芽孢桿菌活菌數(shù)及芽孢數(shù)檢測方法

1、芽孢桿菌活菌數(shù)及芽孢數(shù)檢測方法1主題內(nèi)容與適用范圍本方法規(guī)定了芽孢桿菌總數(shù)的測定方法;本方法適用于測定微生物制劑中芽孢桿菌總數(shù)。2方法提要芽孢桿菌總數(shù)是指水樣在一定條件下培養(yǎng)后(培養(yǎng)基成分,培養(yǎng)溫度和時間、pH、需氧性質(zhì)等所得1mL水樣所含菌落的總數(shù)。按本方法規(guī)定所得結果只包含一群能在營養(yǎng)瓊脂上發(fā)育的嗜中溫的需氧的芽孢桿菌菌落總數(shù)。3 培養(yǎng)基與試劑3.1 營養(yǎng)瓊脂成分蛋白胨10g,酵母膏5g,NaCl 10g,瓊脂20g,水1000mL。3.2 制法: 將上述成分混合后,加熱溶解,調(diào)整pH為7.2,分裝于玻璃容器中(如用國產(chǎn)含雜質(zhì)較多的瓊脂時,應先過濾,經(jīng)121滅菌20min,儲存于冷暗處備用

2、。3.3生理鹽水的制備:按總體積的0.9%稱量NaCl并混合均勻,然后用移液槍或移液管吸取9ml生理鹽水加入到試管中,并在121滅菌20min備用。4 儀器高壓蒸汽滅菌器,干熱滅菌箱,培養(yǎng)箱,36±1,電爐,天平,冰箱, pH計,滅菌試管,平皿(直經(jīng)9cm、刻度吸管等。5活菌計數(shù)方法5.1 取固體樣品5.0g,溶于95mL蒸餾水(此時稀釋20倍,加入適量已滅菌玻璃珠,于200rpm搖床中振蕩20min。5.2 用移液槍從錐形瓶取1ml樣品液至裝有9ml無菌水的試管中,逐步稀釋至適當梯度。5.3 吸取0.2mL適當稀釋梯度的菌液放入對應平板中,用已滅菌的涂布棒來回涂勻。5.4 涂勻的平

3、板置于30培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2030h,待長出清晰可見的菌落,進行計數(shù)。6菌落計數(shù)及報告方法作平皿菌落計數(shù)時,可用眼睛直接觀察,必要時用放大鏡檢查,以防遺漏。在記下各平皿的菌落數(shù)后,應求出同稀釋度的平均菌落數(shù),供下一步計算時應用。在求同稀釋度的平均數(shù)時,若其中一個平皿有較大片狀菌落生長時,則不宜采用,而應以無片狀菌落生長的平皿作為該稀釋度的平均菌落數(shù)。若片狀菌落不到平皿一半,而其余一半中菌落數(shù)發(fā)布又很均勻,則可將此平皿計數(shù)后乘2 以代表全皿菌落數(shù)。然后再求該稀釋度的平均菌落數(shù)。7 不同稀釋度的選擇及計數(shù)方法7.1 首先選擇平均菌落數(shù)在30300之間者進行計算,若只有一個稀釋度的平均菌落數(shù)符合此范圍時

4、,則將該菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之。7.2有兩個稀釋度,其生長的菌落數(shù)均在30300之間,則視二者之比值來決定,若其比值小于2應報告兩者的平均數(shù)。若大于2 則報告其中稀釋度較小的菌落總數(shù)。若等于2亦報告其中稀釋度較小的菌落數(shù)。7.3 若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均大于300,則應按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之。7.4 若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于30,則應以按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告。7.5 若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在30300之間,則應以最接近30或300的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之。7.6 若所有稀釋度的均無菌落生長,則以1乘以稀釋倍數(shù)報告之。7.7 菌落計數(shù)的報告: 菌落數(shù)在100以內(nèi)時按實有數(shù)報