第4章23 免疫檢測(cè)與防治

1、免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù) 的基本原理的基本原理免疫學(xué)檢測(cè)方法：免疫學(xué)檢測(cè)方法： 依據(jù)依據(jù)免疫學(xué)理論免疫學(xué)理論設(shè)計(jì)的設(shè)計(jì)的測(cè)定測(cè)定抗原、抗體、免疫細(xì)胞及細(xì)胞因子抗原、抗體、免疫細(xì)胞及細(xì)胞因子的的實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)方法。一、基本原理一、基本原理 抗原與相應(yīng)抗體特異性結(jié)合，并呈現(xiàn)抗原與相應(yīng)抗體特異性結(jié)合，并呈現(xiàn)某種反應(yīng)現(xiàn)象，如凝集或沉淀，以此檢測(cè)某種反應(yīng)現(xiàn)象，如凝集或沉淀，以此檢測(cè)抗原或抗體?？乖蚩贵w。第一節(jié)第一節(jié) 體外抗原抗體結(jié)合反應(yīng)體外抗原抗體結(jié)合反應(yīng) 的特點(diǎn)及其影響因素的特點(diǎn)及其影響因素抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)1.抗原抗體結(jié)合的特異性 抗原抗體結(jié)合除抗原抗體結(jié)合除空間構(gòu)型空間構(gòu)型互

2、補(bǔ)外，還以互補(bǔ)外，還以氫鍵氫鍵、靜電引力靜電引力、范、范德華力德華力和和疏水鍵疏水鍵等非共價(jià)方式等非共價(jià)方式結(jié)合，結(jié)合，一定條件下一定條件下復(fù)合物可復(fù)合物可解離解離成游離狀態(tài)，成游離狀態(tài)，且仍且仍保持原有性質(zhì)保持原有性質(zhì)。2.抗原抗體結(jié)合的可逆性 復(fù)合物復(fù)合物解離度解離度主要取決于特異性抗體主要取決于特異性抗體超變區(qū)超變區(qū)與相應(yīng)與相應(yīng)抗原表位抗原表位三維空間構(gòu)型的三維空間構(gòu)型的互補(bǔ)程度互補(bǔ)程度，互補(bǔ)程度越高，分子間距越小，作用力越大，互補(bǔ)程度越高，分子間距越小，作用力越大，兩者結(jié)合越牢固，不易解離；反之，則容易兩者結(jié)合越牢固，不易解離；反之，則容易發(fā)生解離。發(fā)生解離。3.抗原抗體結(jié)合的比例與濃

3、度 抗原與抗體結(jié)合抗原與抗體結(jié)合比例合適比例合適，則可形成，則可形成肉眼可見(jiàn)的肉眼可見(jiàn)的大結(jié)合物大結(jié)合物；反之形成肉眼；反之形成肉眼不可見(jiàn)不可見(jiàn)的的小結(jié)合物。小結(jié)合物。4.抗原抗體反應(yīng)的階段性 第二階段：第二階段：可見(jiàn)反應(yīng)階段?？梢?jiàn)反應(yīng)階段。數(shù)分鐘、數(shù)小時(shí)至數(shù)日，因素影響多。數(shù)分鐘、數(shù)小時(shí)至數(shù)日，因素影響多。第一階段：第一階段：特異結(jié)合階段。特異結(jié)合階段。僅幾秒到幾分鐘、尚無(wú)可見(jiàn)反應(yīng)；僅幾秒到幾分鐘、尚無(wú)可見(jiàn)反應(yīng)；細(xì)菌、細(xì)胞等顆粒性抗原與相應(yīng)的抗體，或表面包被抗原的顆粒狀物質(zhì)與相應(yīng)的抗體在電解質(zhì)存在的條件下結(jié)合，出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的凝集團(tuán)現(xiàn)象。毒素、組織浸液以及血清中的蛋白等可溶性抗原與相應(yīng)抗體反應(yīng)

