長期毒性作用及其試驗方法

1、2022-3-161 第十第十五五章章長期毒性作用及其試驗方法長期毒性作用及其試驗方法 long-term toxicity impact and test method 2022-3-162 第一節(jié)第一節(jié) 基本概念和目的基本概念和目的 第二節(jié)第二節(jié) 試驗設(shè)計原則及方法試驗設(shè)計原則及方法2022-3-1632022-3-164 長期毒性試驗是指試驗動物連續(xù)多日接觸較大長期毒性試驗是指試驗動物連續(xù)多日接觸較大劑量的藥物所引起的中毒效應(yīng)劑量的藥物所引起的中毒效應(yīng)，為觀察這種中毒效為觀察這種中毒效應(yīng)而設(shè)計的毒理學(xué)試驗稱之為應(yīng)而設(shè)計的毒理學(xué)試驗稱之為長期長期( (慢性慢性) )毒性毒性試驗試驗。一、定

2、義一、定義 急性毒性試驗急性毒性試驗是為觀察是為觀察和評價急性毒性的和評價急性毒性的有害作用有害作用或中毒反應(yīng)或中毒反應(yīng)而設(shè)計的一種毒理學(xué)試驗而設(shè)計的一種毒理學(xué)試驗。研究藥物一次或。研究藥物一次或2424小小時內(nèi)多次給予時內(nèi)多次給予受試受試藥物藥物后，一定時間內(nèi)后，一定時間內(nèi)所產(chǎn)生的所產(chǎn)生的毒毒性性反應(yīng)反應(yīng)。2022-3-1655/20123給給 藥藥 的的 期期 限限 不不 同同長期毒性試驗與急性毒性試驗長期毒性試驗與急性毒性試驗的根本差別的根本差別2022-3-1666/20123給給 藥藥 的的 期期 限限 不不 同同給給 藥藥 的的 劑劑 量量 范范 圍圍 不不 同同長期毒性試驗與急性

3、毒性試驗長期毒性試驗與急性毒性試驗的根本差別的根本差別2022-3-167 蓄積作用蓄積作用 (accumulation action)(accumulation action) 當(dāng)較長時間連續(xù)、反復(fù)給藥當(dāng)較長時間連續(xù)、反復(fù)給藥時，如果時，如果給藥的給藥的時間間隔和劑量超過機體消除藥物的能力時間間隔和劑量超過機體消除藥物的能力，就會，就會出現(xiàn)藥物進入機體的速度出現(xiàn)藥物進入機體的速度 ( (或總量或總量) ) 超過排除的超過排除的速度速度 ( (或總量或總量) ) 的現(xiàn)象的現(xiàn)象，此，此時藥物就有可能在體時藥物就有可能在體內(nèi)逐漸增加并貯存起來內(nèi)逐漸增加并貯存起來，即，即蓄積作用蓄積作用。 2022

4、-3-168 蓄積作用蓄積作用的表現(xiàn)形式的表現(xiàn)形式作用量積蓄作用量積蓄功能性蓄積功能性蓄積2022-3-1699/20123給給 藥藥 的的 期期 限限 不不 同同給給 藥藥 的的 劑劑 量量 范范 圍圍 不不 同同觀觀 察察 的的 毒毒 效效 應(yīng)應(yīng) 不不 同同長期毒性試驗與急性毒性試驗長期毒性試驗與急性毒性試驗的根本差別的根本差別2022-3-1610二、目的與意義二、目的與意義2022-3-16111預(yù)測受試物可能引起的臨床不良反應(yīng)預(yù)測受試物可能引起的臨床不良反應(yīng)2判斷受試物反復(fù)給藥的毒性靶器官或組織判斷受試物反復(fù)給藥的毒性靶器官或組織提示臨床試驗中需重點監(jiān)測的指標(biāo)提示臨床試驗中需重點監(jiān)測

5、的指標(biāo)43推測臨床試驗的起始劑量和重復(fù)用藥的安全劑量范圍推測臨床試驗的起始劑量和重復(fù)用藥的安全劑量范圍為臨床試驗中的解毒或解救措施提供參考為臨床試驗中的解毒或解救措施提供參考5長期毒性試驗的目的2022-3-1612 了解實驗動物能耐受的最大劑量，找出完了解實驗動物能耐受的最大劑量，找出完全無毒的安全界量，這個界量是判斷一個待選全無毒的安全界量，這個界量是判斷一個待選新藥是否有進一步開發(fā)研究的價值以及能否過新藥是否有進一步開發(fā)研究的價值以及能否過渡到臨床試用的重要依據(jù)，同時，也可為其它渡到臨床試用的重要依據(jù)，同時，也可為其它毒性實驗和臨床初始劑量的選擇提供依據(jù)。因毒性實驗和臨床初始劑量的選擇提

6、供依據(jù)。因此長期毒性試驗是臨床前安全性評價的主要內(nèi)此長期毒性試驗是臨床前安全性評價的主要內(nèi)容，它與急性毒性試驗、生殖毒性以及致癌性容，它與急性毒性試驗、生殖毒性以及致癌性等毒理學(xué)研究有著密切的聯(lián)系，是新藥報批臨等毒理學(xué)研究有著密切的聯(lián)系，是新藥報批臨床時重點審評項目之一，是藥物從藥學(xué)研究進床時重點審評項目之一，是藥物從藥學(xué)研究進入臨床試驗的重要環(huán)節(jié)。入臨床試驗的重要環(huán)節(jié)。長期毒性試驗的長期毒性試驗的意義意義2022-3-1613第二節(jié)第二節(jié)試試 驗驗 設(shè)設(shè) 計計 原原 則則 及及 方方 法法2022-3-1614一、一般原則和要求一、一般原則和要求基本原則基本原則全面、嚴謹、合理全面、嚴謹、合

