生物必修三-動植物細(xì)胞工程

1、生物必修三生物必修三動動植植物細(xì)胞工程物細(xì)胞工程動物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段：動物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段：動物細(xì)胞培養(yǎng)、動物細(xì)胞培養(yǎng)、 動物細(xì)胞核移植、動物細(xì)胞核移植、動物細(xì)胞融合、動物細(xì)胞融合、 單克隆抗體單克隆抗體動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是其他動物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)。是其他動物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)。提問：提問：植物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段有哪些？植物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段有哪些？植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng), 植物體細(xì)胞雜交植物體細(xì)胞雜交植物細(xì)胞工程植物細(xì)胞工程 在在無菌和人工控制的條件下，將離體無菌和人工控制的條件下，將離體的植物器官、組織、細(xì)胞，培養(yǎng)在人工的植物器官、組織、細(xì)胞，培養(yǎng)在人

2、工配制的培養(yǎng)基上，給予適宜的培養(yǎng)條件，配制的培養(yǎng)基上，給予適宜的培養(yǎng)條件，誘導(dǎo)其產(chǎn)生愈傷組織、叢芽，最終形成誘導(dǎo)其產(chǎn)生愈傷組織、叢芽，最終形成完整的植株。完整的植株。細(xì)胞的全能性細(xì)胞的全能性1、概念、概念：生物體的細(xì)胞具有使后代細(xì)胞形成：生物體的細(xì)胞具有使后代細(xì)胞形成完整個體的潛能的特性，叫做細(xì)胞的完整個體的潛能的特性，叫做細(xì)胞的全能性。全能性。2、原因、原因：從理論上講，每個細(xì)胞都包含該物從理論上講，每個細(xì)胞都包含該物種的全部遺傳物質(zhì)（全部基因），所種的全部遺傳物質(zhì)（全部基因），所以每個活細(xì)胞都應(yīng)具有全能性以每個活細(xì)胞都應(yīng)具有全能性 。3、實現(xiàn)條件：、實現(xiàn)條件： 離離體、提供營養(yǎng)物質(zhì)、激素及

3、其他適宜條件。體、提供營養(yǎng)物質(zhì)、激素及其他適宜條件。 4 、全能性的比較、全能性的比較 受受精卵精卵 生殖細(xì)胞生殖細(xì)胞 體細(xì)胞體細(xì)胞 植植物細(xì)胞動物細(xì)胞物細(xì)胞動物細(xì)胞切取切取形成層形成層無菌無菌接種接種誘導(dǎo)愈傷組織誘導(dǎo)愈傷組織的形成的形成試管苗的形成試管苗的形成培養(yǎng)室培養(yǎng)室移栽移栽再分化再分化脫分化脫分化植植物組織培養(yǎng)技術(shù)物組織培養(yǎng)技術(shù)（1）外）外植體：用于離體培養(yǎng)的植物器官或組植體：用于離體培養(yǎng)的植物器官或組織片段織片段。（2）愈）愈傷組織：細(xì)胞排列疏松而無規(guī)則，是傷組織：細(xì)胞排列疏松而無規(guī)則，是一種高度液泡化的呈無定形狀態(tài)的薄壁細(xì)胞。一種高度液泡化的呈無定形狀態(tài)的薄壁細(xì)胞。（3）脫）脫分化

4、：分化：由高度分化的植物器官、組織由高度分化的植物器官、組織或細(xì)胞產(chǎn)生愈傷組織的過程?；蚣?xì)胞產(chǎn)生愈傷組織的過程。（4）再）再分化：脫分化產(chǎn)生的愈傷組織重新分分化：脫分化產(chǎn)生的愈傷組織重新分化成根或芽等器官的過程化成根或芽等器官的過程。影影響植物組織培養(yǎng)的因素：響植物組織培養(yǎng)的因素：PI33（1）植物材料的選擇：直接關(guān)系到實驗的成）植物材料的選擇：直接關(guān)系到實驗的成敗。敗。（2）營養(yǎng)因素營養(yǎng)因素：需要配制適宜的培養(yǎng)基，保：需要配制適宜的培養(yǎng)基，保證營養(yǎng)的供應(yīng)，常用證營養(yǎng)的供應(yīng)，常用MS培養(yǎng)基。培養(yǎng)基。（3）使用激素進行調(diào)節(jié)：使用激素進行調(diào)節(jié)：生長素和細(xì)胞分裂生長素和細(xì)胞分裂素是啟動細(xì)胞分裂、脫分

5、化和再分化的關(guān)鍵素是啟動細(xì)胞分裂、脫分化和再分化的關(guān)鍵性激素。要注意激素的濃度、使用的先后順性激素。要注意激素的濃度、使用的先后順序及用量的比例。序及用量的比例。（4）環(huán)境條件的控制：注意控制）環(huán)境條件的控制：注意控制pH、溫度、溫度、光照等光照等外界條件外界條件。 MS培養(yǎng)基培養(yǎng)基： （1）大量元素：）大量元素：C、H、O、N、P、S、K、Ca、Mg； （2）微量元素：）微量元素：Fe、Mn、B、Zn、Cu、Mo、Co、I； （3）有機物：甘氨酸、煙酸、肌醇、維生素及）有機物：甘氨酸、煙酸、肌醇、維生素及蔗糖等。蔗糖等。 微微量元素和大量元素提供植物細(xì)胞生活所必需量元素和大量元素提供植物細(xì)胞

6、生活所必需的無機鹽；的無機鹽； 蔗糖提供碳源，同時能夠維持細(xì)胞的滲透壓；蔗糖提供碳源，同時能夠維持細(xì)胞的滲透壓； 甘氨酸、維生素等物質(zhì)主要是為了滿足離體植甘氨酸、維生素等物質(zhì)主要是為了滿足離體植物細(xì)胞在正常代謝途徑受到一定影響后所產(chǎn)生物細(xì)胞在正常代謝途徑受到一定影響后所產(chǎn)生的特殊營養(yǎng)需求。的特殊營養(yǎng)需求。 植物激素調(diào)節(jié)植物激素調(diào)節(jié)： （1）在）在生長素存在的情況下，細(xì)胞分裂素的生長素存在的情況下，細(xì)胞分裂素的作用呈現(xiàn)加強的趨勢；作用呈現(xiàn)加強的趨勢； （2）使）使用順序影響實驗結(jié)果：用順序影響實驗結(jié)果： （3）激）激素用量的比例影響實驗結(jié)果：素用量的比例影響實驗結(jié)果： 生長素用量比細(xì)胞分裂素用量