4、后，出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的沉淀物。顯色顯色 第二節(jié)第二節(jié) 免疫細(xì)胞的測(cè)定免疫細(xì)胞的測(cè)定 淋巴細(xì)胞是機(jī)體內(nèi)主要的免疫細(xì)胞，檢測(cè)其數(shù)量和淋巴細(xì)胞是機(jī)體內(nèi)主要的免疫細(xì)胞，檢測(cè)其數(shù)量和功能是了解機(jī)體免疫狀態(tài)的重要手段。功能是了解機(jī)體免疫狀態(tài)的重要手段。 一一 、淋巴細(xì)胞的分離、淋巴細(xì)胞的分離 常用常用ficoll（淋巴細(xì)胞分離液）密度梯度離心除去紅淋巴細(xì)胞分離液）密度梯度離心除去紅細(xì)胞、粒細(xì)胞而獲得外周血單個(gè)核細(xì)胞（細(xì)胞、粒細(xì)胞而獲得外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC），），再再經(jīng)吸附除去單核細(xì)胞而得到淋巴細(xì)胞。若要分離經(jīng)吸附除去單核細(xì)胞而得到淋巴細(xì)胞。若要分離T細(xì)胞細(xì)胞，可用尼龍毛柱、抗，可用尼龍毛柱、抗CD3單抗

5、、單抗、E花結(jié)試驗(yàn)等分離?；ńY(jié)試驗(yàn)等分離。二、免疫細(xì)胞細(xì)胞的鑒定二、免疫細(xì)胞細(xì)胞的鑒定 根據(jù)細(xì)胞的某些標(biāo)志，采用免疫熒光法、磁珠分離根據(jù)細(xì)胞的某些標(biāo)志，采用免疫熒光法、磁珠分離法、流式細(xì)胞術(shù)等方法可確定細(xì)胞不同類(lèi)型和比例。法、流式細(xì)胞術(shù)等方法可確定細(xì)胞不同類(lèi)型和比例。（一）（一）T細(xì)胞功能測(cè)定細(xì)胞功能測(cè)定 1. T細(xì)胞增殖試驗(yàn)細(xì)胞增殖試驗(yàn) 植物血凝素（植物血凝素（PHA）、）、刀豆蛋白刀豆蛋白A（ConA）等絲裂等絲裂原及抗原及抗CD3單抗等能非特異性激活培養(yǎng)的單抗等能非特異性激活培養(yǎng)的T細(xì)胞，使細(xì)胞，使其轉(zhuǎn)化成淋巴母細(xì)胞的試驗(yàn)。其轉(zhuǎn)化成淋巴母細(xì)胞的試驗(yàn)。 淋巴細(xì)胞功能測(cè)定淋巴細(xì)胞功能測(cè)定u在

6、該增殖過(guò)程中，細(xì)胞在該增殖過(guò)程中，細(xì)胞DNADNA、RNARNA、蛋白質(zhì)的合成增加，蛋白質(zhì)的合成增加，細(xì)胞形態(tài)改變。也可檢測(cè)特異性抗原致敏的細(xì)胞形態(tài)改變。也可檢測(cè)特異性抗原致敏的T T細(xì)胞。細(xì)胞。 （1 1）氚標(biāo)記的胸腺嘧啶核苷摻入法：該法靈敏、可靠）氚標(biāo)記的胸腺嘧啶核苷摻入法：該法靈敏、可靠，應(yīng)用廣泛，但需特殊儀器（液體閃爍儀），易有放射，應(yīng)用廣泛，但需特殊儀器（液體閃爍儀），易有放射性污染。性污染。 （2 2）MTTMTT法：該法操作簡(jiǎn)單，無(wú)放射性污染，但敏感法：該法操作簡(jiǎn)單，無(wú)放射性污染，但敏感性相對(duì)較差。性相對(duì)較差。 淋巴細(xì)胞功能測(cè)定淋巴細(xì)胞功能測(cè)定2. 細(xì)胞毒試驗(yàn)：細(xì)胞毒試驗(yàn)： Tc

