的作用機(jī)制及功能研究進(jìn)展

1、中國(guó)科學(xué) C輯:生命科學(xué) 2009年 第39卷 第1期: 109 113 109 中國(guó)科學(xué)雜志社 SCIENCE IN CHINA PRESS MicroRNA作用機(jī)制研究的新進(jìn)展 趙爽 劉默芳 中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院 生物化學(xué)與細(xì)胞生物學(xué)研究所 分子生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 上海 200031 聯(lián)系人 E-mail: 收稿日期: 2008-09-04 接受日期: 2008-11-28 國(guó)家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃批準(zhǔn)號(hào): 2005CB724603和國(guó)家自然科學(xué)基金批準(zhǔn)號(hào): 30770474資助項(xiàng)目 摘要 microRNAmiRNA是一種非蛋白質(zhì)的新型基因表達(dá)調(diào)控因子 對(duì)真核生物基因表

2、達(dá)起非常重要的調(diào)控作用. 關(guān)于miRNA的功能及作用機(jī)制方面的研究是當(dāng)前生命科學(xué)研究的前沿?zé)狳c(diǎn) 研究人員陸續(xù)提出了一些假說模型 諸如翻譯起始抑制、翻譯起始后抑制、mRNA降解、P小體Processing Body SGStress Granules顆?？垩喊衜RNA等來闡述miRNA 如何抑制其靶基因的表達(dá). 此外 最近還有文獻(xiàn)報(bào)道了一些全新的miRNA作用方式 如去抑制和miRNA 激活作用等. 本文將簡(jiǎn)要介紹一些miRNA作用機(jī)制研究的新進(jìn)展及相關(guān)作用模型. 關(guān)鍵詞 miRNA 負(fù)調(diào)控 去抑制 正調(diào)控 P小體 SG顆粒 準(zhǔn)確的基因表達(dá)調(diào)控對(duì)生物體的生長(zhǎng)發(fā)育和功能至關(guān)重要 基因表達(dá)

3、調(diào)控異常是疾病發(fā)生的主要原因. 在過去的數(shù)十年間 對(duì)基因表達(dá)調(diào)控的研究主要集中在蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄因子介導(dǎo)的基因表達(dá)調(diào)控方面. 研究發(fā)現(xiàn) 它們通過激活或抑制基因轉(zhuǎn)錄控制基因的表達(dá) 在基因組信息轉(zhuǎn)化為分子效應(yīng)和生物效 應(yīng)過程中發(fā)揮著重要的作用. 最近 在動(dòng)、植物及病毒等生物中發(fā)現(xiàn)了一系列小分子非編碼RNA small noncoding RNA 包括miRNAmicroRNA siRNA small interfering RNA piRNApiwi-interacting RNA和esiRNA endogenous siRNA等 它們分別在轉(zhuǎn)錄水平、轉(zhuǎn)錄后水平及表觀遺傳水平等方面控制基因的表

4、達(dá) 組成了RNA 調(diào)控網(wǎng)絡(luò) 調(diào)控包括細(xì)胞增殖、分化和凋亡等一系列生理進(jìn)程 影響生物體的生長(zhǎng)發(fā)育 并與多種人類疾病的發(fā)生密切相關(guān)1. 這些小分子RNA的發(fā)現(xiàn) 揭示了真核生物一種新的基因表達(dá)調(diào)控方式. miRNA是小分子非編碼RNA家族的重要成員. miRNA與siRNA共用生成途徑和作用途徑中多種蛋白質(zhì)因子. 但二者也有一些明顯的區(qū)別 如siRNA主 要是由外源提供的小分子RNA 通過引發(fā)靶mRNA的切割負(fù)調(diào)控靶基因的表達(dá) 而miRNA是基因組編碼的內(nèi)源性小分子RNA 通常在翻譯水平負(fù)調(diào)控靶 mRNA的表達(dá). miRNA基因由RNA聚合酶或/和 轉(zhuǎn)錄23. 動(dòng)物miRNA加工成熟一般需要兩個(gè)RN

