2022執(zhí)業(yè)獸醫(yī)考試高分復(fù)習材料6-7病毒學

1、第六單元第六單元病毒基本特性病毒基本特性 南京農(nóng)業(yè)大學南京農(nóng)業(yè)大學張張 煒煒病毒的結(jié)構(gòu)病毒的結(jié)構(gòu)n病毒的基本結(jié)構(gòu)病毒的基本結(jié)構(gòu)n病毒的化學組成病毒的化學組成n病毒的分類病毒的分類病毒的感染病毒的感染n急性感染急性感染n持續(xù)性感染持續(xù)性感染病毒的增殖病毒的增殖n病毒的培養(yǎng)方法及其特點病毒的培養(yǎng)方法及其特點n病毒的細胞培養(yǎng)病毒的細胞培養(yǎng)n病毒感染后產(chǎn)生的細胞病病毒感染后產(chǎn)生的細胞病變、包含體及空斑變、包含體及空斑第第1節(jié)節(jié) 病毒的結(jié)構(gòu)病毒的結(jié)構(gòu)病毒的基本結(jié)構(gòu)病毒的基本結(jié)構(gòu)病毒的化學組成病毒的化學組成病毒的分類病毒的分類一、病毒的結(jié)構(gòu)特征一、病毒的結(jié)構(gòu)特征n核衣殼：核衣殼：由核酸組成的由核酸組成的芯

2、髓（芯髓（corecore）被被衣殼衣殼 qiaoqiao（capsidcapsid）包裹，衣殼與芯髓在一起組包裹，衣殼與芯髓在一起組成核衣殼成核衣殼（nucleocapsidnucleocapsid）n囊膜囊膜: :有些病毒在核衣殼外面有有些病毒在核衣殼外面有囊膜（囊膜（envelopeenvelope）。囊膜是病毒在成熟過程中從宿主細胞獲得的，含囊膜是病毒在成熟過程中從宿主細胞獲得的，含有宿主細胞膜或核膜的化學成分。有囊膜的病毒有宿主細胞膜或核膜的化學成分。有囊膜的病毒稱為稱為囊膜病毒（囊膜病毒（enveloped virusenveloped virus），），無囊膜的病無囊膜的病毒稱毒

3、稱裸露病毒（裸露病毒（naked virusnaked virus）。病毒顆粒結(jié)構(gòu)模式圖病毒顆粒結(jié)構(gòu)模式圖纖突纖突囊膜囊膜殼粒殼粒衣殼衣殼核衣殼核衣殼芯髓芯髓螺旋對稱型螺旋對稱型（Helical SymmetryHelical Symmetry）二十面體立體對稱型二十面體立體對稱型（ IcosahedralIcosahedral Symmetry Symmetry ） 復(fù)合對稱型復(fù)合對稱型（Complex Symmetry Complex Symmetry ）衣殼類型衣殼類型二、病毒的化學組成二、病毒的化學組成n1.1.核酸：核酸：DNADNA或或RNARNA，分為單股或雙股，線，分為單股或雙

4、股，線狀或環(huán)狀，分節(jié)段或不分節(jié)段。正鏈或負狀或環(huán)狀，分節(jié)段或不分節(jié)段。正鏈或負鏈。鏈。n2. 2. 蛋白質(zhì)：蛋白質(zhì)：結(jié)構(gòu)蛋白和非結(jié)構(gòu)蛋白結(jié)構(gòu)蛋白和非結(jié)構(gòu)蛋白n3.3.脂質(zhì)與糖。脂質(zhì)與糖。核核 酸酸n病毒核酸分兩類病毒核酸分兩類 DNADNA或或RNARNA 二者不同時存在二者不同時存在 注意：決定核酸是注意：決定核酸是RNARNA還是還是DNADNA的是的是核苷酸核苷酸的的 組成，而不是一條鏈還是兩條鏈組成，而不是一條鏈還是兩條鏈核酸分子數(shù)和股數(shù)可分核酸分子數(shù)和股數(shù)可分n單股單股 或雙股或雙股:單雙股單雙股DNADNA或或RNARNA n線狀或環(huán)狀線狀或環(huán)狀n分節(jié)段分節(jié)段 或不或不分節(jié)段分節(jié)段

