幾種真菌的分離與鑒定

1、常見真菌的別離與鑒定病原真菌的一般特性真菌Fungi是微生物中的一個(gè)大類，是一群數(shù)目龐大的細(xì)胞生物，估計(jì)全世界已有記載的真菌有10萬(wàn)種以上。它們的子實(shí)體小者用顯微鏡才能見到，大者可達(dá)數(shù)十厘米，它們共同特征是具有真正的細(xì)胞核，產(chǎn)生抱子和不含葉綠素，以寄生或腐生等方式吸取養(yǎng)料，僅少數(shù)類群為單細(xì)胞，其他都有分支或不分支的絲狀體，能進(jìn)展有性或無(wú)性繁殖，具有纖維素或其他葡聚糖或幾丁質(zhì)的微纖維或兩者兼有的細(xì)胞壁的有機(jī)體。對(duì)人類和動(dòng)物致病的真菌大約100余種，屬于病原真菌。一、根本性狀一形態(tài)構(gòu)造真菌分單細(xì)胞真菌與多細(xì)胞真菌兩大類，前者屬于酵母菌yeast一般呈球形或卵圓形，后者稱為霉菌mold或絲狀真菌，呈

2、絲狀分枝，菌絲交織象絨球狀，另有一些真菌可因寄生環(huán)境及培養(yǎng)條件養(yǎng)料、溫度、氧氣等的不同可交替出現(xiàn)兩種形態(tài)，即在室溫中呈霉菌型，在37C或體內(nèi)呈單細(xì)胞的酵母型，這類真菌有雙相性，所以稱之為雙態(tài)真菌或二相真菌。真菌的細(xì)胞構(gòu)造與一般植物細(xì)胞相似，有定型的細(xì)胞核及完善的細(xì)胞器，但胞壁與細(xì)菌胞壁不同，不含粘肽而是由角質(zhì)及葡聚糖組成，也含有脂多糖蛋白質(zhì)，其中酵母菌及類酵母菌皆以出芽增殖，不生長(zhǎng)真菌絲，革蘭氏染色呈陽(yáng)性，絲狀真菌分菌絲及抱子兩局部，形態(tài)多種多樣，分述如下。菌絲Hypha真菌在適宜的環(huán)境中，由抱子生出嫩芽，稱為芽管。芽管逐漸延長(zhǎng)呈絲狀，稱菌絲。菌絲繼續(xù)生長(zhǎng)并生長(zhǎng)分枝，增殖的菌絲交織組成菌絲體。

3、其中一局部菌絲深入被寄生的物體或培養(yǎng)基中吸取養(yǎng)料，稱為營(yíng)養(yǎng)菌絲體。另一局部菌絲向空間生長(zhǎng)，稱為氣生菌絲體。氣生菌絲體能產(chǎn)生抱子者稱為生殖菌絲體。菌絲中各個(gè)細(xì)胞間有明顯分隔者，稱為有隔菌絲。主要見于病原性真菌。很多非病原真菌的菌絲無(wú)明顯分隔，稱為無(wú)隔菌絲。有些菌絲可呈各種特殊形式，如球拍狀、破梳狀、螺旋狀、結(jié)節(jié)狀、關(guān)節(jié)狀、鹿角狀、假菌絲。1. 抱子生成抱子是真菌擴(kuò)大繁殖的一種方式。真菌抱子的抵抗力、形態(tài)及作用等均與細(xì)菌芽胞不同，分為無(wú)性抱子及有性抱子兩大類。不經(jīng)過(guò)兩性細(xì)胞的結(jié)合而形成的抱子叫無(wú)性抱子，這一繁殖過(guò)程稱為無(wú)性繁殖。常見的無(wú)性抱子有5種：關(guān)節(jié)抱子、厚壁抱子、抱子囊抱子、芽抱和分生抱子。