7、理整體性整體性隨機隨機、對照對照、重復(fù)重復(fù)2022-3-1615一、一般原則和要求一、一般原則和要求基本原則基本原則整體性整體性長期毒性試驗不能與藥效學(xué)、藥代長期毒性試驗不能與藥效學(xué)、藥代動力性和其他毒理學(xué)研究割裂，試動力性和其他毒理學(xué)研究割裂，試驗設(shè)計應(yīng)充分考慮其他藥理毒理研驗設(shè)計應(yīng)充分考慮其他藥理毒理研究的試驗設(shè)計和研究結(jié)果。長期毒究的試驗設(shè)計和研究結(jié)果。長期毒性試驗的結(jié)果應(yīng)該力求與其他藥理性試驗的結(jié)果應(yīng)該力求與其他藥理毒理試驗結(jié)果互為印證、說明和補毒理試驗結(jié)果互為印證、說明和補充。充。2022-3-1616一、一般原則和要求一、一般原則和要求總體總體原則原則2022-3-1617一、一般

8、原則和要求一、一般原則和要求總體總體原則原則2022-3-1618一、一般原則和要求一、一般原則和要求總體總體原則原則2022-3-1619一、一般原則和要求一、一般原則和要求總體總體原則原則 口服給藥大鼠一般常用灌胃，灌胃的容量為口服給藥大鼠一般常用灌胃，灌胃的容量為每天每天12ml/100g，也可將受試藥物混在飼料或水，也可將受試藥物混在飼料或水中給予，但要保證每只動物按規(guī)定劑量在一定時中給予，但要保證每只動物按規(guī)定劑量在一定時間內(nèi)服入，靜脈注射大鼠時可采用腹腔代替，各間內(nèi)服入，靜脈注射大鼠時可采用腹腔代替，各劑量組采用等容量不等濃度給藥。特殊情況另作劑量組采用等容量不等濃度給藥。特殊情況

9、另作說明。說明。2022-3-1620理想動物的標(biāo)準(zhǔn)：理想動物的標(biāo)準(zhǔn)：n對受試物的生物轉(zhuǎn)化與人體相近；對受試物的生物轉(zhuǎn)化與人體相近；n對受試物敏感；對受試物敏感；n已有大量歷史對照數(shù)據(jù)。已有大量歷史對照數(shù)據(jù)。二、實驗動物二、實驗動物 2022-3-1621我國藥政部門規(guī)定的基本原則是選用兩種動物我國藥政部門規(guī)定的基本原則是選用兩種動物, , 一種為嚙齒類，首選大白鼠；另一種為非嚙齒類，一種為嚙齒類，首選大白鼠；另一種為非嚙齒類，首選狗。首選狗。1.1.種類及品系種類及品系二、實驗動物二、實驗動物 2022-3-1622我國藥政部門規(guī)定的基本原則是選用兩種動物我國藥政部門規(guī)定的基本原則是選用兩種

10、動物, , 一種為嚙齒類，首選大白鼠；另一種為非嚙齒類，一種為嚙齒類，首選大白鼠；另一種為非嚙齒類，首選狗。首選狗。1.1.種類及品系種類及品系二、實驗動物二、實驗動物 Wistar大鼠SD大鼠 近親繁殖鼠？近親繁殖鼠？雜交鼠？雜交鼠？2022-3-1623我國藥政部門規(guī)定的基本原則是選用兩種動物我國藥政部門規(guī)定的基本原則是選用兩種動物, , 一種為嚙齒類，首選大白鼠；另一種為非嚙齒類，一種為嚙齒類，首選大白鼠；另一種為非嚙齒類，首選狗。首選狗。1.1.種類及品系種類及品系二、實驗動物二、實驗動物 一類新藥：Beagle犬 二類新藥：雜種狗 2022-3-1624我國藥政部門規(guī)定的基本原則是選

11、用兩種動物我國藥政部門規(guī)定的基本原則是選用兩種動物, , 一種為嚙齒類，首選大白鼠；另一種為非嚙齒類，一種為嚙齒類，首選大白鼠；另一種為非嚙齒類，首選狗。首選狗。1.1.種類及品系種類及品系二、實驗動物二、實驗動物 在吸入給藥時，猴是首先推薦的動物，因為它在在吸入給藥時，猴是首先推薦的動物，因為它在呼吸系統(tǒng)的解剖學(xué)和生理學(xué)方面比其它動物更接呼吸系統(tǒng)的解剖學(xué)和生理學(xué)方面比其它動物更接近人類。近人類。如研究計劃生育用藥，應(yīng)選擇猴或其他大動物。如研究計劃生育用藥，應(yīng)選擇猴或其他大動物。2022-3-1627 Beagle犬：原產(chǎn)英國，純種小獵兔犬 Beagle犬的特點：體型小,毛短,性情溫和,親人,

