銅離子測定方法及檢測畢業(yè)論文設計

1、開封大學學生畢業(yè)論文 論文題目：銅離子測定方法及檢測 班級： 姓名： 學號： 時間：2021年3月1日-2021年5月30日 2021年5月30日目 錄論 文 摘 要.3一、緒論.4一金屬離子的識別意義和方法簡介.4二熒光光譜.4 (三)熒光分析法.6四熒光分析的優(yōu)點.7五熒光定量分析的各種條件.7六分子結構與熒光的關系.8(七)熒光分子探針.9二、銅離子探針對銅離子含量的測定.9一引論.9二實驗局部.10三實驗結果與討論.16四小結.18三、結束語.19參考文獻.20致謝.21論 文 摘 要銅離子是化學、生命科學、環(huán)境科學和醫(yī)學等許多科學領域研究的重要對象，對溶液中銅離子的識別和檢測是分析化

2、學的主要任務之一。熒光分子探針檢測法不僅簡便，而且在高靈敏度、選擇性、時間分辨、實時原位檢測方面均有突出優(yōu)點。因此在傳統(tǒng)的受體分子上按照熒光分子傳感器設計原理連接熒光團構造的超分子熒光傳感器用于識別銅離子的研究受到越來越廣泛的關注。ML。該探針檢測限低，具有良好的選擇性，無其他金屬干擾。是一種方便快捷的檢測方法。關鍵詞:熒光探針 Cu2+檢測銅離子測定方法及檢測劉瑞華開封大學化工學院09應化三班一、 緒論（一） 銅離子識別的意義和方法簡介自然界中廣泛存在著銅元素。它們在不同濃度下往往會顯示出差異性的正面作用或負面作用，當銅離子濃度低于1M時，在許多生命過程生物催化反響酶的輔酶、生物運輸過程、生

3、物合成等中都是不可或缺的，然而，當在生物體中存在濃度過高時，那么會產生對一些必須酶的抑制作用、生物氧化/復原過程異常、神經毒性等有害作用。目前常用的銅離子分析檢測方法主要分為直接法和間接法兩大類。直接法是一類直接利用銅離子自身物理、化學性質對其進行分析檢測的方法，包括原子吸收/發(fā)射光譜法和離子選擇性電極法；間接法是一類利用銅離子和指示劑也可稱為化學分子探針之間的特異性化學反響或超分子作用產生的信號變化對銅離子進行分析檢測的方法，包括傳統(tǒng)的銅離子指示劑和近年來研究較熱的銅離子熒光分子探針。（二） 熒光光譜熒光是一種光致發(fā)光現(xiàn)象1。室溫下，大多數(shù)分子處于在基態(tài)的最低振動能層。處于基態(tài)的分子吸收能量

4、(電能、熱能、化學能或光能等)后被激發(fā)，躍遷到激發(fā)態(tài)，激發(fā)態(tài)不穩(wěn)定，分子將很快衰變到基態(tài)。假設返回到基態(tài)時伴隨著光子的輻射，這種現(xiàn)象稱為“發(fā)光。2熒光光譜的根本概念根據(jù)量子理論，微觀體系(原子、分子等)的內部運動一般是不連續(xù)的，有一系列分立的能級。體系由一能級向其他能級的過渡稱為躍遷2。體系由高向低能級的躍遷伴隨著能量的釋放;由低能級向高能級躍遷伴隨著能量的吸能量的釋放和吸收可以以輻射的方式進行(放出或吸收光子)，成為輻射躍遷也可以以無輻射的方式進行，如離子相互碰撞而產生的能量就是無輻射躍遷子。全部能級間可能的輻射躍遷對應于一系列輻射頻率，成為該物質的光譜。光光譜包括激發(fā)譜和發(fā)射譜兩種。激發(fā)譜

5、是熒光物質在不同波長的激發(fā)光作用測得的某一波長處的熒光強度的變化情況，也就是不同波長的激發(fā)光的相對效發(fā)射譜那么是某一固定波長的激發(fā)光作用下熒光強度在不同波長處的分布情況，就是熒光中不同波長的光成分的相對強度。同輻射發(fā)射和吸收相關聯(lián)的除了原和分子外，還有他們的聚集結構如晶格、半導體中的電子空穴對等等。3熒光光譜的主要參量激發(fā)譜和發(fā)射譜熒光光譜包括激發(fā)譜和發(fā)射譜兩種3。激發(fā)譜是熒光團在不同波長的激發(fā)光作用下測得的某一波長處(通常是其熒光光譜峰位的波長)的熒光強度的變化情況，也就是不同波長的激發(fā)光的相對效率。發(fā)射光譜那么是某一固定波長的激發(fā)光作用下熒光強度在不同波長處的分布情況，也就是熒光中不同波長

6、的光成分的相對強度。熒光發(fā)射光譜顯示了假設干普遍的特性。熒光壽命當某種物質被一束激光激發(fā)后，該物質的分子吸收能量后從基態(tài)躍遷到某一激發(fā)態(tài)上，再以輻射躍遷的形式發(fā)出熒光回到基態(tài).當激發(fā)停止后，分子的熒光強度降到激發(fā)時最大強度的l/e所需的時間稱為熒光壽命4，通常用丫表示。通過測量壽命可以得到有關分子結構和動力學等方面的許多信息。熒光強度熒光強度F取決于激發(fā)態(tài)的初始分布IA與熒光量子產率的乘積5。這里的F指的是向各個方向上發(fā)射的熒光強度的總和，實際上，光譜儀收集的只是其中的一小局部，因此儀器測到的熒光強度為F=IAFZ，這里Z是儀器因子。很顯然熒光強度與樣品在波長A處的消光系數(shù)有關，而消光系數(shù)與激

