第8章 分光光度法

1、第八章第八章 吸光光度法吸光光度法第一節(jié)第一節(jié) 概概 述述一、一、吸光光度法的基本屬性吸光光度法的基本屬性 是基于物質(zhì)對(duì)光的是基于物質(zhì)對(duì)光的選擇性選擇性吸收，通過(guò)吸收，通過(guò)測(cè)量物質(zhì)對(duì)光的吸收情況來(lái)進(jìn)行物質(zhì)定性、測(cè)量物質(zhì)對(duì)光的吸收情況來(lái)進(jìn)行物質(zhì)定性、定量分析的方法。定量分析的方法。（比色法、紫外及（比色法、紫外及可見(jiàn)吸光光度法可見(jiàn)吸光光度法、紅外光譜法等）、紅外光譜法等）二、分光光度法的二、分光光度法的特點(diǎn)特點(diǎn) 1. 靈敏度高靈敏度高 測(cè)定濃度可達(dá)測(cè)定濃度可達(dá)10-510-6molL-1。 2. 準(zhǔn)確度高準(zhǔn)確度高 相對(duì)誤差相對(duì)誤差2%5% 用精密度高的儀器，可達(dá)用精密度高的儀器，可達(dá)1%2% 3

2、.操作簡(jiǎn)便、測(cè)定快速操作簡(jiǎn)便、測(cè)定快速 4. 應(yīng)用廣泛應(yīng)用廣泛 第二節(jié)第二節(jié) 分光光度法的基本原理分光光度法的基本原理 射射線線x射射線線紫紫外外光光紅紅外外光光微微波波無(wú)無(wú)線線電電波波10-2 nm 10 nm 102 nm 104 nm 0.1 cm 10cm 103 cm 105 cm可可 見(jiàn)見(jiàn) 光光= 400750nm一、電磁波譜與光的基本性質(zhì)一、電磁波譜與光的基本性質(zhì)1.電磁波譜電磁波譜2.光的基本性質(zhì)光的基本性質(zhì)單色光單色光: 單一波長(zhǎng)的光單一波長(zhǎng)的光復(fù)合光復(fù)合光: 非單一波長(zhǎng)的光非單一波長(zhǎng)的光 ， 由不同由不同波長(zhǎng)的光組合而成的光。波長(zhǎng)的光組合而成的光。 二、物質(zhì)的顏色與對(duì)光選擇

3、性吸收二、物質(zhì)的顏色與對(duì)光選擇性吸收1.單色光與復(fù)合光單色光與復(fù)合光若兩種不同若兩種不同波長(zhǎng)的波長(zhǎng)的單色光按一定的強(qiáng)度比例單色光按一定的強(qiáng)度比例混合得到白光，那么就稱這兩種單色光為互混合得到白光，那么就稱這兩種單色光為互補(bǔ)色光，這種現(xiàn)象稱為光的互補(bǔ)。補(bǔ)色光，這種現(xiàn)象稱為光的互補(bǔ)。圖中直線兩端的兩種光為互補(bǔ)光圖中直線兩端的兩種光為互補(bǔ)光(隔三互補(bǔ)隔三互補(bǔ))藍(lán)黃紫紅綠綠藍(lán)橙紅藍(lán)綠白光白光2.光的互補(bǔ)作用與互補(bǔ)色光光的互補(bǔ)作用與互補(bǔ)色光:3.溶液對(duì)光的選擇吸收和吸收曲線溶液對(duì)光的選擇吸收和吸收曲線完全吸收完全吸收完全透過(guò)完全透過(guò)吸收黃色光吸收黃色光光譜示意光譜示意表觀現(xiàn)象示意表觀現(xiàn)象示意復(fù)合光（1）

