優(yōu)化方案2017版高考生物大一輪復習第十二單元生物技術(shù)實踐第43講微生物的培養(yǎng)與應用講義

1、第 43 講微生物的培養(yǎng)與應用I弋J.,11. I 1.微生物的分離和培養(yǎng)2.培養(yǎng)基對微生物的選擇作用進行發(fā)酵來生產(chǎn)特定的產(chǎn)物研析教材T夯基固本_學生用書P295)基礎梳理3.利用微生物課本隘故知識融逋一、微生物的實驗室培養(yǎng)A拉圭苴I培養(yǎng)基(1)概念：人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)。(2)營養(yǎng)構(gòu)成：一般都含有水、碳源源和無機鹽。此外還要滿足微生物生長對pH特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。(3)種類：按照物理性質(zhì)可分為液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基。2.無菌技術(shù)(1)含義：指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。(2)關(guān)鍵：防止外來雜菌的入侵。方法煮沸

2、消毒法 沖主巴氏消毒法 消毒化學藥劑消毒法紫外線消毒法灼燒滅菌滅菌干熱滅菌.高壓蒸汽滅菌3大腸桿菌的純化培養(yǎng)(1)制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基 計算T稱量亍溶化T滅菌二倒平板。(2)純化大腸桿菌1關(guān)鍵的步驟是接種。2純化培養(yǎng)方法：平板劃線法和稀釋涂布平板法。純化培養(yǎng)原理：在培養(yǎng)基上得到由一個細胞繁殖而來的肉眼可見的菌落,即可獲得較純的菌種。3二、 土壤中分解尿素的細菌的分離和計數(shù)1分離原理：土壤中細菌之所以能分解尿素，是由于它們能合成脲酶，這種物質(zhì)在把尿素分解成無機物的過程中起催化作用。以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基能促進分解尿素的細菌的生長和繁殖，并抑制或阻止其他微生物的生長，從而將目的菌分離。2統(tǒng)

3、計菌落數(shù)目：統(tǒng)計樣品中的活菌一般用稀釋涂布平板法。3實驗流程：土壤取樣T制備培養(yǎng)基T微生物的培養(yǎng)與觀察T細菌的計數(shù)。三、 分解纖維素的微生物的分離1.纖維素酶（1）組成：纖維素酶是一種復合酶，它包括Cl酶、CX酶和葡萄糖苷酶。作用纖堆索沁運細 5 獨理臓糠2.菌種篩選方法：剛果紅染色法。原理纖維素分解菌即：使用以纖維素為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基，根據(jù)是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌。3篩選流程土壤取樣：富含纖維素的環(huán)境選擇培養(yǎng)：用選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)，以增加纖維素分解菌的數(shù)量梯度稀釋涂布平板：將樣品涂布于含CR的鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上挑選產(chǎn)生透明圈的菌落：產(chǎn)生纖維素酶的菌落周圍出現(xiàn)透明圈微觀清障1.

4、 （2016北京海淀區(qū)期末）培養(yǎng)基中一般都含有水、 碳源、氮源和無機鹽四種成分。（V）2將土壤浸出液涂布在無菌的選擇培養(yǎng)基上分離分解尿素的細菌，是否無菌操作影響 較小。（V）3.培養(yǎng)基分裝到培養(yǎng)皿后進行火菌。（X）4從有機廢水中分離微生物用于廢水處理時，接種后的培養(yǎng)皿須放在光照培養(yǎng)箱中培 養(yǎng)。（X）5外植體消毒的原則是既殺死材料表面的微生物，又減少消毒齊I對細胞的傷害。（V）6.（2015高考四川卷T3D）用稀釋涂布平板法培養(yǎng)計數(shù)，應選擇有30300菌落數(shù)的 平板。（V）7. （2016山東青島市期末）篩選能分解尿素的細菌所利用的培養(yǎng)基中，尿素是唯一的氮源。(V)剛果紅纖維素T紅色復合物纖維素

5、酶- 紅色消失、出現(xiàn)透明圈。4&分解尿素的細菌在分解尿素時，可以將尿素轉(zhuǎn)化為氨，使得培養(yǎng)基的酸堿度降低。(X)9土壤中纖維素分解菌的篩選流程中的“選擇培養(yǎng)”是必不可少的。(X)10.在富含纖維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅染色劑，若出現(xiàn)周圍存在透明圈的菌落，則說明篩選到了分解纖維素的微生物。(V)重難透析*命題破譯考點一培養(yǎng)基及微生物的純化培養(yǎng)技術(shù)學生用書P296要點講解,1.培養(yǎng)基的種類(1)按物理狀態(tài)分類培養(yǎng)基種類特點用途液體培養(yǎng)基不加凝固劑工業(yè)生產(chǎn)固體培養(yǎng)基加凝固劑微生物分離、鑒定， 活菌計數(shù)，菌種保藏半固體培養(yǎng)基(如瓊脂)觀察微生物的運動、分類、鑒定(2)按功能分類種類制備方法原理用途

