后備用。（4）對氨基苯磺酸溶液（4g/L）：稱取0.4對氨基苯磺酸，溶于100mL20 %（V/V）鹽酸中，置棕色瓶中混勻，避光保存。（5）鹽酸萘乙二胺溶液（2g/L）：稱取0.2g鹽酸萘乙二胺，溶于100mL水中, 混勻后，置棕色瓶中，避光保存。（6）亞硝酸鈉標準溶液（200g/mL）：準確稱取0.1000于110120干燥恒重的亞硝酸鈉，加水溶解移入500mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，混勻。（7）亞硝酸鈉標準使用液（5.0 g/mL）：臨用前，吸取亞硝酸鈉標準溶液5.00mL

3、，置于200mL容量瓶中，加水稀釋至刻度。四、實驗步驟1. 提取稱取2.50g經絞碎混勻的樣品，于50mL燒杯中，加硼砂飽和溶液12.5mL飽和硼砂溶液，攪拌均勻，以70左右的水約300 mL 將試樣洗入500mL容量瓶中，于沸水浴中加熱15min，取出置冷水浴中冷卻，并放置至室溫。2. 提取液凈化在振蕩上述提取液時加入5 mL 亞鐵氰化鉀溶液, 搖勻, 再加入5mL乙酸鋅溶液，以沉淀蛋白質。加水至刻度, 搖勻, 放置30min, 除去上層脂肪, 上清液用濾紙過濾, 棄去初濾液30mL，濾液備用。143. 亞硝酸鹽的測定與數(shù)據記錄0123456789標準使用液體積mL0.000.200.400

4、.600.801.001.502.00樣品質量 g/樣品提取液體積mL/對氨基苯磺酸溶液 2mL(混勻,靜置3-5min)鹽酸萘乙二胺溶液1mL水至刻度，混勻，靜置15min比色測吸光度2cm比色皿，538nm，0管調零吸光度五、結果計算1. 繪制標準曲線以亞硝酸鈉量（g）為橫坐標，與其對應的吸光度為縱坐標繪制標準曲線。2. 用樣品提取液的吸光度，在以上亞硝酸鈉標準曲線上查出亞硝酸鈉的量(g)。3. 計算m×1000 X= V2 m × ×1000 V1式中：X樣品中亞硝酸鹽的含量，mg/kg；m測定用樣液中亞硝酸鈉的含量，g；m樣品的質量，gV1樣液總體積mL

5、V2測定用樣液體積mL六. 思考題 1. 若從標準曲線上查不到濾液所相當?shù)膩喯跛徕c量（即大于10g）是，如何改進本實驗？2. 采用回歸方程計算與從校正曲線直接求得亞硝酸鈉的含量，各有什么優(yōu)缺點？3. 紫外可見分光光度計由哪幾部分組成，每個主要部分的作用是什么？4. 使用紫外可見分光光度計時，應注意哪些問題？實驗二：茶飲料中茶多酚的測定一、實驗目的1. 掌握分光光度計法測定茶飲料中茶多酚的基本原理和操作程序。2掌握分光光度計的使用及計算方法二、實驗原理茶飲料中的多酚類物質能與亞鐵離于形成紫藍色絡合物，用分光光度計法測定其含量。三、儀器與試劑1. 儀器（1）分析天平：感量0.001g。（2）分光光

6、度計。2.  試劑    所用試劑均為分析純(AR)；試驗用水應符合GB/T 6682中的三級水規(guī)格。（1） 酒石酸亞鐵溶液：稱取硫酸亞鐵0.1g和酒石酸鉀鈉0.5g，用水溶解并定容至100mL(低溫保存有效期10天)。（2）pH7.5磷酸緩沖溶液 A. 23.87 g/L磷酸氫二鈉：稱取磷酸氫二鈉23.87 g加水溶解后定容至1 L。 B. 9.08g/L磷酸二氫鉀：稱取經110烘干2h的磷酸二氫鉀9.08g，加水溶解后定容至1L。    取上述磷酸氫二鈉溶液85mL和磷酸二氫鉀溶液15mL混合均勻。四、實驗步驟