4、溶液的顏色與光的關(guān)系）溶液的顏色與光的關(guān)系藍(lán)藍(lán)黃黃紫紅紫紅綠綠綠藍(lán)綠藍(lán)橙橙紅紅藍(lán)綠藍(lán)綠白光白光完全吸收完全吸收完全透過(guò)完全透過(guò)吸收黃色光吸收黃色光光譜示意光譜示意表觀現(xiàn)象示意表觀現(xiàn)象示意復(fù)合光（1）溶液的顏色與光的關(guān)系）溶液的顏色與光的關(guān)系溶液的顏色與被溶液的顏色與被吸收光的顏色互補(bǔ)吸收光的顏色互補(bǔ)溶液中吸光物質(zhì)的質(zhì)點(diǎn)（離子或分子）對(duì)溶液中吸光物質(zhì)的質(zhì)點(diǎn)（離子或分子）對(duì)光的吸收具有選擇性光的吸收具有選擇性溶液的顏色是因?yàn)閷?duì)光的選擇性吸收溶液的顏色是因?yàn)閷?duì)光的選擇性吸收 （2） 溶液顏色深淺的原因溶液顏色深淺的原因 濃度越大或液層越厚濃度越大或液層越厚, , 吸光質(zhì)點(diǎn)越多吸光質(zhì)點(diǎn)越多, , 吸收

5、程度越大吸收程度越大, , 透過(guò)的互補(bǔ)光的程度越大透過(guò)的互補(bǔ)光的程度越大, , 因而顏色越深因而顏色越深 ?（3） 吸收曲線吸收曲線 固定濃度和液層厚度，測(cè)量某物質(zhì)對(duì)不同波長(zhǎng)固定濃度和液層厚度，測(cè)量某物質(zhì)對(duì)不同波長(zhǎng)單色光的吸收程度，單色光的吸收程度，以波長(zhǎng)（以波長(zhǎng)（ ）為橫坐標(biāo)，為橫坐標(biāo)，吸光度（吸光度（A A）為縱坐標(biāo)）為縱坐標(biāo)，繪制吸光度隨波長(zhǎng)的，繪制吸光度隨波長(zhǎng)的變化可得一曲線，此曲線即為變化可得一曲線，此曲線即為吸收曲線吸收曲線。 如如KMnO4吸收曲線吸收曲線: 制作制作四種不同濃度的四種不同濃度的KMnO4溶液的光吸收曲線溶液的光吸收曲線由吸收曲線可知由吸收曲線可知:四種不同濃度的

6、四種不同濃度的KMnO4溶液的光吸收曲線溶液的光吸收曲線由吸收曲線可知由吸收曲線可知:a. KMnO4對(duì)對(duì)525nm附近的綠光吸收最多附近的綠光吸收最多, 即最大吸收波長(zhǎng)即最大吸收波長(zhǎng)最大最大(max )為為525nm (溶液的顏色主要是由這一數(shù)值確定的溶液的顏色主要是由這一數(shù)值確定的)四種不同濃度的四種不同濃度的KMnO4溶液的光吸收曲線溶液的光吸收曲線由吸收曲線可知由吸收曲線可知:a. KMnO4對(duì)對(duì)525nm附近的綠光吸收最多附近的綠光吸收最多, 即最大吸收波長(zhǎng)即最大吸收波長(zhǎng)最大最大(max )為為525nm (溶液的顏色主要是由這一數(shù)值確定的溶液的顏色主要是由這一數(shù)值確定的)b. 濃度

7、不同濃度不同, 曲線形狀相似曲線形狀相似, 濃度越大濃度越大, 曲線上移曲線上移(即吸光度越大即吸光度越大), 但但max 不變；不變； 四種不同濃度的四種不同濃度的KMnO4溶液的光吸收曲線溶液的光吸收曲線由吸收曲線可知由吸收曲線可知:a. KMnO4對(duì)對(duì)525nm附近的綠光吸收最多附近的綠光吸收最多, 即最大吸收波長(zhǎng)即最大吸收波長(zhǎng)最大最大(max )為為525nm (溶液的顏色主要是由這一數(shù)值確定的溶液的顏色主要是由這一數(shù)值確定的)b. 濃度不同濃度不同, 曲線形狀相似曲線形狀相似, 濃度越大濃度越大, 曲線上移曲線上移(即吸光度越大即吸光度越大), 但但max 不變；不變；c. 在在ma