7、，比值高時，有利于根的分生長素用量比細(xì)胞分裂素用量，比值高時，有利于根的分化、抑制芽的形成；比值低時，有利于芽的分化，抑制根化、抑制芽的形成；比值低時，有利于芽的分化，抑制根的形成；比值適中時，促進愈傷組織的生長。的形成；比值適中時，促進愈傷組織的生長。植植物組織培養(yǎng)的實驗操作物組織培養(yǎng)的實驗操作（1）制備制備MS固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基：（2）外植體消毒外植體消毒：（3）接種：）接種：將外植體插入錐形瓶的培養(yǎng)基中，注意消毒和用封口將外植體插入錐形瓶的培養(yǎng)基中，注意消毒和用封口膜扎好。膜扎好。（4）培養(yǎng)：）培養(yǎng)：將錐形瓶最好放在無菌箱中培養(yǎng)，注意定期消毒，控將錐形瓶最好放在無菌箱中培養(yǎng)，注意定期消

8、毒，控制適宜溫度，適時光照。制適宜溫度，適時光照。（5）移栽：）移栽：將試管苗移植到消過毒的蛭石或珍珠巖等環(huán)境中生活，將試管苗移植到消過毒的蛭石或珍珠巖等環(huán)境中生活，長壯后再移栽到土壤中。長壯后再移栽到土壤中。（6）栽培：）栽培：對移栽幼苗適時澆水、施肥，并觀察生長情況。對移栽幼苗適時澆水、施肥，并觀察生長情況。（7）結(jié)果分析與評價：結(jié)果分析與評價： 制備制備MS固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基： （1）配制各種母液：大量元素濃縮）配制各種母液：大量元素濃縮10倍，微倍，微量元素濃縮量元素濃縮100倍；激素類等按倍；激素類等按1mg/Ml質(zhì)量濃質(zhì)量濃度單獨配制成母液。度單獨配制成母液。 （2）配制培養(yǎng)基：

9、按比例配制各種所需成分，）配制培養(yǎng)基：按比例配制各種所需成分，依需要決定是否加入植物激素；依需要決定是否加入植物激素； （3）滅菌：將培養(yǎng)基連同其他器械一起進行）滅菌：將培養(yǎng)基連同其他器械一起進行高壓蒸汽滅菌。高壓蒸汽滅菌。 外植體消毒外植體消毒：依下列順序進行消毒：依下列順序進行消毒： 流水沖洗流水沖洗洗衣粉洗洗衣粉洗流水沖洗流水沖洗無菌吸水紙無菌吸水紙吸干吸干70%酒精酒精無菌水沖洗無菌水沖洗無菌吸水紙吸無菌吸水紙吸干干0.1%氯化汞溶液氯化汞溶液無菌水沖洗無菌水沖洗1. 1.植物細(xì)胞表現(xiàn)出全能性的條件有哪些？植物細(xì)胞表現(xiàn)出全能性的條件有哪些？2.2.在植物組培過程中，為什么要進行一系列的

10、消毒，在植物組培過程中，為什么要進行一系列的消毒，滅菌，并且要求無菌操作？滅菌，并且要求無菌操作？3 3、為什么切取胡蘿卜根的形成層，其他部分也能、為什么切取胡蘿卜根的形成層，其他部分也能培養(yǎng)成小植株嗎？培養(yǎng)成小植株嗎？細(xì)胞離體、一定的營養(yǎng)物質(zhì)、細(xì)胞離體、一定的營養(yǎng)物質(zhì)、激素和其他外界條件激素和其他外界條件避免雜菌在上面迅速生長消耗營養(yǎng)，避免雜菌在上面迅速生長消耗營養(yǎng)，且有些雜菌會危害培養(yǎng)物的生長。且有些雜菌會危害培養(yǎng)物的生長。 胡胡蘿卜根形成層容易誘導(dǎo)成愈傷組蘿卜根形成層容易誘導(dǎo)成愈傷組織，其他部分如葉、花也能培養(yǎng)成小織，其他部分如葉、花也能培養(yǎng)成小植株，只是稍微困難些。植株，只是稍微困難些

11、。5、為什么誘導(dǎo)愈傷組織的過程中應(yīng)避光培養(yǎng)？、為什么誘導(dǎo)愈傷組織的過程中應(yīng)避光培養(yǎng)？在有光時，往往容易形成維管在有光時，往往容易形成維管組織，而不易形成愈傷組織。組織，而不易形成愈傷組織。植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基 定義：含有一定營養(yǎng)成分，供組織培養(yǎng)植物生長的基定義：含有一定營養(yǎng)成分，供組織培養(yǎng)植物生長的基質(zhì)質(zhì) 無機營養(yǎng)成分：無機營養(yǎng)成分：C C，H H，O O大量元素及部分微量元素大量元素及部分微量元素 有機營養(yǎng)成分有機營養(yǎng)成分 含含N N物質(zhì)：包括維生素和氨基酸物質(zhì)：包括維生素和氨基酸 碳源：碳源：2%2%5%5%的蔗糖的蔗糖 有機添加物：如瓊脂起支持作用有機添加物：如瓊脂起

12、支持作用 激素：生長素，細(xì)胞分裂素和赤霉素激素：生長素，細(xì)胞分裂素和赤霉素 PHPH值：值：5.05.06.06.0雜雜種種植植株株融合的融合的原生質(zhì)原生質(zhì)體體ABAB再再生生出出細(xì)細(xì)胞胞壁壁脫脫分分化化愈愈傷傷組組織織再再分分化化植物體細(xì)胞雜交的過程植物體細(xì)胞雜交的過程植物細(xì)胞的融合植物細(xì)胞的融合植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)植物細(xì)胞植物細(xì)胞A A原生質(zhì)體原生質(zhì)體B B原生質(zhì)體原生質(zhì)體A A雜種雜種細(xì)胞細(xì)胞ABAB去去 壁壁去去 壁壁人人工工誘誘導(dǎo)導(dǎo)方法？方法？促進融合促進融合的方法？的方法？融合融合完成完成的的標(biāo)志標(biāo)志植物細(xì)胞植物細(xì)胞B B 1兩兩個來自不同植物的體細(xì)胞完成融合，遇個來自不同植物

13、的體細(xì)胞完成融合，遇到的第一個障礙是什么？到的第一個障礙是什么？ 2怎么樣去解決這個障怎么樣去解決這個障礙？礙？ 3兩個原生質(zhì)體能發(fā)生融合，這與細(xì)胞膜的兩個原生質(zhì)體能發(fā)生融合，這與細(xì)胞膜的什么特性有關(guān)？什么特性有關(guān)？基基本技術(shù)：本技術(shù)：（1）去除細(xì)胞壁：）去除細(xì)胞壁： 酶酶解法解法纖維素酶和果膠酶纖維素酶和果膠酶（2）人工誘導(dǎo)細(xì)胞原生質(zhì)體融合：）人工誘導(dǎo)細(xì)胞原生質(zhì)體融合： 物物理法：離心、振動、電激等理法：離心、振動、電激等 化化學(xué)法：聚乙二醇（學(xué)法：聚乙二醇（PEG）（3）雜種細(xì)胞培育：）雜種細(xì)胞培育： 植植物組織培養(yǎng)物組織培養(yǎng)意意義：義： 克克服服遠(yuǎn)源雜交不親和遠(yuǎn)源雜交不親和的障礙、在的障