12、抗病力強 缺點：價格昂貴2022-3-16282. 2. 起始月起始月( (周周) )齡齡一般選擇較年輕的或正處于生長發(fā)育階段的動物一般選擇較年輕的或正處于生長發(fā)育階段的動物。二、實驗動物二、實驗動物 2022-3-16292. 2. 起始月起始月( (周周) )齡齡一般選擇較年輕的或正處于生長發(fā)育階段的動物一般選擇較年輕的或正處于生長發(fā)育階段的動物。二、實驗動物二、實驗動物 長期毒性試驗的給藥期限較長長期毒性試驗的給藥期限較長；13原因原因：年齡較大的動物反應(yīng)性降低年齡較大的動物反應(yīng)性降低, , 存存在許多發(fā)性疾病干擾試驗結(jié)果。在許多發(fā)性疾病干擾試驗結(jié)果。處于生長發(fā)育階段的動物對藥物處于生長

13、發(fā)育階段的動物對藥物的毒性反應(yīng)較敏感的毒性反應(yīng)較敏感；232022-3-1630n嚙嚙齒類動物最好在斷奶后不久即開始給藥齒類動物最好在斷奶后不久即開始給藥 大鼠大鼠起始周齡起始周齡要求在要求在 6 8周齡周齡； 如果試驗周期如果試驗周期超過超過3個月以上，則個月以上，則將起始周齡降至將起始周齡降至 5 6周齡周齡。n狗的起始月齡為狗的起始月齡為 6 月齡月齡，一般不超過一般不超過 12 月月 齡齡；如選用雜種狗如選用雜種狗，起始年齡可稍大些起始年齡可稍大些，但也不能但也不能超過超過 5 年。年。二、實驗動物二、實驗動物 2. 2. 起始月起始月( (周周) )齡齡2022-3-1631n起始體

14、重應(yīng)在體重均值起始體重應(yīng)在體重均值 20% 的范圍內(nèi)的范圍內(nèi)。二、實驗動物二、實驗動物 2. 2. 起始月起始月( (周周) )齡齡2022-3-16323. 3. 性別及數(shù)量性別及數(shù)量 （1 1）性別）性別二、實驗動物二、實驗動物 一般來講是兼用兩種性別的動物，每個劑量組中一般來講是兼用兩種性別的動物，每個劑量組中 雌雄性別的動物數(shù)必須一致。雌雄性別的動物數(shù)必須一致。2022-3-1633 在特殊情況下如藥物對雄性（或雌性）生殖在特殊情況下如藥物對雄性（或雌性）生殖細胞的毒效應(yīng)已確知，或者急性試驗已證明藥物細胞的毒效應(yīng)已確知，或者急性試驗已證明藥物對雌雄兩性動物的毒性有明顯差別時，就應(yīng)主要對

15、雌雄兩性動物的毒性有明顯差別時，就應(yīng)主要選用敏感性別的動物進行試驗。選用敏感性別的動物進行試驗。 二、實驗動物二、實驗動物 3. 3. 性別及數(shù)量性別及數(shù)量 （1 1）性別）性別2022-3-1634超過超過 90 天的試驗天的試驗 嚙齒類動物每組至少嚙齒類動物每組至少 40 只（雌雄各只（雌雄各 20 只）；只）； 非嚙齒類每組非嚙齒類每組 810 只（雌雄各只（雌雄各 45 只）。只）。 90 天以內(nèi)的試驗天以內(nèi)的試驗 嚙齒類動物每組至少嚙齒類動物每組至少20只（雌雄各只（雌雄各 10 只）；只）； 非嚙齒類每組非嚙齒類每組 46 只（雌雄各只（雌雄各 23只）；只）；二、實驗動物二、實驗

16、動物 3. 3. 性別及數(shù)量性別及數(shù)量 （2 2）數(shù)量）數(shù)量2022-3-1635超過超過 90 天的試驗天的試驗 嚙齒類動物每組至少嚙齒類動物每組至少 40 只（雌雄各只（雌雄各 20 只）；只）； 非嚙齒類每組非嚙齒類每組 8-10 只（雌雄各只（雌雄各 45 只）。只）。 90 天以內(nèi)的試驗天以內(nèi)的試驗 嚙齒類動物每組至少嚙齒類動物每組至少20只（雌雄各只（雌雄各 10 只）；只）； 非嚙齒類每組非嚙齒類每組 46 只（雌雄各只（雌雄各 23只）；只）；二、實驗動物二、實驗動物 3. 3. 性別及數(shù)量性別及數(shù)量 （2 2）數(shù)量）數(shù)量指導(dǎo)原則指導(dǎo)原則：一般大鼠為雌、雄各：一般大鼠為雌、雄各

17、30只，只， Beagle犬或猴各犬或猴各36只。只。2022-3-16364. 4. 飼養(yǎng)管理飼養(yǎng)管理 嚴格控制環(huán)境條件，避免不必要的干擾因素嚴格控制環(huán)境條件，避免不必要的干擾因素是非常重要的。是非常重要的。二、實驗動物二、實驗動物 2022-3-1637酮癥酸中毒酮癥酸中毒室內(nèi)溫度室內(nèi)溫度飼料或飼料配方飼料或飼料配方濕濕 度度光光 照照通風(fēng)條件通風(fēng)條件飲水質(zhì)量飲水質(zhì)量4. 4. 飼養(yǎng)管理飼養(yǎng)管理二、實驗動物二、實驗動物 2022-3-1638酮癥酸中毒酮癥酸中毒室內(nèi)溫度室內(nèi)溫度飼料或飼料配方飼料或飼料配方濕濕 度度光光 照照通風(fēng)條件通風(fēng)條件飲水質(zhì)量飲水質(zhì)量4. 4. 飼養(yǎng)管理飼養(yǎng)管理二、實