8、x 處吸光度隨濃度變化大處吸光度隨濃度變化大,靈敏度高靈敏度高 吸收曲線的用途吸收曲線的用途 a. 選擇波長(zhǎng)選擇波長(zhǎng) 定量測(cè)定時(shí)定量測(cè)定時(shí), 一般選最大吸收波長(zhǎng)一般選最大吸收波長(zhǎng), 有干擾時(shí)有干擾時(shí), 要選避開干擾的波長(zhǎng)要選避開干擾的波長(zhǎng) 如測(cè)定如測(cè)定KMnO4 , 無(wú)干擾時(shí)無(wú)干擾時(shí), 選選525nm, 與與K2Cr2O7共存時(shí)共存時(shí), 根據(jù)兩吸收曲線：根據(jù)兩吸收曲線：可選可選545nm測(cè)定測(cè)定KMnO4物質(zhì)對(duì)光的選擇吸收物質(zhì)對(duì)光的選擇吸收, ,吸收光譜形狀特征與物質(zhì)本吸收光譜形狀特征與物質(zhì)本質(zhì)相關(guān)質(zhì)相關(guān), ,根據(jù)曲線形狀和最大吸收波長(zhǎng)初步定性。根據(jù)曲線形狀和最大吸收波長(zhǎng)初步定性。b.定性分析

9、與定量分析的基礎(chǔ)定性分析與定量分析的基礎(chǔ)定性分析基礎(chǔ)定性分析基礎(chǔ)定量分析基礎(chǔ)定量分析基礎(chǔ)在一定的實(shí)驗(yàn)條在一定的實(shí)驗(yàn)條件下，物質(zhì)對(duì)光件下，物質(zhì)對(duì)光的吸收強(qiáng)度與物的吸收強(qiáng)度與物質(zhì)的濃度成正比質(zhì)的濃度成正比A c增增大大第三節(jié)第三節(jié) 光吸收定律光吸收定律入射光入射光 I0透射光透射光 Itbc透光率透光率 (透射比透射比)T0IITtT 取值為取值為0.0 % 100.0 %全部吸收全部吸收 T = 0.0 % 全部透過(guò)全部透過(guò) T = 100.0 %一、吸光度一、吸光度A和透光率和透光率T吸光度與透光率：T ： 透光率透光率0IITtTTA1lglgA： 吸光度吸光度 Ab -朗伯定律朗伯定律b.

10、 Ac -比耳定律比耳定律KcbTA lg朗伯朗伯- -比耳定律：比耳定律：公式意義：一束平行公式意義：一束平行單色光單色光通過(guò)通過(guò)均勻均勻的的非非色散色散的某的某吸光物質(zhì)吸光物質(zhì)溶液時(shí)，溶液的吸光溶液時(shí)，溶液的吸光度與吸光物質(zhì)濃度及液層厚度成正比。度與吸光物質(zhì)濃度及液層厚度成正比。KcbTA lg這是吸光光度法進(jìn)行定量分析的依據(jù)。這是吸光光度法進(jìn)行定量分析的依據(jù)。二、光吸收定律：朗伯二、光吸收定律：朗伯- -比耳定律比耳定律三、三、光吸收定律計(jì)算公式中的光吸收定律計(jì)算公式中的比例常數(shù)比例常數(shù)KKcbA b ：吸光液層的厚度，光程，吸光液層的厚度，光程， cmc：吸光物質(zhì)的濃度，吸光物質(zhì)的濃度

