抗生素效價的測定ppt課件

1、抗生素效價微生物檢定法抗生素效價微生物檢定法趙永成 生工1001 41041001.概述一、抗生素的概念及抗生素的生物檢定一、抗生素的概念及抗生素的生物檢定 抗生素是由微生物所產生的極微量便抗生素是由微生物所產生的極微量便具有選擇性地殺死或抑制其他病原微生物具有選擇性地殺死或抑制其他病原微生物生長的一類天然有機化合物。生長的一類天然有機化合物。 抗生素的生物檢定是以抗生素對抗生素的生物檢定是以抗生素對微生物的抗菌效能作為效價的衡量規(guī)范。微生物的抗菌效能作為效價的衡量規(guī)范。一、抗生素的效價和單位一、抗生素的效價和單位 抗生素的含量用效價和單位表抗生素的含量用效價和單位表示。該詞有時不加區(qū)別統(tǒng)稱為

2、效價單示。該詞有時不加區(qū)別統(tǒng)稱為效價單位。位。 效價效價otency，指檢品的，指檢品的實踐單位數(shù)與其標示量的比值。常表實踐單位數(shù)與其標示量的比值。常表示為效價的百分數(shù)。示為效價的百分數(shù)。 單位單位unit,u單位是衡量抗生單位是衡量抗生素有效成分的詳細尺度。素有效成分的詳細尺度。 、分量單位、分量單位 以抗生素的生物活性部分分量作以抗生素的生物活性部分分量作單位單位 微克單位，毫克單微克單位，毫克單位。位。 、類似分量單位、類似分量單位 以特定的純粹抗生素鹽類的以特定的純粹抗生素鹽類的分量作為單位。如純粹金霉素鹽酸鹽及四環(huán)素分量作為單位。如純粹金霉素鹽酸鹽及四環(huán)素鹽酸鹽包括無生物活性的鹽酸根

3、在內微克鹽酸鹽包括無生物活性的鹽酸根在內微克單位，毫克個單位。單位，毫克個單位。這是根據(jù)國際運用習慣而來的。這是根據(jù)國際運用習慣而來的。 、質量折算單位、質量折算單位 以特定的純抗生素鹽的質量以特定的純抗生素鹽的質量為單位而加以折算。青霉素為單位而加以折算。青霉素0.6ug為為1單位單位 、特定單位、特定單位 以特定的抗生素規(guī)范品的某一質以特定的抗生素規(guī)范品的某一質量定為一單位。量定為一單位。微生物發(fā)的分類 稀釋法 濁度法 雙碟法 2 2、濁度法系利用抗生素在液體培育基中對、濁度法系利用抗生素在液體培育基中對實驗菌生長的抑制造用，經過測定培育后實驗菌生長的抑制造用，經過測定培育后細菌濁度值的大

4、小，比較規(guī)范品與供試品細菌濁度值的大小，比較規(guī)范品與供試品對實驗菌生長抑制的程度，以測定供試品對實驗菌生長抑制的程度，以測定供試品效價的種方法。效價的種方法。3 3、管碟法：是利用抗生、管碟法：是利用抗生素在含敏感實驗菌的素在含敏感實驗菌的瓊脂培育基中的球面瓊脂培育基中的球面分散浸透作用，從而分散浸透作用，從而構成一定的抑菌圈。構成一定的抑菌圈。經過瓊脂培育基，可察經過瓊脂培育基，可察看并丈量出抑菌圈的看并丈量出抑菌圈的大小。大小。一一 原理原理 在一定的抗生素濃在一定的抗生素濃度范圍內，對數(shù)劑量度范圍內，對數(shù)劑量(濃濃度度)與抑菌圈的外表積或與抑菌圈的外表積或直徑成正比，可以得出直徑成正比，

5、可以得出一條曲線。一條曲線。 抗生素濃度換算成對數(shù)，抗生素濃度換算成對數(shù)，那么抑菌圈直徑與抗生那么抑菌圈直徑與抗生素對數(shù)成直線關系素對數(shù)成直線關系管碟法的資料管碟法的資料一，儀器菌種 培育基 培育皿 牛角杯 陶瓦圓蓋二，試劑無菌生理鹽水 ph6.0的磷酸緩沖液 青霉素規(guī)范品貯藏液 青霉素規(guī)范品運用液管碟法測定操作管碟法測定操作 1. 1. 實驗用菌液實驗用菌液 金黃色葡萄球菌懸液：取金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌懸液：取金黃色葡萄球菌的營養(yǎng)斜面培育物，接種于營養(yǎng)瓊脂斜面的營養(yǎng)斜面培育物，接種于營養(yǎng)瓊脂斜面上，在上，在35373537培育培育20h20h到到22h22h，；臨用前用，；臨用前用水或