4、病原真菌屬于不完全菌綱，很少產(chǎn)生有性抱子，大多數(shù)是無(wú)性抱子。1厚壁抱子：當(dāng)真菌在不利環(huán)境中，由菌絲內(nèi)胞漿縮濃和胞壁增厚而成，呈圓形。當(dāng)環(huán)境好轉(zhuǎn)時(shí)可生成芽管成長(zhǎng)為菌絲。2關(guān)節(jié)抱子：菌絲斷裂形成長(zhǎng)方形兩端略鈍圓的抱子叫關(guān)節(jié)抱子。如白地霉和粗球抱子菌。3抱子囊抱子：為鞭毛菌和接合菌的無(wú)性生殖形式。抱子囊中所含的抱子來(lái)源于分枝菌絲或胞囊梗頂端膨大形成抱子囊，囊內(nèi)原生質(zhì)濃縮集聚，割裂而成，一般數(shù)目較多，抱子囊形態(tài)多樣，因種而異。4芽生抱子：由菌細(xì)胞出芽生成，見于念珠菌及隱球菌，前者類酵母菌出芽后抱子伸長(zhǎng)呈絲狀，但不見與母細(xì)胞別離，稱為假菌絲，在假菌絲上的收縮點(diǎn)也可出芽成芽生抱子。5分生抱子：是子囊菌和半

5、知菌的無(wú)性抱子，也是半知菌分類的主要依據(jù)，單細(xì)胞的分生抱子稱小分生抱子，有蒂或無(wú)蒂，側(cè)生或游離，分散或成群，圓形、梨形、卵圓形或其它形狀，外表粗糙或光滑，或有或無(wú)各種紋飾。多細(xì)胞的分生抱子稱大分生抱子，有紡錘形、棒形、球棍形、鐮刀形及其它形狀，兩端尖或圓或一端圓，厚壁或薄壁，壁光滑或粗糙，有色或無(wú)色，分隔有多有少。二培養(yǎng)特性及繁殖方式1.培養(yǎng)特性大多數(shù)真菌對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求不高，只需要水、鹽，簡(jiǎn)單的氮源及碳水化合物就可生長(zhǎng)，一般常用沙堡氏瓊脂基主要成分葡萄糖4%蛋白腺1%瓊脂2%培養(yǎng)都能生長(zhǎng)。但需要弱酸性pH46、較低孵育溫度2228C，充分溫度和氧氣供給才能生長(zhǎng)良好。侵害內(nèi)臟的某些真菌在37C含血的

6、培養(yǎng)基中生長(zhǎng)良好。真菌生長(zhǎng)都比擬緩慢，大多需孵育數(shù)天后才成明顯菌落，菌落有以下三種類型：1酵母型菌落：外觀濕潤(rùn)稠軟致密，類似一般細(xì)菌菌落，鏡檢只見有圓形或橢圓形生芽細(xì)胞例如隱球菌的菌落。2類酵母型菌落：外觀性狀似酵母型菌落，鏡檢除見有出芽的細(xì)胞外，尚可見到假菌絲例如念珠菌的菌落。3絲狀型菌落：由多數(shù)分枝的菌絲體向上生長(zhǎng)組成疏松的絨球狀，外表有很多抱子，顯示各種色澤，菌落可呈棉絮狀絨球狀粉末狀或石膏樣，其正面和反面可顯示各種不同色素，常作為鑒定菌種的參考。鏡檢可見有縱橫交織的菌絲及各種抱子例如各種癬菌的菌落。2.繁殖方式有多樣性，包括出芽增殖，菌絲增長(zhǎng)，菌絲分枝和斷裂，產(chǎn)生無(wú)性抱子及有性抱子進(jìn)展

7、繁殖，因此它繁殖力很強(qiáng)，但生長(zhǎng)速度較慢。三變異性和抵抗力真困很容易發(fā)生變異，在人工培養(yǎng)基中屢次移種或孵育過(guò)久，就可出現(xiàn)形態(tài)構(gòu)造、菌落性狀、色素以及各種生理性狀包括毒力的改變，用不同的培養(yǎng)基和溫度培養(yǎng)真菌，其性狀也有改變，真菌對(duì)枯燥陽(yáng)光紫外線及一般化學(xué)消毒劑耐受性卻較強(qiáng)。但對(duì)熱的抵抗力卻不強(qiáng)。60C以上1小時(shí)即可殺死抱子及其菌絲，在1吮3%炭酸、2.5%碘酊、0.1%升汞及10御醛中可被滅活。用甲醛氣體熏蒸被真菌污染的衣物用具，可殺滅真菌菌絲及其抱子。但真菌對(duì)一般抗菌素及磺胺藥均不敏感。只對(duì)二性霉素、酮康哇、制霉菌素等非常敏感，治療真菌感染常用此藥。四致病性與免疫性1.致病性病原真菌的致病機(jī)制還