11、， g L-1-1 , mol L-1-1 K：比例常數(shù)比例常數(shù)cbA1.比例常數(shù)比例常數(shù)cbA ：摩爾吸光系數(shù)摩爾吸光系數(shù) 單位單位: Lmol-1cm-1物理意義物理意義: 數(shù)值上等于濃度為數(shù)值上等于濃度為1 1molLmolL-1-1, , 液層厚度為液層厚度為1cm1cm的有色溶液在一定條件下對(duì)的有色溶液在一定條件下對(duì)波長(zhǎng)為波長(zhǎng)為的的平行單色光平行單色光的吸光度。與的吸光度。與吸光物質(zhì)的性吸光物質(zhì)的性質(zhì)、入射光波長(zhǎng)、溫度、溶劑質(zhì)、入射光波長(zhǎng)、溫度、溶劑有關(guān)。有關(guān)。 是量度吸光物質(zhì)吸光能力是量度吸光物質(zhì)吸光能力 (或測(cè)定方法靈敏度或測(cè)定方法靈敏度)的特征常數(shù)。的特征常數(shù)。 測(cè)定時(shí)常選用測(cè)

12、定時(shí)常選用值大的有色化合物值大的有色化合物, 以獲得高靈敏度。以獲得高靈敏度。 一般一般104 靈敏靈敏 103不靈敏不靈敏 105 通常所說(shuō)的通常所說(shuō)的(或從手冊(cè)中查得的或從手冊(cè)中查得的) 是最大吸收波長(zhǎng)時(shí)的數(shù)值是最大吸收波長(zhǎng)時(shí)的數(shù)值, 即即max KcbA b ：吸光液層的厚度，光程，吸光液層的厚度，光程， cmc：吸光物質(zhì)的濃度，吸光物質(zhì)的濃度， g L-1-1 , mol L-1-1 K：比例常數(shù)比例常數(shù)cbAacbA 1.比例常數(shù)比例常數(shù)吸光系數(shù)吸光系數(shù)a 與摩爾吸光系數(shù)與摩爾吸光系數(shù) 的關(guān)系為的關(guān)系為=Ma摩爾質(zhì)量摩爾質(zhì)量2.a 或或的測(cè)定的測(cè)定 取適當(dāng)濃度的被測(cè)物溶液取適當(dāng)濃度的

13、被測(cè)物溶液, 用分光光度用分光光度計(jì)測(cè)得計(jì)測(cè)得A值值, 由由A=abc 或或 A=bc算得。算得。cbAacbA ? ?當(dāng)當(dāng)I0依次通過(guò)依次通過(guò)n個(gè)液層厚度不等吸光物質(zhì)個(gè)液層厚度不等吸光物質(zhì)不同的溶液時(shí)不同的溶液時(shí):A = A1 + A2 + + An = 1b1c1 + 2b2c2 + + nbncn 即即: 總吸光度等于各吸光物質(zhì)的吸光度之和總吸光度等于各吸光物質(zhì)的吸光度之和四、吸光度及其特性四、吸光度及其特性加和性加和性推論推論:3. 朗伯朗伯- -比耳定律的適用范圍比耳定律的適用范圍(1)不僅適用于可見(jiàn)光不僅適用于可見(jiàn)光, 也適用于紫外光和紅外光也適用于紫外光和紅外光;但只適用于單色光

14、但只適用于單色光,且入射光與物質(zhì)的作用且入射光與物質(zhì)的作用僅限于吸收過(guò)程。吸收過(guò)程中各物質(zhì)僅限于吸收過(guò)程。吸收過(guò)程中各物質(zhì)無(wú)相互作用，各物質(zhì)的吸光度具有加和性。無(wú)相互作用，各物質(zhì)的吸光度具有加和性。（2）不僅適用于溶液）不僅適用于溶液, 也適用于固體和氣體也適用于固體和氣體; 但吸光物質(zhì)應(yīng)是均勻的、非散射的。但吸光物質(zhì)應(yīng)是均勻的、非散射的。(3)測(cè)定時(shí)測(cè)定時(shí), 被測(cè)物濃度應(yīng)控制在直線范圍內(nèi)。被測(cè)物濃度應(yīng)控制在直線范圍內(nèi)。8.3 吸光光度法的測(cè)量誤差吸光光度法的測(cè)量誤差 1. 非單色光引起的偏離非單色光引起的偏離設(shè)有設(shè)有1 2兩種波長(zhǎng)的光兩種波長(zhǎng)的光, 分別透過(guò)溶液時(shí)分別透過(guò)溶液時(shí),bcIIbc