7、1. 試液制備（1）含二氧化碳茶飲料量取充分混勻的樣液100mL于250mL燒杯中，稱取其總質量，然后置于電爐上加熱至沸，在微沸狀態(tài)下加熱10min，將二氧化碳氣排除。冷卻后，用水補足其原來的質量。搖勻后，備用。（2）茶葉 稱取3g磨碎樣品于500mL錐形瓶中，加入熱蒸餾水450mL,立即移入沸水浴中浸提45min（每隔10min搖動一次）浸提完畢后，立即趁熱減壓過濾。濾液移入500mL容量瓶中，殘渣用少量熱蒸餾水洗滌2-3次，并將濾液濾入上述容量瓶中，冷卻后，用蒸餾水稀釋至刻度。2. 測定（1）茶飲料精確移取上述制備的試液1 mL5 mL于25 mL容量瓶中，加水4 mL、酒石酸亞鐵溶液5m

8、L，充分搖勻，用pH7.5磷酸緩沖溶液定容至刻度。用10mm比色皿，在波長540nm處，以試劑空白作參比，測定其吸光度(A1)。同時移取等量的試液于25mL容量瓶中，加水4mL，用pH7.5的磷酸緩沖液定容至刻度，測定其吸光度(A2)。（2）茶葉精確移取上述制備的試液1 mL于25 mL容量瓶中，加水4 mL、酒石酸亞鐵溶液5mL，充分搖勻，用pH7.5磷酸緩沖溶液定容至刻度。用10mm比色皿，在波長540nm處，以試劑空白作參比，測定其吸光度(A)。五、結果計算1. 數(shù)據記錄（1）茶飲料樣品質量m g測定用樣液體積 mL試液顯色后的吸光度A1試液底色的吸光度A2（2）茶葉樣品質量M g試液顯

9、色后的吸光度A2. 計算(1)茶飲料中茶多酚含量計算公式(A1- A2)×1.957×2×K X= ×1000 m式中：   X樣品中茶多酚的含量，mg/kg;A1試液顯色后的吸光度；            A2試液底色的吸光度；            K稀釋倍數(shù)；            m 測定時

10、稱取試樣的質量，g；           1.957用10mm比色皿，當吸光度等于0.50時，1mL茶湯中茶多酚的含量相當于1.957mg。（2）茶葉中茶多酚含量計算公式A×1.957×2 V1 X(%)= ××100 100 V2×MX樣品中茶多酚的含量，%A試樣溶液的吸光度；           M稱取試樣的質量，gV1試樣溶液的總體積，mLV2測定用試樣溶液的體積，mL   

11、60;       1.957用10mm比色皿，當吸光度等于0.50時，1mL茶湯中茶多酚的含量相當于1.957mg。六. 思考題1. 若實驗室無10mm比色皿，可否用1mm比色皿進行測定，若可以，結果計算公式將作何變化。實驗三：火焰原子吸收光譜法測定食品中的銅一、實驗目的1. 通過對銅最佳測定條件的選擇，了解與火焰性質有關的一些條件參數(shù)對銅測定靈敏度的影響；2. 了解原子吸收分光光度計的基本結構和原理；3. 掌握火焰原子吸收光譜分析的基本操作；學習食品中銅含量的測定方法。4. 熟悉和掌握原子吸收分光光度法的定量分析方法5. 學習微波消解儀在樣品前處理中

12、的應用二、實驗原理樣品處理后，導入原子吸收分光光度計中，原子化以后，吸收324.8共振線，其吸收量與銅含量成正比，與標準系列比較定量。三、儀器與試劑1. 儀器（1）原子吸收分光光度計（附銅空心陰極燈）（2）微波消解儀2. 試劑除非另有規(guī)定，本方法所使用試劑均為分析純，水為GB/T 6682 規(guī)定的一級水。（1） 硝酸：優(yōu)級純（2） 過氧化氫（30%）（3） 硝酸：1+99（4） 6mol/L硝酸：量取60 mL硝酸，加水稀釋至160mL。（5） 銅的標準儲備液(1000g/mL)：稱取1.000克金屬銅（99.99%），分次加入6mol/L硝酸溶解，總量不超過37mL，移1000 mL容量瓶中