8、是一個(gè)未完全解決的問(wèn)題；根據(jù)其侵害部位，主要分為以下兩類：1淺部真菌?。褐饕砂_菌引起，大多為外源感染，常易侵害皮膚、指趾甲及須發(fā)等含角質(zhì)的組織，引起癬癥。2深部真菌?。嚎捎筛鞣N真菌引起，包括類酵母菌、二相真菌及絲狀菌。侵害粘膜、皮下組織、內(nèi)臟及腦膜等處，有時(shí)擴(kuò)散全身，主要是內(nèi)源性感染，也可由外源傳染；前者是因機(jī)體抵抗力降低，如患重病，長(zhǎng)期使用免疫抑制劑，廣譜抗菌素或放射治療，患惡性病，嚴(yán)重?zé)齻葧r(shí)，造成體內(nèi)菌群失調(diào)，以致常居在體內(nèi)的某些真菌如白念珠菌，甚至平時(shí)不致病的環(huán)境中的真菌如曲霉、毛霉等也會(huì)乘機(jī)侵害，一些傳染性較強(qiáng)的內(nèi)臟真菌病是內(nèi)外源感染。2.免疫性淺部真菌病一般在血中不產(chǎn)生特異性抗體

9、，病后無(wú)免疫保護(hù)力，只是兒童頭癬等青春期后頭皮皮脂增多時(shí)可以白愈，以后不再感染，其他部位癬癥治愈后仍可再感染。深部真菌病雖可產(chǎn)生抗體，但無(wú)明顯免疫保護(hù)作用。臨床常見的病原性真菌一、淺部真菌一皮膚癬菌皮膚癬菌又稱皮膚絲狀真菌，有以下三屬見表1，都只侵犯體表角化組織皮膚，毛發(fā)及指甲和趾甲。不侵害深部組織，或內(nèi)臟，皆屬外源性傳染，由接觸患癬病人、動(dòng)物狗、貓、鼠、牛、馬等或染菌物體而感染。毛癬菌屬大紅色毛癬菌1直接鏡檢：皮屑及甲屑，分枝分隔的菌絲有時(shí)可斷裂或關(guān)節(jié)抱子狀，毛發(fā)：發(fā)外型感染表現(xiàn)為發(fā)外抱子排列成串。少數(shù)為發(fā)內(nèi)型感染抱子在發(fā)內(nèi)排列成鏈狀；毛發(fā)穿孔試驗(yàn)陰性。2培養(yǎng)特征：在葡萄糖蛋白腺瓊脂，25C

10、,生長(zhǎng)比擬快，菌落形態(tài)有多種表現(xiàn)，鏡檢也不完全一樣，常見有以下四種：I型：羊毛狀：白色羊毛狀菌絲充滿斜面，典型的卷成筒狀，邊緣貼牢管壁，呈鮮紅色，反面開場(chǎng)在中心有一紅色小點(diǎn)，以后形成深紅色環(huán)，最后成片為葡萄酒色，色素邊緣劃界非常明顯。少數(shù)I型菌株表現(xiàn)無(wú)紅色色素，正面白色，反面呈淡黃色類似石膏I型，亦有正面白色而反面呈灰黑色。II型：絨毛狀：粉紅色絨毛狀菌絲生長(zhǎng)，占斜面3/5,菌絲稀疏，透過(guò)菌絲可見粉紅色的基底，反面顏色同I型一樣。山型:粉未狀：菌落外表稍有凸起，呈粉末狀，粉紅色，約占斜面的1/22/3,反面同I型。IV型：溝紋狀：菌落生長(zhǎng)相對(duì)較慢，比以上三種類型為小，占斜面的1/31/2,菌落

