原核蛋白包涵體表達案例

1、Zoonbio Biotechnology原核蛋白（包涵體）表達案例技術服務咨詢025-85454BO0-查號撥0,（分機）分子8Q2/蛋白803/免疫806/檢測811025-8563400 產品錯看專線 025-8444B440 公司名稱；南京神鼎生物技術有限公司技術支持熱線：400-0660086公司網址1ww, 郵箱：or de rzoonbk）. com 稅號: 91320H656723S52XA聯(lián)系地址；江蘇省南京鯉濟開發(fā)區(qū)紅楓科技園*6株2樓神鼎生物（郵編210033 ）原核蛋白(包涵體)表達案例1 .實驗目的以客戶提供的目的蛋白基因構建表達載體， 通

2、過原核蛋白表達體系獲得目的蛋白Ao2 .實驗設計(1)分析客戶提供的目的蛋白序列，設計蛋白表達方案；(2)選擇鐘鼎特色載體pCznl,構建表達質粒pCzn1-A;(3) IPTG誘導進行目的蛋白表達，并且優(yōu)化表達條件，將誘導條件調整至37 C, 經分析目標蛋白主要呈包涵體形式，通過 Western Blot檢測蛋白A是否表達；(4)通過Ni柱純化獲得目的蛋白A, SDS-PAGE檢測純化蛋白純度，BSA方法 測定蛋白濃度。3.蛋白分析(1)經 EditSeq 翻譯目的蛋白 A 序列：m.w.=23.25kd, pI=5.22(2)經UniProt匹配，蛋白A物種來源：人類(3)蛋白性質分析蛋白

3、親疏水分析5Q100150200也iLk15" £1.510.500.5-L-1.5耳-2.S蛋白跨膜結構域分析T助 siTiLnibfaiE out sid e；蛋白信號肽預測1.00SC-iicdre Swore Yscors0 2 -I-Ofl jwiwmwiwiliiTnAlhnwmTiKJl UWk UhjktMK Ph£DDI DMrB LIU FIT KPL RAIET iE LMf MF HKDr AGIM ftl 工"片 R KHCK IU FI L F Ero703040：!tiilrjnMue7EgEE4ZE AltalBDl K0

4、113 IHcUEEiflQ .45G Hegw-fkEffSAgMllF*lizTfei分析結果：目的蛋白整體呈親水性、無跨膜結構域、無信號肽序列，可嘗試全長表達。結論：將目的基因構建在鐘鼎特色載體 pCznl上，利用載體自帶信號肽分泌表 達。4 .表達載體構建4.1 pCzn1-A質粒酶切驗證:1212Mbp鐘鼎特色載體pCznl酶切鑒定Marker: 200,500,800,1200,2000,3000,4500Linel:酶切前質粒Line2:酶切后質粒基因名稱：A (OD260/OD280:1.82)酶切位點：NdeI /XhoI4.2 pCzn1-A質粒測序驗證:部分序列比對結果圖5 .蛋白表達及純化KD M 1 2 3 4116.066.245.035.025.018.414.4蛋白表達鑒定SDS-PAGE分析M:蛋白質分子質量標準1:未誘導2:誘導后3:誘導破碎后上清4:誘導破碎后沉淀KD M 123116.066,245.035,025.018.414.4蛋白純化 SDS-PAGE分析M:蛋白質分子質量標準1:破碎后處理樣品2:流出3:洗脫KD M 140 .一30 一2