5、ase 家族酶Drosha和Dicer參與. 最近發(fā)現(xiàn)AgoAr- gonaute蛋白在miRNA加工成熟中也發(fā)揮作用4. miRNA調(diào)控是通過RNA誘導(dǎo)基因沉默復(fù)合物RNA- induced silencing complex RISC完成的 復(fù)合物的核心成員是Ago 家族蛋白 還有一些功能未知、非RISC核酸酶活性必需的蛋白成分 如FXRP RNA 解旋酶等 也存在于復(fù)合物中56. 通常認(rèn)為 miRNA與Ago1結(jié)合 組成miRNA效應(yīng)器復(fù)合物miRNA- RISC miRISC 執(zhí)行靶mRNA翻譯抑制 而siRNA與Ago2結(jié)合 組成siRISC 執(zhí)行靶mRNA降解7. 最近有人對(duì)這種m

6、iRNA/siRNA分選模型進(jìn)行了校正 認(rèn)為miRNA/siRNA都可以被Ago1或Ago2結(jié)合89 這為miRNA介導(dǎo)切割提供了可行性. 過去認(rèn)為Dicer生產(chǎn)的miRNA: miRNA雙鏈 miRNA作為向?qū)ф湵唤M裝入miRISC 互補(bǔ)鏈miRNA則被迅速降解. 但最 趙爽等: MicroRNA作用機(jī)制研究的新進(jìn)展 110 近研究發(fā)現(xiàn) 雖然miRNA種類不如對(duì)應(yīng)的miRNA豐富 但它們常常以適當(dāng)?shù)纳硭酱嬖?并同樣可以被Ago蛋白結(jié)合10. miRNA主要是通過5端被稱為種子序列Seed Sequence的7 nt序列與位于靶mRNA 3UTR的miRNA調(diào)控元件miRNA R

7、egulatory Element MRE相互作用 識(shí)別靶mRNA11. 一些靶mRNA 的其他特征 如MRE附近富含AU序列、靶mRNA與miRNA的1316位堿基配對(duì)、MRE距離終止密碼子15 nt以外、不位于長(zhǎng)3UTR的中間、鄰近共表達(dá)miRNA的識(shí)別位點(diǎn)等 可增加miRNA的作用效率12. miRNA與靶mRNA之間的配對(duì)程度決定了miRISC抑制靶mRNA的方式: 高度配對(duì)的miRNA 如大部分植物miRNA 將通過類似于siRNA的作用機(jī)制 導(dǎo)致靶mRNA切割和降解 相反 在動(dòng)物中大部分miRNA與靶mRNA不完全配對(duì) 則可能是通過翻譯抑制發(fā)揮作用. 在過去的幾年間 研究

8、者陸續(xù)提出了一些不同的、甚至互相矛盾的假說模型 來解釋miRNA如何抑制其靶基因表達(dá). 但對(duì)miRNA準(zhǔn)確的作用機(jī)制 目前還沒有統(tǒng)一的觀點(diǎn). 本文將簡(jiǎn)述miRNA 作用機(jī)制研究的新進(jìn)展及miRNA的一些新功能. 1 miRNA翻譯起始抑制機(jī)制 關(guān)于miRNA翻譯起始抑制機(jī)制目前主要有3種觀點(diǎn): 第一種觀點(diǎn)認(rèn)為miRNA可能通過抑制全能性核糖體的組裝而阻斷翻譯起始13. 因?yàn)檠芯堪l(fā)現(xiàn)被miRNA沉默的mRNA沒有或鮮有偶聯(lián)完整的核糖體 部分研究者認(rèn)為miRNA可能通過抑制全能性核糖體的組裝而阻斷翻譯起始13. 這種觀點(diǎn)被至少兩個(gè)新近的證據(jù)支持: Thermann等人14在一個(gè)體外研究中發(fā)現(xiàn) 果蠅