11、中央凸起，從中央向四周有排列比擬整齊的放射狀溝紋，邊緣整齊，外表菌絲甚少。開場(chǎng)微帶黃色，以后變粉紅，反面同I型。3菌種鑒定：菌落特征及色素；大小分生抱子的形態(tài)；玉米粉吐溫瓊脂上產(chǎn)生紅色色素；毛發(fā)穿孔試驗(yàn)陰性；尿素酶試驗(yàn)陰性。大須癬毛癬菌1直接鏡檢：皮屑內(nèi)見分枝分隔的菌絲，甲屑內(nèi)為關(guān)節(jié)狀菌絲。毛發(fā)感染為發(fā)外型，發(fā)內(nèi)有時(shí)有菌絲。2培養(yǎng)特性：在沙氏上生長(zhǎng)較快，菌落形態(tài)可分為兩大類：毛型和粉型；以下I、II型為毛型，III、IV、V型屬粉型。白炎癥明顯的皮損中所別離出的菌株多屬粉型。毛型菌落外觀均似紅毛，應(yīng)注意鑒別。具體分型羊毛狀I(lǐng)型，又稱趾間毛癬菌，菌落生長(zhǎng)快，白色羊毛狀。氣生菌絲較多且長(zhǎng)，排列嚴(yán)密

12、，充滿斜面，好象紅毛，正面雪白，反面淡黃色。鏡檢見較細(xì)分枝，分隔的菌絲，胞漿濃。有少量球形或長(zhǎng)形小分生抱子，無(wú)螺旋菌絲和大分生抱子。間或可見球拍菌絲及結(jié)節(jié)菌絲。絨毛型II型，生長(zhǎng)快，菌落雪白。外表有嚴(yán)密的細(xì)短氣生菌絲，中央可有乳頭狀突起，邊緣如刀切，反面棕黃色或棕紅色。鏡檢見較細(xì)的分枝、分隔的菌絲，小分生抱子多，有時(shí)成葡萄串狀，無(wú)螺旋菌絲或大分生抱子；乳皮狀I(lǐng)II型，開場(chǎng)為乳白色菌絲，不久一局部菌落變?yōu)榉勰樱ⅫS，光滑，似牛乳外表的一層薄膜，可一塊塊地挑取，中央有少許褶疊，邊緣不整齊，反面淡黃或棕黃色。鏡檢見粗細(xì)不一，分枝分隔的菌絲和大量螺旋菌絲，間或可見破梳狀菌絲，結(jié)節(jié)菌絲及球拍菌絲，大

13、分生抱子少，棒狀，兩端圓，與分生抱子梗的連接處較窄，薄壁光滑，小分生抱子多，球形或長(zhǎng)形，有時(shí)成葡萄串狀排列。粉末狀I(lǐng)V型，菌落粉末狀，外表平坦、光滑。間或有少數(shù)白色氣生菌絲，中央有乳頭狀凸起，邊緣鋸齒狀。菌落生長(zhǎng)快，充滿斜面，色黃或奶油色，外觀像石小、反面棕黃或棕紅色。顆粒狀V型：生長(zhǎng)快，菌落粉樣，外表不平，呈顆粒狀。有不規(guī)那么的褶疊或溝紋，邊緣不整齊。下面色黃帶紅或棕黃。反面棕紅色。IV、V鏡檢均見大量棒狀大分生抱子及無(wú)數(shù)圓形的小分生抱子，少數(shù)長(zhǎng)型。游離或葡萄狀成串，有螺旋菌絲和球拍菌絲。3菌種鑒定：菌落形態(tài)；菌絲較細(xì)，是皮膚癬菌中最細(xì)的一種；螺旋菌絲多見；大分生抱子的形態(tài)和球形小分生抱子；

14、尿素酶陽(yáng)性；毛發(fā)穿孔陽(yáng)性。太紫色毛癬菌1直接鏡檢：皮屑、甲屑內(nèi)可見分枝分隔的菌絲或成串的抱子，病發(fā)取黑點(diǎn)部位的斷發(fā)，毛發(fā)損害為發(fā)內(nèi)型大抱子，呈關(guān)節(jié)型排列，充滿整個(gè)發(fā)內(nèi)，故毛發(fā)出皮即斷。2培養(yǎng)特性：在沙氏瓊脂培養(yǎng)基室溫培養(yǎng)菌落生長(zhǎng)慢，開場(chǎng)為圓形、白色、潮濕發(fā)亮的菌落，類似酵母；以后中央褶疊或突起，產(chǎn)生紫色色素，并逐漸擴(kuò)大，或中央紫色，邊緣淡紅色，最外圍有一圈白色的環(huán)。培養(yǎng)基顏色不變，邊緣無(wú)放射狀菌絲，整齊如刀切，下沉不明顯，反面無(wú)色至深紫色，少數(shù)菌株無(wú)顏色，呈無(wú)色紫色毛癬菌，鏡檢見粗細(xì)不一的菌絲，分隔較密，胞漿淡，有很多不規(guī)那么的突起和腫脹，但無(wú)鹿角菌絲。厚壁抱子多，多為間生，偶見小分生抱子25