14、礙、在培育作物新品種培育作物新品種方面，可大大擴展可用于雜交的親本組合范圍。方面，可大大擴展可用于雜交的親本組合范圍。未解未解決的問題：未能讓雜種植物按照人們的需要表現(xiàn)出親決的問題：未能讓雜種植物按照人們的需要表現(xiàn)出親代的優(yōu)良。代的優(yōu)良。 1.微型繁殖微型繁殖 微型繁殖技術(shù)微型繁殖技術(shù):快速繁殖優(yōu)良品種的植物組快速繁殖優(yōu)良品種的植物組織培養(yǎng)技術(shù)?？椗囵B(yǎng)技術(shù)。 二植物細(xì)胞工程的實際應(yīng)用二植物細(xì)胞工程的實際應(yīng)用特點特點:保持優(yōu)良品種的遺傳特性；保持優(yōu)良品種的遺傳特性； 高效快速地實現(xiàn)種苗的大量繁殖。高效快速地實現(xiàn)種苗的大量繁殖。 (1)材料材料:無病毒的莖尖。無病毒的莖尖。 (2)脫毒苗脫毒苗:切

15、取莖尖進行組織培養(yǎng)獲得。切取莖尖進行組織培養(yǎng)獲得。2.作物脫毒3.神奇的人工種子神奇的人工種子 (1)技術(shù)技術(shù):植物組織培植物組織培養(yǎng)。養(yǎng)。(2)結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu):人工薄膜胚人工薄膜胚狀體或不定芽或頂芽狀體或不定芽或頂芽或腋芽?；蛞秆俊?3)特點特點:保持親本優(yōu)良性狀；保持親本優(yōu)良性狀；不受氣候不受氣候,季節(jié)和地季節(jié)和地域限制。域限制。 人人工種子的概念中包含的工種子的概念中包含的“具有正常發(fā)育具有正常發(fā)育能力的材料能力的材料”通常是指胚狀體（目前國外有使通常是指胚狀體（目前國外有使用不定芽、頂芽和腋芽的），它可以由三種途用不定芽、頂芽和腋芽的），它可以由三種途徑產(chǎn)生：徑產(chǎn)生：A A、由已脫分化的外植

16、體直接產(chǎn)生；、由已脫分化的外植體直接產(chǎn)生；B B、由愈傷組織產(chǎn)生；、由愈傷組織產(chǎn)生；C C、由懸浮細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)生。、由懸浮細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)生。對對胚狀體的基本要求：胚狀體的基本要求： 播種后能快速出苗播種后能快速出苗； 根和芽幾乎同時生長，不產(chǎn)生愈傷組織根和芽幾乎同時生長，不產(chǎn)生愈傷組織； 同步化程度高同步化程度高； 活力強活力強； 形成的幼苗的形態(tài)與生長要正常。形成的幼苗的形態(tài)與生長要正常?！巴饷姘恢囟ǖ奈镔|(zhì)外面包被著特定的物質(zhì)”是指人工種皮，是指人工種皮，對人工種皮的要求是：能保持胚狀體的活力，對人工種皮的要求是：能保持胚狀體的活力，有利于貯藏運輸和萌發(fā)。選取的材料要有韌有利于貯藏運輸和萌發(fā)。

17、選取的材料要有韌性，耐壓，對胚狀體無毒害，含有胚狀體發(fā)性，耐壓，對胚狀體無毒害，含有胚狀體發(fā)芽所需要的營養(yǎng)成分或植物激素，還應(yīng)含有芽所需要的營養(yǎng)成分或植物激素，還應(yīng)含有殺菌劑，以防播種后微生物的侵害。殺菌劑，以防播種后微生物的侵害。植植物人工種子制備技術(shù)的主要流程物人工種子制備技術(shù)的主要流程圖圖： 外植體外植體 誘誘導(dǎo)植物愈傷組織導(dǎo)植物愈傷組織 體體細(xì)胞胚的誘導(dǎo)細(xì)胞胚的誘導(dǎo) 體體細(xì)胞胚細(xì)胞胚的成熟的成熟 體體細(xì)胞胚的機械化包細(xì)胞胚的機械化包裹裹 貯貯藏或種植藏或種植 1.單倍體育種單倍體育種 (1)方法方法:花藥離體培養(yǎng)?；ㄋ庪x體培養(yǎng)。 (2)優(yōu)點優(yōu)點: 后代穩(wěn)定遺傳后代穩(wěn)定遺傳,都是純合體都

18、是純合體; 明顯縮短育種年限。明顯縮短育種年限。2.突變體的利用突變體的利用 (1)產(chǎn)生產(chǎn)生:植物組織培養(yǎng)；植物組織培養(yǎng)； (2)利用利用:篩選對人們有利突變體篩選對人們有利突變體,進而培育新品種。進而培育新品種。單單倍體育種的實驗流程。倍體育種的實驗流程。花花藥藥花粉細(xì)花粉細(xì)胞培養(yǎng)胞培養(yǎng)愈傷愈傷組織組織分化出分化出小植物小植物單倍體單倍體植株植株正常正常植株植株接種接種脫分化脫分化再分化再分化移栽移栽染色體加倍染色體加倍1.種類種類:蛋白質(zhì)蛋白質(zhì),脂肪脂肪,糖糖類類,藥物藥物,香料香料,生物堿等。生物堿等。2.技術(shù)技術(shù):植物的組織培養(yǎng)植物的組織培養(yǎng)。第一步，選擇人參根作為外植體進行培養(yǎng)，產(chǎn)第

19、一步，選擇人參根作為外植體進行培養(yǎng)，產(chǎn)生愈傷組織，經(jīng)過培養(yǎng)選擇找到增殖速度快而生愈傷組織，經(jīng)過培養(yǎng)選擇找到增殖速度快而且細(xì)胞內(nèi)人參皂甙含量高的細(xì)胞株作為種質(zhì)，且細(xì)胞內(nèi)人參皂甙含量高的細(xì)胞株作為種質(zhì)，其中一部分作為保存用，以備下一次生產(chǎn)用，其中一部分作為保存用，以備下一次生產(chǎn)用，一部分進行發(fā)酵生產(chǎn)。一部分進行發(fā)酵生產(chǎn)。第二步，將第一步選擇到的細(xì)胞株在發(fā)酵罐中第二步，將第一步選擇到的細(xì)胞株在發(fā)酵罐中的適合培養(yǎng)液中進行液體培養(yǎng)，增加細(xì)胞數(shù)量。的適合培養(yǎng)液中進行液體培養(yǎng)，增加細(xì)胞數(shù)量。第三步，將發(fā)酵罐中培養(yǎng)的細(xì)胞進行破碎，從第三步，將發(fā)酵罐中培養(yǎng)的細(xì)胞進行破碎，從中提取人參皂甙。中提取人參皂甙。植物組