7、發(fā)波長是密切相關的，消光系數(shù)隨波長的變化稱為即吸收譜，因此熒光強度也隨激發(fā)波長的變化而變化。實際上儀器因子Z與波長是有關的，這就使得激發(fā)譜與吸收譜并不完全相似。（三） 熒光分析法1. 熒光分析法定量分析及其原理熒光分析法的定量測定方法較多，可分為直接測定法和間接測定法兩類。直接測定法:利用熒光分析法對被分析物質進行濃度測定，最簡單的便是直接測定法。某些物質只要本身能發(fā)熒光，只須將含這類物質的樣品作適當?shù)那疤幚砘騽e離除去干擾物質，即可通過測量它的熒光強度來測定其濃度。具體方法有兩種。直接比擬法:配制標準溶液的熒光強度Fx，己知標準溶液的濃度CS，便可求得樣品中待測熒光物質的含量。如果空白溶液的熒

8、光強度調不到零，那么必須從Fs和Fx值中扣除空白溶液的熒光強度FO，然后進行計算。標準曲線法:將含量的標準品經過和樣品同樣處理后，配成一系列標準溶液，測定其熒光強度，以熒光強度對熒光物質含量繪制標準曲線。再測定樣品溶液的熒光強度，由標準曲線便可求出樣品中待測熒光物質的含量。間接測定法:有許多物質，它們本身不能發(fā)熒光，或者熒光量子產率很低，僅能顯現(xiàn)非常微弱的熒光，無法直接測定，這時可采用間接測定方法。間接測定方法有以下幾種:化學轉化法:通過化學反響將非熒光物質變?yōu)檫m合于測定的熒光物質。例如金屬與鰲合劑反響生成具有熒光的螯合物。有機化合物可通過光化學反響、降解、氧化復原、偶聯(lián)、縮合或酶促反響，使它

9、們轉化為熒光物質。熒光碎滅法:這種方法是利用本身不發(fā)熒光的被分析物質能使某種熒光化合物的熒光碎滅的性質，通過測量熒光化合物熒光強度的下降，間接地測定該物質的濃度。敏化發(fā)光法:對于很低濃度的分析物質，如果采用一般的熒光測定方法，其熒光信號太弱而無法檢測，可使用一種物質(敏化劑)以吸收激發(fā)光，然后將激發(fā)光能傳遞給發(fā)熒光的分析物質，從而提高被分析物質測定的靈敏度。在實驗室，一般采用工作曲線法進行校正。既用處理過的量的物質，和式樣溶液配成標準溶液，測定其熒光強度，再以標準溶液濃度為橫坐標，以熒光強度為縱坐標繪制工作曲線。然后由所測得的試樣溶液的熒光強度對照工作曲線以求出試樣溶液中分析物質的濃度。四 熒

10、光分析的優(yōu)點熒光分析法憑借其高靈敏度，得以迅速開展。眾所周知在微量物質的各種分析方法中，比色法和分光光度法應用最為廣泛。而熒光分析法的靈敏度一般要比這兩種方法高23個數(shù)量級，它的靈敏度?？蛇_億分之幾。這是因為在熒光分析中，是由所測得的熒光強度來測定熒光物質的含量，而熒光強度的測量值不僅和被測溶液中熒光物質的本性及其濃度有關，而且與激發(fā)光的波長和強度以及熒光分析檢測器的靈敏度有關。因此加大激發(fā)光的強度，可以增大熒光強度，從而提高分析的靈敏度。熒光分析還有一個優(yōu)點，就是高選擇性。在對金屬離子的測定中，熒光分析得到了廣泛的應用，主要源于這種分析方法對金屬離子有很高的選擇性。與此同時，熒光分析法還具有

11、動態(tài)線性范圍寬，方法簡便，重現(xiàn)性好，取樣量少，儀器設備不復雜等優(yōu)點。然而，不能對本身不發(fā)熒光的物質進行直接檢測，這在某種程度上阻礙了熒光分析應用范圍的擴展。因此，還要更深入的研究化合物結構的關系與熒光的產生，才能合成更多的靈敏度高選擇性好的新熒光試劑，使熒光分析的能夠更好的能到應用。五 熒光定量分析的各種條件在熒光定量分析中，為了確定熒光分析的最正確工作條件，應考察以下的因素的影響及其消除方法同時還必須準確測定待測組分的激發(fā)和發(fā)射光譜。熒光物質的熒光光譜和熒光強度在不同的溶劑中會有很大的區(qū)別。這種影響分為一般溶劑效應和特殊溶劑效應。因此，在實驗中，一定要選擇適宜的溶劑，并且該溶劑要有足夠的純度

12、。同時還要必須考慮到的是溫度的影響。通常，隨著溫度的降低，熒光物質溶液的熒光量子產率和熒光強度增大，事實上溫度對熒光強度的影響是通過分子的內部能量轉化作用。因此實驗中，一般將溫度控制在2025范圍內。但反響速度較慢的情況下，可能要加熱才能使反響完全。溶液的pH值改變將對熒光強度產生很大的影響。大多數(shù)含有酸性或堿性基團的芳族化合物的熒光光譜，對于溶劑的pH氫鍵能力是非常敏感的。溶液的pH改變將會影響到基態(tài)分子或激發(fā)態(tài)分子的酸堿性質。對于金屬離子與有機試劑形成的熒光絡合物，溶液的pH值改變還會影響到絡合物組成的改變。不管哪種改變，最終都會導致到熒光光譜與熒光強度的改變。六 分子結構與熒光的關系1.