6、舉例選擇依據(jù)某些微生物 對某些物質(zhì)的特從眾多微生物中加入青霉素分離培養(yǎng)培養(yǎng)基中加入某 些化學物質(zhì)分離所需的微生得到酵母菌和霉基殊需求或抗性而 設計物菌鑒別 培養(yǎng) 基培養(yǎng)基中加入某 種指示劑或化學 藥品產(chǎn)生特定的顏色 或其他變化鑒別不同種類的 微生物用伊紅一美藍培 養(yǎng)基鑒別大腸桿菌2.培養(yǎng)基的配制原則(1)目的要明確：配制時應根據(jù)微生物的種類、培養(yǎng)目的等確定配制的培養(yǎng)基種類。(2)營養(yǎng)要協(xié)調(diào)：注意各種營養(yǎng)物質(zhì)的濃度和比例。(3) pH要適宜：細菌為6.57.5，放線菌為7.58.5，真菌為5.06.0，培養(yǎng)不同微 生物所需pH不同。3.消毒與滅菌條件結(jié)果常用方法應用范圍消毒較為溫和的物理或化學方

7、法僅殺死物體表面或內(nèi)部的部分對人體有害的微生煮沸消毒法日常用品巴氏消毒法不耐咼溫的液 體5物化學藥劑消毒 法用酒精擦拭雙 手，用氯氣消毒 水源火菌強烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所 有的微生物，包括 芽孢和孢子灼燒滅 菌法接種工具干熱滅 菌法玻璃器皿、金屬 工具咼壓蒸汽火菌 法培養(yǎng)基及容器4.大腸桿菌的純化( 1 )原 理 ： 在 培 養(yǎng) 基 上 將 細 菌 稀 釋 或 分 散 成 單 個 細 胞 ， 使 其 長 成 單 個 的 菌 落 ， 這 個 菌 落就是純化的細菌菌落。(2)純化微生物的接種方法比較項目平板劃線法稀釋涂布平板法關(guān)鍵操作接種環(huán)在固體平板培養(yǎng)基表面連續(xù) 劃線一系列的梯度稀釋；涂布平

8、板法操作注意事項每次劃線前后均需灼燒接種環(huán)稀釋度要足夠咼，為確保實驗成功可 以增加稀釋度菌體獲取在具有顯者的菌洛特征的菌洛中挑取菌體從適宜稀釋度的平板上的菌落中挑取菌體優(yōu)點可以根據(jù)菌落的特點獲得某種微生物的單細胞菌落既可以獲得單細胞菌落，又能對微生 物計數(shù)缺點不能對微生物計數(shù)操作復雜，需要涂布多個平板思維拓展1.認清不同生物需要的營養(yǎng)物質(zhì)不同(1)微生物需要的營養(yǎng)成分有水、無機鹽、碳源、氮源，有些微生物還需要特殊營養(yǎng)物 質(zhì)，如生長因子。(2)在人和動物中，營養(yǎng)物質(zhì)包括水、無機鹽、糖類、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、維生素六類。(3)在植物中，營養(yǎng)物質(zhì)包括礦質(zhì)元素、水、二氧化碳三類。2平板劃線操作的注意事項(1

9、)操作第一步即取菌種之前及每次劃線之前都需要對接種環(huán)進行火焰灼燒滅菌，劃線 操作結(jié)束時，仍需灼燒接種環(huán)，每次灼燒目的如下表：-第一次操作每次劃線之間劃線結(jié)束目的殺死接種環(huán)上原有的微生物殺死上次劃線后接種 環(huán)上殘留的菌種，使 下次劃線的菌種直接 來源于上次劃線的末端，使每次劃線菌種 數(shù)目減少殺死接種環(huán)上殘存的 菌種，避免細菌污染 環(huán)境和感染操作者(2)灼燒接種環(huán)，待其冷卻后才能伸入菌液，以免溫度太高殺死菌種。第二次及其以后的劃線操作總是從上一次劃線末端開始，能使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐漸減少，最終得到由單個細菌繁殖而來的菌落。(4)劃線時最后一區(qū)不要與第一區(qū)相連。6劃線用力大小要適當，防