9、的miR-2抑制全能性核糖體的前體-48S翻譯復(fù)合物的組裝 該復(fù)合物添加60S亞基后即形成全能性核糖體 Chendrimada等人15發(fā)現(xiàn) EIF6是一種可以抑制核糖體40S和60S亞基結(jié)合、阻斷80S全 能性核糖體形成的蛋白 與Ago/RISC直接相互作用 并且在哺乳動(dòng)物和線蟲中 缺失EIF6影響miRNA介導(dǎo)基因沉默. 然而 RISC是否通過與EIF6相互作用誘導(dǎo)40S和60S核糖體解聚還有待于進(jìn)一步的研究. 第二種觀點(diǎn)根據(jù)miRNA 抑制要求靶mRNA m7G 帽子的存在 認(rèn)為miRISC 可能抑制翻譯起始復(fù)合物的形成1316. 這個(gè)假說最近也找到了一些新證據(jù): 研究者在一個(gè)體

10、外系統(tǒng)中發(fā)現(xiàn) 增加eIF4F復(fù)合物含有m7G 帽子結(jié)合蛋白、翻譯起始因子eIF4E水平可回復(fù)miRNA翻譯抑制17 與之一致的是 另一個(gè)研究組18發(fā)現(xiàn) Ago2中間結(jié)構(gòu)域類似于eIF4E 具有結(jié)合m7G 帽子的活性 推測(cè)經(jīng)miRNA招募到靶mRNA 3UTR的Ago2 與起始復(fù)合物eIF4E/G競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合m7G帽子 從而抑制翻譯起始復(fù)合物的形成. 此外 miRNA還可能通過阻止polyA結(jié)合蛋白poly A binding protein PABP 與mRNA結(jié)合影響翻譯起始. Wakiyama等人19發(fā)現(xiàn) miRNA引起靶mRNA脫腺嘌呤反應(yīng)deadenylation 導(dǎo)致 mRNA的poly

11、A尾巴縮短 但mRNA的穩(wěn)定性似乎并不受影響 只是polyA 尾巴縮短使PABP結(jié)合mRNA受阻 從而影響了翻譯起始. 2 miRNA翻譯起始后抑制 雖然上述證據(jù)支持miRNA抑制翻譯起始 但也有研究發(fā)現(xiàn) 一些被miRNA抑制的mRNA與翻譯活躍性的多核糖體偶聯(lián) 說明有一些miRNA的抑制作用不是發(fā)生在翻譯起始2021. 此外 Petersen等人22發(fā)現(xiàn) 經(jīng)內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)Internal Ribosome En-try Site IRES起始、不依賴于mRNA m7G帽子的翻譯也可以被miRNA抑制 這進(jìn)一步證明miRNA抑制是發(fā)生在翻譯起始之后. 雖然這些研究證明了miRNA沉默作用確

12、實(shí)是發(fā)生在翻譯起始后、新生多肽完成前 但關(guān)于miRNA究竟如何在翻譯起始后發(fā)揮抑制作用 目前還沒有一致的結(jié)論. 研究者推測(cè) miRNA可能引起新生多肽鏈的翻譯同步降解21 或者是在翻譯延伸過程中 miRNA引發(fā)大量的核糖體脫落及高頻次的翻譯提前終止 產(chǎn)生的不完整多肽產(chǎn)物則被迅速降解22. 3 miRNA介導(dǎo)mRNA衰減 Wu等人23首先發(fā)現(xiàn) miRNA可以誘導(dǎo)與之不完全配對(duì)靶mRNA的衰減 下調(diào)靶mRNA的水平. 這種miRNA誘導(dǎo)mRNA衰減的作用機(jī)制被隨后的證據(jù)所支持24 如在斑馬魚的早期胚胎發(fā)育中 miR-430控制母本mRNA的代謝 表明miRNA介導(dǎo)的mRNA衰減機(jī)制具有生