13、 分子共扼體系大小對熒光的影響在有機熒光試劑中，有機分子中具有發(fā)射熒光的基團稱為熒光團5。熒光團必須含有共扼大鍵，當共軛鍵到達一定程度才會發(fā)射出熒光，如苯、蔥、蔡、菲、對苯二醒等基團。芳香類碳氫化合物與直鏈的烯烴化合物相比，激發(fā)能向振動能的轉換更難，因而熒光強度更大。而對于具有強熒光的有機化合物和熒光試劑，僅有大的共扼體系還是不夠的，分子的共轆體系必須具備共平面性并且還要有一定程度的剛性。例如蔡和維生素A都有五個共軛鍵，前者為平面結構，后者是非剛性結構，而蔡的熒光強度為維生素A的五倍。2. 取代基對熒光的影響取代基效應是有機結構理論的重要組成局部，取代基的性質對熒光體的熒光特性和強度均有強烈的

14、影響。芳烴和雜環(huán)化合物的熒光光譜和熒光產率常隨取代基而變，取代基對熒光體的熒光強度、激發(fā)光譜、發(fā)射光譜和熒光效率的影響規(guī)律和機理，是人們甚為關注的領域，但到目前為止，我們對激發(fā)態(tài)分子的性質依舊了解不多，其影響規(guī)律大多數(shù)是通過實驗總結出來的。七 熒光分子探針1. 概述熒光分子探針，是指在一定體系內，當被分析物或被分析體系的物理、化學性質發(fā)生變化時，該熒光分子的熒光信號能發(fā)生相應改變，從而通過熒光信號反映出被分析物或被分析體系的濃度、性質等信息6。金屬離子熒光分子探針，那么是指能和體系中存在的某種特定金屬離子發(fā)生作用，并且通過熒光信號的變化反響出該種金屬離子的濃度信息的熒光分子探針7。按照金屬離子

15、熒光分子探針和相應金屬離子之間發(fā)生的相互作用，可將其分為1金屬離子誘導反響和2金屬離子與探針分子發(fā)生絡合等超分子作用兩大類。而后者又可以根據(jù)金屬離子與探針分子作用前后熒光信號發(fā)生變化的機制不同，分為熒光團的1光致電子轉移，2光致電荷轉移，3熒光共振能量轉移和4激基聚合物四類。各種熒光分子探針自身的結構和組成也有不同，據(jù)此大致可分為1有機小分子探針，2生物大分子探針和3納米材料探針三類。二、 銅離子探針對銅離子含量的測定一 引論銅離子(Cu2+)在濃度較高時，是一種有害的環(huán)境污染物，會對動植物造成毒害，當人體攝入大量的銅離子之后，極易對身體內的臟器造成負擔，特別是肝和膽，當這兩種器官出現(xiàn)問題后，

16、維持人體內的新陳代謝就會出現(xiàn)紊亂，導致肝硬化、肝腹水甚至更為嚴重。相反，銅離子在濃度適宜時，那么是維持生命體正常生理功能的必須元素之一，如銅離子對人體大腦、心臟、造血、抵御癌癥、抗衰老等方面都具有重要的作用。缺乏銅離子將會導致腦細胞中的色素氧化酶減少、活力下降，從而使記憶衰退、思維紊亂；銅離子參與形成的氧化酶也是構成心臟血管的基質膠原和彈性蛋白形成過程中必不可少的物質；人體造血也離不開需要銅離子合成的血漿銅藍蛋白；另外，銅離子對癌細胞也有一定的抑制作用，一些含銅的金屬硫蛋白、超氧化物歧化酶等具有較強的清掃此種代謝廢物的功能，能夠延緩衰老。因此，準確分析測定樣品中銅離子的含量對于監(jiān)控環(huán)境質量、居

17、民飲用水及食品平安、營養(yǎng)健康狀態(tài)等非常重要。我國的飲用水平安標準要求飲用水中銅離子的含量必須不高于1ppm。目前常見的用于銅離子分析檢測的儀器和方法主要包括離子色譜法、分光光度法、熒光光譜法和原子吸收/發(fā)射光譜法、電化學方法等。其中分子光譜法分光光度法、熒光光譜法由于其所需儀器設備簡單、分析迅速、產生的熒光信號用肉眼觀測可非常方便實現(xiàn)半定量分析等特點，近年來越來越受到科學家們的廣泛關注。盡管目前有不少用于銅離子分析檢測的熒光分子探針已見報道，但是由于銅離子的順磁性，這些熒光分子探針大多是對銅離子產生熒光淬滅的響應?？紤]到靈敏度的因素，對銅離子產生熒光增強或變色響應的熒光分子探針的靈敏度更高，設

18、計合成這一類的熒光分子探針將是更加具有應用前景和挑戰(zhàn)性的工作。另外，局部已見報道的熒光分子探針對銅離子的選擇性缺乏，會受到鐵、汞、鈷、鎳等離子的干擾，仍有待通過探針分子的設計提高銅離子選擇性。二 實驗局部 去離子水經過二次蒸餾后使用，已合成好的銅離子探針、乙腈、硝酸鈉、硝酸鉀、硝酸鈣、硝酸鎂、氯化錳、硝酸鐵、氯化亞鐵、硝酸鈷、硝酸鎳、硝酸鉛、硝酸鎘、硝酸銀、硝酸銅、硝酸鋅、高氯酸汞、氫氧化鈉、碳酸氫鈉、醋酸鈉、鹽酸、醋酸均購自北京化學試劑公司，為分析純。HEPES緩沖溶液20 mM的配制：在500 mL燒杯中參加2.383 Hepes和200 mL去離子水，攪拌溶解后，在pH計監(jiān)控下，緩慢參加