7、、NK細(xì)胞對(duì)靶細(xì)胞有直接殺傷作用，可根據(jù)待細(xì)胞對(duì)靶細(xì)胞有直接殺傷作用，可根據(jù)待檢效應(yīng)細(xì)胞的性質(zhì)，選用相應(yīng)的靶細(xì)胞。檢效應(yīng)細(xì)胞的性質(zhì)，選用相應(yīng)的靶細(xì)胞。 （1）51Cr釋放法：用釋放法：用51Cr標(biāo)記靶細(xì)胞，標(biāo)記靶細(xì)胞，記數(shù)儀測(cè)定記數(shù)儀測(cè)定釋放的釋放的51C活性?；钚?。 （2）MTT法：其原理與增殖試驗(yàn)相同，但甲法：其原理與增殖試驗(yàn)相同，但甲 生成量生成量與靶細(xì)胞溶解破壞水平呈負(fù)相關(guān)。與靶細(xì)胞溶解破壞水平呈負(fù)相關(guān)。 （3）乳酸脫氫酶釋放法：細(xì)胞受損致膜通透性改變，）乳酸脫氫酶釋放法：細(xì)胞受損致膜通透性改變，乳酸脫氫酶釋放到培養(yǎng)液中。乳酸脫氫酶釋放到培養(yǎng)液中。 3.細(xì)胞因子檢測(cè)：細(xì)胞因子檢測(cè)：u

8、CK的檢測(cè)有助于了解其在免疫調(diào)節(jié)中的作用，的檢測(cè)有助于了解其在免疫調(diào)節(jié)中的作用，鑒定分離的淋巴細(xì)胞，監(jiān)測(cè)某些疾病狀態(tài)的細(xì)胞鑒定分離的淋巴細(xì)胞，監(jiān)測(cè)某些疾病狀態(tài)的細(xì)胞免疫功能。常用的檢測(cè)方法有以下三種：免疫功能。常用的檢測(cè)方法有以下三種：（1）ELISA法：法：（2）生物活性測(cè)定法：生物活性測(cè)定法：（3）聚合酶鏈反應(yīng)（）聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）：）： 淋巴細(xì)胞功能測(cè)定淋巴細(xì)胞功能測(cè)定 4.皮膚實(shí)驗(yàn)皮膚實(shí)驗(yàn) 正常機(jī)體對(duì)某種抗原產(chǎn)生細(xì)胞免疫后，用相同抗原正常機(jī)體對(duì)某種抗原產(chǎn)生細(xì)胞免疫后，用相同抗原做皮膚試驗(yàn)時(shí)出現(xiàn)以局部紅腫為特征的做皮膚試驗(yàn)時(shí)出現(xiàn)以局部紅腫為特征的DTH。細(xì)胞免細(xì)胞免疫正常時(shí)出現(xiàn)陽(yáng)性反

9、應(yīng)，細(xì)胞免疫低下則呈陰性反應(yīng)疫正常時(shí)出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)，細(xì)胞免疫低下則呈陰性反應(yīng)。 該方法簡(jiǎn)便，可幫助診斷某些病原微生物感染（如該方法簡(jiǎn)便，可幫助診斷某些病原微生物感染（如結(jié)核桿菌、麻風(fēng)桿菌等）及免疫缺陷病等。結(jié)核桿菌、麻風(fēng)桿菌等）及免疫缺陷病等。 淋巴細(xì)胞功能測(cè)定淋巴細(xì)胞功能測(cè)定（二）（二）B細(xì)胞功能測(cè)定細(xì)胞功能測(cè)定u B細(xì)胞介導(dǎo)體液免疫，檢查細(xì)胞介導(dǎo)體液免疫，檢查B細(xì)胞的數(shù)量與功能細(xì)胞的數(shù)量與功能是確定體液免疫是否正常的重要手段。是確定體液免疫是否正常的重要手段。1.B細(xì)胞增殖試驗(yàn)細(xì)胞增殖試驗(yàn)2.抗體形成細(xì)胞的測(cè)定：吸附有特異性抗原的抗體形成細(xì)胞的測(cè)定：吸附有特異性抗原的SRBC與抗體形成細(xì)胞分