13、，用水稀釋至刻度?？梢灾苯淤徺I該元素的有證國家標準物質作為標準溶液（6）銅標準使用液：將銅標準儲備液用硝酸（1+199）溶液稀釋，配制成濃度為0.4、0.8、1.0、2.0、3.0、4.0mg/L的標準使用液。四、實驗步驟1. 原子吸收光譜儀分析參考條件測定波長：324.8nm 燈 電 流：6mA 狹 縫：0.19nm空氣流量：9L/min 乙炔流量：2L/min 燈頭高度：3mm背景校正：氘燈可根據儀器情況調至最佳狀態(tài)。2. 樣品消化稱取0.10g0.50g 試樣于消解罐內，加硝酸5mL,12mL30%的過氧化氫，蓋好安全閥后，將消解罐放入微波爐消解系統(tǒng)中，選擇合適的消解條件進行消解，至消解

14、完全，轉移到25 mL容量瓶中, 用硝酸（1+199）定容至刻度。同時作試劑空白。3. 樣品測量將標準溶液、空白溶液和樣品溶液依次噴入火焰，測量吸光度。4. 繪制標準曲線并查出樣液銅元素的濃度。五、結果計算1. 數(shù)據記錄樣品質量m g樣品提取液體積V mL樣液中銅元素濃度C mg/L2. 計算 C×V X (mg/)= -mX試樣中銅的含量（mg/kg）；C樣品中檢測物濃度，mg/LV樣品體積，mLm樣品質量，g 計算結果保留兩位有效數(shù)字。 六、思考題1. 原子吸收光譜儀由哪幾部分組成，每個主要部分的作用是什么？2. 在原子吸收分析中，為什么常選用共振線作為吸收線？3. 原子吸收定量

15、分析的依據是什么？進行定量分析有哪些方法？試比較它們的優(yōu)缺點。實驗四：食品中甜蜜素的測定一、實驗目的1. 了解氣相色譜儀的使用方法；2. 了解氣相色譜儀的基本結構和原理；3學習食品中甜蜜素的氣相色譜測定方法。二、實驗原理在硫酸介質中環(huán)己基氨基磺酸鈉與亞硝酸反應，生成環(huán)己醇亞硝酸酯，利用氣相色譜法進行定性和定量。三、儀器與試劑1. 儀器（1）氣相色譜儀附氫火焰離子化檢測器。（2）旋渦混合器。 （3）離心機。（4）10L微量注射器。（5）DB-5毛細管柱 30m×0.53mm×0.25m 2. 試劑（1）正己烷（2）氯化鈉（3）層析硅膠(或海砂)。（4）50g/L亞硝酸鈉溶液（

16、5）100g/L硫酸溶液。（6）環(huán)己基氨基磺酸鈉標準溶液：精確稱取1.0000g環(huán)己基氨基磺酸鈉，加水溶解并定容至100mL，此溶液每毫升含環(huán)己基氨基磺酸鈉10mg。四、實驗步驟1、氣相色譜檢測樣品參考條件：（1）DB-5毛細管柱 30m×0.53mm×0.25m，或相當者。（2）檢測器溫度：200 （3）汽化室溫度：200（4）爐箱溫度：60（5）載氣流速（壓力）：60kPa（6）氫氣流速（壓力）：50kPa（7）空氣流速（壓力）：60 kPa2. 試樣制備稱取20.0g試樣于100mL帶塞比色管，置冰浴中。3. 測定（1）標準曲線的制備：準確吸取1.00mL環(huán)己基氨基磺

17、酸鈉標準溶液于100mL帶塞比色管中，加水20mL。置冰浴中，加入5mL50g/L亞硝酸鈉溶液，5mL100g/L硫酸溶液，搖勻，在冰浴中放置30min，并時常搖動，然后準確加入10mL正己烷，5g氯化鈉，搖勻后振搖80次。待靜止分層后吸出正己烷層于10mL帶塞離心管中進行離心分離。每毫升己烷提取液相當于1mg環(huán)己基氨基磺酸鈉，將標準提取液進樣1L5L于氣相色譜儀中，根據響應值繪制標準曲線。（2）試樣測定：處理過程同標準溶液前處理。吸取的試樣提取液1L注入色譜儀進行分析。五、結果計算1. 數(shù)據記錄樣品質量m g樣品提取液體積V mL樣液中甜蜜素濃度C mg/mL2. 計算 C×V X