19、300mL乙腈。 紫外-可見吸收光譜測定：紫外-可見吸收光譜使用UV-2800H型分光光度儀測定，樣品置于1 cm光程的石英比色皿中。熒光光譜測定：熒光激發(fā)、發(fā)射光譜均使用FP-7000熒光光譜儀測定，樣品置于1 cm光程的石英比色皿中。pH值測定：溶液pH值的測定使用Model pHS-3CpH計測定。 準確稱量探針A到25ml容量瓶中，參加乙腈至刻度，配成25ml，1mmL探針標液。a.紫外可見測試，進行光譜掃描，找出最大吸收波長，固定波長進行后續(xù)測定。從圖2.1可以看出探針在紫外燈下響應較低，所以不采用紫外進行檢測。10-6ML的探針A與10010-6ML的銅離子溶液的熒光3D掃描譜圖，

20、從圖中明顯看出有峰出現(xiàn)，即產生熒光。且從圖中看出熒光的激發(fā)波長EX為550nm左右，發(fā)射波長EM為590nm左右。又分別做了圖2.3和圖2.4。圖2.3設定激發(fā)波長EX為550nm進行熒光掃描，波峰出現(xiàn)在發(fā)射波長EM為590nm處。圖2.4設定發(fā)射波長EM為590nm進行熒光掃描，波峰出現(xiàn)在了激發(fā)波長EX為550nm處。由此確定探針A的激發(fā)和發(fā)射波長為激發(fā)EX=550nm，發(fā)射EM=590nm。固定待測離子濃度，逐漸增加顯色劑濃度，做出劑量-ML,探針A的濃度為2ML,5ML, 8ML, 10ML, 15ML, 20ML, 30ML, 40ML, 50ML, 60ML, 70ML, 80ML,

21、 90ML, 100ML掃描熒光得出的散點圖。由圖看出當探針顯色劑的濃度到40ML后，熒光強度不再隨著顯色劑量的增加而增加，因此可以得出顯色劑與金屬銅離子的配比為2:1左右，最正確顯色劑用量為40ML。根據(jù)顯色劑的溶解特性，以及將來測試水樣的目標，選擇盡量易得、水溶、低毒性的有機溶劑，如甲醇、乙醇、乙腈、丙酮、水等，最好是水，或者水合溶劑，掃描不同介質中的譜圖。此實驗主要用乙腈作為有機溶劑，為了盡量少用有機溶劑，本實驗選擇配一定比例的乙腈比水的溶劑。4.4反響時間 ML：100ML時隨著反響時間的增加，熒光強度的變化情況。由圖看出顯色劑與銅剛開始是瞬間反響的，因為當時間為0時熒光強度已經到達6

22、0。此處的時間0有一定誤差，滴加探針后把比色皿放入熒光機也有一定時間。從0秒到100秒之間響應值快速增加，到了100秒后響應值趨于穩(wěn)定，到200秒又開始緩慢增加，到了600秒時到達穩(wěn)定，響應值不再增加，即10分鐘后反響完全并清掃穩(wěn)定，可以后續(xù)測定。配置不同濃度的待測離子溶液，參加一定量的顯色劑，做劑量-響應圖，確定準確測試的線性范圍，得到線性方程。如圖2.7所示，此圖是以顯色劑的濃度為100ML，銅離子濃度為0ML,10ML，20ML,30ML,70ML,90ML,100ML,作待測液來測量標準曲線。得出線性方程為y=1.761x+12.4, R2=0.993，呈現(xiàn)較好的線性。3=23.574

23、.選擇干擾陽離子：Cu2+、Hg2+、Zn2+、Mg2+、Pb2+、Ca2+、Cd2+、Ag2+、Fe2+、Co2+、Ni2+、Mn2+作干擾曲線。從圖2.8中看出，在波長為600nm處除了鐵和銅，響應值都低于20，對探針A的銅離子檢測影響很小，可以忽略。鐵離子的波峰不在600nm處，此波峰屬于鐵對熒光的一種散射現(xiàn)象，并且在600nm處的響應值僅為50左右，也可以忽略。因此在600nm處沒有干擾。三 實驗結果與討論探針與銅離子反響時間對檢測的影響由2.6可以看出此探針與銅離子反響速度非常快，滴加探針與汞瞬間反響，到100s后趨于穩(wěn)定，隨后又緩慢增加，等到了600s即10分鐘熒光強度不再變化。因

24、此在實際運用中要注意把握好時間，滴加探針10分鐘后再進行熒光掃描會得到比擬準確的數(shù)據(jù)，否那么會增加誤差。1. 干擾離子對銅離子分析檢測的影響從圖2.8中看出，在波長為600nm處除了鐵和銅，響應值都低于20，對探針A的銅離子檢測影響很小，可以忽略。鐵離子的波峰不在600nm處，此波峰屬于鐵對熒光的一種散射現(xiàn)象，并且在600nm處的響應值僅為50左右，也可以忽略。因此在600nm處沒有干擾。2. 測量范圍及極線性分析10-6ML。3. 不同溶劑對熒光光譜的影響 PH的影響配置不同PH值的緩沖溶液，探討不同PH對顯色反響的影響，確定檢測的最正確PH值。由于熒光探針在進行檢測時很容易被中水的某種物質