20、織培養(yǎng)技術(shù)在我們生活中的另外植物組織培養(yǎng)技術(shù)在我們生活中的另外一些應(yīng)用一些應(yīng)用 ： a a. . 拯救瀕危植物；拯救瀕危植物； b b. . 提供食品制作的原料；提供食品制作的原料； c c. . 利用愈傷組織進行轉(zhuǎn)基因操作利用愈傷組織進行轉(zhuǎn)基因操作( (基基因工程），培育作物新類型。（參閱必因工程），培育作物新類型。（參閱必修修IP119IP119） 課堂小結(jié)植物細(xì)胞工程植物細(xì)胞工程細(xì)胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)細(xì)胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)植物繁殖的新途徑植物繁殖的新途徑實際應(yīng)用實際應(yīng)用基本技術(shù)基本技術(shù)作物新品種的培育作物新品種的培育1植物細(xì)胞表現(xiàn)出全能性的必要條件是植物細(xì)胞表現(xiàn)出全能

21、性的必要條件是 （ ）A.給予適宜的營養(yǎng)和外界條件給予適宜的營養(yǎng)和外界條件B.導(dǎo)入其他植物細(xì)胞的基因?qū)肫渌参锛?xì)胞的基因C.脫離母體后，給予適宜的營養(yǎng)和外界條件脫離母體后，給予適宜的營養(yǎng)和外界條件D.將成熟篩管的細(xì)胞核移植到去核的卵細(xì)胞內(nèi)將成熟篩管的細(xì)胞核移植到去核的卵細(xì)胞內(nèi)2細(xì)胞具有全能性的原因是細(xì)胞具有全能性的原因是 （ ）A.生物體細(xì)胞具有使后代細(xì)胞形成完整個體的潛生物體細(xì)胞具有使后代細(xì)胞形成完整個體的潛能能B.生物體的每一個細(xì)胞都具有全能性生物體的每一個細(xì)胞都具有全能性C.生物體的每一個細(xì)胞都含有個體發(fā)育的全部基生物體的每一個細(xì)胞都含有個體發(fā)育的全部基因因D.生物體的每一個細(xì)胞都是由

22、受精卵發(fā)育來的生物體的每一個細(xì)胞都是由受精卵發(fā)育來的3.下列植物細(xì)胞全能性最高的是下列植物細(xì)胞全能性最高的是 （ ）A.形成層細(xì)胞形成層細(xì)胞 B.韌皮部細(xì)胞韌皮部細(xì)胞 C.木質(zhì)部細(xì)胞木質(zhì)部細(xì)胞 D.葉肉細(xì)胞葉肉細(xì)胞CCA4.生物體內(nèi)細(xì)胞沒有表現(xiàn)出全能性，原因是生物體內(nèi)細(xì)胞沒有表現(xiàn)出全能性，原因是 （ ）A.細(xì)胞喪失了全能性細(xì)胞喪失了全能性B.基因的表達有選擇性基因的表達有選擇性C.基因發(fā)生了變化基因發(fā)生了變化D.不同細(xì)胞基因不同不同細(xì)胞基因不同5植物組織培養(yǎng)過程中的脫分化是指植物組織培養(yǎng)過程中的脫分化是指 （ ）A.植物體的分生組織通過細(xì)胞分裂產(chǎn)生新細(xì)胞植物體的分生組織通過細(xì)胞分裂產(chǎn)生新細(xì)胞B

23、.未成熟的種子經(jīng)過處理培育出幼苗的過程未成熟的種子經(jīng)過處理培育出幼苗的過程 C.植物的器官、組織或細(xì)胞，通過離體培養(yǎng)產(chǎn)生愈傷植物的器官、組織或細(xì)胞，通過離體培養(yǎng)產(chǎn)生愈傷組織的過程組織的過程D.取植物的枝芽培育成一株新植物的過程取植物的枝芽培育成一株新植物的過程6植物組織培養(yǎng)是指植物組織培養(yǎng)是指 （ ）A離體的植物器官或細(xì)胞培育成愈傷組織離體的植物器官或細(xì)胞培育成愈傷組織B愈傷組織培育成植株愈傷組織培育成植株C離體的植物器官、組織或細(xì)胞培養(yǎng)成完整植物體離體的植物器官、組織或細(xì)胞培養(yǎng)成完整植物體D愈傷組織形成高度液泡化組織愈傷組織形成高度液泡化組織BCC7不能人工誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合的方法是不能人工誘

24、導(dǎo)原生質(zhì)體融合的方法是 （ ）A.振動振動 B.電刺激電刺激 C.PEG試劑試劑 D重壓重壓8植物體細(xì)胞雜交要先去除細(xì)胞壁的原因是植物體細(xì)胞雜交要先去除細(xì)胞壁的原因是 （ ）A.植物體細(xì)胞的結(jié)構(gòu)組成中不包括細(xì)胞壁植物體細(xì)胞的結(jié)構(gòu)組成中不包括細(xì)胞壁B.細(xì)胞壁使原生質(zhì)體失去活力細(xì)胞壁使原生質(zhì)體失去活力C.細(xì)胞壁阻礙了原生質(zhì)體的融合細(xì)胞壁阻礙了原生質(zhì)體的融合 D.細(xì)胞壁不是原生質(zhì)的組成部分細(xì)胞壁不是原生質(zhì)的組成部分9植物體細(xì)胞雜交的結(jié)果是植物體細(xì)胞雜交的結(jié)果是 （ ）A. 產(chǎn)生雜種植株產(chǎn)生雜種植株 B產(chǎn)生雜種細(xì)胞產(chǎn)生雜種細(xì)胞C原生質(zhì)體融合原生質(zhì)體融合 D形成愈傷組織形成愈傷組織10植物體細(xì)胞雜交的目

25、的中錯誤的是植物體細(xì)胞雜交的目的中錯誤的是 （ ）A.把兩個植物體的優(yōu)良性狀集中在雜種植株上把兩個植物體的優(yōu)良性狀集中在雜種植株上B.獲得雜種植株獲得雜種植株C.克服遠(yuǎn)源雜交不親和的障礙克服遠(yuǎn)源雜交不親和的障礙D.實現(xiàn)原生質(zhì)體的融合實現(xiàn)原生質(zhì)體的融合D DC CA AD D11植物組織培養(yǎng)的用途中不正確的是植物組織培養(yǎng)的用途中不正確的是 （ ）A.快速繁殖快速繁殖 B.生產(chǎn)新品種生產(chǎn)新品種 C生產(chǎn)殺蟲劑生產(chǎn)殺蟲劑 D生產(chǎn)白細(xì)胞介素生產(chǎn)白細(xì)胞介素212.能刺激愈傷組織形成的激素是能刺激愈傷組織形成的激素是 （ ） A細(xì)胞分裂素細(xì)胞分裂素 B. 赤霉素與乙烯赤霉素與乙烯 C. 細(xì)胞分裂素與生長素細(xì)