18、 (g/)= -mC樣品中甜蜜素濃度，mg/mLV樣品提取液體積，mLm樣液質量，g 計算結果保留兩位有效數(shù)字。 六、思考題1氣相色譜儀由哪幾部分組成，各有什么作用？2氣相色譜定量分析的方法有幾種？各有哪些優(yōu)缺點？實驗五：乳制品中三聚氰胺的測定一、實驗目的1. 了解HPLC儀器基本結構,掌握實驗儀器的一般使用方法；2. 加深對色譜分離原理的理解，掌握主要實驗條件的選擇；3. 掌握液相色譜定性定量分析技術。4. 掌握乳制品中三聚氰胺的測定方法二、實驗原理試樣用甲醇-水提取，過濾后進高效液相色譜儀，經反相色譜柱分離后，根據保留時間和峰面積進行定性和定量。三、儀器與試劑1. 儀器（1）高效液相色譜儀

19、，配有紫外檢測器或二極管陣列檢測器（2）分析天平：感量為0.0001 g（3）超聲波水?。?）渦旋混合器2. 試劑除非另有說明，所有試劑均為分析純，水為GB/T 6682規(guī)定的一級水。（1）甲醇：色譜純（2）乙腈：色譜純（3）檸檬酸（4）辛烷磺酸鈉：色譜純（5）離子對試劑緩沖液：準確稱取2.10 g 檸檬酸和2.16 g 辛烷磺酸鈉，加入約980 mL 水溶解，調節(jié)pH至3.0后，定容至1L備用。（6）三聚氰胺標準品：CAS 108-78-01，純度大于99.0%。（7）三聚氰胺標準儲備液：準確稱取100 mg（精確到0.1 mg）三聚氰胺標準品于100 mL 容量瓶中，用甲醇水溶液（1+1）

20、溶解并定容至刻度，配制成濃度為1 mg/mL的標準儲備液，于4避光保存。四、實驗步驟1、高效液相色譜檢測樣品參考條件：（1）C18柱，250 mm×4.6 mm，5 m，或相當者。（2）流動相：乙腈+離子對試劑緩沖液(10+90) 恒量流速 （3）離子對試劑緩沖液：10mM辛烷磺酸鈉+10mM檸檬酸加1000mL水定容（4）流速：1mL/min （5）溫度：25（6）進樣體積：20L（7）檢測器：DAD檢測器 波長236nm根據保留時間定性，外標峰面積法定量2. 標準曲線的制備：用流動相將三聚氰胺標準儲備液稀釋得到的濃度為5、10、20、40、50g/mL的標準工作液，濃度由低到高進

21、樣檢測，以峰面積-濃度作圖，得到標準曲線回歸方程。3. 試樣測定：稱取試樣2克左右樣品，移入100mL容量瓶中，加入適量甲醇+水（2+8），充分混勻，超聲提取10分鐘后用甲醇+水（2+8）定容至刻度，過濾，濾液過0.45m濾膜過濾后進液相色譜測定。五、結果計算1. 數(shù)據記錄樣品質量m g樣品提取液體積V mL樣液中三聚氰胺濃度C mg/L2. 計算 C×V X (mg/)= -mX試樣中三聚氰胺的含量（mg/kg）；C樣品中檢測物濃度，mg/LV樣品體積，mLm樣品質量，g 計算結果保留兩位有效數(shù)字。 六、思考題1高效液相色譜儀由哪幾部分組成？2在高效液相色譜分析中，為什么要對流動相

