色譜柱的故障診斷與維護(hù)

1、1色譜柱的故障診斷與維護(hù)色譜柱的故障診斷與維護(hù)液相色譜柱部分2I. 常見(jiàn)問(wèn)題常見(jiàn)問(wèn)題 基線噪音基線噪音可能的原因：可能的原因：流動(dòng)池臟檢測(cè)器燈有問(wèn)題如果是周期性的，則起源于泵的脈沖溫度對(duì)檢測(cè)器的影響氣泡經(jīng)過(guò)檢測(cè)器Time (min.)3基線漂移基線漂移 梯度洗脫 溫度不穩(wěn)定 (示差檢測(cè)器） 流動(dòng)相中有污染物 柱中的流動(dòng)相沒(méi)有平衡 體系中有污染物流出可能的原因：可能的原因：4鬼鬼 峰峰 鬼峰即使不進(jìn)樣也會(huì)出現(xiàn)的峰20% - 100% MeOH沒(méi)有進(jìn)樣601530150371517問(wèn)題1- 流動(dòng)相臟問(wèn)題2- 樣品過(guò)量(也可能是回收率太差)5峰峰 型型雙 峰柱 塌 陷正 常 峰 雙 峰柱中有死體積

2、過(guò)濾片部分堵塞只有一個(gè)雙峰組分的共洗脫可能原因：可能原因：樣品與溶劑不匹配6峰峰 型型所有的峰都展寬柱效降低柱死體積大進(jìn)樣量 / 質(zhì)量高捻度流動(dòng)相部分峰展寬前次進(jìn)樣后流出的組分大分子量樣品蛋白或聚合物峰展寬樣品與流動(dòng)相不匹配7峰峰 型型拖尾峰對(duì)稱性 1.2NormalTailingNormalTailing原因：原因：部分峰拖尾二次保留效應(yīng)殘留硅醇基的反應(yīng)小峰緊跟在大峰的后面流出柱頭有污染金屬所有峰拖尾額外的柱效應(yīng)柱損壞不適當(dāng)?shù)臉悠妨?溶劑8峰峰 型型正常峰伸舌峰前伸峰不對(duì)稱性 強(qiáng)有機(jī)溶劑) 通常最有效l低 pH 流動(dòng)相, 如 0.1% TFA or 0.01M H3PO4, 也是有效的l升高

3、溫度（60-80）20l6M鹽酸胍、異硫氰酸胍、尿素等溶液可用于清除蛋白質(zhì)的沉積lXDB, 有機(jī)聚合物等填料可使用高pH 水溶液 /有機(jī)溶液，如： 0.01M NaOH 50% 異丙醇 /水溶液，硅膠基質(zhì)應(yīng)盡量減少接觸時(shí)間 (15-30 min).色譜柱的修復(fù)和再生色譜柱的修復(fù)和再生 - 化學(xué)變化化學(xué)變化 -IIExample: 4.6 mm ID x 15 cm Zorbax 300SB-C18Flow rate: 1 mL / min; Temp: 80A: 0.1% TFA in water B: 0.1% TFA in acetonitrile100% A for 30 min.; 0-100% B over 30 min.; Hold 100% B for 30 min., Return to 100% A in 5 min.Repeat 3 times.21 總總 結(jié)結(jié)如果使用時(shí)加以注意，大部分的液相色譜柱的問(wèn)題是可以預(yù)防的- 流動(dòng)相必須是互溶的，無(wú)顆粒- 使用保護(hù)柱和在線過(guò)濾器，并定期更換- 使用恰當(dāng)?shù)臉悠分苽浞椒? 使用恰當(dāng)?shù)纳V柱清洗程序- 不同類型的色譜柱，請(qǐng)選擇不同的操作條件 (如： SB: pH 1-6, XDB: pH