第十四章醫(yī)院環(huán)境微生物

1、第十四章醫(yī)院環(huán)境微生物醫(yī)院感染的概念醫(yī)院感染的概念 醫(yī)院感染醫(yī)院感染（Nosocomial Infection，Hospital Infection 或 Hospital acquired Infection），是指住院患者在醫(yī)院內(nèi)獲得的感染，包括在住院期間發(fā)生的感染和在醫(yī)院內(nèi)獲得出院后發(fā)生的感染，但不包括入院前已開始或入院時已存在的感染，醫(yī)院工作人員在醫(yī)院內(nèi)獲得的感染也屬醫(yī)院感染。醫(yī)院感染情況醫(yī)院感染情況 據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）報告，全球每年有140萬名患者在住院期間發(fā)生醫(yī)院感染。 我國醫(yī)院感染事故也屢見報道，感染的病原多種，以各種途徑傳播。醫(yī)院感染案例醫(yī)院感染案例案例案例1 1991年1

2、1月，某縣醫(yī)院發(fā)生新生兒鼠傷寒的暴發(fā)流行，55名嬰兒發(fā)病，23名嬰兒死亡。在對感染原因的調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，該院衛(wèi)生設(shè)施條件差，產(chǎn)科消毒、隔離制度不嚴，在對產(chǎn)房、嬰兒室的56件物品進行細菌檢測時，發(fā)現(xiàn)其中的26件物品，包括嬰兒被褥、尿布、奶瓶等都培養(yǎng)有鼠傷寒沙門菌生長。醫(yī)院感染案例醫(yī)院感染案例案例案例2 1992年9月，某市醫(yī)院發(fā)生志賀痢疾桿菌C群13型暴發(fā)流行，26名新生兒感染，10名新生兒死亡。感染源系志賀氏痢疾桿菌攜帶者的產(chǎn)婦，通過接觸傳染給其嬰兒。因該院新生兒室無配奶間，配奶、換尿布、打包操作均在不足兩平方米的操作臺上進行，通過污染的牛奶在新生兒之間傳播。醫(yī)院感染案例醫(yī)院感染案例案例案例3 1

3、993年9月10月期間，沈陽市某婦嬰保健院共接生了244名嬰兒，其中49名于出生后318天先后出現(xiàn)發(fā)燒、拒乳、黃疸及心、肝、腎多臟器受損癥狀，并有15名重癥患兒死于DIC及多器官功能衰竭。此次暴發(fā)感染源系兩名已攜帶柯薩奇B族病毒的產(chǎn)婦，其所產(chǎn)兩名嬰兒被感染，后在嬰兒室內(nèi)引起了交叉感染。醫(yī)院感染案例醫(yī)院感染案例 案例案例4 1999年，上海某醫(yī)院多個病區(qū)約一周內(nèi)先后有10名患者、護士和醫(yī)生出現(xiàn)全身皮膚瘙癢和皮損，診斷為疥瘡（疥螨）。 案例案例5 2000年，上海市某醫(yī)院為某廠職工健康體檢，之后12d約40位婦女出現(xiàn)外陰瘙癢、白帶增加，診斷為陰道念珠菌感染暴發(fā)。 案例案例6 2001年，上海某醫(yī)院

4、兒科心臟術(shù)后發(fā)生18例肺炎克雷伯菌血液感染。醫(yī)院感染案例醫(yī)院感染案例 案例案例8 1998年深圳市某醫(yī)院集體感染事件暴發(fā)流行，系由于手術(shù)器械滅菌使用的戊二醛濃度偏低，造成術(shù)后切口膿腫分枝桿菌感染。 案例案例9 2009年3月，天津市某保健院發(fā)生新生兒醫(yī)院感染事件醫(yī)院感染事件， 6例重癥感染患兒中有5例患兒死亡。其中，3例患兒診斷為新生兒敗血癥，血培養(yǎng)結(jié)果均為陰溝腸桿菌陽性。醫(yī)院感染案例醫(yī)院感染案例 案案例例10 2008年12月2009年1月間，在山西某職工醫(yī)院進行血液透析的47名患者中有 20名患者丙肝抗體陽性。調(diào)查表明，對丙肝抗體陽性患者不能實施專機血液透析和專區(qū)處理血液透析器，對復用血液