26、胞分裂素與生長素 D. 赤霉素赤霉素DC動動物細(xì)胞培養(yǎng)物細(xì)胞培養(yǎng) 動動物細(xì)胞培養(yǎng)就是從動物機體內(nèi)取出相物細(xì)胞培養(yǎng)就是從動物機體內(nèi)取出相關(guān)關(guān)的組的組織，將它分散成單個細(xì)胞，然后，織，將它分散成單個細(xì)胞，然后，放在放在適宜適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長和的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長和增殖。增殖。閱讀思考：閱讀思考：1 為什么細(xì)胞培養(yǎng)要分散成單個細(xì)胞培養(yǎng)？為什么細(xì)胞培養(yǎng)要分散成單個細(xì)胞培養(yǎng)？ 怎樣分散？怎樣分散？2 用胰蛋白酶分散細(xì)胞，說明細(xì)胞間的物質(zhì)主要用胰蛋白酶分散細(xì)胞，說明細(xì)胞間的物質(zhì)主要 成分是什么？用胃蛋白酶行嗎？成分是什么？用胃蛋白酶行嗎？3 什么是細(xì)胞貼壁和細(xì)胞接觸抑制？什么是細(xì)胞貼壁和

27、細(xì)胞接觸抑制？4 什么是原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)？傳代培養(yǎng)的細(xì)胞什么是原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)？傳代培養(yǎng)的細(xì)胞 具有具有 什么特點？什么特點？為什么細(xì)胞培養(yǎng)要分散成單個細(xì)胞培養(yǎng)？怎樣分散？為什么細(xì)胞培養(yǎng)要分散成單個細(xì)胞培養(yǎng)？怎樣分散？1.成塊的組織中細(xì)胞與細(xì)胞靠在一起，彼此限制了細(xì)胞的生成塊的組織中細(xì)胞與細(xì)胞靠在一起，彼此限制了細(xì)胞的生長和增值。長和增值。2.從健康動物體內(nèi)取出組織塊，剪碎，用胰蛋白酶或膠原蛋從健康動物體內(nèi)取出組織塊，剪碎，用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理白酶處理用胰蛋白酶分散細(xì)胞，說明細(xì)胞間的物質(zhì)主要成分用胰蛋白酶分散細(xì)胞，說明細(xì)胞間的物質(zhì)主要成分是什么？用胃蛋白酶行嗎？是什么？用胃蛋白酶行嗎

28、？1.在進行動物細(xì)胞培養(yǎng)時，用胰蛋白酶分散細(xì)胞，說明細(xì)胞在進行動物細(xì)胞培養(yǎng)時，用胰蛋白酶分散細(xì)胞，說明細(xì)胞間的物質(zhì)主要是蛋白質(zhì)。間的物質(zhì)主要是蛋白質(zhì)。2.動物細(xì)胞培養(yǎng)適宜的動物細(xì)胞培養(yǎng)適宜的PH為為7.27.4，此環(huán)境下胃蛋白酶，此環(huán)境下胃蛋白酶（2.0）沒有活性，而胰蛋白酶）沒有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性較高。的活性較高。動物細(xì)胞生長特性：動物細(xì)胞生長特性：細(xì)胞貼壁：細(xì)胞貼壁： 懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上，稱為懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上，稱為細(xì)胞貼壁。細(xì)胞貼壁。要求：要求： 培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿的內(nèi)表面光滑、無毒、易于貼附。培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿的內(nèi)表面光滑、無毒、易于貼附。

29、細(xì)胞的接觸抑制細(xì)胞的接觸抑制： 當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到表面相互接觸時，細(xì)胞當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到表面相互接觸時，細(xì)胞就會停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的接觸抑就會停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的接觸抑制。制。 什么是原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)？什么是原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)？原代培養(yǎng)：將動物組織用胰蛋白酶處理成單個細(xì)胞，配原代培養(yǎng)：將動物組織用胰蛋白酶處理成單個細(xì)胞，配制成一定濃度的懸浮液，放入培養(yǎng)瓶中在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)制成一定濃度的懸浮液，放入培養(yǎng)瓶中在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)的過程的過程傳代培養(yǎng)：培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞越來越多，用胰蛋白酶處理傳代培養(yǎng)：培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞越來越多，用胰蛋白酶處理使細(xì)胞從瓶壁上脫離下來，配制成懸浮液，分瓶

30、培養(yǎng)的使細(xì)胞從瓶壁上脫離下來，配制成懸浮液，分瓶培養(yǎng)的過程過程回顧：動物細(xì)胞培回顧：動物細(xì)胞培養(yǎng)過程養(yǎng)過程動物胚胎或幼齡動物動物胚胎或幼齡動物的組織、器官的組織、器官配置細(xì)胞懸液配置細(xì)胞懸液剪碎用胰蛋白酶處理剪碎用胰蛋白酶處理1010代細(xì)胞代細(xì)胞轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶40-5040-50代細(xì)胞代細(xì)胞傳傳代代培培養(yǎng)養(yǎng)無限傳代無限傳代單個細(xì)胞單個細(xì)胞加培養(yǎng)液稀釋加培養(yǎng)液稀釋傳代傳代1010代以內(nèi)，代以內(nèi)，遺傳物質(zhì)不改變，遺傳物質(zhì)不改變，保持保持正常正常二倍體核型二倍體核型。傳代傳代10-5010-50代左右，增長緩慢以代左右，增長緩慢以至于完全停止，至于完全停止，部分細(xì)胞核型可部分細(xì)胞核型可能發(fā)生變

31、化能發(fā)生變化（遺傳物質(zhì)可能改變（遺傳物質(zhì)可能改變）為什么用胰蛋白酶處理？為什么用胰蛋白酶處理？分瓶分瓶傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)原代培養(yǎng)特點：原代培養(yǎng)特點：細(xì)胞貼壁、細(xì)胞貼壁、接觸抑制接觸抑制繼續(xù)傳代培養(yǎng)少部分細(xì)胞繼續(xù)傳代培養(yǎng)少部分細(xì)胞獲得不獲得不死性死性，細(xì)胞突變細(xì)胞突變，遺傳物質(zhì)已經(jīng)遺傳物質(zhì)已經(jīng)改變改變，等同于癌細(xì)胞等同于癌細(xì)胞。細(xì)胞株：細(xì)胞株：一般說一般說遺傳物質(zhì)未改變遺傳物質(zhì)未改變細(xì)胞系：細(xì)胞系：遺傳物遺傳物質(zhì)已改質(zhì)已改變變原原代代培培養(yǎng)養(yǎng)動物細(xì)胞培養(yǎng)條件：動物細(xì)胞培養(yǎng)條件：1、無菌、無毒的環(huán)境、無菌、無毒的環(huán)境 （添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液）（添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液）2、營