15、個(gè)大生分生抱子。3菌種鑒定：菌落形態(tài)，紫色色素；VitB能促進(jìn)菌落生長(zhǎng)，形成大分生抱子；發(fā)內(nèi)型感染。1. 小抱子菌屬大羊毛狀小抱子菌1直接鏡檢：皮屑內(nèi)見分枝、分隔的菌絲，病發(fā)為發(fā)外型感染。2培養(yǎng)特性：在沙氏瓊脂培養(yǎng)基上室溫生長(zhǎng)快。開場(chǎng)為黃色絨毛樣生長(zhǎng)，2周后菌絲較多，呈羊毛狀，可充滿大局部斜面。中央趨向粉未化。正面桔黃，反面紅棕色，平皿中培養(yǎng)的菌落外表中央可有少數(shù)同心園，無(wú)放射狀溝紋。生長(zhǎng)約4-5周后開場(chǎng)變異，菌絲增多,大分生抱子減少或消失。鏡檢見大量紡錘形，厚壁的大分生抱子。一端稍彎曲，末端有帽樣肥大，有6-15個(gè)分隔。小分生抱子較少，長(zhǎng)形，無(wú)柄側(cè)生?？捎星蚺臓罹z，破梳狀菌絲，結(jié)節(jié)菌絲及大

16、量厚壁抱子等。3菌種鑒定：菌落形態(tài)及色素，在PDA養(yǎng)基上能產(chǎn)生黃色色素；特征性的厚壁、頂端膨大微彎曲，如戴帽的大分生抱子；發(fā)外抱子型感染。大石膏樣小抱子菌1直接鏡檢：皮屑內(nèi)見菌絲或成串的抱子，病發(fā)為發(fā)外型感染，抱子較大，排列成串。2培養(yǎng)特性：在沙氏瓊脂培養(yǎng)基上室溫生長(zhǎng)快，開場(chǎng)為白色菌絲，后成棕黃色粉未狀菌落，凝結(jié)成片，菌落中心有隆起，外圍有少數(shù)極短的溝紋，邊緣不整齊，反面紅棕色。鏡檢：見多數(shù)較小，紡錘形，46個(gè)的大分生抱子，壁厚13m兩端園，壁有刺，菌絲較少，小分生抱子棒狀無(wú)柄，有時(shí)可見球拍狀菌絲，螺旋，破梳狀菌絲及結(jié)節(jié)菌絲。3菌種鑒定：菌落形態(tài)；大分生抱子的形態(tài)；毛發(fā)穿孔試驗(yàn)陽(yáng)性。2. 表皮

17、癬菌屬大絮狀表皮癬菌1直接鏡檢：皮屑及甲屑內(nèi)見分枝分隔的菌絲。2培養(yǎng)特性：在沙氏培養(yǎng)基室溫生長(zhǎng)快。菌落開場(chǎng)蠟狀，Wj出斜面，外表有不規(guī)那么的褶疊，上覆粉未樣菌絲，黃綠色。較大的菌落中央有褶疊，外圍可見放射狀溝紋，最外圍有不整齊的平滑圈。菌落下沉明顯，培養(yǎng)基常為之開裂。反面黃至棕色。鏡檢：見典型的杵狀大分生抱子，24個(gè)分隔。游離端圓形，薄壁光滑，基部平截。常24個(gè)成群，無(wú)小分生抱子，老齡菌落厚壁抱子多，菌絲較細(xì)，分枝，分隔，間或可見球拍，結(jié)節(jié)和螺旋菌絲。3菌種鑒定：菌落特征；典型杵狀大分生抱子；無(wú)小分生抱子。二、深部真菌一白念珠菌：Candidaalbicans1. 標(biāo)本來(lái)源痰、大便、口腔或陰道

