氯惡草唑檢測(cè)方法

1、氯惡草唑檢測(cè)方法1分析目標(biāo)化合物氯惡草唑、高氯惡草唑、惡唑禾草靈、高惡唑禾草靈、CDHB6-氯2,3二氫苯并噁唑2酮2、儀器設(shè)備帶紫外分光光度檢測(cè)器的高效液相色譜儀（HPLC(UV)）。液相色譜-質(zhì)譜儀（LC/MS）3、試劑除下列試劑外，使用附錄2所列試劑。氯惡草唑標(biāo)準(zhǔn)品：含氯惡草唑98以上，熔點(diǎn)為8587。4試驗(yàn)溶液的制備1） 提取方法 谷類，豆類和種子類：稱取10.0g，加入20mL水，放置2小時(shí)。加入100mL乙腈，均質(zhì)后，抽濾。濾紙上的殘留物中加入50mL乙腈均質(zhì)后，按上述同樣操作，合并所得的濾液，40以下濃縮至約30mL。加入20g氯化鈉和100mL 0.5 mol/L鹽酸，分別用1

2、00mL和50mL乙酸乙酯：正己烷（3：7）混合溶液振蕩提取兩次。提取液中加入無(wú)水硫酸鈉脫水，濾去無(wú)水硫酸鈉后，濾出液在40以下濃縮，除去溶劑。殘留物中加入30mL正己烷，每次用30mL正己烷飽和乙腈溶液振蕩提取兩次。提取液在40以下濃縮，除去溶劑。水果和蔬菜20.0g樣品中加入100mL乙腈，均質(zhì)后，抽濾。濾紙上的殘留物中加入50mL乙腈均質(zhì)，按上述同樣操作，合并所得的濾液，40以下濃縮至約30ml。加入20g氯化鈉和100mL 0.5 mol/L鹽酸，分別用100mL和50mL乙酸乙酯：正己烷（3 ：7）混合溶液振蕩提取兩次。提取液在40以下濃縮，除去溶劑。2）水解在1）所得的殘留物中加入

3、10 mL 0.5mol/L鹽酸，塞緊，不時(shí)振蕩混合，在50下加溫30分鐘。加入100mL 10氯化鈉溶液，分別用100mL和50mL乙酸乙酯：正己烷（3 ：7）混合溶液振蕩提取兩次。提取液中加入無(wú)水硫酸鈉脫水，濾去無(wú)水硫酸鈉，濾液在40以下濃縮，除去溶劑。3）凈化方法在2）水解所得的殘留物中加入5mL正已烷溶解。在丙三醇丙醇甲硅烷基化硅膠小柱(360mg) （I）下面連接三甲胺基丙基甲硅烷基化硅膠與苯砜酸甲硅烷基化硅膠混合小柱(600mg)（II）連接，注入10mL正已烷，舍棄流出液。柱中注入上述溶液，舍棄流出液。接著，依次注入10mL正已烷和30mL丙酮：正己烷（1：19）混合溶液，棄去各

4、流出液，取下小柱（I），在小柱（II）中注入30 mL丙酮：正己烷（1：1）混合溶液，溶出液40以下濃縮，除去溶劑。殘留物溶解在乙腈中，準(zhǔn)確至1 mL，作為試驗(yàn)溶液。但是，分析樣品為大豆、毛豆、豇豆時(shí)，用5mL正已烷代替乙腈溶解，用下述方法進(jìn)一步凈化：在色譜管(內(nèi)徑15 mm) 中注入5g懸浮在正已烷中的柱色譜用合成硅酸鎂，其上面再裝入約5g無(wú)水硫酸鈉，放出正己烷至柱上端留有少量的正己烷。柱中注入上述所得的溶液，舍棄流出液，依次注入10mL正已烷和150mL丙酮：正己烷(1：19)混合溶液，舍棄各流出液。再注入150mL丙酮：正己烷(3：7)混合溶液，溶出液在40以下濃縮，除去溶劑。殘留物溶解

5、在乙腈中，準(zhǔn)確至1mL，作為試驗(yàn)溶液。5標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作將氯惡草唑標(biāo)準(zhǔn)品配制成100 mg/L的丙酮溶液，取其1mL，在室溫下通氮?dú)獬ト軇?。殘留物與4中2）同樣操作，其殘留物中加入乙腈溶解，至50mL。用乙腈稀釋此溶液，配制成0.12 mg/L氯惡草唑的丙酮溶液數(shù)點(diǎn)，分別注入20L于 HPLC中，用峰高法或面積法繪制成標(biāo)準(zhǔn)曲線。6定量試驗(yàn)注入20L試驗(yàn)溶液于HPLC中 ，根據(jù)5的標(biāo)準(zhǔn)曲線求出氯惡草唑的含量。7測(cè)定條件1）HPLC檢測(cè)器：UV (波長(zhǎng)235 nm)柱：十八烷基甲硅烷基化硅膠（粒徑5m），內(nèi)徑4.6mm、長(zhǎng)250mm。柱溫：40流動(dòng)相：乙腈：0.01 %三氯乙酸混合溶液，從(3：7

6、)到(1：0)濃度梯度運(yùn)行30分鐘。保留時(shí)間標(biāo)準(zhǔn)：10分鐘2）LC/MS柱：十八烷基甲硅烷基化硅膠 （粒徑3m），內(nèi)徑 2mm、長(zhǎng) 150mm。柱溫：40流動(dòng)相：含有0.2 %乙酸的乙睛：0.2乙酸混合溶液，從(3：97)到(97：3)濃度梯度運(yùn)行10分鐘。離子化方式：ESI()主離子： m/z 168、170保持時(shí)間標(biāo)準(zhǔn)：10 分8定量限0.05 mg/kg9注意事項(xiàng)1）分析値將氯惡草唑和惡唑禾草靈轉(zhuǎn)變成CDHB后，對(duì)CDHB 進(jìn)行定量，其含量乘以系數(shù)換算成氯惡草唑的含量，作為氯惡草唑的分析值。氯惡草唑的分析值中，包括氯惡草唑、高氯惡草唑、惡唑禾草靈、高惡唑禾草靈和CDHB。2）檢測(cè)方法概述

7、本方法乙腈從樣品中提取氯惡草唑、高氯惡草唑和它們的代謝物惡唑禾草靈、高惡唑禾草靈和CDHB，轉(zhuǎn)溶到乙酸乙酯：正己烷的混合溶液中。水果、蔬菜保持原樣，谷類等用乙腈/正己烷分配脫脂后，用鹽酸水解，氯惡草唑和惡唑禾草靈轉(zhuǎn)變成CDHB。經(jīng)丙三醇丙醇甲硅烷基化硅膠小柱、三甲胺基丙基甲硅烷基化硅膠與苯砜酸甲硅烷基化硅膠混合小柱和合成硅酸鎂柱凈化后，HPLC(UV)測(cè)定CDHB，LC/MS 確證。3）注意點(diǎn) 用7所列的HPLC 測(cè)定條件，可以同時(shí)檢測(cè)氯惡草唑和惡唑禾草靈。CDHB的保留時(shí)間約10分鐘，惡唑禾草靈的保留時(shí)間約17分鐘，氯惡草唑約24分鐘。 按照4中2)所列示的操作，從氯惡草唑轉(zhuǎn)變CDHB的轉(zhuǎn)變率為95%。取得CDHB標(biāo)準(zhǔn)品時(shí)，繪制成CDHB的標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)CDHB定量，按下式求得氯惡草唑的含量。氯