32、養(yǎng)、營養(yǎng)（葡萄糖葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素、氨基酸、無機鹽、維生素、動物血清動物血清等。等。）3、溫度和、溫度和PH 36.5+（-）0.5度, 7.2-7.44、氣體環(huán)境：、氣體環(huán)境： O2和和CO2（95%空氣和空氣和5% CO2 ）保證細(xì)胞順利的保證細(xì)胞順利的生長增殖生長增殖動物細(xì)胞培養(yǎng)液的主要成分動物細(xì)胞培養(yǎng)液的主要成分：葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素和動物血清等。葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素和動物血清等。與植物培養(yǎng)基相比其特點是：與植物培養(yǎng)基相比其特點是：（1 1）液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基（2 2）含有動物血清含有動物血清動物體細(xì)胞大都生活動物體細(xì)胞大都生活在在液體液體的環(huán)境的環(huán)境

33、動物細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)用動物細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)用 大規(guī)模培養(yǎng)生產(chǎn)生物制品（病毒疫苗、干擾素、大規(guī)模培養(yǎng)生產(chǎn)生物制品（病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體）單克隆抗體） 獲得大量自身的皮膚細(xì)胞，用于植皮獲得大量自身的皮膚細(xì)胞，用于植皮 培養(yǎng)的動物細(xì)胞可以用于檢測有毒物質(zhì)，判斷某培養(yǎng)的動物細(xì)胞可以用于檢測有毒物質(zhì)，判斷某種物質(zhì)的毒性種物質(zhì)的毒性 為治療和預(yù)防癌癥及其他疾病提供理論依據(jù)為治療和預(yù)防癌癥及其他疾病提供理論依據(jù)一、動物細(xì)胞融合一、動物細(xì)胞融合 細(xì)胞融合是正常的生命活動細(xì)胞融合是正常的生命活動兩個細(xì)胞正在融合兩個細(xì)胞正在融合 受精作用受精作用動物動物細(xì)胞細(xì)胞融合融合誘導(dǎo)方式誘導(dǎo)方式物理法物理法化學(xué)法化學(xué)法生物法：

34、生物法： 滅活的病毒滅活的病毒仙臺病毒仙臺病毒紫外線紫外線喪失感染性喪失感染性（不感染細(xì)胞）（不感染細(xì)胞）保留融合活性保留融合活性 （誘導(dǎo)細(xì)胞融合）（誘導(dǎo)細(xì)胞融合）誘導(dǎo)方法誘導(dǎo)方法細(xì)胞細(xì)胞A細(xì)胞細(xì)胞B雜種細(xì)胞雜種細(xì)胞滅活的病毒滅活的病毒物理法物理法化學(xué)法化學(xué)法仙臺病毒仙臺病毒皰疹病毒皰疹病毒新城雞瘟病毒新城雞瘟病毒細(xì)胞融合與誘導(dǎo)細(xì)胞融合物質(zhì)：細(xì)胞融合與誘導(dǎo)細(xì)胞融合物質(zhì)： 因為滅活的病毒能使細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂因為滅活的病毒能使細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細(xì)胞膜打開，細(xì)胞發(fā)生融合，不滅質(zhì)分子重新排布，細(xì)胞膜打開，細(xì)胞發(fā)生融合，不滅活的話會感染細(xì)胞，而不能誘導(dǎo)細(xì)胞融合?；畹脑挄腥?/p>

35、細(xì)胞，而不能誘導(dǎo)細(xì)胞融合。 細(xì)胞融合技術(shù)應(yīng)用于哪些方面？細(xì)胞融合技術(shù)應(yīng)用于哪些方面？ 細(xì)胞學(xué)、遺傳學(xué)、免疫學(xué)及制備單克隆抗體。細(xì)胞學(xué)、遺傳學(xué)、免疫學(xué)及制備單克隆抗體。植物體細(xì)胞雜交和動物細(xì)胞融合的比較植物體細(xì)胞雜交和動物細(xì)胞融合的比較比較項目比較項目植物體細(xì)胞雜交植物體細(xì)胞雜交動物細(xì)胞融合動物細(xì)胞融合細(xì)胞融合原理細(xì)胞融合原理細(xì)胞膜的流動性、細(xì)胞膜的流動性、 細(xì)胞膜的流動性細(xì)胞膜的流動性細(xì)胞融合的方法細(xì)胞融合的方法 去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合原生質(zhì)體融合使細(xì)胞分散后誘使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合導(dǎo)細(xì)胞融合誘導(dǎo)方法誘導(dǎo)方法物理（離心、振蕩、物理（離心、振蕩、電刺激）電刺激）化學(xué)（聚乙

36、二醇）化學(xué)（聚乙二醇）物理、化學(xué)方法物理、化學(xué)方法（同左）（同左）滅活的病毒滅活的病毒用途用途獲得雜種植株獲得雜種植株制備單克隆抗體制備單克隆抗體二、單克隆抗體二、單克隆抗體 抗體是機體受抗原刺激后產(chǎn)生的、抗體是機體受抗原刺激后產(chǎn)生的、并能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有免并能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白。疫功能的球蛋白。漿細(xì)胞產(chǎn)生抗體。漿細(xì)胞產(chǎn)生抗體。想一想想一想:什么是抗體？什么是抗體？B B淋巴細(xì)胞與抗體的關(guān)系：淋巴細(xì)胞與抗體的關(guān)系：B B淋巴細(xì)胞受抗原刺激后，可以產(chǎn)生淋巴細(xì)胞受抗原刺激后，可以產(chǎn)生抗體?？贵w。動物體內(nèi)的動物體內(nèi)的B B淋巴細(xì)胞可以產(chǎn)生百萬種淋巴細(xì)胞可以產(chǎn)生百

37、萬種以上的抗體，每種抗體對特定的抗原具有特異以上的抗體，每種抗體對特定的抗原具有特異性免疫作用。性免疫作用。每一個淋巴細(xì)胞只能產(chǎn)生一種抗體。每一個淋巴細(xì)胞只能產(chǎn)生一種抗體。 所以傳統(tǒng)的抗體的生產(chǎn)方法及缺陷是什么？所以傳統(tǒng)的抗體的生產(chǎn)方法及缺陷是什么？怎樣解決這個問題？怎樣解決這個問題？ 抗原抗原 動物體內(nèi)動物體內(nèi)刺激刺激效應(yīng)效應(yīng)B 抗體抗體抗原不純抗原不純抗體不純抗體不純篩選單一效應(yīng)篩選單一效應(yīng)B細(xì)胞細(xì)胞不能增殖產(chǎn)生大量抗體不能增殖產(chǎn)生大量抗體特異性差、純度低；特異性差、純度低；產(chǎn)量低、反應(yīng)不夠靈敏產(chǎn)量低、反應(yīng)不夠靈敏讀下面一段文字資料，思考以下問題：讀下面一段文字資料，思考以下問題： 長期以