18、驗動物二、實驗動物 嚙齒類動物嚙齒類動物適宜溫度為適宜溫度為 1827 。 相對濕度為相對濕度為 40%70%。光照宜持續(xù)光照宜持續(xù) 12 小時明亮，小時明亮，12 小時黑暗。小時黑暗。通風(fēng)條件良好。通風(fēng)條件良好。所用飼料應(yīng)符合動物的營養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)。所用飼料應(yīng)符合動物的營養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)。雌雄動物應(yīng)分開飼養(yǎng)，每籠不宜超過雌雄動物應(yīng)分開飼養(yǎng)，每籠不宜超過 5只只2022-3-1639酮癥酸中毒酮癥酸中毒室內(nèi)溫度室內(nèi)溫度飼料或飼料配方飼料或飼料配方濕濕 度度光光 照照通風(fēng)條件通風(fēng)條件飲水質(zhì)量飲水質(zhì)量4. 4. 飼養(yǎng)管理飼養(yǎng)管理二、實驗動物二、實驗動物 犬犬單籠飼養(yǎng)，定量喂食。單籠飼養(yǎng)，定量喂食。 Beagle 狗

19、實驗前至少馴養(yǎng)狗實驗前至少馴養(yǎng) 12 周周; 雜種狗應(yīng)先檢疫，驅(qū)蟲。雜種狗應(yīng)先檢疫，驅(qū)蟲。2022-3-1640三、給藥期限三、給藥期限 按我國藥政管理部門的要求，長期毒性試按我國藥政管理部門的要求，長期毒性試驗的給藥期限一般為臨床療程的驗的給藥期限一般為臨床療程的34倍時間。倍時間。 創(chuàng)新藥品試驗周期應(yīng)不少于創(chuàng)新藥品試驗周期應(yīng)不少于90天，天， 超過超過180天天的新藥可以在試驗開始的新藥可以在試驗開始90天后，同時進行天后，同時進行I期臨期臨床試驗。床試驗。2022-3-1641 臨床擬用臨床擬用 毒性試驗期限毒性試驗期限 給藥時間給藥時間 嚙齒類動物嚙齒類動物 非嚙齒類動物非嚙齒類動物5

20、 5天天 2 2周周 2 2周周2 2周周 1 1月月 1 1月月 2-42-4周周 3 3月月 3 3月月 1-31-3月月 6 6月月 6 6月月 3 3月月 6 6月月 9 9月月 每天給藥最好固定時間。每天給藥最好固定時間。2022-3-1642四、劑量水平的選擇四、劑量水平的選擇 三個劑量組是必不可少的：三個劑量組是必不可少的：n一個是足以引起明顯的毒性反應(yīng)的高劑量，但死一個是足以引起明顯的毒性反應(yīng)的高劑量，但死亡率應(yīng)控制在亡率應(yīng)控制在 20% 以內(nèi)；以內(nèi)；n第二個是不引起毒性作用的低劑量第二個是不引起毒性作用的低劑量(一般為動物一般為動物有效劑量或臨床治療量的有效劑量或臨床治療量的

21、23倍倍)；n為表明毒性作用的量為表明毒性作用的量效關(guān)系，在上述兩個劑量效關(guān)系，在上述兩個劑量之間插入一個之間插入一個(或多個或多個)中間劑量。中間劑量。 中劑量按中劑量按 計算計算 高劑量低劑量X2022-3-1643 在選擇合適的劑量時還應(yīng)考慮到：在選擇合適的劑量時還應(yīng)考慮到： 藥物在體內(nèi)的生物蓄積作用。對于高蓄積性藥物在體內(nèi)的生物蓄積作用。對于高蓄積性藥物應(yīng)適當(dāng)減少其劑量，否則在長期毒性試驗結(jié)束藥物應(yīng)適當(dāng)減少其劑量，否則在長期毒性試驗結(jié)束時各劑量均有可能出現(xiàn)毒性作用；時各劑量均有可能出現(xiàn)毒性作用； 藥物是否有可能被特殊的酶所藥物是否有可能被特殊的酶所“解毒解毒”或或“活化增毒活化增毒”，

22、而這些酶又是否易被藥物本身所誘，而這些酶又是否易被藥物本身所誘導(dǎo)或抑制。導(dǎo)或抑制。 藥物在消化道中的穩(wěn)定性。與胃腸道內(nèi)容藥物在消化道中的穩(wěn)定性。與胃腸道內(nèi)容物有親和性的藥物，則應(yīng)酌情增加劑量。物有親和性的藥物，則應(yīng)酌情增加劑量。 可供參考的具體方法可供參考的具體方法（1 1）半數(shù)致死量法（）半數(shù)致死量法（LDLD5050法）法） 根據(jù)急性毒性的根據(jù)急性毒性的LD50值決定三個劑量。一般在值決定三個劑量。一般在大鼠大鼠3個月長期毒性試驗中，高、中、低三個劑量可個月長期毒性試驗中，高、中、低三個劑量可分別采用約分別采用約LD50的的1/10、1/50和和1/100劑量，狗各劑劑量，狗各劑量組可采用