18、分泌物、尿、腦脊液、胸水、膿液、皮屑及痂皮等。2. 直接鏡檢氫氧化鉀涂片，可見卵圓形、圓形芽抱，薄壁，直徑約24芽抱，橢圓形芽抱的芽管延長(zhǎng)形成假菌絲，有時(shí)在菌絲旁附著芽抱，PASfe色為紅色。3. 培養(yǎng)及鏡檢1葡萄糖蛋白月東瓊脂：30C劃線培養(yǎng)一天即有光滑小菌落生長(zhǎng)，菌落為奶油色，閃光或呈蠟狀，柔軟光滑，老的菌落漸變硬，外表有皺褶或有毛發(fā)狀突起。鏡檢，在菌絲交接處有群集的卵圓形抱子或在菌絲旁側(cè)有少許芽抱，。2玉米培養(yǎng)基：菌落外觀同上，鏡檢：菌絲很少分枝，有少量芽生抱子，在菌絲的頂端或側(cè)緣有厚壁抱子，直徑717叫m3快速鑒定與鑒定程序：將標(biāo)本直接接種在科瑪嘉上，24小時(shí)出現(xiàn)翠綠色菌落，將初代別離

19、的酵母樣菌接種在含1礎(chǔ)溫80米粉中，25C室溫中2448小時(shí)，鏡檢可見頂端產(chǎn)生圓形厚壁抱子或接種于，正常人血清或羊血清中，置37C溫箱中，經(jīng)12小時(shí)鏡檢有芽生抱子及芽管形成，可初步鑒定為白念珠菌。API酵母快速鑒定：同化試驗(yàn)結(jié)果：葡萄糖+,麥芽糖+,乳糖一，半乳糖+。二熱帶念珠菌CandidaTropicalis1. 標(biāo)本來(lái)源：同白念珠菌。2. 直接鏡檢：同白念珠菌。3. 培養(yǎng)及鏡檢：1葡萄糖蛋白月東瓊脂，在25C中培養(yǎng)，菌落平滑有光澤，白色，時(shí)間較久外表有皺紋，粘稠，甚至有毛樣外觀，鏡檢可見卵圓形細(xì)胞或球形細(xì)胞約59m612mi。2玉米瓊脂：產(chǎn)生豐富的假菌絲及發(fā)育良好芽生抱子，但無(wú)厚壁抱子生

20、長(zhǎng)。3快速鑒定：科瑪嘉培養(yǎng)基上，24小時(shí)出現(xiàn)藍(lán)灰色。同化試驗(yàn)。三克柔氏念珠菌CandidaKrusei1. 標(biāo)本來(lái)源：同白念珠菌。2. 直接鏡檢：同白念珠菌。3. 培養(yǎng)及鏡檢：葡萄糖蛋白腺瓊脂：菌落扁平，平滑、枯燥，有時(shí)外表有皺折，通常是乳白色到淡黃，鏡檢所見：大多數(shù)抱子是較大的柱狀，亦有少數(shù)短卵圓形抱子。假菌絲豐富，芽生抱子在菌絲上輪生。玉米瓊脂：對(duì)稱分枝的菌絲，芽生抱子較少，無(wú)厚壁抱子。葡萄糖蛋白月東液培養(yǎng)基：在培養(yǎng)基外表生長(zhǎng)，與試管壁粘連?？焖勹b定：科瑪嘉培養(yǎng)基上24小時(shí)出現(xiàn)淡粉紅色菌落。同化試驗(yàn)。四近平滑念珠菌Candidaparapsilosis1. 標(biāo)本來(lái)源：同白念珠菌。2. 直接

21、鏡檢：同白念珠菌。3. 培養(yǎng)及鏡檢：葡萄糖蛋白月東瓊脂：乳酪樣菌落，通常外表光滑，亦有菌落外表粗糙及皺折。鏡檢所見：卵圓形芽生抱子5.0X48m假菌絲形成豐富。玉米瓊脂：穿插分枝菌絲，側(cè)生芽生抱子較多，無(wú)厚壁抱子。葡萄糖蛋白月東液基：無(wú)外表生長(zhǎng)，在管底生長(zhǎng)。快速鑒定：科瑪嘉培養(yǎng)上24小時(shí)出現(xiàn)粉色光滑菌落。同化試驗(yàn)：API。五光滑念珠菌Candidaglabrata1. 標(biāo)本來(lái)源：痰、尿、血、皮膚、陰道、傷口、腹水、胸水、膽汁等。2. 直接鏡檢：卵圓形芽生抱子，直徑27或更大，單芽，位于抱子的細(xì)端，無(wú)莢膜，無(wú)子囊或菌絲。3. 培養(yǎng)及鏡檢：葡萄糖蛋白月東瓊：白色或奶油色乳酪樣菌落，日久變棕灰色，外