6、者滅菌生理鹽水溶液將菌苔洗下，備水或者滅菌生理鹽水溶液將菌苔洗下，備用用2 供試品及規(guī)范品的配制 規(guī)范品與樣品從冰箱取出后，使與室溫平衡。供規(guī)范品與樣品從冰箱取出后，使與室溫平衡。供試品應放于枯燥器內至少試品應放于枯燥器內至少30min方可稱取。稱量方可稱取。稱量最好為一次取樣稱量，動作迅速，不得反復稱取，最好為一次取樣稱量，動作迅速，不得反復稱取，取樣后立刻將稱量瓶瓶蓋蓋好，以免吸水。取樣后立刻將稱量瓶瓶蓋蓋好，以免吸水。 規(guī)范品的稱量最好用規(guī)范品的稱量最好用1/100,000克的分析天平，克的分析天平，樣品稱量不得低于樣品稱量不得低于1/10,000克的分析天平。天平克的分析天平。天平中的

7、枯燥參與劑應堅持經常留意改換。中的枯燥參與劑應堅持經常留意改換。 稱量終了后，超聲波處置后的磷酸緩沖液，稱量終了后，超聲波處置后的磷酸緩沖液，定容至刻度，過濾并稀釋。定容至刻度，過濾并稀釋。 雙碟的制備：雙碟的制備： 取內徑取內徑90mm、高、高1617mm的平底雙碟；的平底雙碟； 注入加熱融化的培育基注入加熱融化的培育基20ml，使在碟底內均，使在碟底內均勻攤布，放置程度臺上使凝固，作為底層。勻攤布，放置程度臺上使凝固，作為底層。 另取培育基適量加熱融化后，放冷至另取培育基適量加熱融化后，放冷至4850芽孢可至芽孢可至60，參與規(guī)定的實驗菌懸液，參與規(guī)定的實驗菌懸液適量能得明晰的抑菌圈為度。

8、適量能得明晰的抑菌圈為度。 二劑量法規(guī)范品溶液的高濃度所致的抑菌圈直徑二劑量法規(guī)范品溶液的高濃度所致的抑菌圈直徑在在 1824 mm。 二抑菌圈的構成二抑菌圈的構成 在平板底部四邊，分別在平板底部四邊，分別對角注明對角注明“SH、“SL 和和“UH、“UL標標志志 將不銹鋼小管將不銹鋼小管(俗稱為牛俗稱為牛津杯津杯)放置在含敏感實驗放置在含敏感實驗菌的瓊脂培育基上。菌的瓊脂培育基上。thsluh 以無菌滴管分別在每個以無菌滴管分別在每個牛津杯內參與相應的抗牛津杯內參與相應的抗生素溶液至滿但不溢出生素溶液至滿但不溢出管外管外 且四杯內液面高度一樣，且四杯內液面高度一樣，蓋上平皿蓋，靜置蓋上平皿蓋

9、，靜置30分分鐘。鐘。 將培育基置入適宜實將培育基置入適宜實驗菌生長的培育箱中，驗菌生長的培育箱中，瓊脂培育基中的實驗瓊脂培育基中的實驗菌開場生長。菌開場生長。 抑菌圈直徑大小與抗生素濃度相關；抑菌圈直徑大小與抗生素濃度相關； 比較抗生素規(guī)范品與檢品的抑菌圈大小，比較抗生素規(guī)范品與檢品的抑菌圈大小，可計算出抗生素的效價?？捎嬎愠隹股氐男r。 計算檢品的效價 求出求出W和和V W=SH+TH-SL+TL V=TH+TL-SH+SL TH供試品高劑量的抑菌圈供試品高劑量的抑菌圈 TL供試品低劑量的抑菌圈供試品低劑量的抑菌圈 SH規(guī)范品高劑量的抑菌圈規(guī)范品高劑量的抑菌圈 SL規(guī)范品低劑量的抑菌圈規(guī)范品低劑量的抑菌圈 求出求出=D logIV/W 供試品和規(guī)范品