5、 即核酸是一個分即核酸是一個分子或多個分子子或多個分子結(jié)構(gòu)蛋白結(jié)構(gòu)蛋白（structural protein） n約占病毒總重量的約占病毒總重量的70%，少數(shù)低至，少數(shù)低至30%40%。n病毒蛋白質(zhì)構(gòu)成全部衣殼成分和囊膜的主要成分，病毒蛋白質(zhì)構(gòu)成全部衣殼成分和囊膜的主要成分，具有保護病毒核酸的功能。具有保護病毒核酸的功能。n衣殼蛋白、囊膜蛋白或纖突蛋白可特異地吸附至衣殼蛋白、囊膜蛋白或纖突蛋白可特異地吸附至易感細胞受體并促使病毒穿入細胞，是決定病毒易感細胞受體并促使病毒穿入細胞，是決定病毒對宿主細胞嗜性的重要因素。對宿主細胞嗜性的重要因素。n病毒蛋白質(zhì)是良好的抗原，可激發(fā)機體發(fā)生免疫病毒蛋白質(zhì)

6、是良好的抗原，可激發(fā)機體發(fā)生免疫應(yīng)答。應(yīng)答。非結(jié)構(gòu)蛋白非結(jié)構(gòu)蛋白（nonstructural protein）n是指病毒組份之外的蛋白，在病毒復(fù)制過程中的是指病毒組份之外的蛋白，在病毒復(fù)制過程中的某些中間產(chǎn)物，具有酶的活性或其它功能。某些中間產(chǎn)物，具有酶的活性或其它功能。n非結(jié)構(gòu)蛋白的作用和應(yīng)用價值近年來已逐步被了非結(jié)構(gòu)蛋白的作用和應(yīng)用價值近年來已逐步被了解，例如冠狀病毒和流感病毒的非結(jié)構(gòu)蛋白有一解，例如冠狀病毒和流感病毒的非結(jié)構(gòu)蛋白有一定的抗宿主免疫功能，有助于病毒在體內(nèi)復(fù)制。定的抗宿主免疫功能，有助于病毒在體內(nèi)復(fù)制。n再如口蹄疫病毒的非結(jié)構(gòu)蛋白再如口蹄疫病毒的非結(jié)構(gòu)蛋白3ABC僅存在于感僅

7、存在于感染動物，檢測其抗體可區(qū)分野毒感染與疫苗接種染動物，檢測其抗體可區(qū)分野毒感染與疫苗接種的動物。的動物。核核 酸酸n病毒的核酸分兩大類，病毒的核酸分兩大類， DNADNA或或RNARNA 二者不同時存在二者不同時存在 n核酸可分核酸可分單股單股 或雙股或雙股: 單雙股單雙股DNA或或RNA 線狀線狀 或環(huán)狀或環(huán)狀 分節(jié)段分節(jié)段 或不分節(jié)段或不分節(jié)段 即核酸是一個分子或多個分子即核酸是一個分子或多個分子三、病毒的分類三、病毒的分類n國際病毒分類委員會國際病毒分類委員會（International International committee on taxonomy of viruses,

8、committee on taxonomy of viruses, ICTVICTV），），是國際公認的病毒分類與命名的是國際公認的病毒分類與命名的權(quán)威機構(gòu)。權(quán)威機構(gòu)。n19611961年年LooperLooper建議，建議，以病毒核酸作為病毒以病毒核酸作為病毒分類的首要標準，分類的首要標準，從此病毒分類開始形成從此病毒分類開始形成較合理的框架。較合理的框架。 分類的機構(gòu)及標準分類的機構(gòu)及標準n19661966年建立了國際病毒命名委員會年建立了國際病毒命名委員會（ICNVICNV），），19731973年更名為國際病毒分類委年更名為國際病毒分類委員會員會（International commi

9、ttee on International committee on taxonomy of viruses, ICTVtaxonomy of viruses, ICTV），），作為作為國際國際公認的病毒分類與命名的權(quán)威機構(gòu)。公認的病毒分類與命名的權(quán)威機構(gòu)。n迄今為止，迄今為止，ICTVICTV共出版共出版8 8次分類報告。次分類報告。n其命名與細菌不同，不再采用拉丁文雙名其命名與細菌不同，不再采用拉丁文雙名法，而是采用英文或英語化的拉丁文，只法，而是采用英文或英語化的拉丁文，只用單名用單名n根據(jù)根據(jù)ICTVICTV的分類報告，目前把已知病毒分為的分類報告，目前把已知病毒分為289289個個屬

