酵母核糖核酸的分離及組分鑒定改1ppt課件

1、酵母核糖核酸的分別及組分鑒定酵母核糖核酸的分別及組分鑒定目的與要求目的與要求1. 了解稀堿法提取了解稀堿法提取RNA的原理、方法的原理、方法2. 掌握核酸中三大組分的鑒定方法掌握核酸中三大組分的鑒定方法原原 理理v核糖核酸RNA：從細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中分別出來的化學(xué)物質(zhì)。v 在蛋白質(zhì)合成和其他生化反響中起著重要作用，RNA的構(gòu)造和DNA的構(gòu)造類似，都是由核苷酸按照一定順序陳列成的長鏈。v RNA可以分為信使RNA、轉(zhuǎn)運(yùn)RNA、核糖體RNA以及其他類型的RNA。磷酸磷酸堿基堿基戊糖戊糖酵母菌酵母菌酵母中主要成分是酵母中主要成分是RNARNA2.672.6710.0%)10.0%)，DNADNA很少很

2、少 (0.03(0.030.516%)0.516%)。總總RNARNA的提取的提取: : 采用稀堿裂解法，乙醇沉淀采用稀堿裂解法，乙醇沉淀RNA, RNA, 洗滌除洗滌除雜質(zhì)；雜質(zhì)；RNARNA組分鑒定組分鑒定: :硫酸可使硫酸可使RNARNA水解，再分別鑒定水解，再分別鑒定1. 1. 核糖的鑒定核糖的鑒定苔黑酚苔黑酚(3,5(3,5二羥基甲苯二羥基甲苯) )法法CHOCHCHCHCH2OHOHOHOHOCHOOHOHCH3COCH3OCH3OH-H2O濃酸核糖3，5-二羥甲苯糠醛綠色化合物墨綠色墨綠色 2. 堿基的鑒定堿基的鑒定嘌呤堿嘌呤堿嘌呤堿嘌呤堿+過量濃氨水過量濃氨水+AgNO3 絮狀

3、嘌呤銀絮狀嘌呤銀化合物化合物 3. 磷酸的測定磷酸的測定定磷法定磷法(NH4)2MoO4+H2SO4 H2MoO4+(NH4)2SO4 H3PO4+12H2MoO4 H3P(Mo3O10)4+12H2O+12H2O H3P(Mo3O10)4 Mo2O3MoO3(鉬藍(lán)鉬藍(lán)試劑和器材試劑和器材v試劑：試劑：v 0.04M NaOH 0.04M NaOH；酸性乙醇；酸性乙醇溶液溶液, 95%, 95%乙醇乙醇v1.5M1.5M硫酸；硫酸；v濃氨水，濃氨水，0.1M0.1M硝酸銀；硝酸銀；v三氯化鐵濃鹽溶液三氯化鐵濃鹽溶液 , ,苔苔黑酚乙醇；黑酚乙醇；v定磷試劑定磷試劑v v v器材器材v 研缽，天

4、平；研缽，天平；v 沸水浴，低速臺沸水浴，低速臺式離心機(jī)。式離心機(jī)。 n 資料資料n 干酵母干酵母 一一.提取步驟改動(dòng)：提取步驟改動(dòng)：5g酵母中參與酵母中參與30 ml 0.04M NaOH，在研缽中研，在研缽中研磨均勻，轉(zhuǎn)入大試管，沸水浴磨均勻，轉(zhuǎn)入大試管，沸水浴20 min，3000轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)離心離心10min，取上清，棄沉淀。，取上清，棄沉淀。上清液漸漸傾入上清液漸漸傾入10 ml 酸性乙醇中，邊加邊攪，沉酸性乙醇中，邊加邊攪，沉淀淀RNA靜置靜置5min， 3000轉(zhuǎn)離心轉(zhuǎn)離心10min，棄上，棄上清，取沉淀。清，取沉淀。3.3.將沉淀用將沉淀用95%95%乙醇洗兩次，約乙醇洗兩次，約6 6

5、毫升毫升/ /管，用于除管，用于除去外表雜質(zhì)。第一次將沉淀搗散后再離心去外表雜質(zhì)。第一次將沉淀搗散后再離心5min5min；第二次將沉淀搗散過濾，旨在將沉淀謄出來，放第二次將沉淀搗散過濾，旨在將沉淀謄出來，放在濾紙上涼干，稱量。差減法稱量，濾紙應(yīng)提在濾紙上涼干，稱量。差減法稱量，濾紙應(yīng)提早稱好早稱好 4.4.將一切提取物轉(zhuǎn)移到小三角瓶中，加硫酸進(jìn)展水將一切提取物轉(zhuǎn)移到小三角瓶中，加硫酸進(jìn)展水解，再分別鑒定組份。解，再分別鑒定組份。二二. . 鑒定鑒定 1.1.鑒定磷組分可適當(dāng)添加，效果更好。鑒定磷組分可適當(dāng)添加，效果更好。2.2.氨水過量太多也會使沉淀消逝；先加硝酸氨水過量太多也會使沉淀消逝；先加硝酸銀后加氨水效果明顯。銀后加氨水效果明顯。苔黑酚顯色的特異性較差，凡戊糖都有此反苔黑酚顯色的特異性較差，凡戊糖都有此反響。響。準(zhǔn)微量準(zhǔn)微量DNADNA無影響，較多無影響，較多DNADNA存在，亦有干擾。存在，亦有干擾。 離心本卷須知：離心本卷須知：1.樣品倒入玻璃離心管不能太滿；2.離心前玻璃離心管套上塑料管套放在天平上平衡好；3.離心機(jī)中對稱放置；4.接通電源前