10、泌的與抗體形成細(xì)胞分泌的Ig特異性結(jié)合后活特異性結(jié)合后活化補(bǔ)體，溶解化補(bǔ)體，溶解SRBC。又稱(chēng)溶血空斑試驗(yàn)。又稱(chēng)溶血空斑試驗(yàn)。免疫學(xué)防治免疫學(xué)防治 “國(guó)防建設(shè)國(guó)防建設(shè)”學(xué)習(xí)要求：學(xué)習(xí)要求：1.掌握人工主動(dòng)免疫與人工被動(dòng)免疫的概念；掌握死疫苗和活疫苗概念以及特性；2.熟悉疫苗的基本要求。1.1.定義：定義：為為預(yù)防、控制預(yù)防、控制傳染病的發(fā)生和流行，用傳染病的發(fā)生和流行，用于于人體預(yù)防接種人體預(yù)防接種的的生物制品生物制品。包括疫苗、菌苗和類(lèi)毒素。包括疫苗、菌苗和類(lèi)毒素。2.2.基本要求基本要求：安全安全實(shí)用實(shí)用有效有效對(duì)絕大多數(shù)人群有保護(hù)性作用，對(duì)絕大多數(shù)人群有保護(hù)性作用，使用后群體抗感染能力強(qiáng)

11、，使用后群體抗感染能力強(qiáng)，理想的疫苗：同時(shí)誘導(dǎo)細(xì)胞和體理想的疫苗：同時(shí)誘導(dǎo)細(xì)胞和體液免疫，維持時(shí)間長(zhǎng)。液免疫，維持時(shí)間長(zhǎng)。接種程序簡(jiǎn)單，無(wú)嚴(yán)重不良反應(yīng)，接種程序簡(jiǎn)單，無(wú)嚴(yán)重不良反應(yīng)，便于運(yùn)輸和儲(chǔ)存，價(jià)格低。便于運(yùn)輸和儲(chǔ)存，價(jià)格低?；钜呙缫筮z傳性狀穩(wěn)定，活疫苗要求遺傳性狀穩(wěn)定，無(wú)返祖、致癌和致畸作用，無(wú)返祖、致癌和致畸作用，無(wú)熱原性和過(guò)敏原。無(wú)熱原性和過(guò)敏原?？垢腥究垢腥究鼓[瘤抗腫瘤計(jì)劃生育計(jì)劃生育防止免疫病理?yè)p傷防止免疫病理?yè)p傷3.3.疫苗應(yīng)用疫苗應(yīng)用疫苗疫苗死疫苗）與減毒活疫苗死疫苗）與減毒活疫苗活疫苗活疫苗：人工的方法使病原體減毒減毒或從自然界篩選病原體無(wú)毒株無(wú)毒株或微毒株微毒株所制成的活的活的微生物制劑。也稱(chēng)減毒活疫苗，卡介苗，甲肝疫苗。死疫苗死疫苗：選用免疫原性強(qiáng)免疫原性強(qiáng)的病原微生物，經(jīng)人工大量培養(yǎng)，經(jīng)理化方法將其殺死殺死后制成的疫苗。無(wú)毒力無(wú)毒力，但仍保持其免疫原性免疫原性。傷寒、百日咳、鉤端螺旋體、斑疹傷寒、乙型腦炎等疫苗死疫苗與活疫苗特點(diǎn)的比較含義：含義：細(xì)菌外毒素經(jīng)0.30.4%甲醛處理。特點(diǎn)：特點(diǎn)：失去毒性而仍保留其免疫原性。亞單位疫苗、合成肽疫苗、基因工程疫苗。食用轉(zhuǎn)基因植物以預(yù)防接種已初步成功。含義：含義：細(xì)菌外毒素經(jīng)0.30.4%甲醛處理。特點(diǎn)：特點(diǎn)：失去毒性而仍保留其免疫原性。主動(dòng)免疫治療主動(dòng)免疫治療被動(dòng)免疫治療被動(dòng)免疫治療刺激或增強(qiáng)機(jī)體免疫系統(tǒng)，使