22、進行脫氣？有哪些脫氣方式？實驗六：食品中合成著色劑的測定一、實驗目的1.掌握聚酰胺吸附法提取色素的樣品前處理方法。2. 加深對色譜分離原理的理解，掌握主要實驗條件的選擇；3. 掌握液相色譜定性定量分析技術。4. 掌握食品中人工合成色素的測定方法二、實驗原理食品中人工合成著色劑在酸性條件下用聚酰胺吸附法或液-液分配法提取，制成水溶液，注入高效液相色譜儀，經反相色譜分離后，根據保留時間定性，與峰面積比較進行定量。三、儀器與試劑2. 試劑除非另有說明，所有試劑均為分析純，水為GB/T 6682規(guī)定的一級水。（1）甲醇（色譜純）：經0.45m濾膜過濾。（2）0.02 mol/L 乙酸銨溶液：稱取1.5

23、4 g 乙酸銨，加水溶解至1000 mL，經0.45m 濾膜過濾。（3）聚酰胺粉（尼龍6）：過200目篩。（4）甲醇-甲酸（6+4）溶液：量取甲醇60 mL，甲酸40 mL，混勻。（5）檸檬酸溶液：稱取20g 檸檬酸，加水至100 mL，溶解混勻。（6）無水乙醇-氨水-水（7+2+1）溶液：量取無水乙醇70 mL，氨水20 mL，水10mL，混勻。（7）pH6的水：水加檸檬酸溶液調pH值到6。（8）合成著色劑標準溶液：準確稱取按其純度折算為100%質量的檸檬黃、日落黃各0.100 g，置100 mL 容量瓶中，加pH 6水到刻度，配成濃度為1.00 mg/mL 的著色劑水溶液。也可以直接購買該

24、著色劑的有證國家標準物質作為標準溶液。（9）合成著色劑標準使用液：臨用時將上述溶液加水稀釋100倍，經0.45m 濾膜過濾，配成每毫升相當于10 g 的合成著色劑。（10）乙酸2. 儀器：（1）高效液相色譜儀，配有紫外檢測器或二極管陣列檢測器（2）分析天平：感量為0.0001 g（3）電熱恒溫干燥箱（4）真空泵（5）真空抽濾瓶（6）G3垂融漏斗四、實驗步驟1、高效液相色譜檢測樣品參考條件：（1）C18柱，250 mm×4.6 mm，5 m，或相當者（2）流動相：甲醇-乙酸銨溶液(PH=4.0,0.02 mol/L)（3）梯度洗脫：甲醇：20%35%，5min；35%98%，5min；

25、98% 繼續(xù)6 min（4）流速：1mL/min（5）檢測波長：254nm2. 樣品處理1、稱取20.0g40.0g,放入100mL 燒杯中，加熱驅除二氧化碳。2. 色素提取1、聚酰胺吸附法：試樣溶液加檸檬酸溶液pH值到6，加熱至60，將1g聚酰胺粉加少許水調成粥狀，倒入試樣溶液中，攪拌片刻，以G3垂融漏斗抽濾，用60 pH=4的水洗滌35次，然后用甲醇-甲酸混合溶液洗滌35次，再用水洗至中性，用乙醇-氨水-水混合溶液解吸35次，每次5mL，收集解吸液，加乙酸中和，蒸發(fā)至近干，加水溶解，定容至5mL。約0.45m 濾膜過濾，取20L 進高效液相色譜儀分析。2、測定取相同體積樣液和合成著色劑標準

26、使用液分別注入高效液相色譜儀，根據保留時間定性，外標峰面積法定量。五、結果計算1. 數(shù)據記錄樣品質量m g樣品提取液體積V mL樣液中檸檬黃濃度C1 mg/L樣液中日落黃濃度C2 mg/L2. 計算C×V X (g/)= -m×1000C樣品中檢測物濃度，mg/LV樣品體積，mLm樣品質量，g 計算結果保留兩位有效數(shù)字。六、思考題1、什么是梯度洗脫？它與氣相色譜中的程序升溫有何異同？2、用聚酰胺粉吸附提取色素時，用檸檬酸調整樣液的pH 值到6的目的是什么？如何解吸被聚酰胺粉吸附的色素？實驗七：糖精含量的檢測(薄層色譜法)一、實驗目的1. 學習薄層色譜法測定食品中糖精含量的基本原理。2. 掌握薄層色譜法的基本操作技術。二、實驗原理在酸性條件下，食品中的糖精鈉用乙醚提