38、來，為了獲得抗體，采用的是把某種抗原反復(fù)長期以來，為了獲得抗體，采用的是把某種抗原反復(fù)注射到動物體內(nèi)，然后從動物血清中分離出所需抗體的方注射到動物體內(nèi)，然后從動物血清中分離出所需抗體的方法。用這種方法獲得的抗體，不僅產(chǎn)量低，而且抗體的特法。用這種方法獲得的抗體，不僅產(chǎn)量低，而且抗體的特異性差，純度低，反應(yīng)不夠靈敏。人們發(fā)現(xiàn)，在動物發(fā)生異性差，純度低，反應(yīng)不夠靈敏。人們發(fā)現(xiàn)，在動物發(fā)生免疫反應(yīng)的過程中，體內(nèi)的免疫反應(yīng)的過程中，體內(nèi)的B B細(xì)胞可以產(chǎn)生多達百萬種以細(xì)胞可以產(chǎn)生多達百萬種以上的特異性抗體，但是每個上的特異性抗體，但是每個B B細(xì)胞只分泌一種化學(xué)性質(zhì)單細(xì)胞只分泌一種化學(xué)性質(zhì)單一、特異性

39、強的抗體。要想獲得大量的單一抗體，必須用一、特異性強的抗體。要想獲得大量的單一抗體，必須用單個單個B B細(xì)胞進行無性繁殖，即克隆。細(xì)胞進行無性繁殖，即克隆。 1、請從以上文字資料中找出單克隆抗體的概念。、請從以上文字資料中找出單克隆抗體的概念。2、如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？、如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？提示提示1 1：僅用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)可行嗎？：僅用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)可行嗎？提示提示2 2：我們所學(xué)的哪種細(xì)胞是可以無限增殖的？：我們所學(xué)的哪種細(xì)胞是可以無限增殖的？提示提示3 3：有什么方法能使：有什么方法能使B B細(xì)胞產(chǎn)生抗體的能力和腫瘤細(xì)胞無細(xì)胞產(chǎn)生抗體的能力和腫瘤細(xì)胞無 限增殖能力同時具備呢？限增殖能力

40、同時具備呢？用單個用單個B B細(xì)胞進行克隆，得到的細(xì)胞群能夠分泌一種化學(xué)性細(xì)胞進行克隆，得到的細(xì)胞群能夠分泌一種化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強的抗體，這種抗體就叫做單克隆抗體。質(zhì)單一、特異性強的抗體，這種抗體就叫做單克隆抗體。單克隆抗體單克隆抗體 由單個由單個B B淋巴細(xì)胞經(jīng)過無性繁殖（克淋巴細(xì)胞經(jīng)過無性繁殖（克?。?，形成基因型相同的細(xì)胞群，這一?。?，形成基因型相同的細(xì)胞群，這一細(xì)胞群所產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性細(xì)胞群所產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強的抗體稱為單克隆抗體。強的抗體稱為單克隆抗體。 特點：特點：特異性強、靈敏度特異性強、靈敏度高高、產(chǎn)產(chǎn)量量高高、純度高純度高如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？如何大量

41、生產(chǎn)單克隆抗體？ 利用淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體的功能利用淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體的功能 利用腫瘤細(xì)胞無限增殖的特性利用腫瘤細(xì)胞無限增殖的特性 利用細(xì)胞融合的技術(shù)將利用細(xì)胞融合的技術(shù)將兩種細(xì)胞融兩種細(xì)胞融合合獲得具有淋巴細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞特獲得具有淋巴細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞特性的性的雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞 利用動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)大量培養(yǎng)雜利用動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)大量培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞交瘤細(xì)胞如何篩選？如何篩選？融融合合方方式？式？ 單克隆抗體制備過程單克隆抗體制備過程 注射抗原注射抗原B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞細(xì)胞融合、篩選細(xì)胞融合、篩選雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)篩選，繼續(xù)培養(yǎng)篩選，繼續(xù)培養(yǎng)足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生足夠

42、數(shù)量的、能產(chǎn)生特定抗體的細(xì)胞群特定抗體的細(xì)胞群體外培養(yǎng)體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔單克隆抗體單克隆抗體思考：思考：1 1、本過程利用了哪些原理？、本過程利用了哪些原理？免疫原理，細(xì)胞融合原理和動物細(xì)胞培養(yǎng)原理免疫原理，細(xì)胞融合原理和動物細(xì)胞培養(yǎng)原理2 2、為什么選用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與、為什么選用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與B B細(xì)胞融合？細(xì)胞融合？這樣融合成的雜交瘤細(xì)胞，繼承了雙親細(xì)胞這樣融合成的雜交瘤細(xì)胞，繼承了雙親細(xì)胞的遺傳物質(zhì)，不僅具有的遺傳物質(zhì)，不僅具有B B細(xì)胞分泌抗體的能細(xì)胞分泌抗體的能力，而且還有無限增殖的本領(lǐng)，因而可以獲力，而且還有無限增殖的本領(lǐng)，因而可以獲得大量單克隆抗體得大量單克

43、隆抗體3 3、整個制備過程為何要經(jīng)過兩次篩選、整個制備過程為何要經(jīng)過兩次篩選? ?（第一次篩選得到雜交瘤細(xì)胞（多種），第二次需先（第一次篩選得到雜交瘤細(xì)胞（多種），第二次需先在多孔培養(yǎng)板上，在每孔只有一個雜交瘤細(xì)胞的情況在多孔培養(yǎng)板上，在每孔只有一個雜交瘤細(xì)胞的情況下開始培養(yǎng)，然后再篩選出下開始培養(yǎng)，然后再篩選出能產(chǎn)生特異性抗體的細(xì)胞能產(chǎn)生特異性抗體的細(xì)胞群。群。 由于該細(xì)胞群是單個雜交瘤細(xì)胞克隆得來的，所由于該細(xì)胞群是單個雜交瘤細(xì)胞克隆得來的，所以產(chǎn)生的抗體必然是化學(xué)性質(zhì)單一的，特異性強的單以產(chǎn)生的抗體必然是化學(xué)性質(zhì)單一的，特異性強的單克隆抗體。這里的克隆抗體。這里的單克隆單克隆確有確有單個

44、細(xì)胞單個細(xì)胞克隆的含義，克隆的含義，只不過克隆的不是只不過克隆的不是B B淋巴細(xì)胞，而是淋巴細(xì)胞，而是雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞。）。） 單克隆抗體的應(yīng)用單克隆抗體的應(yīng)用 與常規(guī)抗體相比，單克隆抗體產(chǎn)量高，特異性強，與常規(guī)抗體相比，單克隆抗體產(chǎn)量高，特異性強，靈敏度高，優(yōu)越性十分明顯。靈敏度高，優(yōu)越性十分明顯。應(yīng)用主要有：應(yīng)用主要有：1 1、臨床診斷、臨床診斷2 2、作為載體，運載抗癌藥物，形成、作為載體，運載抗癌藥物，形成“生物導(dǎo)彈生物導(dǎo)彈” 治療腫瘤治療腫瘤資料資料：目前世界各國已經(jīng)研制出數(shù)以百計的單克隆抗：目前世界各國已經(jīng)研制出數(shù)以百計的單克隆抗體。許多缺乏良好診斷手段的傳染病、免疫性疾病、血