5、透析器消毒處理方法不規(guī)范，存在交叉感染的安全隱患。醫(yī)院感染案例醫(yī)院感染案例案例案例11 2008年8月9月，發(fā)生在西安交大某醫(yī)院的新生兒集體感染事件，死亡的8名患兒都是早產(chǎn)兒或體重不足的低體重兒。對部分醫(yī)務(wù)人員手、病房物體表面、新生兒使用的奶瓶和奶嘴、新生兒暖箱注水口等進行檢測，發(fā)現(xiàn)有金黃色葡萄球菌、肺炎克雷伯桿菌污染且這些病原菌為多重耐藥性菌株。 醫(yī)院感染案例醫(yī)院感染案例案例案例12 2009年保定76名患者在轄區(qū)某診所就診后，注射部位出現(xiàn)硬結(jié)、腫塊，部分患者出現(xiàn)化膿甚至潰爛。普通抗菌藥物治療無效，部分患者進行多次手術(shù)治療。后經(jīng)分離培養(yǎng)鑒定致病菌為偶發(fā)分支桿菌，應(yīng)用敏感藥物可治愈。研究醫(yī)院環(huán)

6、境微生物內(nèi)容及意義研究醫(yī)院環(huán)境微生物內(nèi)容及意義 探討與醫(yī)院感染相關(guān)的一切衛(wèi)生微生物問題，對預防和控制醫(yī)院感染發(fā)生具有重要作用。 了解醫(yī)院環(huán)境生境特征；微生物特點、來源、種類、分布；常用消毒滅菌方法效果監(jiān)測方法；醫(yī)院環(huán)境微生物衛(wèi)生檢測方法；發(fā)生醫(yī)院感染暴發(fā)時樣本采集方法；開展重點科室、高危人群、侵害操作、常見感染部位及耐藥性病原體等目標監(jiān)測。 醫(yī)院作為一個提供醫(yī)療服務(wù)的特殊環(huán)境，對于微生物的生存、感染和傳播都有其特殊性。 醫(yī)院患者密集、病種構(gòu)成復雜，病原體種類繁多、密度大，若環(huán)境和設(shè)備管理不善，感染的危險性增加， 在不同類型醫(yī)院、不同臨床科室的醫(yī)院感染發(fā)生率差別較大，與發(fā)生醫(yī)院感染易感人群的年齡

7、、免疫力、基礎(chǔ)性疾病及被使用的各種診療手段等因素密切相關(guān)。 了解醫(yī)院環(huán)境的生境特征，對預防和控制醫(yī)院感染發(fā)生具有重要作用。醫(yī)院環(huán)境的生境特征醫(yī)院環(huán)境的生境特征 患者高度聚集的場所（綜合性和專科醫(yī)院特征）患者高度聚集的場所（綜合性和?？漆t(yī)院特征） 患者抵抗力低下（患者抵抗力低下（如嬰幼兒、老年患者以及腫如嬰幼兒、老年患者以及腫瘤患者、移植患者等瘤患者、移植患者等） 侵入性診療手段的應(yīng)用（侵入性診療手段的應(yīng)用（泌尿道插管、動靜脈泌尿道插管、動靜脈插管、有創(chuàng)人工呼吸機、內(nèi)鏡、血液透析插管、有創(chuàng)人工呼吸機、內(nèi)鏡、血液透析） 抗菌藥物和消毒滅菌措施應(yīng)用普遍（濫用、不抗菌藥物和消毒滅菌措施應(yīng)用普遍（濫用、

8、不規(guī)范）規(guī)范） 醫(yī)院內(nèi)病原種類多、密度大、構(gòu)成復雜醫(yī)院內(nèi)病原種類多、密度大、構(gòu)成復雜 第二節(jié)第二節(jié) 醫(yī)院環(huán)境微生物的特點、來醫(yī)院環(huán)境微生物的特點、來源、種類、分布及衛(wèi)生意義源、種類、分布及衛(wèi)生意義 近年來由于醫(yī)療技術(shù)發(fā)展，醫(yī)院生境特點發(fā)生了改變，引起醫(yī)院感染的常見微生物種類也隨之發(fā)生變化，在其他感染罕見的微生物，卻可能成為醫(yī)院感染常見致病微生物，作為正常菌群或條件致病菌的革蘭陰性菌較多，且耐藥菌株多見，耐藥率呈逐年上升趨勢。醫(yī)院環(huán)境微生物的特點醫(yī)院環(huán)境微生物的特點 多數(shù)為正常菌群或條件致病菌（抗菌藥物濫用、多數(shù)為正常菌群或條件致病菌（抗菌藥物濫用、侵襲性診療）侵襲性診療） 多數(shù)病原菌呈交叉或多