15、IIA11111-0t1t0110lg 或或?qū)?duì)bcIIbcIIA22222-0t2t02210lg 或或?qū)?duì)2121tt00,IIII 透透過(guò)過(guò)光光強(qiáng)強(qiáng)為為若若入入射射光光強(qiáng)強(qiáng)為為)1010()(lg)()(lg2211212121-0-000tt00bcbcIIIIIIIIA )1010()(lg)()(lg2211212121-0-000tt00bcbcIIIIIIIIA 當(dāng)當(dāng)1=2=時(shí)時(shí),bcAbc -101lg上上式式得得A與與c成直線關(guān)系成直線關(guān)系當(dāng)當(dāng)12時(shí)時(shí), Abc 形成曲線，即發(fā)生偏離形成曲線，即發(fā)生偏離偏離越嚴(yán)重。偏離越嚴(yán)重。越大越大, 減小偏離的方法減小偏離的方法:使用好

16、的單色器使用好的單色器 (提供更純的單色光提供更純的單色光, 使使 減小減小)選選 作入射光作入射光 max,max處處若若固固定定在在 ,max處處若選定在非若選定在非 大,較較小小即即較較小小 AA/nm2. 溶液本身引起的偏離溶液本身引起的偏離 溶質(zhì)解離、締合、互變異構(gòu)及化學(xué)變化溶質(zhì)解離、締合、互變異構(gòu)及化學(xué)變化AB A+ + B- -若將溶液稀釋一倍若將溶液稀釋一倍, ,則則cAB不只降至不只降至1/2HCrOHCrOOHOCr2222442272介質(zhì)不均介質(zhì)不均勻勻溶液的濃度溶液的濃度c =吸光光度法適用于稀溶液。吸光光度法適用于稀溶液。稀溶液時(shí)稀溶液時(shí): : 吸光質(zhì)點(diǎn)是獨(dú)立的吸光中

17、心吸光質(zhì)點(diǎn)是獨(dú)立的吸光中心, ,彼此間影響很小。彼此間影響很小。 濃溶液時(shí)：濃溶液時(shí)：相互影響較大相互影響較大, ,會(huì)改變其吸光性能會(huì)改變其吸光性能, ,引起偏離。引起偏離。 不同被測(cè)物符合朗伯不同被測(cè)物符合朗伯比耳定律的濃度范圍比耳定律的濃度范圍不同不同, , 測(cè)定時(shí)應(yīng)將測(cè)定時(shí)應(yīng)將標(biāo)準(zhǔn)液和試液的濃度控制標(biāo)準(zhǔn)液和試液的濃度控制在符合朗伯在符合朗伯-比耳定律比耳定律的濃度范圍內(nèi)。的濃度范圍內(nèi)。?不同被測(cè)物符合朗伯不同被測(cè)物符合朗伯比耳定律比耳定律的濃度范圍不同的濃度范圍不同, , 測(cè)定時(shí)應(yīng)將標(biāo)準(zhǔn)液測(cè)定時(shí)應(yīng)將標(biāo)準(zhǔn)液和試液的濃度控制和試液的濃度控制在符合朗伯在符合朗伯-比耳定律比耳定律的濃度范圍內(nèi)。

18、的濃度范圍內(nèi)。朗伯朗伯比爾定律的應(yīng)用條件：比爾定律的應(yīng)用條件：21、儀器本身引入的誤差儀器本身引入的誤差(1)儀器本身的性能儀器本身的性能(2)雜散光的影響雜散光的影響吸光度測(cè)量誤差引起的濃度測(cè)量誤差吸光度測(cè)量誤差引起的濃度測(cè)量誤差透光率讀數(shù)誤差為透光率讀數(shù)誤差為T= 0.0010.002TTTAAccTTATAcbAdcbdAbcAlg434. 0434. 0lgTTTAAcclgd434. 0dd 或或:)(dd作作圖圖得得或或?qū)?duì)對(duì)對(duì)并并以以代代入入上上式式算算得得各各此此時(shí)時(shí)將將不不同同ATccccT光度計(jì)讀數(shù)的光度計(jì)讀數(shù)的絕對(duì)誤差絕對(duì)誤差,對(duì)給對(duì)給定的光度計(jì)定的光度計(jì),此此為固定值為