22、表平滑，稍有光澤，本菌只在酸性條件下生長(zhǎng)，即不生長(zhǎng)，鏡檢：同直接涂片。快速鑒定：科瑪嘉培養(yǎng)基上24小時(shí)出現(xiàn)紫色菌落。同化：API試驗(yàn)。六膠紅酵母RhodotorulamucilaginosaL標(biāo)本來(lái)源：痰、尿、血、大便、皮膚、CSF咽喉、體液等。2. 直接鏡檢：圓形或卵圓形，35山直徑，有莢膜的芽生抱子，單芽生，抱子內(nèi)有少數(shù)顆粒，無(wú)菌絲，不著色。3. 培養(yǎng)及鏡檢：葡萄糖蛋白月東瓊脂：25C或37C時(shí)，生長(zhǎng)迅速，菌落10天內(nèi)可達(dá)2直徑，為乳酪樣生長(zhǎng)，邊緣整齊，外表光滑，但無(wú)光澤，桔紅，日久顏色逐漸消退，呈淡黃色或桔黃色，培養(yǎng)基不變色，鏡檢同涂片所見，有時(shí)可見假菌絲，無(wú)子囊。快速鑒定：菌落產(chǎn)生紅色

23、色素；使尿素瓊脂由黃變紅。七新生隱球菌Cryptococcusneoformans1. 標(biāo)本來(lái)源：腦脊液、痰、膿、尿、糞、血、活體組織及尸體解剖材料等。2. 直接鏡檢：墨汁染色，可見圓形厚壁抱子，菌體直徑約4201m外圍有一透光的厚莢膜，厚度約57少m莢膜內(nèi)的菌體可出芽或不出芽，抱內(nèi)有一較大的反光顆粒脂質(zhì)顆粒，不是抱核和許多小顆粒，可與白細(xì)胞或淋巴細(xì)胞相鑒別。3. 培養(yǎng)及鏡檢：在葡萄蛋白月東瓊脂，25C或37C培養(yǎng)時(shí)，25天即生長(zhǎng)出乳白色細(xì)菌粘液性菌落，呈不規(guī)那么圓形，外表有蠟樣光澤，以后菌落增厚，顏色由乳白、奶油轉(zhuǎn)桔黃色。非致病性隱球菌37C不生長(zhǎng)。鏡檢類似直接鏡檢，可見圓形抱子，直徑8m多

24、數(shù)有芽，抱子外圍有莢膜，但莢膜開場(chǎng)甚狹，日久漸增厚，無(wú)真菌絲及子囊抱子，但可有芽管?？焖勹b定：37C生長(zhǎng)；尿素酶變紅；咖啡酸變棕色；同化試驗(yàn)，不發(fā)酵葡萄糖、麥芽糖、蔗糖、乳糖等。三、其它實(shí)驗(yàn)室常見的絲狀真菌一曲霉屬：1. 標(biāo)本來(lái)源：皮屑，甲屑，耳丁盼，痰，糞，尿，膿液，活檢與尸檢組織標(biāo)本。2. 直接鏡檢：涂片見分枝，分隔的菌絲及足細(xì)胞，與外界相通腔道內(nèi)標(biāo)本中有時(shí)可見分生抱子頭，為曲霉的特征構(gòu)造。3. 培養(yǎng)：初代用沙氏培養(yǎng)基，次代用察氏PDA養(yǎng)基，接種后室溫培養(yǎng)2周。少數(shù)能產(chǎn)生閉囊殼的曲霉需培養(yǎng)3周或更長(zhǎng)時(shí)間。4. 菌種鑒定：1菌落，菌落生長(zhǎng)速度，外表質(zhì)地，顏色，形態(tài)和氣味等，其中顏色的特征較穩(wěn)定，是曲霉分類的主要依據(jù)之一2分生