23、大鼠相應(yīng)各組的一半劑量。量組可采用大鼠相應(yīng)各組的一半劑量。可供參考的具體方法可供參考的具體方法（1）半數(shù)致死量法（）半數(shù)致死量法（LD50法）法）（2）短期蓄積試驗過渡法）短期蓄積試驗過渡法 根據(jù)急性毒性試驗所提供的相關(guān)信息，如毒根據(jù)急性毒性試驗所提供的相關(guān)信息，如毒性的量性的量效關(guān)系，毒性出現(xiàn)的劑量范圍及敏感動效關(guān)系，毒性出現(xiàn)的劑量范圍及敏感動物等，先過渡到物等，先過渡到7 7天至天至2121天的短期蓄積性試驗，再天的短期蓄積性試驗，再將獲得的參數(shù)外推于長期毒性試驗。將獲得的參數(shù)外推于長期毒性試驗。急性毒性試驗急性毒性試驗蓄積毒性試驗蓄積毒性試驗和和/ /或或7 7天短期重復(fù)給藥試驗天短期重

24、復(fù)給藥試驗9090天重復(fù)給藥試驗天重復(fù)給藥試驗180180天或更長期重復(fù)給藥試驗天或更長期重復(fù)給藥試驗可供參考的具體方法可供參考的具體方法（1）半數(shù)致死量法（）半數(shù)致死量法（LD50法）法）（2）短期蓄積試驗過渡法）短期蓄積試驗過渡法（3）藥代動力學(xué)法）藥代動力學(xué)法 根據(jù)藥代動力學(xué)最大有效安全濃度（根據(jù)藥代動力學(xué)最大有效安全濃度（MCD）大鼠大鼠3個月長期毒性試驗時，低、中、高三個劑量可分別采個月長期毒性試驗時，低、中、高三個劑量可分別采用大鼠的用大鼠的1.0 、3.36.6 和和1020 MCD;狗一般可采用大鼠一半左右的劑量。狗一般可采用大鼠一半左右的劑量。可供參考的具體方法可供參考的具體

25、方法（1）半數(shù)致死量法（）半數(shù)致死量法（LD50法）法）（2）短期蓄積試驗過渡法）短期蓄積試驗過渡法（3）藥代動力學(xué)法（）藥代動力學(xué)法（MBS法）法）根據(jù)大鼠急性毒性試驗的最大耐受量根據(jù)大鼠急性毒性試驗的最大耐受量(MTD)大鼠長期毒性試驗的三個劑量分別為大鼠長期毒性試驗的三個劑量分別為1、1/3及及1/10MTD；狗和猴可采用大鼠一半左右的劑量。狗和猴可采用大鼠一半左右的劑量。（4）最大耐受量法（）最大耐受量法（MTD法）法）可供參考的具體方法可供參考的具體方法（1）半數(shù)致死量法（）半數(shù)致死量法（LD50法）法）（2）短期蓄積試驗過渡法）短期蓄積試驗過渡法（3）藥代動力學(xué)法（）藥代動力學(xué)法（

26、MBS法）法） 根據(jù)臨床擬用劑量（根據(jù)臨床擬用劑量（3個月長期毒性試驗）個月長期毒性試驗） 大鼠低、中、高三個劑量可分別采用大鼠低、中、高三個劑量可分別采用50100倍、倍、2550倍和倍和 1020倍臨床劑量倍臨床劑量狗可分別采用狗可分別采用3050倍、倍、1525倍和倍和510倍臨床劑量倍臨床劑量猴可采用與狗相近的劑量或略低于狗的劑量進行試驗猴可采用與狗相近的劑量或略低于狗的劑量進行試驗（4）最大耐受量法（）最大耐受量法（MTD法）法）（5）臨床擬用劑量法（）臨床擬用劑量法（ACD法）法）可供參考的具體方法可供參考的具體方法（1）半數(shù)致死量法（）半數(shù)致死量法（LD50法）法）（2）短期蓄積

27、試驗過渡法）短期蓄積試驗過渡法（3）藥代動力學(xué)法（）藥代動力學(xué)法（MBS法）法） 根據(jù)人和動物的等效劑量比值，再按一定倍數(shù)根據(jù)人和動物的等效劑量比值，再按一定倍數(shù)擴大。擴大。（4）最大耐受量法（）最大耐受量法（MTD法）法）（5）臨床擬用劑量法（）臨床擬用劑量法（ACD法）法）（6）等效劑量法）等效劑量法2022-3-1651不同動物的劑量折算系數(shù)不同動物的劑量折算系數(shù) 動物種屬動物種屬 小鼠小鼠 大鼠大鼠 豚鼠豚鼠 兔兔 貓貓 猴猴 狗狗 人人標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn) K(K(劑量折算系數(shù)劑量折算系數(shù)) ) 1 1 7 7 12.312.3 27.527.5 29.729.7 64 64 124124 38

28、8388體重體重 K(kgK(kg體重劑量折算系數(shù)體重劑量折算系數(shù)) ) 1 1 0.710.71 0.62 0.62 0.37 0.37 0.30 0.30 0.320.32 0.210.21 0.110.11任何任何 R(R(動物體型系數(shù)動物體型系數(shù)) ) 0.0590.059 0.090.09 0.099 0.099 0.0930.093 0.0820.082 0.1110.111 0.104 0.104 0.10.1體重體重 W(W(標(biāo)準(zhǔn)體重標(biāo)準(zhǔn)體重kg)kg) 0.020.02 0.20.2 0.40.4 1.51.5 2 2 4 4 1212 7070注：有些資料記載的動物體型系數(shù)