45、液病、體。許多缺乏良好診斷手段的傳染病、免疫性疾病、血液病、內(nèi)分泌疾病和遺傳病，用單克隆抗體作為診斷手段，是一個內(nèi)分泌疾病和遺傳病，用單克隆抗體作為診斷手段，是一個必然趨勢。另外，用單克隆抗體做體內(nèi)診斷，借以鑒別和定必然趨勢。另外，用單克隆抗體做體內(nèi)診斷，借以鑒別和定位體內(nèi)位體內(nèi)“病灶病灶”也引起人們的注意，目前，主要用于腫瘤追也引起人們的注意，目前，主要用于腫瘤追蹤及心肌梗塞的診斷。蹤及心肌梗塞的診斷。小結(jié)小結(jié)兩個過程兩個過程動物細(xì)胞培養(yǎng)過程動物細(xì)胞培養(yǎng)過程單克隆抗體制備過程單克隆抗體制備過程三個三個“一一”一個誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法滅活一個誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法滅活病毒病毒一個新細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞

46、一個新細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞一個優(yōu)勢單克隆抗體特異性一個優(yōu)勢單克隆抗體特異性 強、靈敏度高的優(yōu)勢強、靈敏度高的優(yōu)勢 下圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計的生產(chǎn)破傷下圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌的實驗方案風(fēng)桿菌的實驗方案2、該方案能達到預(yù)期效果嗎？為什么？、該方案能達到預(yù)期效果嗎？為什么？4、圖中、圖中B為為_過程，常用過程，常用_作為誘導(dǎo)劑，該細(xì)胞繼承作為誘導(dǎo)劑，該細(xì)胞繼承_的遺傳特性，既能的遺傳特性，既能_,又能又能_。1 1、該實驗方案的目的是、該實驗方案的目的是_3、A是從小鼠的脾臟中取得是從小鼠的脾臟中取得_,該細(xì)胞能夠產(chǎn)生該細(xì)胞能夠產(chǎn)生_ 5、C過程指細(xì)胞培養(yǎng)，該過

47、程包括過程指細(xì)胞培養(yǎng)，該過程包括_培養(yǎng)和培養(yǎng)和_培養(yǎng)兩個階段，其培養(yǎng)兩個階段，其中中_代以內(nèi)的的細(xì)胞屬于細(xì)胞株。代以內(nèi)的的細(xì)胞屬于細(xì)胞株。制備單克隆抗體制備單克隆抗體B細(xì)胞細(xì)胞抗體抗體細(xì)胞融合細(xì)胞融合滅活病毒滅活病毒雙親細(xì)胞雙親細(xì)胞分泌抗體分泌抗體無限增殖無限增殖原代原代傳代傳代50B體外培養(yǎng)體外培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞足夠數(shù)量的細(xì)胞群足夠數(shù)量的細(xì)胞群注射到注射到小鼠腹腔小鼠腹腔AC1 1、在動物細(xì)胞培養(yǎng)過程中，下列哪種現(xiàn)象是不可能的（、在動物細(xì)胞培養(yǎng)過程中，下列哪種現(xiàn)象是不可能的（ ）A A細(xì)胞一直在細(xì)胞懸液中分裂生長細(xì)胞一直在細(xì)胞懸液中分裂生長B B有少部分細(xì)胞可能在培

48、養(yǎng)條件下無限地傳代下去有少部分細(xì)胞可能在培養(yǎng)條件下無限地傳代下去C C有部分細(xì)胞核型會發(fā)生變化有部分細(xì)胞核型會發(fā)生變化 D. D. 個別細(xì)胞會發(fā)生基因突變個別細(xì)胞會發(fā)生基因突變2 2、下列過程與細(xì)胞培養(yǎng)無關(guān)的是、下列過程與細(xì)胞培養(yǎng)無關(guān)的是-（ ） A.A.檢測有毒物質(zhì)檢測有毒物質(zhì) B.B.生產(chǎn)單克隆抗體生產(chǎn)單克隆抗體 C.C.篩選抗癌藥物篩選抗癌藥物 D.D.雜交育種雜交育種AD三、動三、動物體細(xì)胞核移植技術(shù)物體細(xì)胞核移植技術(shù): 將動物的一個細(xì)胞的細(xì)胞核，移入一個已經(jīng)去掉將動物的一個細(xì)胞的細(xì)胞核，移入一個已經(jīng)去掉 細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中，使其重組并發(fā)育成一個新細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中，使其重組并發(fā)育成一

49、個新 的胚胎，的胚胎， 這個新的胚胎最終發(fā)育成動物個體。這個新的胚胎最終發(fā)育成動物個體。 用核移植的方法得到的動物稱為用核移植的方法得到的動物稱為克隆動物克隆動物核移植核移植胚胎細(xì)胞核移植胚胎細(xì)胞核移植體細(xì)胞核移植體細(xì)胞核移植（難度高難度高）胚胎移植技術(shù)胚胎移植技術(shù)試管動物（嬰兒）培養(yǎng)過程試管動物（嬰兒）培養(yǎng)過程卵細(xì)胞卵細(xì)胞精子精子體外受精體外受精受精卵受精卵胚胎胚胎新個體新個體母體子宮內(nèi)母體子宮內(nèi)孕育、產(chǎn)出孕育、產(chǎn)出綿羊綿羊“多莉多莉” 整個克隆過程如下：整個克隆過程如下：母綿羊母綿羊A 乳腺細(xì)胞乳腺細(xì)胞（體細(xì)胞）（體細(xì)胞） 母綿羊母綿羊B未受精的未受精的卵細(xì)胞卵細(xì)胞 母綿羊母綿羊C“多莉多莉” 新的卵細(xì)胞新的卵細(xì)胞 發(fā)育成胚胎發(fā)育成胚胎去核卵細(xì)胞去核卵細(xì)胞提取細(xì)胞核提取細(xì)胞核細(xì)胞融合細(xì)胞融合胚胎移植胚胎移植黑面綿羊去黑面綿羊去核卵母細(xì)胞核卵母細(xì)胞白面綿羊乳白面綿羊乳腺細(xì)胞核腺細(xì)胞核a重組細(xì)胞重組細(xì)胞電脈沖刺激電脈沖刺激早期重組胚胎早期重組胚胎b另一頭綿羊的子宮另一頭綿羊的子宮妊娠、出生妊娠、出生克隆羊多利克隆羊多利細(xì)細(xì)胞工程名稱：胞工程名稱：a表示：表示： b表示表示: 實實施細(xì)胞工程時，所需受體施細(xì)胞工程時，所需受體細(xì)胞大多采用卵母細(xì)胞的原細(xì)胞大多采用卵母細(xì)胞的原因：因：體積大，易操作。含有促使細(xì)胞核體積大，易操作。含有促使細(xì)胞核表達全能性的物質(zhì)和營養(yǎng)條件。表達全