10、止用力過大將培養(yǎng)基劃破。題組突(2016山東煙臺市統(tǒng)考)為了調(diào)查某河流的水質(zhì)狀況，某研究小組測定了該河流水樣中的細菌含量，并進行了細菌分離等工作。回答下列問題：(1)該小組采用稀釋涂布平板法檢測水樣中的細菌含量。在涂布接種前，隨機取若干滅 菌后的空白平板先行培養(yǎng)了一段時間，這樣做的目的是(2)該小組采用平板劃線法分離水樣中的細菌，操作時，接種環(huán)通過_ 滅菌。在第二次及以后的劃線時，總是從上一次劃線的末端開始劃線。這樣做的目的是(3)_示意圖A和B中，表示的是用稀釋涂布平板法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果。(4)該小組將得到的菌株接種到液體培養(yǎng)基中并混勻，一部分進行靜置培養(yǎng)，另一部分 進行振蕩培養(yǎng)。結(jié)果發(fā)

11、現(xiàn)：振蕩培養(yǎng)的細菌比靜置培養(yǎng)的細菌生長速度快。分析其原因是：振蕩培養(yǎng)能提高培養(yǎng)液中 _ 的含量，同時可使菌體與培養(yǎng)液充分接觸，提高_的利用率。(5)該小組從(3)B培養(yǎng)基中獲得甲、乙、丙三種微生物，并分別用I、川三種培養(yǎng) 基來培養(yǎng)。甲、乙、丙都能在川中正常生長繁殖，甲能在I中正常生長繁殖，而乙和丙都不 能；乙能在n中正常生長繁殖，甲、丙都不能。培養(yǎng)基的成分如下：成分In出粉狀硫10 g+KHPQ4 g+FeSQ0.5 g+蔗糖10 g+一+(NH4)2SQ0.4 g一+H2Q 100 mL+MgSQ9.25 g+CaCl20.5 g+貝y甲是_ 微生物，乙是_微生物，丙是_微生物。解析：(1)

12、為了檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格，可在涂布接種前，隨機取滅菌后的空白 平板先行培養(yǎng)一段時間。(2)接種環(huán)、接種針等金屬用具可直接在酒精燈火焰的充分燃燒層 灼燒，以達到迅速徹底滅菌的目的。在第二次及以后的劃線時，總是從上一次劃線的末端開始劃線，其目的是將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個菌落。(3)比較A和B可以看出：A培養(yǎng)基中細菌的分布呈線性，是用平板劃線法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果；B培養(yǎng)基中細菌均勻分布，是用稀釋涂布平板法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果。(4)振蕩培養(yǎng)可以提高培養(yǎng)液中溶解氧的含量，還可以使菌體與培養(yǎng)液充分接觸，提高了營養(yǎng)物質(zhì)的利用率，因此振蕩培養(yǎng)的細菌比靜置培養(yǎng)的細菌生長速度快。(5)從表格中可

13、看出，1培養(yǎng)基中無氮源，n中無碳源，川7中為完全培養(yǎng)基。由此可知能在I中生存的甲只能是固氮微生物，能在n中生存的乙是自養(yǎng)微生物，丙只在川中存活，為異養(yǎng)微生物。答案：(1)檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格(2)灼燒將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個菌落(3) B (4)溶解氧營養(yǎng)物質(zhì)(5)固氮自養(yǎng)異養(yǎng)考點二微生物的計數(shù)方法學生用書P298要點講解r1兩種計數(shù)方法的比較囂間接計數(shù)法(稀釋涂布平板法)直接計數(shù)法(顯微計數(shù)法)原理當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基 表面生長的一個菌落，來源于樣品 稀釋液中的一個活菌，通過統(tǒng)計平 板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌利用特定細菌計數(shù)板或血細胞計數(shù) 板，在顯

14、微鏡下計算一定容積的樣 品中微生物的數(shù)量公式每克樣品中的菌落數(shù)=(C+V)XMC:某稀釋度下平板上生長的平均菌 落數(shù)；V:涂布平板時所用的稀釋液 的體積(mL);M稀釋倍數(shù)每毫升原液所含細菌數(shù)： 每小格平 均細菌數(shù)X400 x104x稀釋倍數(shù)缺點當兩個或多個菌體連在一起時，平 板上觀察到的只是一個菌落不能區(qū)分細胞死活結(jié)果比實際值偏小比頭際值偏大2.設置對照和重復比較項目對照重復目的排除非測試因素對實驗結(jié)果的影響排除偶然因素對實驗結(jié)果的影響 實例空白對照：確定培養(yǎng)基制作是否合格同一稀釋度涂布至少3個平板錯混辨折“選擇菌落數(shù)在30300的平板”的兩個提醒用稀釋涂布平板法計數(shù)微生物時，要求選擇菌落數(shù)