29、（注：有些資料記載的動物體型系數(shù)（R R）為此表中）為此表中R R 值的值的1000 1000 倍，如小鼠倍，如小鼠R R 為為5959，大鼠，大鼠R R 為為9090，這不影響藥物劑量的折算。這不影響藥物劑量的折算。2022-3-1652對于標(biāo)準(zhǔn)體重的動物：對于標(biāo)準(zhǔn)體重的動物： 每只用量（每只用量（mg/mg/只）只）D DB B D DA A K KB BK KA A千克體重劑量（千克體重劑量（mg/kgmg/kg）d dB B d dB B K KB BK KA AK KA A，K KB B，R RA A，R RB B 值由上表查找值由上表查找2022-3-1653對于任何體重的動物：對

30、于任何體重的動物： 每只用量（每只用量（mg/mg/只）只）D DB B D DA A R RB B( (W WB B) )2/32/3R RA AW WA A千克體重劑量（千克體重劑量（mg/kgmg/kg）d dB B d dA AR RB B( (W WB B) )2/32/3R RA AW WA A式中式中D DB B、d dB B 分別是欲計算的分別是欲計算的B B 種動物的每只劑量及公斤體種動物的每只劑量及公斤體重劑量，重劑量，D DA A、d dA A 分別是已知分別是已知A A 種動物的每只劑量及公斤體種動物的每只劑量及公斤體重劑量，重劑量，W WA A、W WB B 是已知動

31、物體重，是已知動物體重，R RA A、R RB B 是體型系數(shù)，可是體型系數(shù)，可由上表查得由上表查得。 可供參考的具體方法可供參考的具體方法（1）半數(shù)致死量法（）半數(shù)致死量法（LD50法）法）（2）短期蓄積試驗過渡法）短期蓄積試驗過渡法（3）藥代動力學(xué)法（）藥代動力學(xué)法（MBS法）法）（4）最大耐受量法（）最大耐受量法（MTD法）法）（5）臨床擬用劑量法（）臨床擬用劑量法（ACD法）法）（6）等效劑量法）等效劑量法2022-3-1655五、限度試驗五、限度試驗 我國藥政部門規(guī)定我國藥政部門規(guī)定，如小鼠急性毒性的口服如小鼠急性毒性的口服給藥劑量大于給藥劑量大于 5g/kg5g/kg，注射給藥劑量

32、大于注射給藥劑量大于 2g/kg 2g/kg 仍未產(chǎn)生毒性反應(yīng)和死亡仍未產(chǎn)生毒性反應(yīng)和死亡，或僅個別動物有毒性或僅個別動物有毒性反應(yīng)時反應(yīng)時，可考慮只做一個高于臨床擬用劑量可考慮只做一個高于臨床擬用劑量5050倍倍( (狗用狗用3030倍倍) )的劑量組。的劑量組。2022-3-1656 經(jīng)濟合作與開發(fā)組織經(jīng)濟合作與開發(fā)組織(OECD)提出如果一種提出如果一種化合物以化合物以1000mg/kg的劑量的劑量，按規(guī)定期限連續(xù)給按規(guī)定期限連續(xù)給藥藥，不產(chǎn)生任何可觀察到的毒性反應(yīng)不產(chǎn)生任何可觀察到的毒性反應(yīng)，而且根據(jù)而且根據(jù)結(jié)構(gòu)相關(guān)藥物的已有資料結(jié)構(gòu)相關(guān)藥物的已有資料，估計不會產(chǎn)生毒性的估計不會產(chǎn)生毒

33、性的話話，就不需要再用三個劑量來進行試驗就不需要再用三個劑量來進行試驗，除非預(yù)除非預(yù)期臨床需要更高的劑量。期臨床需要更高的劑量。 五、限度試驗五、限度試驗2022-3-1657六、給藥方法六、給藥方法n長期毒性試驗的給藥途徑一般應(yīng)盡量與預(yù)期臨床長期毒性試驗的給藥途徑一般應(yīng)盡量與預(yù)期臨床使用的途徑相一致。使用的途徑相一致。臨床用藥途徑為靜脈或肌注臨床用藥途徑為靜脈或肌注時，時，3 3個月及以上的試驗，由于試驗周期長大鼠給個月及以上的試驗，由于試驗周期長大鼠給藥有困難，可用腹腔或皮下注射代替。藥有困難，可用腹腔或皮下注射代替。n如采用灌胃給藥的方式可將供試藥物制成一種如采用灌胃給藥的方式可將供試藥

34、物制成一種溶液或混懸液，但必須注意給藥容量不應(yīng)超過溶液或混懸液，但必須注意給藥容量不應(yīng)超過 12ml/100g 體重體重/天。天。2022-3-1658六、給藥方法六、給藥方法n長期毒性試驗長期毒性試驗一般均強調(diào)每天給藥，每周必一般均強調(diào)每天給藥，每周必須給藥須給藥 7 天。給藥期限長（天。給藥期限長（3個月或以上）的個月或以上）的藥物每周至少應(yīng)給藥藥物每周至少應(yīng)給藥6天。天。2022-3-1659七七、觀察及測定指標(biāo)、觀察及測定指標(biāo) 試驗前，嚙齒類動物至少應(yīng)進行試驗前，嚙齒類動物至少應(yīng)進行5天的適應(yīng)性天的適應(yīng)性觀觀 察，非嚙齒類動物至少應(yīng)馴養(yǎng)觀察察，非嚙齒類動物至少應(yīng)馴養(yǎng)觀察12周，應(yīng)對周，