13、理學(xué)意義25. 與之一致的是 Ago蛋白被發(fā)現(xiàn)定位于細(xì)胞中降解mRNA的RNA顆粒RNA 中國(guó)科學(xué) C輯: 生命科學(xué) 2009年 第39卷 第1期 111 granules 如P小體processing bodies中 這些RNA顆粒中包含常規(guī)的mRNA降解酶 如脫腺嘌呤酶、脫帽酶、核酸外切酶等 提示這些mRNA降解酶可能參與miRNA介導(dǎo)的mRNA衰減2627. 此外 miRISC的核心成分Ago家族蛋白有多種異構(gòu)體 其中一些成員的內(nèi)切酶活性也可能協(xié)助miRNA介導(dǎo)的mRNA的切割和/或衰減2428. 總之 這些證據(jù)都表明 miRNA可以直接或間接介導(dǎo)靶mRNA的降解 這改變了最初認(rèn)為的mi

14、RNA調(diào)控僅翻譯抑制作用的觀點(diǎn). 4 RNA顆粒扣押、降解或儲(chǔ)存靶mRNA 胞漿的RNA 顆粒 如P小體和SGStress Gran-ules顆粒 在轉(zhuǎn)錄后水平的基因表達(dá)調(diào)控中具有重要的作用 它們是細(xì)胞儲(chǔ)存處于翻譯抑制狀態(tài)mRNA 的場(chǎng)所. 在此 mRNA被降解或/和釋放重新進(jìn)入翻譯機(jī)器29. P小體含有多種mRNA衰減機(jī)器的組分 被認(rèn)為是細(xì)胞的mRNA代謝場(chǎng)所 SG 顆粒特異性地在受脅迫條件下形成 因此被命名為脅迫顆粒Stress Granule. 從組成成分看來 SG顆粒更傾向于沉默mRNA翻譯 而不降解mRNA. P小體和SG顆粒常常彼此并列 動(dòng)態(tài)關(guān)聯(lián) 二者含有一些相同的組分 如帽子結(jié)合

15、蛋白eIF4E 和翻譯抑制子rck/p54 但它們的成分并不完全相同 暗示可能有功能差別. 因?yàn)榘l(fā)現(xiàn)它們與miRNA作用相關(guān)聯(lián) 可能是miRNA的胞內(nèi)作用場(chǎng)所 這兩種RNA顆粒最近受到特別關(guān)注. 一些證據(jù)表明 在miRNA存在下 miRISC中的核心組分及與miRISC結(jié)合的mRNA定位于P小體和SG顆粒中262730. 而且 有證據(jù)表明 P小體的形成與RNA 沉默相關(guān)聯(lián) 抑制P小體的形成將抑制miRNA介導(dǎo)的翻譯抑制 反過來 抑制RISC也同樣抑制P小體的形成 更值得注意的是 一些研究證明 siRNA/miRNA都可以在哺乳動(dòng)物細(xì)胞和果蠅細(xì)胞中誘導(dǎo)P小體的形成31. 鑒于P小體和SG顆粒的內(nèi)

16、在聯(lián)系 可以推測(cè)P小體和SG顆?？赡軋?zhí)行相互聯(lián)系但又不同的功能. 推測(cè)被miRISC結(jié)合的mRNA進(jìn)入P小體和SG顆粒中 即被這些RNA顆粒中的翻譯抑制子剝奪了與核糖體和翻譯機(jī)器結(jié)合的可能性 從而使mRNA處于翻譯抑制狀態(tài) 達(dá)到了基因沉默的目的. 但是 扣押的mRNA下一步命運(yùn)如何盡管不少的證據(jù)支持miRNA介導(dǎo)靶mRNA的衰減 但也發(fā)現(xiàn) 在很多情況下 miRNA僅降低了靶基因的蛋白水平 靶基因的mRNA水平卻無明顯變化. 這使得我們有理由推測(cè) 在靶mRNA被扣押到RNA顆粒解除翻譯后 可能隨即會(huì)進(jìn)行一個(gè)mRNA 衰減或儲(chǔ)存的分揀步驟. P小體和SG顆粒極有可能分工執(zhí)行mRNA降解和儲(chǔ)存功能.