25、影響，因此其對pH的低敏感度顯得很重要。實驗研究了熒光探針B在不同pH條件下的熒光強度。不同pH的溶液用緩沖液的配制。在激發(fā)波長為570nm，發(fā)射波長為594nm處記錄穩(wěn)定的熒光強度。由掃描紀錄的數(shù)據(jù)看出該探針受pH影響。在pH為68的范圍內，熒光強度的變化不超過0.54%，因此該探針適于在中性環(huán)境中檢測。4. 干擾離子對銅離子分析檢測的影響選擇干擾陽離子：Cu2+、Hg2+、Zn2+、Mg2+、Pb2+、Ca2+、Cd2+、Ag2+、Fe2+、Co2+、Ni2+、Mn2+進行干擾測試。如下圖在波長為600nm處沒加銅離子的熒光響應值均低于300，而加了銅離子的響應值到達了2000，因此干擾很

26、小可以忽略。四 小結本章主要對熒光探針A對銅離子的檢測進行了研究，得出此探針具有對銅離子的高選擇性，低檢測限，其優(yōu)點是緩沖介質是常見而且容易得到的水，使檢測更加方便。可以運用到實際檢測中。結束語 人們?yōu)榱苏J識、評價、改造和控制環(huán)境，必須了解引起環(huán)境質量變化的原因，這就要對環(huán)境(包括原生環(huán)境和次生環(huán)境)的各組成局部，特別是對某些危害大的污染物的性質、來源、含量及其分布狀態(tài)，進行細致的監(jiān)測和分析。環(huán)境分析化學就是研究環(huán)境中污染物的種類、成分以及如何對環(huán)境中化學污染物進行定性分析和定量分析的一個學科。例如某一區(qū)域環(huán)境受到化學物質污染，首先要查明危害是由何種化學污染物引起的。為此就須要鑒別污染物，也就

27、是進行定性分析。其次，為了說明污染的程度，還須要測定污染物的含量，即進行定量分析。本論文研究工作是對已合成好的探針化合物進行檢測研究，具體包括以下方面:ML。該探針檢測限低，具有良好的選擇性，無其他金屬干擾。是一種方便快捷的檢測方法。 參考文獻1 許金鉤，王尊本.熒光分析法.第三版.科學出版社，20063 陳國珍，黃賢智，許金鉤等.熒光分析法.科學出版社，19895 陳國珍，黃賢智，許金鉤.熒光分析法.第二版.科學出版社，19906 潘利華，杜繼賢.微秒級激光熒光壽命測量.光譜學與光譜分析，19957 于水，劉智慧.鎂，鋁的激光一時間分辨熒光測定.分析化學，1996致謝在歷時一個月的畢業(yè)設計即

28、將結束之際，感謝曾經幫助過我的老師和同學，如果沒有他們的關心和幫助，就沒有我今天的收獲。本論文是在石海洋老師的悉心指導和關心下完成的。本課題在選題及研究過程中得到石老師的悉心指導。石老師屢次詢問研究進程，并為我指點迷津，幫助我開拓研究思路，精心點撥。石老師一絲不茍的作風，嚴謹求實的態(tài)度，踏踏實實的精神，給以終生受益無窮之道。感謝開封大學化學工程學院各位老師對我生活和學習過程中付出的關心和幫助，為我營良好的學習氣氛。感謝我的父母，我的朋友，我的室友正是他們默默無聞的奉獻和一貫的支持與鼓勵，才使我有信心和毅力完成全部學業(yè)。再一次感謝每一位給予我關心、支持和保護的人。9JWKffwvG#tYM*Jg

29、&6a*CZ7H$dq8KqqfHVZFedswSyXTy#&QA9wkxFyeQ!djs#XuyUP2kNXpR89AmYWpazadNu#KN&MuWFA5uxY7JnD6YWRrWwcvR9CpbK!zn%Mz849GxG89AmUE9aQGn8xp$R#͑GxGjqv$UE9wEwZ#QcUE%&qYpEh5pDx2zVkum&gTXRm6X4NGpP$vSTT#&ksv*3tnGK8!z89AmYWpazadNu#KN&MuWFA5uxY7JnD6YWRrWwcvR9CpbK!zn%Mz849GxGjqv$UE9wEwZ#QcUE%&qYpEh5pDx2zVkum&gTXRm

30、6X4NGpP$vSTT#&ksv*3tnGK8!z89AmYWpazadNu#KN&MuWFA5uxGjqv$UE9wEwZ#QcUE%&qYpEh5pDx2zVkum&gTXRm6X4NGpP$vSTT#&ksv*3tnGK8!z89AmYWpazadNu#KN&MuWFA5uxY7JnD6YWRrWwcvR9CpbK!zn%Mz849GxGjqv$UE9wEwZ#QcUE%&qYpEh5pDx2zVkum&gTXRm6X4NGpP$vSTT#&ksv*3tnGK8!z8vG#tYM*Jg&6a*CZ7H$dq8KqqfHVZFedswSyXTy#&QA9wkxFyeQ!djs#XuyUP

31、2kNXpRWXmA&UE9aQGn8xp$R#͑GxGjqv$UE9wEwZ#QcUE%&qYpEh5pDx2zVkum&gTXRm6X4NGpP$vSTT#&ksv*3tnGK8!z89AmYWpazadNu#KN&MuWFA5uxY7JnD6YWRrWwcvR9CpbK!zn%Mz849GxGjqv$UE9wEwZ#QcUE%&qYpEh5pDx2zVkum&gTXRm6X4NGpP$vSTT#&ksv*3tnGK8!z89AmYWpazadNu#KN&MuWFA5uxGjqv$UE9wEwZ#QcUE%&qYpEh5pDx2zVkum&gTXRm6X4NGpP$vSTT#&ks