15、在30300的平板進行計數(shù)。解題時易出現(xiàn)以下誤解：(1)只得到1個菌落數(shù)在30300的平板是錯誤的。錯誤的原因是不符合實驗的重復原 則，易受到偶然因素的影響。(2)得到3個或3個以上菌落數(shù)在30300的平板，也不一定正確，這可能有兩種情況：1不同平板間差異較大，如得到3個平板，菌落數(shù)分別為230、34、240,雖然菌落數(shù)均在“30300”，這也是不正確的，因為“34”與“230”“240”差異太大，應重新實驗 找出原因。2不同平板之間差異不大，是符合要求的，用其平均值作為估算的最終結(jié)果?？梢?，并不是只要得到3個“菌落數(shù)在30300的平板”即可，而應該是涂布的同一稀 釋度的平板均符合“菌落數(shù)在3

16、0300的平板”且無較大差異， 說明實驗操作合格，才能按8題組突破牛奶是微生物生長的良好培養(yǎng)基。 牛奶在飲用前都要經(jīng)過巴氏消毒，以殺死有害微生物。為檢測消毒前后牛奶中細菌含量變化情況，做如圖所示操作。用無菌吸管從錐形瓶中吸取1mL生牛奶稀釋液至盛有9 mL無菌水的試管中，混合均勻，如此再重復2次。請回答下列有關(guān)問題：巴氏消毒的方法是(2)取最終的牛奶稀釋液0.1 mL滴在培養(yǎng)基上進行涂布,(3)圖中所示方法為稀釋培養(yǎng)法，理想情況下，培養(yǎng)一段時間后可在培養(yǎng)基表面形成菌落。若用該方法培養(yǎng)設置了3個培養(yǎng)皿，菌落數(shù)分別為35個、33個、34個，則可以推測生牛奶中每毫升含細菌數(shù)為 _ 個，運用這種方法統(tǒng)

17、計的結(jié)果往往較實際值 _(填“偏大”或“偏小”)，原因是 _。(4)從生牛奶取樣培養(yǎng)得到的菌落中，混有各種雜菌，從中檢測大腸桿菌的方法是在培養(yǎng)基中加入 _ ，菌落具有 _特征的可以認定為大腸桿菌。答案：(1)7075C煮30分鐘(或80C煮15分鐘)牛奶的營養(yǎng)成分不被破壞(2)B(3)3.4X106偏小個別菌落可能是由2個或多個細菌形成的伊紅一美藍(金屬光澤的紫)黑色考點三 微生物的篩選與鑒別學生用書P299要點講解1.微生物的鑒別方法(1)菌落特征鑒別法：根據(jù)微生物在固體平板培養(yǎng)基表面形成的菌落的形狀、大小、隆 起程度和顏色等特征進行鑒別。(2)指示劑鑒別法：如以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入

18、酚紅指示劑，培養(yǎng)某種微生物 后，培養(yǎng)基變紅說明該種微生物照計算公式進行計算。,使用這種方法對生鮮牛奶進行消毒的好處是 _應選擇的涂布工具是下圖中的(:D9能夠分解尿素。(3)染色鑒別法：如利用剛果紅染色法，根據(jù)培養(yǎng)基中出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈來篩選分解纖維素的微生物。2.篩選微生物的三種方法(1)單菌落挑取法：利用平板劃線法或稀釋涂布平板法接種到固體平板培養(yǎng)基表面，直 接根據(jù)微生物菌落的特征利用單菌落挑取的方法獲得目的微生物。(2)選擇培養(yǎng)法：利用選擇培養(yǎng)基對微生物進行選擇培養(yǎng)，直接獲得目的微生物。(3)鑒定培養(yǎng)法：利用鑒別培養(yǎng)基使目的微生物菌落呈現(xiàn)特有的特征，然后篩選目的微 生物。3