35、應(yīng)對 動物進行一般觀察及血液生化學(xué)指標(biāo)的檢測。動物進行一般觀察及血液生化學(xué)指標(biāo)的檢測。 試驗期間，至少應(yīng)每天或每兩天作一次詳細的試驗期間，至少應(yīng)每天或每兩天作一次詳細的 觀察。觀察。 試驗結(jié)束時，必須留試驗結(jié)束時，必須留1/3的動物做恢復(fù)期的觀察的動物做恢復(fù)期的觀察 試驗，其觀察期時間一般不超過試驗，其觀察期時間一般不超過28天。天。2022-3-1660（一一）日常觀察日常觀察 1. 一般一般觀察觀察內(nèi)容內(nèi)容 包括對實驗動物被毛、皮膚、眼睛、粘膜、包括對實驗動物被毛、皮膚、眼睛、粘膜、孔道孔道 ( 及其分泌物及其分泌物 ) 、呼吸、循環(huán)、自主神經(jīng)系、呼吸、循環(huán)、自主神經(jīng)系統(tǒng)、軀體和肢體活動情

36、況以及精神行為進行仔細統(tǒng)、軀體和肢體活動情況以及精神行為進行仔細地觀察地觀察；對動物糞便的量、色澤和內(nèi)含物對動物糞便的量、色澤和內(nèi)含物，散失散失的食物的食物，飲水瓶中殘余的水以及一切可以反映動飲水瓶中殘余的水以及一切可以反映動物生活情況變化的各種跡象物生活情況變化的各種跡象，都必須加以注意。都必須加以注意。所有出現(xiàn)的癥狀都必須記錄在案。所有出現(xiàn)的癥狀都必須記錄在案。2022-3-16611. 一般一般觀察觀察內(nèi)容內(nèi)容 如果發(fā)現(xiàn)動物死亡如果發(fā)現(xiàn)動物死亡，必須盡可能快地進行尸必須盡可能快地進行尸體剖檢體剖檢，以減少組織自溶。將組織置于以減少組織自溶。將組織置于 10% 的中的中性福爾馬林或其它適宜

37、的固定液中。如果尸體剖性福爾馬林或其它適宜的固定液中。如果尸體剖檢不能立即進行檢不能立即進行，則必須將動物則必須將動物冷藏冷藏起來以延緩起來以延緩組織自溶組織自溶 。（一一）日常觀察日常觀察 2022-3-16621. 一般一般觀察觀察內(nèi)容內(nèi)容 對瀕死的動物也應(yīng)立即處死作尸體剖檢。對瀕死的動物也應(yīng)立即處死作尸體剖檢。（一一）日常觀察日常觀察 尸體剖檢尸體剖檢后行組織病理學(xué)檢查、評價后行組織病理學(xué)檢查、評價。2022-3-16632. 生長率生長率 （一一）日常觀察日常觀察 2022-3-16643. 食耗食耗食耗常用來評價給藥對食欲及食物利用率的影響食耗常用來評價給藥對食欲及食物利用率的影響食

38、耗的計算食耗的計算 將加入供食器具中飼料的重量減去剩余的飼料重量再除以給食天數(shù) （一一）日常觀察日常觀察 2022-3-16653. 食耗食耗食耗常用來評價給藥對食欲及食物利用率的影響食耗常用來評價給藥對食欲及食物利用率的影響食耗的計算食耗的計算 將給藥組和對照組的食耗加以比較將給藥組和對照組的食耗加以比較，有助于說有助于說明藥物是否影響實驗動物的食欲。明藥物是否影響實驗動物的食欲。 （一一）日常觀察日常觀察 2022-3-16663. 食耗食耗食耗常用來評價給藥對食欲及食物利用率的影響食耗常用來評價給藥對食欲及食物利用率的影響食耗的計算食耗的計算 將給藥組和對照組的食耗加以比較將給藥組和對照

39、組的食耗加以比較，有助于說有助于說明藥物是否影響實驗動物的食欲。明藥物是否影響實驗動物的食欲。 （一一）日常觀察日常觀察 如對食欲有影響如對食欲有影響，則每日進食量必然減少則每日進食量必然減少, , 體重增體重增長亦受影響長亦受影響, , 但此時食物利用率并不一定降低但此時食物利用率并不一定降低 如果不影響食欲如果不影響食欲, ,而體重增長卻下降而體重增長卻下降, ,表明藥物有可表明藥物有可能影響食物的吸收或合成代謝能影響食物的吸收或合成代謝, ,此時食物利用率就此時食物利用率就必然會有變化必然會有變化2022-3-1667（二）測定指標(biāo)（二）測定指標(biāo) 1. 器官重量器官重量 涉及的主要器官有