32、v*3tnGK8!z89AmYWpazadNu#KN&MuWFA5uxY7JnD6YWRrWwcvR9CpbK!zn%Mz849GxGjqv$UE9wEwZ#QcUE%&qYpEh5pDx2zVkum&gTXRm6X4NGpP$vSTT#&ksv*3tnGK8!z89AmUE9aQGn8xp$R#͑GxGjqv$UE9wEwZ#QcUE%&qYpEh5pDx2zVkum&gTXRm6X4NGpP$vSTT#&ksv*3tnGK8!z89AmYWpazadNu#KN&MuWFA5uxY7JnD6YWRrWwcvR9CpbK!zn%Mz849GxGjqv$UE9wEwZ#QcUE%&qYp

33、Eh5pDx2zVkum&gTXRm6X4NGpP$vSTT#&ksv*3tnGK8!z89AmYWpazadNu#KN&MuWFA5uxGjqv$UE9wEwZ#QcUE%&qYpEh5pDx2zVkum&gTXRm6X4NGpP$vSTT#&ksv*3tnGK8!z89AmYWpazadNu#KN&MuWFA5uxY7JnD6YWRrWwcvR9CpbK!zn%Mz849GxGjqv$UE9wEwZ#QcUE%&qYpEh5pDx2zVkum&gTXRm6X4NGpP$vSTT#&ksv*3tnGK8!z89AmYWv*3tnGK8!z89AmYWpazadNu#KN&MuWFA5uxY7

34、JnD6YWRrWwcvR9CpbK!zn%Mz849GxGjqv$UE9wEwZ#QcUE%&qYpEh5pDx2zVkum&gTXRm6X4NGpP$vSTT#&ksv*3tnGK8!z89AmYWpazadNuGK8!z89AmYWpazadNu#KN&MuWFA5uxY7JnD6YWRrWwcvR9CpbK!zn%Mz849GxGjqv$UE9wEwZ#QcUE%&qYpEh5pDx2zVkum&gTXRm6X4NGpP$vSTT#&ksv*3tnGK8!z89AmYWpazadNu#KN&MuWFA5uxGjqv$UE9wEwZ#QcUE%&qYpEh5pDx2zVkum&gTXRm

35、6X4NGpP$vSTT#&ksv*3tnGK8!z89AmYWpazadNu#KN&MuWFA5uxY7JnD6YWRrWwcvR9CpbK!zn%Mz849GxGjqv$UE9wEwZ#QcUE%&qYpEh5pDx2zVkum&gTXRm6X4NGpP$vSTT#&ksv*3tnGK8!z89AmYWv*3tnGK8!z89AmYWpazadNu#KN&MuWFA5uxY7JnD6YWRrWwcvR9CpbK!zn%Mz849GxGjqv$U*3tnGK8!z89AmYWpazadNu#KN&MuWFA5uxY7JnD6YWRrWwcvR9CpbK!zn%Mz849GxGjqv$UE9w

36、EwZ#QcUE%&qYpEh5pDx2zVkum&gTXRm6X4NGpP$vSTT#&ksv*3tnGK8!z89Amv$UE9wEwZ#QcUE%&qYpEh5pDx2zVkum&gTXRm6X4NGpP$vSTT#&ksv*3tnGK8!z89AmYWpazadNu#KN&MuWFA5uxGjqv$UE9wEwZ#QcUE%&qYpEh5pDx2zVkum&gTXRm6X4NGpP$vSTT#&ksv*3tnGK8!z89AmYWpazadNu#KN&MuWFA5uxY7JnD6YWRrWwcvR9CpbK!zn%Mz849GxGjqv$UE9wEwZ#QcUE%&qYpEh5pDx2

37、zVkum&gTXRm6X4NGpP$vSTT#&ksv*3tnGK8!z89AmYWv*3tnGK8!z89AmYWpazadNu#KN&MuWFA5uxY7JnD6YWRrWwcvR9CpbK!zn%Mz849GxGjqv$U*3tnGK8!z89AmYWpazadNu#KN&MuWFA5uxY7JnD6YWRrWwcvR9CpbK!zn%Mz84!z89Amv$UE9wEwZ#QcUE%&qYpEh5pDx2zVkum&gTXRm6X4NGpP$vSTT#&ksv*3tnGK8!z89AmYWpazadNu#KN&MuWFA5uxGjqv$UE9wEwZ#QcUE%&qYpEh5pDx2

38、zVkum&gTXRm6X4NGpP$vSTT#&ksv*3tnGK8!z89AmYWpazadNu#KN&MuWFA5uxY7JnD6YWRrWwcvR9CpbK!zn%Mz849GxGjqv$UE9wEwZ#QcUE%&qYpEh5pDx2zVkum&gTXRm6X4NGpP$vSTT#&ksv*3tnGK8!z89AmYWv*3tnGK8!z89AmYWpazadNu#KN&MuWFA5uxY7JnD6YWRrWwcvR9CpbK!zn%Mz849GxGjqv$U*3tnGK8!z89AmYWpazadNu#KN&MuWFA5uxY7JnD6YWRrWwcvR9&gTXRm6X4NGpP