19、.篩選微生物的兩個實例比較囂土壤中分解尿素 的細菌的分離分解纖維素的微生物的分離方法利用以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng) 基進行選擇培養(yǎng)利用富含纖維素的選擇培養(yǎng)基進行 選擇培養(yǎng)原理只有分解尿素的細菌能夠合成脲 酶，才能在以尿素為唯一氮源的培 養(yǎng)基上牛長因為培養(yǎng)基中含有豐富的纖維素，因此能夠分解纖維素的微生物具有 更多的生存機會而大量繁殖鑒別在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，指示 劑變紅說明菌洛中的菌體為分解尿 素的細菌剛果紅染色法，周圍出現(xiàn)透明圈的 菌落為分解纖維素的微生物的菌落題組突破(2016陜西長安一中等五校一模)研究者初步篩選到能合成纖維素酶的菌株MC-1,回答以下問題：(1)為了獲得能合成纖維素酶

20、的單菌落，可采用 _ 法將初篩菌液接種在以纖維素為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上，這種培養(yǎng)基屬于 _培養(yǎng)基。(2)下列關(guān)于制備固體培養(yǎng)基的敘述，錯誤的是 _ 。A.制備固體培養(yǎng)基時可以加入瓊脂B.操作的順序為計算、稱量、溶化、倒平板、滅菌C.待培養(yǎng)基冷卻至50C左右時進行倒平板D.待平板冷卻凝固約510 min后將平板倒過來放置(3)實驗過程中如何防止其他微生物的污染？下表的培養(yǎng)液pH均為4.8，若對MC-1中纖維素酶的活力進行測定，則不能選擇表中的_ 培養(yǎng)液。(多選)培養(yǎng)液ABCD纖維素25 g/L一25 g/L25 g/L纖維素酶一一1ug/L一NaNO一3 g/L一3 g/L牛肉膏一一3 g/L

21、一10KzHPQ1 g/L1 g/L1 g/L1 g/LKCl0.5 g/L0.5 g/L0.5 g/L0.5 g/LMgSQ1 g/L1 g/L1 g/L1 g/L7fOFeSQ0.01 g/L0.01 g/L0.01 g/L0.01 g/L（5）分離獲得了具有較高纖維素酶活性的菌株MC-1,為了在此基礎上獲得纖維素酶活性更高的菌株，最可行的做法是（6）某同學在培養(yǎng)過程中發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上感染了幾種細菌。若在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入_指示劑培養(yǎng)幾種菌后，指示劑變紅就可以鑒定其中含有能夠分解尿素的細菌；若在以纖維素為唯一碳源的培養(yǎng)基中加入 _ 染料，培養(yǎng)后，培養(yǎng)基中出現(xiàn)透明圈，就可以鑒定其中含

22、有纖維素分解菌。答案：（1）涂布平板 選擇（2）B （3）培養(yǎng)基滅菌、接種過程中進行無菌操作（4）A、B C （5）人工誘變（紫外線照射等）處理菌株，再進行篩選（6）酚紅 剛果紅- 稱題細做固本提能_,學生用書P300）1.（2015高考全國卷I）已知微生物A可以產(chǎn)生油脂，微生物B可以產(chǎn)生脂肪酶。脂 肪酶和油脂可用于生物柴油的生產(chǎn)?；卮鹩嘘P(guān)問題：（1）_顯微觀察時，微生物A菌體中的油脂通?？捎萌旧?。微生物A產(chǎn)生的油脂不易揮發(fā)，可選用 _（填“萃取法”或“水蒸氣蒸餾法”）從菌體中提取。（2）為了從自然界中獲得能產(chǎn)生脂肪酶的微生物B的單菌落，可從含有油料作物種子腐爛物的土壤中取樣，并應選用以 _

23、為碳源的固體培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。（3）_若要測定培養(yǎng)液中微生物B的菌體數(shù)，可在顯微鏡下用 _ 直接計數(shù)；若要測定其活菌數(shù)量，可選用 _法進行計數(shù)。為了確定微生物B產(chǎn)生的脂肪酶的最適溫度，某同學測得相同時間內(nèi)，在35C、40C、45C溫度下降解10 g油脂所需酶量依次為4 mg、1 mg、6 mg,則上述三個溫度中，_ C條件下該酶活力最小。為了進一步確定該酶的最適溫度，應圍繞 _C設 計后續(xù)實驗。解析：（1）油脂可被蘇丹川染液染成橘黃色，被蘇丹W染液染成紅色，因此油脂通常用 蘇丹川或蘇丹W染色。 不易揮發(fā)的物質(zhì)大多采用萃取法進行提取，水蒸氣蒸餾法一般用來提取易揮發(fā)的物質(zhì)。（2）能產(chǎn)生脂肪酶的微生物