40、涉及的主要器官有： 心臟、肝臟、腎臟、脾臟、肺、腦、心臟、肝臟、腎臟、脾臟、肺、腦、 腎上腺、甲狀腺、腎上腺、甲狀腺、睪丸睪丸、前列腺、子宮、前列腺、子宮等等。 目的：確定靶器官2022-3-1668年組織編寫年組織編寫 藥物研究技術(shù)指導(dǎo)原則藥物研究技術(shù)指導(dǎo)原則規(guī)定規(guī)定長期毒性試驗中需稱重并計算臟器系數(shù)的器官：長期毒性試驗中需稱重并計算臟器系數(shù)的器官：l腦腦l肝臟肝臟l腎上腺腎上腺l脾臟脾臟l附睪附睪l子宮子宮l心臟心臟l腎臟腎臟l胸腺胸腺l睪丸睪丸l卵巢卵巢l肺臟肺臟2022-3-1669年組織編寫年組織編寫 藥物研究技術(shù)指導(dǎo)原則藥物研究技術(shù)指導(dǎo)原則規(guī)定規(guī)定長期毒性試驗中需稱重并計算臟器系數(shù)

41、的器官：長期毒性試驗中需稱重并計算臟器系數(shù)的器官：l腦腦l肝臟肝臟l腎上腺腎上腺l脾臟脾臟l附睪附睪l子宮子宮l心臟心臟l腎臟腎臟l胸腺胸腺l睪丸睪丸l卵巢卵巢l肺臟肺臟甲狀腺、甲狀腺、前列腺前列腺長期毒性試驗中進行病理組織學(xué)檢查的組織或器官：長期毒性試驗中進行病理組織學(xué)檢查的組織或器官：l腦（大腦、小腦、腦干）腦（大腦、小腦、腦干）l垂體垂體l甲狀腺甲狀腺l食管食管l胃胃l肝臟肝臟l腎臟腎臟l脾臟脾臟l氣管氣管l主動脈主動脈l附睪附睪l卵巢卵巢l前列腺前列腺l坐骨神經(jīng)坐骨神經(jīng)l眼（眼科檢查發(fā)現(xiàn)異常時）眼（眼科檢查發(fā)現(xiàn)異常時）l給藥局部給藥局部l淋巴結(jié)淋巴結(jié)l脊髓脊髓l胸腺胸腺l甲狀旁腺甲狀旁

42、腺l唾液腺唾液腺l小腸和大腸小腸和大腸l膽囊膽囊l腎上腺腎上腺l胰腺胰腺l肺肺l心臟心臟l睪丸睪丸l子宮子宮l乳腺乳腺l膀胱膀胱l視神經(jīng)視神經(jīng)l骨髓骨髓注：為嚙齒類動物可不進行組織病理學(xué)檢查的組織或器官注：為嚙齒類動物可不進行組織病理學(xué)檢查的組織或器官2022-3-16711. 1. 器官重量器官重量 器官重量降低器官重量降低，表示該器官萎縮或發(fā)育不良表示該器官萎縮或發(fā)育不良； 器官重量增加提示可能有充血器官重量增加提示可能有充血、水腫、增生、肥大、酶誘水腫、增生、肥大、酶誘導(dǎo)變化或新生物等。導(dǎo)變化或新生物等。 將動物處死后取出上述器官將動物處死后取出上述器官，除去附著的組除去附著的組織、除盡

43、余血后立即稱重織、除盡余血后立即稱重（）。（二）測定指標(biāo)（二）測定指標(biāo) 2022-3-16722. 2. 血液學(xué)血液學(xué)（二）測定指標(biāo)（二）測定指標(biāo) u常規(guī)的血液學(xué)參數(shù)常規(guī)的血液學(xué)參數(shù)u骨髓涂片骨髓涂片1. 1. 器官重量器官重量 2022-3-1673年組織編寫年組織編寫 藥物研究技術(shù)指導(dǎo)原則藥物研究技術(shù)指導(dǎo)原則規(guī)定規(guī)定血液學(xué)指標(biāo)血液學(xué)指標(biāo)l紅細胞計數(shù)紅細胞計數(shù)l紅細胞容積紅細胞容積l平均紅細胞血紅蛋白平均紅細胞血紅蛋白l網(wǎng)織紅細胞計數(shù)網(wǎng)織紅細胞計數(shù)l血小板計數(shù)血小板計數(shù)l血紅蛋白血紅蛋白l平均紅細胞容積平均紅細胞容積l平均紅細胞血紅蛋白濃度平均紅細胞血紅蛋白濃度l白細胞計數(shù)及分類白細胞計數(shù)及

44、分類l凝血酶原時間凝血酶原時間紅細胞壓積紅細胞壓積2022-3-1674 血液學(xué)指標(biāo)血液學(xué)指標(biāo)觀察時間觀察時間非非嚙嚙齒類動物齒類動物一般于整個試驗周期中每隔一般于整個試驗周期中每隔 1.5 2 個月采血測定一次各項指標(biāo)。個月采血測定一次各項指標(biāo)。嚙嚙齒類動物齒類動物試驗周期為試驗周期為 6 個月時個月時，可于試驗中期、試驗?zāi)┛捎谠囼炛衅?、試驗?zāi)?期以及恢復(fù)期分別剖殺部分動物期以及恢復(fù)期分別剖殺部分動物 ( 約約 1/4 、 2/4 、 1/4)，進行各項檢查進行各項檢查；試驗周期為試驗周期為 3 個月時個月時，可于試驗未期以及恢復(fù)可于試驗未期以及恢復(fù) 期分別剖殺部分動物期分別剖殺部分動物 ( 約約 2/3、1/3)，取血，取血檢查。檢查。（二）測定指標(biāo)（