9、重耐藥（耐藥基因突變、多數(shù)病原菌呈交叉或多重耐藥（耐藥基因突變、質(zhì)粒轉(zhuǎn)移）質(zhì)粒轉(zhuǎn)移） 非發(fā)酵革蘭陰性桿菌和真菌感染上升（非發(fā)酵菌非發(fā)酵革蘭陰性桿菌和真菌感染上升（非發(fā)酵菌革蘭陰性菌分離率、真菌感染危險因素）革蘭陰性菌分離率、真菌感染危險因素） 病原體對外界抵抗力強（對消毒劑的選擇壓力）病原體對外界抵抗力強（對消毒劑的選擇壓力） 按感染的病原體來源，醫(yī)院感染通常分為內(nèi)按感染的病原體來源，醫(yī)院感染通常分為內(nèi)源性和外源性感染，內(nèi)源性感染又稱為自身源性和外源性感染，內(nèi)源性感染又稱為自身感染，常呈散發(fā)，病原體主要來自體內(nèi)，由感染，常呈散發(fā)，病原體主要來自體內(nèi)，由于患者自身免疫力降低，對體內(nèi)固有微生物于患

10、者自身免疫力降低，對體內(nèi)固有微生物菌叢易感。外源性感染又稱交叉感染，偶有菌叢易感。外源性感染又稱交叉感染，偶有暴發(fā)，病原體主要來自患者體外。發(fā)生醫(yī)院暴發(fā)，病原體主要來自患者體外。發(fā)生醫(yī)院感染來源有：感染來源有：醫(yī)院環(huán)境微生物來源醫(yī)院環(huán)境微生物來源 機體自身定植的微生物群（侵襲性操作、廣譜抗機體自身定植的微生物群（侵襲性操作、廣譜抗生素、免疫抑制劑、激素、化療藥物、創(chuàng)傷等）生素、免疫抑制劑、激素、化療藥物、創(chuàng)傷等） 從其他帶菌者獲得（高危科室醫(yī)護人員、兒童，從其他帶菌者獲得（高?？剖裔t(yī)護人員、兒童，多重耐藥不動桿菌和多重耐藥不動桿菌和MRSAMRSA的患者或攜帶者）的患者或攜帶者） 經(jīng)污染的外環(huán)

11、境獲得（患者血液、體液、分泌物、經(jīng)污染的外環(huán)境獲得（患者血液、體液、分泌物、排泄物污染空氣、水、醫(yī)療用具、儀器設(shè)備等）排泄物污染空氣、水、醫(yī)療用具、儀器設(shè)備等）醫(yī)院環(huán)境微生物傳播途徑醫(yī)院環(huán)境微生物傳播途徑 呼吸道、消化道、血液、體液等途徑傳播；呼吸道、消化道、血液、體液等途徑傳播； 經(jīng)胎盤、產(chǎn)道、哺乳等途徑傳播。經(jīng)胎盤、產(chǎn)道、哺乳等途徑傳播。 由于現(xiàn)代診療技術(shù)手段的改變，使醫(yī)院感染由于現(xiàn)代診療技術(shù)手段的改變，使醫(yī)院感染的常見微生物種類發(fā)生了變遷，革蘭陽性球的常見微生物種類發(fā)生了變遷，革蘭陽性球菌減少，革蘭陰性桿菌比例上升，且作為條菌減少，革蘭陰性桿菌比例上升，且作為條件致病菌的非發(fā)酵型革蘭陰性

12、桿菌所占比例件致病菌的非發(fā)酵型革蘭陰性桿菌所占比例較大。真菌和病毒引起的醫(yī)院感染也呈上升較大。真菌和病毒引起的醫(yī)院感染也呈上升趨勢。其主要微生物種類如下：趨勢。其主要微生物種類如下：醫(yī)院環(huán)境微生物的種類醫(yī)院環(huán)境微生物的種類 葡萄球菌屬（葡萄球菌屬（Staphylococcus） MARS：在醫(yī)院嬰兒室、重癥監(jiān)護病房及燒傷在醫(yī)院嬰兒室、重癥監(jiān)護病房及燒傷病房等常引起嚴重感染，且為病房等常引起嚴重感染，且為多重耐藥（檢測多重耐藥（檢測方法？產(chǎn)生機制？預防措施？）方法？產(chǎn)生機制？預防措施？） CNS：與侵襲性操作相關(guān)，新生兒與侵襲性操作相關(guān)，新生兒ICU及免疫力及免疫力低下患者人群易于感染的病原（低