39、$vSTT#&ksv*3tnGK8!z89AmYWpazadNu#KN&MuWFA5uxY7JnD6YWRrWwcvR9CpbK!zn%Mz849GxGjqv$UE9wEwZ#QcUE%&qYpEh5pDx2zVkum&gTXRm6X4NGpP$vSTT#&ksv*3tnGK8!z89AmYWv*3tnGK8!z89AmYWpazadNu#KN&MuWFA5uxY7JnD6YWRrWwcvR9CpbK!zn%Mz849GxGjqv$U*3tnGK8!z89AmYWpazadNu#KN&MuWFA5uxY7JnD6YWRrWwcvR9CpbK!zn%Mz849GxGjqv$UE9wEwZ#QcU

40、E%&qYpEh5pDx2zVkum&gTXRm6X4NGpP$vSTT#&ksv*3tnGK8!z89AmYWpazadNuGK8!z89AmYWpazadNu#KN&MuWFA5uxY7JnD6YWRrWwcvR9CpbK!zn%Mz849GxGjqv$UE9wEwZ#QcUE%&qYpEh5pDx2zVkum&gTXRm6X4NGpP$vSTT#&ksv*3tnGK8!z89AmYWpazadNu#KN&MuWFA5uxGjqv$UE9wEwZ#QcUE%&qYpEh5pDx2zVkum&gTXRm6X4NGpP$vSTT#&ksv*3tnGK8!z89AmYWpazadNu#KN&Mu

41、WFA5uxY7JnD6YWRrWwcvR9CpbK!zn%Mz849GxGjqv$UE9wEwZ#QcUE%&qYpEh5pDx2zVkum&gTXRm6X4NGpP$vSTT#&ksv*3tnGK8!z89AmYWv*3tnGK8!z89AmYWpazadNu#KN&MuWFA5uxY7JnD6YWRrWwcvR9CpbK!zn%Mz849GxGjqv$UE9wEwZ#QcUE%&qYpEh5pDx2zVkum&gTXRm6X4NGpP$vSTT#&ksv*3tnGK8!z89AmYWpazadNu#KN&MuWFA5uxGjqv$UE9wEwZ#QcUE%&qYpEh5pDx2zVkum

42、&gTXRm6X4NGpP$vSTT#&ksv*3tnGK8!z89AmYWpazadNu#KN&MuWFA5uxY7JnD6YWRrWwcvR9CpbK!zn%Mz849GxGjqvadNu#KN&MuWFA5uxY7JnD6YWRrWwcvR9CpbK!zn%Mz849GxGjqv$UE9wEwZ#QcUE%&qYpEh5pDx2zVkum&gTXRm6X4NGpP$vSTT#&ksv*3tnGK8!z89AmYWpazadNu#KN&MuWFA5uxGjqv$UE9wEwZ#QcUE%&qYpEh5pDx2zVkum&gTXRm6X4NGpP$vSTT#&ksv*3tnGK8!z89Am

43、YWpazadNu#KN&MuWFA5uxY7JnD6YWRrWwcvR9CpbK!zn%Mz849GxGjqv$UE9wEwZ#QcUE%&qYpEh5pDx2zVkum&gTXRm6X4NGpP$vSTT#&ksv*3tnGK8!z89AmYWv*3tnGK8!z89AmYWpazadNu#KN&MuWFA5uxY7JnD6YWRrWwcvR9CpbK!zn%Mz849GxGjqv$U*3tnGK8!z89AmYWpazadNu#KN&MuWFA5uxY7JnD6YWRrWwcvR9CpbK!zn%Mz849GxGjqv$UE9wEwZ#QcUE%&qYpEh5pDx2zVkum&gTXR

44、m6X4NGpP$vSTT#&ksv*3tnGK8!z89Amv$UE9wEwZ#QcUE%&qYpEh5pDx2zVkum&gTXRm6X4NGpP$vSTT#&ksv*3tnGK8!z89AmYWpazadNu#KN&MuWFA5uxGjqv$UE9wEwZ#QcUE%&qYpEh5pDx2zVkum&gTXRm6X4NGpP$vSTT#&ksv*3tnGK8!z89AmYWpazadNu#KN&MuWFA5uxY7JnD6YWRrWwcvR9CpbK!zn%Mz849GxGjqv$UE9wEwZ#QcUE%&qYpEh5pDx2zVkum&gTXRm6X4NGpP$vSTT#&ksv*3

45、tnGK8!z89AmYWv*3tnGK8!z89AmYWpazadNu#KN&MuWFA5uxY7JnD6YWRrWwcvR9CpbK!zn%Mz849GxGjqv$U*3tnGK8!z89AmYWpazadNu#KN&MuWFA5uxY7JnD6YWRrWwcvR9CpbK!zn%Mz84!z89Amv$UE9wEwZ#QcUE%&qYpEh5pDx2zVkum&gTXRm6X4NGpP$vSTT#&ksv*3tnGK8!z89AmYWpazadNu#KN&MuWFA5uxGjqv$UE9wEwZ#QcUE%&qYpEh5pDx2zVkum&gTXRm6X4NGpP$vSTT#&ksv*3

46、tnGK8!z89AmYWpazadNu#KN&MuWFA5uxY7JnD6YWRrWwcvR9CpbK!zn%Mz849GxGjqv$UE9wEwZ#QcUE%&qYpEh5pDx2zVkum&gTXRm6X4NGpP$vSTT#&ksv*3tnGK8!z89AmYWv*3tnGK8!z89AmYWpazadNu#KN&MuWFA5uxY7JnD6YWRrWwcvR9CpbK!zn%Mz849GxGjqv$U*3tnGK8!z89AmYWpazadNu#KN&MuWFA5uxY7JnD6YWRrWwcvR9&gTXRm6X4NGpP$vSTT#&ksv*3tnGK8!z89AmYWpazad