19、固定值, 如如:0.01( 1%)Er由圖可見(jiàn)由圖可見(jiàn), T很小或很大時(shí)很小或很大時(shí), 濃度測(cè)量誤差都很大濃度測(cè)量誤差都很大,因此,在實(shí)際測(cè)定時(shí)，在實(shí)際測(cè)定時(shí)，只有使待測(cè)溶液的只有使待測(cè)溶液的透光率透光率T在在1565 ， 或使或使吸光度吸光度A在在0.20.8之間之間才能保證測(cè)量的相對(duì)誤差較小才能保證測(cè)量的相對(duì)誤差較小(4%)當(dāng)吸光度當(dāng)吸光度A=0.434(或透光率或透光率T=36.8% )時(shí)時(shí),測(cè)量的相對(duì)誤差最小。測(cè)量的相對(duì)誤差最小。例例: 某有色溶液盛于某有色溶液盛于1cm比色皿中比色皿中, 在在 =514nm處測(cè)得處測(cè)得T1=60%, 求求: (1)若若c1=2.010-5mol/L,

20、 =?(2)當(dāng)溶液當(dāng)溶液濃度增大一倍時(shí)濃度增大一倍時(shí), A2=? T2=?解解: (1) A1= -lgT1 = -lg0.60 = 0.22 由由A1= bc1得得 = A1/bc1=1.1104 (Lmol-1cm-1)(2) 由由A1= -lgT1= bc1 ； A= -lgT2= bc得得21212121ccbcbcAA A2=2A1=0.44 lgT2=-0.44 T2=36% 一、一、反應(yīng)條件的選擇反應(yīng)條件的選擇-顯色反應(yīng)顯色反應(yīng)M(待測(cè)組分待測(cè)組分) + R(顯色劑顯色劑) = MR (有色化合物有色化合物) 對(duì)顯色反應(yīng)的要求對(duì)顯色反應(yīng)的要求：(1)選擇性好選擇性好, 干擾少干擾

21、少(2)靈敏度足夠高靈敏度足夠高(3)有色化合物組成恒定，化學(xué)性質(zhì)足夠穩(wěn)定有色化合物組成恒定，化學(xué)性質(zhì)足夠穩(wěn)定(4)有色化合物與顯色劑之間的顏色差別要大有色化合物與顯色劑之間的顏色差別要大(5)顯色過(guò)程要易于控制。顯色過(guò)程要易于控制。 顯色劑的用量顯色劑的用量M + nR = MRn實(shí)際工作中，作實(shí)際工作中，作 A cR 曲線，曲線，確定適宜確定適宜 cR 范圍。范圍。 顯色條件的選擇：顯色條件的選擇：ACRa b溶液的酸度OH-M + nR = MRnH+例，磺基水楊酸例，磺基水楊酸 Fe 3+pH = 2 3FeR紫紅色pH = 4 8FeR2橙色pH = 8 11FeR3黃色有色化合物組

22、成有色化合物組成酸度的影響酸度的影響顯色劑的平衡濃顯色劑的平衡濃度和顏色度和顏色 金屬離子的存在金屬離子的存在狀態(tài)狀態(tài)RH = R- + H+ 1 2實(shí)際工作中，作實(shí)際工作中，作 A pH 曲線，確定適宜曲線，確定適宜 pH 范圍。范圍。ApH顯色溫度顯色溫度實(shí)際工作中，作實(shí)際工作中，作 A T 曲線，尋找適宜反應(yīng)溫度曲線，尋找適宜反應(yīng)溫度ATATAT 顯色反應(yīng)時(shí)間顯色反應(yīng)時(shí)間實(shí)際工作中，作實(shí)際工作中，作 A t 曲線，尋找適宜反應(yīng)時(shí)間。曲線，尋找適宜反應(yīng)時(shí)間。 共存干擾離子影響共存干擾離子影響: :二、測(cè)量條件的選擇二、測(cè)量條件的選擇 1.1.入射光波長(zhǎng)的選擇入射光波長(zhǎng)的選擇max通常選通常