17、 在某些脅迫條件下 miRISC結(jié)合的mRNA是否有可能首先被送到SG 顆粒 被抑制翻譯和臨時(shí)儲(chǔ)存 然后在細(xì)胞估算mRNA確實(shí)已過量后再轉(zhuǎn)運(yùn)到富含mRNA代謝酶的P小體中進(jìn)行降解事實(shí)上 在miRNA存在下 Ago蛋白與SG顆粒呈動(dòng)態(tài)聯(lián)系 SG顆粒中的酶發(fā)揮翻譯沉默而不是mRNA衰減的作 用30. 還有研究發(fā)現(xiàn) 一些誘導(dǎo)SG顆粒形成的脅迫作用確實(shí)減少了P小體的形成和mRNA衰減32. 但目前還不清楚miRISC偶聯(lián)mRNA在脅迫條件下聚積到SG顆粒中的生理作用是什么. 5 miRNA正調(diào)控和去抑制 最近的研究發(fā)現(xiàn)了一些新型的miRNA作用方 式 如miRNA正調(diào)控和去抑制等. 首先 Vasude

18、van實(shí)驗(yàn)室336535發(fā)現(xiàn) miRNA不總是基因表達(dá)的負(fù)調(diào)控因子 在一些條件下 miRNA也上調(diào)基因表達(dá). 他們發(fā)現(xiàn) 在細(xì)胞周期過程中 miRNA效應(yīng)在抑制作用和活化作用間擺動(dòng). 在靜態(tài)細(xì)胞中G0期 miRNA活化翻譯和上調(diào)基因表達(dá) 而在其他細(xì)胞循環(huán)/增殖期則繼續(xù)發(fā)揮抑制作用35. miRNA激活作用與富含腺嘌呤/尿嘧啶元件AU rich element ARE相關(guān)33. ARE是miRNA活化翻譯的信號(hào) 在miRNA指導(dǎo)下 miRISC復(fù)合物成員如Ago FXRP被招募到ARE上 激活翻譯、上調(diào)基因表達(dá)34. ARE元件是一種mRNA不穩(wěn)定元件 位于mRNA 3UTR 嚴(yán)重影響其宿主mRN

19、A的穩(wěn)定性. 研究已發(fā)現(xiàn)ARE元件介導(dǎo)的mRNA 衰減調(diào)控與miRNA介導(dǎo)的mRNA衰減調(diào)控有多種聯(lián)系36. 另外 最近研究發(fā)現(xiàn) 在一些條件下 miR-10a也正調(diào)控基因表達(dá). miR-10a結(jié)合到核糖體蛋白mRNA 5UTR 促進(jìn)其翻譯 提高核糖體蛋白合成 從而刺激核糖體生成 進(jìn)而正調(diào)控總蛋白質(zhì)的合成37. 研究發(fā)現(xiàn) miRNA的抑制作用是可逆的 一些RNA 結(jié)合蛋白可能在這一過程中發(fā)揮重要作用38. 在人體細(xì)胞中觀察到 脅迫條件下 被miRNA 抑制 趙爽等: MicroRNA作用機(jī)制研究的新進(jìn)展 112 的mRNA可以去抑制 重新進(jìn)入翻譯機(jī)器 HuR 一個(gè)A