10、、屬、7373個科。個科。n脊椎動物病毒為主的有脊椎動物病毒為主的有2727科，無脊椎動物為主的科，無脊椎動物為主的有有5 5科，科，n其余分別為植物病毒、細菌病毒（噬菌體）、真其余分別為植物病毒、細菌病毒（噬菌體）、真菌病毒，藻類和霉形體病毒。菌病毒，藻類和霉形體病毒。n科下設(shè)屬，有的科還分亞科，科下設(shè)屬，有的科還分亞科，科和屬是病毒分類科和屬是病毒分類的最主要單位。的最主要單位。第第6 6次分類報告起，把病次分類報告起，把病毒分為三大類：毒分為三大類：nDNADNA病毒類病毒類nDNADNA反轉(zhuǎn)錄反轉(zhuǎn)錄與與RNARNA反轉(zhuǎn)反轉(zhuǎn)錄病毒類錄病毒類nRNARNA病毒類。病毒類。第第7 7次分類報

11、告起在部分科次分類報告起在部分科之上建立了之上建立了3 3個目，個目，n尾病毒目尾病毒目（CaudoviralesCaudovirales）- -噬菌體噬菌體n單負股病毒目單負股病毒目“MononegaviralesMononegavirales”n套式病毒目套式病毒目“NidoviriralesNidovirirales”第第2 2節(jié)節(jié) 病毒的增殖病毒的增殖一、病毒的培養(yǎng)方法及其特點一、病毒的培養(yǎng)方法及其特點n病毒是嚴格細胞內(nèi)寄生的生物，所以病毒病毒是嚴格細胞內(nèi)寄生的生物，所以病毒的培養(yǎng)需要在的培養(yǎng)需要在活體內(nèi)進行活體內(nèi)進行。n細胞培養(yǎng)細胞培養(yǎng)、雞胚雞胚和和實驗動物實驗動物可用于病毒的可用于

12、病毒的分離與培養(yǎng)，其中細胞培養(yǎng)是用于病毒分分離與培養(yǎng)，其中細胞培養(yǎng)是用于病毒分離與培養(yǎng)最常用的方法。離與培養(yǎng)最常用的方法。動物細胞培養(yǎng)一般流程動物細胞培養(yǎng)一般流程二、病毒的細胞培養(yǎng)二、病毒的細胞培養(yǎng)n細胞類型：用于病毒分離與培養(yǎng)的細胞有細胞類型：用于病毒分離與培養(yǎng)的細胞有原代細胞原代細胞、二倍體細胞株二倍體細胞株和和傳代細胞系傳代細胞系，一般說來，本動物的原代細胞最為敏感，一般說來，本動物的原代細胞最為敏感，但不如但不如傳代細胞傳代細胞方便易得。方便易得。n培養(yǎng)方法：培養(yǎng)方法：靜置培養(yǎng)；靜置培養(yǎng)；旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)；懸浮培養(yǎng)；懸浮培養(yǎng)；微載體培養(yǎng)微載體培養(yǎng) 疫苗疫苗三、病毒感染后產(chǎn)生的細胞病變、

13、三、病毒感染后產(chǎn)生的細胞病變、包含體包含體及空班及空班n細胞病變細胞病變 病毒感染導(dǎo)致的細胞損傷稱為細胞病變病毒感染導(dǎo)致的細胞損傷稱為細胞病變n包含體包含體 是指某些病毒感染細胞產(chǎn)生的特征性的形是指某些病毒感染細胞產(chǎn)生的特征性的形態(tài)變化，可能過固定染色而后在光學顯微態(tài)變化，可能過固定染色而后在光學顯微鏡下檢測。鏡下檢測。n空斑空斑【菌落？【菌落？】 將將1010倍梯度稀釋的病毒樣本接種吸附于單層細倍梯度稀釋的病毒樣本接種吸附于單層細胞，而后在細胞上覆蓋一層含營養(yǎng)液的瓊脂，以胞，而后在細胞上覆蓋一層含營養(yǎng)液的瓊脂，以防止游離的病毒通過營養(yǎng)液擴散，但病毒可在細防止游離的病毒通過營養(yǎng)液擴散，但病毒可