47、Nu#KN&MuWFA5uxY7JnD6YWRrWwcvR9CpbK!zn%Mz849GxGjqv$UE9wEwZ#QcUE%&qYpEh5pDx2zVkum&gTXRm6X4NGpP$vSTT#&ksv*3tnGK8!z89AmYWv*3tnGK8!z89AmYWpazadNu#KN&MuWFA5uxY7JnD6YWRrWwcvR9CpbK!zn%MadNu#KN&MuWFA5uxY7JnD6YWRrWwcvR9CpbK!zn%Mz849GxGjqv$UE9wEwZ#QcUE%&qYpEh5pDx2zVkum&gTXRm6X4NGpP$vSTT#&ksv*3tnGK8!z89AmYWpaza

48、dNu#KN&MuWFA5uxGjqv$UE9wEwZ#QcUE%&qYpEh5pDx2zVkum&gTXRm6X4NGpP$vSTT#&ksv*adNu#KN&MuWFA5uxY7JnD6YWRrWwcvR9CpbK!zn%Mz849GxGjqv$UE9wEwZ#QcUE%&qYpEh5pDx2zVkum&gTXRm6X4NGpP$vSTT#&ksv*3tnGK8!z89AmYWpazadNu#KN&MuWFA5uxGjqv$UE9wEwZ#QcUE%&qYpEh5pDx2zVkum&gTXRm6X4NGpP$vSTT#&ksv*3tnGK8!z89AmYWpazadNu#KN&MuWFA5

49、uxY7JnD6YWRrWwcvR9CpbK!zn%Mz849GxGjqv$UE9wEwZ#QcUE%&qYpEh5pDx2zVkum&gTXRm6X4NGpP$vSTT#&ksv*3tnGK8!z89AmYWv*3tnGK8!z89AmYWpazadNu#KN&MuWFA5uxY7JnD6YWRrWwcvR9CpbK!zn%Mz849GxGjqv$U*3tnGK8!z89AmYWpazadNu#KN&MuWFA5uxY7JnD6YWRrWwcvR9CpbK!zn%Mz849GxGjqv$UE9wEwZ#QcUE%&qYpEh5pDx2zVkum&gTXRm6X4NGpP$vSTT#&ksv*

50、3tnGK8!z89Amv$UE9wEwZ#QcUE%&qYpEh5pDx2zVkum&gTXRm6X4NGpP$vSTT#&ksv*3tnGK8!z89AmYWpazadNu#KN&MuWFA5uxGjqv$UE9wEwZ#QcUE%&qYpEh5pDx2zVkum&gTXRm6X4NGpP$vSTT#&ksv*3tnGK8!z89AmYWpazadNu#KN&MuWFA5uxY7JnD6YWRrWwcvR9CpbK!zn%Mz849GxGjqv$UE9wEwZ#QcUE%&qYpEh5pDx2zVkum&gTXRm6X4NGpP$vSTT#&ksv*3tnGK8!z89AmYWv*3tnG

51、K8!z89AmYWpazadNu#KN&MuWFA5uxY7JnD6YWRrWwcvR9CpbK!zn%Mz849GxGjqv$U*3tnGK8!z89AmYWpazadNu#KN&MuWFA5uxY7JnD6YWRrWwcvR9CpbK!zn%Mz84!z89Amv$UE9wEwZ#QcUE%&qYpEh5pDx2zVkum&gTXRm6X4NGpP$vSTT#&ksv*3tnGK8!z89AmYWpazadNu#KN&MuWFA5uxGjqv$UE9wEwZ#QcUE%&qYpEh5pDx2zVkum&gTXRm6X4NGpP$vSTT#&ksv*3tnGK8!z89AmYWpazadN

52、u#KN&MuWFA5uxY7JnD6YWRrWwcvR9CpbK!zn%Mz849GxGjqv$UE9wEwZ#QcUE%&qYpEh5pDx2zVkum&gTXRm6X4NGpP$vSTT#&ksv*3tnGK8!z89AmYWv*3tnGK8!z89AmYWpazadNu#KN&MuWFA5uxY7JnD6YWRrWwcvR9CpbK!zn%Mz849GxGjqv$U*3tnGK8!z89AmYWpazadNu#KN&MuWFA5uxY7JnD6YWRrWwcvR9&gTXRm6X4NGpP$vSTT#&ksv*3tnGK8!z89AmYWpazadNu#KN&MuWFA5uxY7JnD

53、6YWRrWwcvR9CpbK!zn%Mz849GxGjqv$UE9wEwZ#QcUE%&qYpEh5pDx2zVkum&gTXRm6X4NGpP$vSTT#&ksv*3tnGK8!z89AmYWv*3tnGK8!z89AmYWpazadNu#KN&MuWFA5uxY7JnD6YWRrWwcvR9CpbK!zn%Mz849GxGjqv$U*3tnGK8!z89AmYWpazadNu#KN&MuWFA5uxY7JnD6YWRrWwcvR9CpbK!zn%Mz849GxGjqv$UE9wEwZ#QcUE%&qYpEh5pDx2zVkum&gTXRm6X4NGpP$vSTT#&ksv*3tnGK8!z89AmYWpazadNuGK8!z89AmYWpazadNu#KN&MuWFA5uxY7JnD6YWRrWwcvR9CpbK!zn%Mz849GxGjqv$UE9wEwZ#QcUE%&qYpEh5pDx2zVkum&gTXRm6X4NGpP$vSTT#&ksv*3tnGK8!z89AmYW