23、選為什么為什么? ? 處有干擾時(shí)處有干擾時(shí), ,選既避開干擾選既避開干擾, ,又使吸收盡可能大的又使吸收盡可能大的 。max(1) 最大吸收原則最大吸收原則 (2) 吸收最大吸收最大, 干擾最小干擾最小A 有干擾有干擾A 2. 控制在控制在 A= 0.20.8 范圍范圍 控制方法控制方法: 改變樣品稱取量或溶液的稀釋度改變樣品稱取量或溶液的稀釋度; 改變比色皿厚度。改變比色皿厚度。3. 選擇合適的參比溶液選擇合適的參比溶液 參比溶液是用來(lái)調(diào)節(jié)儀器工作零點(diǎn)的溶液參比溶液是用來(lái)調(diào)節(jié)儀器工作零點(diǎn)的溶液M + R MR顯色劑顯色劑被測(cè)離子被測(cè)離子,存在于試存在于試液中。液中。有色化合物有色化合物為控制

24、反應(yīng)酸度為控制反應(yīng)酸度, 常加緩沖溶液常加緩沖溶液為掩蔽干擾離子為掩蔽干擾離子, 常加入掩蔽劑常加入掩蔽劑通稱為通稱為試劑試劑,以區(qū)別以區(qū)別于顯色于顯色劑劑A (測(cè)測(cè)) = A (待測(cè)物質(zhì)待測(cè)物質(zhì)) + A (干擾干擾)+ A (比色皿比色皿)若使若使A (參比參比) = A (干擾干擾)+ A (比色皿比色皿)= 0測(cè)得的測(cè)得的吸光度吸光度僅為僅為MR產(chǎn)生的產(chǎn)生的吸光度吸光度選擇參比溶液的依據(jù)如下選擇參比溶液的依據(jù)如下:若試液、試劑、顯色劑均無(wú)色若試液、試劑、顯色劑均無(wú)色, ( (即不吸光即不吸光, , 只被測(cè)物生成的有色化合物只被測(cè)物生成的有色化合物MRMRn n吸光吸光) ) 可選蒸餾水

25、作參比溶液?？蛇x蒸餾水作參比溶液。此稱為此稱為“溶劑空白溶劑空白”若試液無(wú)色，試劑和顯色劑有色若試液無(wú)色，試劑和顯色劑有色, 即除即除MRMRn n吸光外吸光外, , 試劑試劑( (如緩沖溶液、掩蔽劑等如緩沖溶液、掩蔽劑等) )和和R R也吸光也吸光 可選不加試液可選不加試液, 但加同量試劑和顯色劑的溶液作參比但加同量試劑和顯色劑的溶液作參比 此稱為此稱為“試劑空白試劑空白” 若試液有色，試劑和顯色劑無(wú)色若試液有色，試劑和顯色劑無(wú)色, 可選不加顯色劑可選不加顯色劑( (其他試劑一般應(yīng)同量加入其他試劑一般應(yīng)同量加入) )的試的試液液 作參比作參比稱為稱為“樣品空白樣品空白”若顯色劑和試液均有吸收