20、RE元件結(jié)合蛋白 可能通過促進(jìn)miRISC-靶mRNA復(fù)合體解離和P小體解聚 去除miRNA的抑制作用39. 另一個(gè)RNA結(jié)合蛋白Dnd1 在生殖系細(xì)胞中與miRNA緊密聯(lián)系 它可能通過結(jié)合在mRNA的U豐富區(qū)U-rich mRNA region 屏蔽miRNA的結(jié)合位點(diǎn) 阻止miRNA接近靶mRNA 解除miR-430家族的抑制效應(yīng)40. 最近 Sandberg等人41還報(bào)道了一種逃避miRNA抑制的新方式. 他們發(fā)現(xiàn) 一些在增殖細(xì)胞中表達(dá)的mRNA 3UTR保守性地縮短 導(dǎo)致miRNA的靶位點(diǎn)減少 從而避免了miRNA的負(fù)調(diào)控作用. 本實(shí)驗(yàn)室對(duì)miR-155與它的一個(gè)靶基因在部分乳腺癌中同

21、時(shí)高表達(dá)的原因進(jìn)行了調(diào)查 發(fā)現(xiàn)在一個(gè)乳腺癌樣本中 該mRNA與miR-155種子序列配對(duì)的第8位A可能通過RNA編輯被轉(zhuǎn)變成I/G 導(dǎo)致該靶基因不再受miR-155的抑制 提示RNA編輯也可能在miRNA的去抑制中發(fā)揮作用未發(fā)表資料. 總之 這些新的miRNA調(diào)控方式 改變了我們過去將miRNA等同于基因表達(dá)負(fù)調(diào)控因子的觀點(diǎn) 提示miRNA的調(diào)控作用具有多樣性 可能被動(dòng)態(tài)調(diào) 節(jié). 這些新的miRNA作用方式擴(kuò)大和加深了我們對(duì)miRNA調(diào)控作用的認(rèn)識(shí)和理解. 6 小結(jié)和展望 眾多的證據(jù)表明 在不同條件下 miRNA確實(shí)以 不同的作用機(jī)制抑制靶基因表達(dá). 然而 目前還不知道m(xù)iRNA究竟是如何選擇

22、沉默的機(jī)制或通路的 這可能由特定的miRNA和靶基因 或特定的組織和細(xì)胞來決定的 也可能受控于不同的信號(hào)通路. 同樣 還有以下問題需要回答: miRISC中其他成分和輔助因子的作用是什么 miRISC結(jié)合的靶mRNA是如何分選為衰減和儲(chǔ)存的 在脅迫條件下 miRISC結(jié)合的靶mRNA聚積到SG顆粒中的生理作用是什么 胞漿中的RNA顆粒是如何形成的 細(xì)胞中有多少種與miRNA沉默作用相關(guān)的RNA顆粒 這些顆粒的組成成分是什么 這些問題的答案將使我們更全面、更準(zhǔn)確地了解miRNA的作用機(jī)制. 對(duì)新型小分子非編碼RNA的發(fā)現(xiàn)及機(jī)制的研究將是非編碼RNA研究領(lǐng)域的重要發(fā)展方向. 目前 我們對(duì)miRNA

23、的調(diào)控作用已有一定的認(rèn)識(shí) 但對(duì)其他幾種內(nèi)源小分子非編碼RNA 如piRNA esiRNA等的功能和作用機(jī)制還知之甚少. 在過去的一年多 本研究組致力于piwi-piRNA相互作用的研究 初步的研究結(jié)果表明 piRNA可能通過調(diào)控組蛋白乙酰化修飾在表觀遺傳學(xué)水平調(diào)控基因表達(dá) 同時(shí)可能參與細(xì)胞周期的調(diào)控未發(fā)表資料. 非編碼RNA是后基因組時(shí)代重要的科學(xué)問題 闡明小分子非編碼RNA的功能和作用機(jī)制將有助于我們深入了解基因組的表達(dá)調(diào)控. 參考文獻(xiàn) 1 Guarnieri D J Dileone R J. MicroRNAs: a new class of gene regulators. A

24、nn Med 2008 403: 197208 2 Lee Y Kim M Han J et al. MicroRNA genes are transcribed by RNA polymerase . EMBO J 2004 2320: 40514060 3 Borchert G M Lanier W Davidson B L. RNA polymerase transcribes human microRNAs. Nat Struct Mol Biol 2006 1312: 10971101 4 Diederichs S Haber D A. Dual role for argonaute