13、下患者人群易于感染的病原（生物被膜、耐生物被膜、耐藥性？藥性？） 非發(fā)酵菌非發(fā)酵菌指一群在厭氧條件下不能利用糖指一群在厭氧條件下不能利用糖的革蘭陰性無芽胞桿菌，需氧或兼性厭氧，生的革蘭陰性無芽胞桿菌，需氧或兼性厭氧，生化特征相近，分屬于不同屬和種的細菌。（分化特征相近，分屬于不同屬和種的細菌。（分布于呼吸科、燒傷、布于呼吸科、燒傷、ICU和神經(jīng)內(nèi)科病房，部位和神經(jīng)內(nèi)科病房，部位呼吸道最多，其次為創(chuàng)面分泌物和引流液。）呼吸道最多，其次為創(chuàng)面分泌物和引流液。）l 假單胞菌屬假單胞菌屬 銅綠假單胞菌（分布潮濕環(huán)境、抵抗力強、致銅綠假單胞菌（分布潮濕環(huán)境、抵抗力強、致病力強，生物被膜感染上升，且廣泛耐

14、藥。）病力強，生物被膜感染上升，且廣泛耐藥。）l 不動桿菌屬不動桿菌屬 鮑曼不動桿菌（鮑曼不動桿菌（發(fā)病率，耐藥率上升，有資料發(fā)病率，耐藥率上升，有資料報道從報道從1999年年2008年，鮑曼不動桿菌對亞胺年，鮑曼不動桿菌對亞胺培南的耐藥率從培南的耐藥率從10.0%上升為上升為47.9%。 ）l 嗜麥芽寡養(yǎng)（窄食）單胞菌，分離率在非發(fā)酵嗜麥芽寡養(yǎng)（窄食）單胞菌，分離率在非發(fā)酵菌中僅次于銅綠假單胞菌和鮑曼氏不動桿菌，菌中僅次于銅綠假單胞菌和鮑曼氏不動桿菌，對多種抗生素耐藥。對多種抗生素耐藥。 大腸菌群細菌大腸菌群細菌 （條件致病菌、耐藥率上升）（條件致病菌、耐藥率上升）l 埃希菌屬（埃希菌屬（腹

15、瀉、尿路感染和菌血癥腹瀉、尿路感染和菌血癥）l 克雷伯桿菌屬（肺炎克雷伯菌，克雷伯桿菌屬（肺炎克雷伯菌， ICU病房、新病房、新生兒和老年患者易感生兒和老年患者易感）l 沙雷菌屬（沙雷菌屬（粘滯沙雷粘滯沙雷（）（） ， ICU病房、病房、泌尿科泌尿科等，長時間使用靜脈插管及尿道插管患者易感等，長時間使用靜脈插管及尿道插管患者易感） 分枝桿菌屬（非典型分枝桿菌）分枝桿菌屬（非典型分枝桿菌）l 龜型分枝桿菌和膿腫分枝桿菌（龜型分枝桿菌和膿腫分枝桿菌（肺部慢性感染，肺部慢性感染，外傷感染、中耳炎、皮膚軟組織感染，特別是外傷感染、中耳炎、皮膚軟組織感染，特別是術(shù)后易繼發(fā)感染。術(shù)后易繼發(fā)感染。 ）l 鳥

16、復合分枝桿菌鳥復合分枝桿菌 （MACMAC）l 偶發(fā)分枝桿菌（偶發(fā)分枝桿菌（為復合菌群，可導致人的局部為復合菌群，可導致人的局部感染和肺部病變，對常規(guī)抗結(jié)核藥物均耐受感染和肺部病變，對常規(guī)抗結(jié)核藥物均耐受）l 恥垢分枝桿菌恥垢分枝桿菌 真菌真菌l 假絲酵母菌屬：假絲酵母菌屬：以白色假絲酵母菌最為多見，以白色假絲酵母菌最為多見，國內(nèi)外報道，白色念珠菌尿發(fā)生率可高達國內(nèi)外報道，白色念珠菌尿發(fā)生率可高達50%。l 霉菌霉菌：以肺部曲霉菌病最為多見。毛霉感染多以肺部曲霉菌病最為多見。毛霉感染多繼發(fā)于糖尿病或其他慢性消耗性疾病。繼發(fā)于糖尿病或其他慢性消耗性疾病。l 卡氏肺胞菌：卡氏肺胞菌：先天性獲得性免