24、B能利用脂肪（油脂）作為碳源，所以在制備選擇微生物B的培養(yǎng)基時，應將油脂作為唯一的碳源。（3）用顯微鏡直接對微生物進行計數(shù)，需要用血細胞計數(shù)板。如果對活菌進行計數(shù)，則要用稀釋涂布平板法涂布平板，培養(yǎng)后統(tǒng)計菌落數(shù)目，然后計算出活菌數(shù)量。（4）降解等量的油脂，需要的酶量越多，說明此溫度下的酶的活力越小。所以三種溫度中45C下酶的活力最小。從三種溫度下的實驗結(jié)果可知，40C下酶的活力最大，所以要想測定該酶的最適溫度，應圍繞該溫度設計不同溫度梯度，進行后11續(xù)實驗。答案：（1）蘇丹川（或蘇丹W）萃取法（2）油脂（3）血細胞計數(shù)板稀釋涂布平板（4）45 402.（2015高考江蘇卷，31,8分）人工瘤胃

25、模仿了牛羊等反芻動物的胃，可用來發(fā)酵 處理秸稈，提高秸稈的營養(yǎng)價值。為了增強發(fā)酵效果，研究人員從牛胃中篩選纖維素酶高產(chǎn) 菌株，并對其降解纖維素能力進行了研究。請回答下列問題：12（1）在樣品稀釋和涂布平板步驟中，下列選項不需要的是 _（填序號）。酒精燈培養(yǎng)皿顯微鏡無菌水在涂布平板時，滴加到培養(yǎng)基表面的菌懸液量不宜過多的原因是O（3）向試管內(nèi)分裝含瓊脂的培養(yǎng)基時，若試管口粘附有培養(yǎng)基，需要用酒精棉球擦凈的原因是_（4）剛果紅可以與纖維素形成紅色復合物，但并不與纖維素降解產(chǎn)物纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應。研究人員在剛果紅培養(yǎng)基平板上，篩到了幾株有透明降解圈的菌落（見下圖）。圖中降解圈大小與纖維素酶

26、的_ 有關(guān)。圖中降解纖維素能力最強的菌株是（填圖中序號（5）研究人 員 用篩 選 到的 纖 維素 酶 高產(chǎn) 菌 株測 得 發(fā)酵 液 中酶 活 性的 結(jié) 果見下圖，推 測 菌株J1和J4，在不同溫度和pH條件下進行發(fā)酵,_ 更適合用于人工瘤胃發(fā)酵，理由是51525354555657550403020105040302010J三Ed-,嚴墊龍誕磔誥丸13解析：（1）在樣品稀釋和涂布平板過程中，需要在酒精燈火焰附近進行操作，培養(yǎng)皿用于盛放培養(yǎng)基并培養(yǎng)細菌，無菌水做稀釋的溶劑，此處唯一用不到的是顯微鏡。（2）在涂布14平板時，要取少量菌懸液滴加到培養(yǎng)基表面，因為如果滴加菌懸液過多，菌懸液就會堆積在培養(yǎng)

27、基表面影響分離效果。（3）在向試管內(nèi)分裝含瓊脂的培養(yǎng)基時，如果試管口粘附有培養(yǎng) 基，就很容易使棉塞受到污染，因此，需要用無菌的酒精棉球?qū)⒃嚬芸诓潦酶蓛?。?）因為剛果紅可以與纖維素形成紅色復合物，且不與纖維素降解產(chǎn)物反應。所以在剛果紅培養(yǎng)基平板上，菌落周圍有透明降解圈是纖維素被降解的結(jié)果，降解圈大小由纖維素酶的活性和量決定。圖中菌落周圍的降解圈最大，因此其降解纖維素的能力最強。（5）考慮到人工瘤胃的發(fā)酵過程會使發(fā)酵液酸性增加，溫度升高，在這個前提下觀察在不同溫度和pH條件下測得的發(fā)酵液中酶活性的結(jié)果圖，從圖中可以看出，在高溫和低pH條件下都是J4菌株中的纖維素酶的活性較高，因而該菌株更適合用于

28、人工瘤胃發(fā)酵。答案：（1）（2）培養(yǎng)基表面的菌懸液會出現(xiàn)積液， 導致菌體堆積，影響分離效果（3）避免培養(yǎng)基污染棉塞（4）量與活性 （5）J4發(fā)酵過程會產(chǎn)熱和產(chǎn)酸，J4菌株在較高 溫度和酸性環(huán)境下酶的活性更高3. （2014高考四川卷，10,11分）有機農(nóng)藥苯磺隆是一種除草劑，長期使用會污染環(huán) 境。研究發(fā)現(xiàn)，苯磺隆能被土壤中某些微生物降解。分離降解苯磺隆的菌株和探索其降解機制的實驗過程如圖甲、乙所示。.m（1）微生物生長繁殖所需的主要營養(yǎng)物質(zhì)有碳源、水、所用的選擇培養(yǎng)基只能以苯磺隆作為唯一碳源，其原因是（2）_與微生物培養(yǎng)基相比，植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基常需添加生長素和 _ ,這些植物激素一般需要事