26、，若顯色劑和試液均有吸收， 可取一份試液加入適當(dāng)?shù)难诒蝿扇∫环菰囈杭尤脒m當(dāng)?shù)难诒蝿?將待測(cè)組分掩蔽起來(lái)，將待測(cè)組分掩蔽起來(lái)， 使之不再與顯色劑反應(yīng)，使之不再與顯色劑反應(yīng)， 然后然后加加相同相同量量顯色劑和其它試劑，顯色劑和其它試劑， 所得的溶液作參比溶液。所得的溶液作參比溶液。 一、目視比色法與吸光光度法一、目視比色法與吸光光度法 二、二、 吸光光度法的定量測(cè)定方法吸光光度法的定量測(cè)定方法 1. 標(biāo)準(zhǔn)比較法標(biāo)準(zhǔn)比較法 xsxsccAA 根據(jù)根據(jù) As = bcs Ax = bcxssxxcAAc 將一標(biāo)準(zhǔn)溶液將一標(biāo)準(zhǔn)溶液(S)和試液和試液(X)在相同條在相同條件下顯色件下顯色, 測(cè)得各吸

27、光度測(cè)得各吸光度As 和和 Ax使用比較法注意使用比較法注意 ： a. 標(biāo)準(zhǔn)溶液與試液濃度接近標(biāo)準(zhǔn)溶液與試液濃度接近 b. 測(cè)定條件相同測(cè)定條件相同cx2. 標(biāo)準(zhǔn)曲線法標(biāo)準(zhǔn)曲線法 配一系列標(biāo)準(zhǔn)液配一系列標(biāo)準(zhǔn)液, 測(cè)得各測(cè)得各A值值, 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線:Ac.Ax.相同條件下配制試液相同條件下配制試液, 測(cè)得其測(cè)得其Ax , ,從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得c cx x , ,c cx x稀釋倍數(shù)稀釋倍數(shù)= =原未知液濃度原未知液濃度, ,或進(jìn)而算得質(zhì)量分?jǐn)?shù)或進(jìn)而算得質(zhì)量分?jǐn)?shù)3. 標(biāo)準(zhǔn)加入法標(biāo)準(zhǔn)加入法 (1) 兩點(diǎn)比較法兩點(diǎn)比較法 取一份試液取一份試液cx，測(cè)得其吸光度為，測(cè)得其吸光度為A

28、x； 另取一等量試液，另取一等量試液， 加入一定量的含待測(cè)組分的標(biāo)準(zhǔn)溶液，加入一定量的含待測(cè)組分的標(biāo)準(zhǔn)溶液， 使被測(cè)組分的濃度增加使被測(cè)組分的濃度增加ck， 在相同的條件下測(cè)定其吸光度為在相同的條件下測(cè)定其吸光度為Ax+k 按照朗伯比耳定律有：按照朗伯比耳定律有： Ax= bcx Ax+k= b(cx+ck)xkxkxxkx1)(ccbcccbAA xkxkx1ccAA xkxxkxkxkx1AAAcAAcc xkxxkxAAAcc 與標(biāo)準(zhǔn)加入的被測(cè)組與標(biāo)準(zhǔn)加入的被測(cè)組分的濃度分的濃度(2) 標(biāo)準(zhǔn)加入工作曲線法標(biāo)準(zhǔn)加入工作曲線法取同量取同量試液若干份試液若干份, , 分別加入不同量的待測(cè)組分標(biāo)準(zhǔn)液分別加入不同量的待測(cè)組分標(biāo)準(zhǔn)液, ,使使試液中試液中待測(cè)組分的濃度依次增加待測(cè)組分的濃度依次增加了了: : 0，ck ，2ck ，3ck ，4ck,在相同的條件下測(cè)得各溶液的吸光度。在相同的條件下測(cè)得各溶液的吸光度?？芍嚎芍篈x+k = b(cx+ck) = bcx+ bck = Ax+ bck 所測(cè)得的溶液的吸光度所測(cè)得的溶液的吸光度成線性關(guān)系。成線性關(guān)系。Ax+k ck 以加標(biāo)濃度以加標(biāo)濃度ck為橫坐標(biāo)，為橫坐標(biāo)，加標(biāo)后溶液的吸光度加標(biāo)后溶液的吸光度Ax+k為縱坐標(biāo)作圖，為縱坐標(biāo)作圖，可得一條直線可得一條直線, ,該直線在縱坐標(biāo)該