25、s in microRNA processing and posttranscriptional regulation of microRNA expres-sion. Cell 2007 1316: 10971108 5 Hutvagner G Simard M J. Argonaute proteins: key players in RNA silencing. Nat Rev Mol Cell Biol 2008 91: 2232 6 Farazi T A Juranek S A Tuschl T. The growing catalog of small RNAs and their

26、 association with distinct Argonaute/Piwi family members. Development 2008 1357: 12011214 7 Okamura K Ishizuka A Siomi H et al. Distinct roles for Argonaute proteins in small RNA-directed RNA cleavage pathways. Genes Dev 2004 1814: 16551666 8 Forstemann K Horwich M D Wee L et al. Drosophila microRNA

27、s are sorted into functionally distinct argonaute complexes after production by dicer-1. Cell 2007 1302: 287297 9 Tomari Y Du T Zamore P D. Sorting of Drosophila small silencing RNAs. Cell 2007 1302: 299308 10 Okamura K Phillips M D Tyler D M et al. The regulatory activity of microRNA species has su

28、bstantial influence on microRNA and 3 UTR evolution. Nat Struct Mol Biol 2008 154: 354363 11 Lewis B P Burge C B Bartel D P. Conserved seed pairing often flanked by adenosines indicates that thousands of human genes are 中國(guó)科學(xué) C輯: 生命科學(xué) 2009年 第39卷 第1期 113 microRNA targets. Cell 2005 1201: 1520 12 Grims

29、on A Farh K K Jothston W K et al. MicroRNA targeting specificity in mammals: determinants beyond seed pairing. Mol Cell 2007 271: 91105 13 Pillai R S Bhattacharyya S N Artus C G et al. Inhibition of translational initiation by Let-7 MicroRNA in human cells. Science 2005 3095740: 15731576 14 Thermann

30、 R Hentze M W. Drosophila miR-2 induces pseudo-polysomes and inhibits translation initiation. Nature 2007 4477146: 875878 15 Chendrimada T P Finn K J Ji X et al. MicroRNA silencing through RISC recruitment of eIF6. Nature 2007 447: 823828 16 Humphreys D T Westman B J Martin D I et al. MicroRNAs cont

31、rol translation initiation by inhibiting eukaryotic initiation factor 4E/cap and polyA tail function. Proc Natl Acad Sci USA 2005 10247: 1696116966 17 Mathonnet G Fabian M R Svitkin Y V et al. MicroRNA inhibition of translation initiation in vitro by targeting the cap-binding com-plex eIF4F. Science

32、 2007 3175845: 17641767 18 Kiriakidou M Tan G S Lamprinaki S et al. An mRNA m7G cap binding-like motif within human Ago2 represses translation. Cell 2007 1296: 1141 1151 19 Wakiyama M Takimoto K Ohara O et al. Let-7 microRNA-mediated mRNA deadenylation and translational repression in a mam-malian ce

33、ll-free system. Genes Dev 2007 2115: 18571862 20 Olsen P H Ambros V. The lin-4 regulatory RNA controls developmental timing in Caenorhabditis elegans by blocking LIN-14 pro-tein synthesis after the initiation of translation. Dev Biol 1999 2162: 671680 21 Nottrott S Simard M J Richter J D. Human let-

34、7a miRNA blocks protein production on actively translating polyribosomes. Nat Struct Mol Biol 2006 1312: 11081114 22 Petersen C P Bordeleau M E Pelletier J et al. Short RNAs repress translation after initiation in mammalian cells. Mol Cell 2006 214: 533542 23 Wu L Fan J Belasco J G. MicroRNAs direct rapid deadenylation of mRNA. Proc Natl Acad Sci USA 2006 10311: 40344039 24 Wu L Belasco J G. Let me count the ways: mechanisms of gene regulation by miRNAs a