14、在細胞間傳遞。胞間傳遞。 經(jīng)過一段時間培養(yǎng)，進行染色，原先感染病毒經(jīng)過一段時間培養(yǎng)，進行染色，原先感染病毒的細胞及病毒擴散的周圍細胞會形成一個近似圓的細胞及病毒擴散的周圍細胞會形成一個近似圓形的斑點，類似固體培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)，稱為形的斑點，類似固體培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)，稱為空斑或蝕斑蝕斑（空斑或蝕斑蝕斑（plaqueplaque）。）。第3節(jié) 病毒的感染n急性感染急性感染 也稱病原消滅型感染也稱病原消滅型感染n持續(xù)性感染持續(xù)性感染潛伏感染潛伏感染慢性感染慢性感染慢發(fā)病毒感染慢發(fā)病毒感染遲發(fā)性臨診癥狀的急性感染遲發(fā)性臨診癥狀的急性感染第七單元第七單元 病毒的檢測病毒的檢測 病料的采集與準備病料的

15、采集與準備n樣本的采集與病毒分樣本的采集與病毒分離前的處理離前的處理病毒的分離和鑒定病毒的分離和鑒定n病毒的分離和培養(yǎng)病毒的分離和培養(yǎng)n病毒的鑒定病毒的鑒定病毒感染單位的測定病毒感染單位的測定n空斑試驗空斑試驗n終點稀釋法終點稀釋法病毒感染的血清學診斷病毒感染的血清學診斷方法方法n病毒中和試驗病毒中和試驗n血凝抑制試驗血凝抑制試驗n免疫組化技術(shù)免疫組化技術(shù)n免疫轉(zhuǎn)印技術(shù)免疫轉(zhuǎn)印技術(shù)n酶聯(lián)免疫吸附試驗酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISAELISA）病毒感染的分子診斷病毒感染的分子診斷n聚合酶鏈式反應(yīng)（聚合酶鏈式反應(yīng)（PCRPCR）及序列分析及序列分析n核酸雜交核酸雜交DNADNA芯片芯片n病毒病毒dna

16、 or rnadna or rnan病毒感染的檢測病毒感染的檢測n病毒血清學檢測病毒血清學檢測n病毒的分子檢測與診斷病毒的分子檢測與診斷第1節(jié) 病料的采集與準備樣本的采集與病毒分離前的處理樣本的采集與病毒分離前的處理n采集的采集的器官或組織樣本器官或組織樣本如肺臟、腦、肝、脾、淋巴結(jié)等，如肺臟、腦、肝、脾、淋巴結(jié)等，可取一小塊進行充分研磨，加入含青、鏈霉素的可取一小塊進行充分研磨，加入含青、鏈霉素的Hanks?Hanks?液，液，離心取上清液作為接種物；離心取上清液作為接種物； 培養(yǎng)培養(yǎng)n鼻液、膿汁、乳液汁等鼻液、膿汁、乳液汁等分泌物或滲出液分泌物或滲出液、糞便，應(yīng)加入高、糞便，應(yīng)加入高濃度的

17、抗生素，充分混勻后，置濃度的抗生素，充分混勻后，置4 4度冰箱內(nèi)處理度冰箱內(nèi)處理2424小時或小時或過夜，離心后取上清作接種用；過夜，離心后取上清作接種用；n拭子拭子在取樣后應(yīng)迅速將其浸泡入含有在取樣后應(yīng)迅速將其浸泡入含有2%2%犢牛血清和一定濃犢牛血清和一定濃度的青、鏈霉素的度的青、鏈霉素的HanksHanks液中，充分涮洗棉拭子，反復(fù)凍液中，充分涮洗棉拭子，反復(fù)凍融融3-53-5次，離心后取上清液作為接種材料。次，離心后取上清液作為接種材料。第2節(jié) 病毒的分離和鑒定n病毒的分離和培養(yǎng)：病毒的分離和培養(yǎng)：細胞培養(yǎng)細胞培養(yǎng)；雞胚雞胚；實實驗動物驗動物n采用細胞培養(yǎng)進行病毒分離時，采用細胞培養(yǎng)進行病毒分離時，應(yīng)盲傳應(yīng)盲傳3 3代代二、病毒的鑒定n病毒形態(tài)學鑒定：病毒形態(tài)學鑒定：電鏡電鏡n病毒的血清學鑒定：病毒的血清學鑒定：中和試驗中和試驗、血凝抑制血凝抑制試驗試驗、免疫熒光免疫熒光等。等。n分子生物學鑒定：分子生物學鑒定：PCRPCRn病毒特性的測定：病毒特性