29、先單獨配制成 _ 保存?zhèn)溆?。?）_純化菌株時，通常使用的劃線工具是 。 劃線的某個平板培養(yǎng)后，第一劃線區(qū)域的劃線上都不間斷地長滿了菌， 第二劃線區(qū)域所劃的第一條線上無菌落，其他劃線上有菌落。造成劃線無菌落可能的操作失誤有O（4）為探究苯磺隆的降解機制，將該菌種的培養(yǎng)液過濾離心，取上清液做圖乙所示實驗。 該實驗的假設是_ ?該 實 驗 設 計 是 否 合 理？ 為 什 么？解析：（1）微生物生長繁殖需要的主要營養(yǎng)物質(zhì)包括碳源、氮源、水和無機鹽四類。根 據(jù)題意可知，土壤中某些微生物有降解苯磺隆的能力，該實驗的目的是探索其降解機制，因四類，該實驗圖甲選擇培養(yǎng)劃登純叱圖乙測定苯磺隆降解率15此，需要

30、分離出有降解苯磺隆能力的土壤中的某些微生物，故選擇培養(yǎng)時為了排除其他碳源的干擾，培養(yǎng)基中唯一碳源只能是苯磺隆。（2）與微生物培養(yǎng)基相比，植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基需要添加生長素和細胞分裂素，用于調(diào)節(jié)植物細胞再分化；這些植物激素一般需要事先單獨配制成母液保存?zhèn)溆?。?）純化菌株時，通常使用的劃線工具是無菌接種環(huán)。劃線的平板 培養(yǎng)后，發(fā)現(xiàn)第一劃線區(qū)域的劃線上不間斷地長滿了菌，第二劃線區(qū)域所劃的第一條線上無菌落，而其他劃線上有菌落。造成此現(xiàn)象的原因可能有兩個：一是接種環(huán)灼燒后未冷卻，菌種接觸到高溫的接種環(huán)而死亡；二是劃第二劃線區(qū)域第一條線時未從第一區(qū)域末端開始。（4）根據(jù)圖乙所示實驗中的上清液加入蛋白酶溶

31、液推測，實驗目的是探究目的菌株是否能分泌降解苯磺隆的蛋白質(zhì)，實驗設計不合理之處是缺少不加蛋白酶溶液、其他條件同圖乙的空白對照。1.（2016廣西四市第一次聯(lián)考）如圖是某細菌純化培養(yǎng)過程中劃線接種的培養(yǎng)結(jié)果。 回答問題：（1）_在（填圖中編號）區(qū)域出現(xiàn)了單個菌落，產(chǎn)生每個菌落的最初細菌數(shù)目是_ 個。據(jù)圖分析，在培養(yǎng)基上劃線接種時，劃線的順序依次是 _（用編號表示）。（2）下表是某微生物培養(yǎng)基的成分。編號成分含量編號成分含量粉狀硫10 gd(NH4)2SQ0.4 gK?HPO4 gMgSO9.25 gFeSO0.5 gCaCb0.5 gHbO100 mL1若培養(yǎng)從土壤中分離出來的自生固氮菌，該培養(yǎng)

32、基應添加 _ ，去除_2若要鑒別纖維素分解菌，可用_ 法，若要鑒別尿素分解菌， 可在培養(yǎng)液中加入解析：（1）從圖中可知，號區(qū)域出現(xiàn)了單個菌落；1個菌落由1個細菌繁殖形成；根據(jù)菌落數(shù)量可判斷，劃線的順序依次是TT。 定大氣中的2,因而培養(yǎng)基中應添加碳源去掉氮源。 要鑒別尿素分解菌，可在培養(yǎng)液中加入酚紅指示劑。答案：（1）1TT（2）碳源2.（2016武漢調(diào)研）如表所示為培養(yǎng)某種微生物的培養(yǎng)基配方，請回答有關(guān)問題:KHPQNaHPOMgSO葡萄糖尿素蒸餾水答案:（1）氮源和無機鹽只有能利用苯磺隆的微生物能正常生長繁殖母液（3）接種環(huán)接種環(huán)灼燒后未冷卻；劃線未從第一區(qū)域末端開始 泌降解苯磺隆的蛋白質(zhì)

33、不合理，缺少空白對照課后曲達標檢測爭生用書單號威冊（2）細胞分裂素（4）目的菌株能分（2）自生固氮菌是異養(yǎng)生物，它可固鑒別纖維素分解菌可用剛果紅染色法,氮源剛果紅染色酚紅指示劑167H2O1.4 g2.1 g0.2 g10.0 g1.0 g定容至1 000 mL(1)該培養(yǎng)基只允許分解尿素的細菌生長，這種培養(yǎng)基稱為 _培養(yǎng)基。該培養(yǎng)基會抑制其他種類微生物生長，其原因是該培養(yǎng)基 _。(2)若要通過統(tǒng)計培養(yǎng)基中菌落數(shù)來估計樣品中的細菌數(shù)，上述培養(yǎng)基中還需要添加的成分是_，接種時應米用 _ 法，該方法接種培養(yǎng)后的菌落，不可能是下圖中的_ 。(3)從土壤中分離出分解尿素的細菌后，要對其做進一步的鑒定，

34、可在上述培養(yǎng)基中加入_ 指示劑，培養(yǎng)該菌后，如果指示劑變 _，可初步鑒定該種細菌能夠分解尿素。(4)某同學用0.1 mL稀釋液在稀釋倍數(shù)為106的平板中測得菌落數(shù)的平均值為163,則每mL樣品中的細菌數(shù)是_。答案：(1)選擇以尿素為唯一的氮源(2)瓊脂稀釋涂布平板D (3)酚紅 紅(4)1.63X1093.(2016河北邯鄲一模)某化工廠的污水池中含有一種有害的難以降解的有機化合物A。研究人員用化合物A、磷酸鹽、鎂鹽以及微量元素配制的培養(yǎng)基，成功篩選到能高效降解化合物A的細菌(目的菌)。實驗的主要步驟如圖所示。請分析回答下列問題：(1)培養(yǎng)基中加入化合物A的目的是 _ ，這種培養(yǎng)基屬于 _ 培

35、養(yǎng)基。(2)“目的菌”生長所需的氮源和碳源是來自培養(yǎng)基中的 _ 。實驗需要振蕩培養(yǎng)，由此推測“目的菌”的代謝類型是 _ 。(3)在上述實驗操作過程中，獲得純凈“目的菌”的關(guān)鍵是 _ 。(4)轉(zhuǎn)為固體培養(yǎng)基時，常采用平板劃線的方法進行接種，此過程中所用的接種工具是_ ，操作時采用的滅菌方法是 _。(5)實驗結(jié)束后，使用過的培養(yǎng)基應該進行滅菌處理才能倒掉，這樣做的目的是(6)某同學計劃統(tǒng)計污水池中“目的菌”的總數(shù)，他選用104、105、106稀釋液進行平板劃線，每種稀釋液都設置了3個培養(yǎng)皿，從設計實驗的角度看，還應設置的一組對照實驗是 _，此對照實驗的目的是 _ 。解析：(1)該實驗的目的是篩選“

36、目的菌”，故培養(yǎng)基中添加的化合物A起選擇作用。(2)微生物正常生長需要碳源、氮源、無機鹽等，由培養(yǎng)基中添加的物質(zhì)種類知：化合物A應該給微生物生長提供碳源、氮源。培養(yǎng)過程需振蕩，說明目的菌是需氧型微生物。(6)統(tǒng)計污水池中的“目的菌”時應設置空白對照，以用于檢驗培養(yǎng)基是否滅菌嚴格。CD選更鹽ST掘蒔堆養(yǎng)若-FX-后.測定 污祀樣臘評殖中化合物人的含業(yè)蟲芟多次世至我鮒冃的歯17答案：(1)篩選目的菌 選擇(2)化合物A異養(yǎng)需氧型(3)防止外來雜菌污染(4)接種環(huán)灼燒（5）防止造成環(huán)境污染（6）不接種的空白培養(yǎng)基檢驗培養(yǎng)基滅菌是否合格4.（2016山東濰坊一模）地球上植物產(chǎn)生的纖維素中有40%-60%被土壤中的某些微生物利用，從土壤中分離并研究這些微生物有利于人們更有效地利用植物秸稈中的纖維素。請回答：（1）_分離纖維素分解菌，宜從的土壤中取樣。纖維素分解菌之所以能夠利用纖維素，是因為其細胞內(nèi)