17、疫缺陷及免疫抑先天性獲得性免疫缺陷及免疫抑制患者易感，可致肺部感染，耐藥。制患者易感，可致肺部感染，耐藥。 病毒病毒 l HCV ：在醫(yī)院手術(shù)科室、檢驗科、血庫、血液透在醫(yī)院手術(shù)科室、檢驗科、血庫、血液透析室、牙科等感染率較高。析室、牙科等感染率較高。l 其他病毒：其他病毒：輪狀病毒和諾如病毒引起的腹瀉，多輪狀病毒和諾如病毒引起的腹瀉，多發(fā)生于住院嬰幼兒和老年患者；巨細胞病毒感染發(fā)生于住院嬰幼兒和老年患者；巨細胞病毒感染多見于長期住院的肝炎和其他慢性疾患兒童以及多見于長期住院的肝炎和其他慢性疾患兒童以及器官和骨髓移植患者；口唇皰疹病毒易于經(jīng)口腔器官和骨髓移植患者；口唇皰疹病毒易于經(jīng)口腔科患者分

18、泌物、血液污染環(huán)境、醫(yī)療器械等傳播?？苹颊叻置谖铩⒀何廴经h(huán)境、醫(yī)療器械等傳播。醫(yī)院環(huán)境微生物分布及衛(wèi)生意義醫(yī)院環(huán)境微生物分布及衛(wèi)生意義 分布分布 醫(yī)院環(huán)境中分布：醫(yī)院環(huán)境中分布：空氣、水、醫(yī)療用品、醫(yī)護空氣、水、醫(yī)療用品、醫(yī)護人員手等；人員手等； 機體中分布：機體中分布：皮膚、呼吸道、腸道、口咽部等；皮膚、呼吸道、腸道、口咽部等； 醫(yī)院感染部位分布：醫(yī)院感染部位分布：下呼吸道、泌尿道、切口、下呼吸道、泌尿道、切口、胃腸道、血流等；胃腸道、血流等； 衛(wèi)生意義（從生境特性、醫(yī)院感染相關(guān)危險因衛(wèi)生意義（從生境特性、醫(yī)院感染相關(guān)危險因素，微生物特點、種類、分布等綜述）素，微生物特點、種類、分布等綜述

19、）第三節(jié)第三節(jié) 醫(yī)院環(huán)境微生物檢驗及醫(yī)院環(huán)境微生物檢驗及衛(wèi)生標準衛(wèi)生標準 醫(yī)院環(huán)境微生物檢驗是醫(yī)院感染監(jiān)測重要內(nèi)容，醫(yī)院環(huán)境微生物檢驗是醫(yī)院感染監(jiān)測重要內(nèi)容，包括對重點科室常規(guī)監(jiān)測及發(fā)生醫(yī)院感染時的特包括對重點科室常規(guī)監(jiān)測及發(fā)生醫(yī)院感染時的特殊監(jiān)測。殊監(jiān)測。 了解適用于醫(yī)院感染微生物監(jiān)測的法律法規(guī)、檢了解適用于醫(yī)院感染微生物監(jiān)測的法律法規(guī)、檢測標準、檢測方法，熟悉各類樣本采集方法，正測標準、檢測方法，熟悉各類樣本采集方法，正確判斷病原體分離鑒定結(jié)果，并對病原體進行藥確判斷病原體分離鑒定結(jié)果，并對病原體進行藥敏試驗和分型檢測，為預防和控制醫(yī)院感染提供敏試驗和分型檢測，為預防和控制醫(yī)院感染提供病原

20、學診斷依據(jù)。病原學診斷依據(jù)。醫(yī)院環(huán)境微生物檢驗醫(yī)院環(huán)境微生物檢驗p醫(yī)院環(huán)境微生物常規(guī)監(jiān)測醫(yī)院環(huán)境微生物常規(guī)監(jiān)測l 醫(yī)院環(huán)境消毒滅菌及其效果評價醫(yī)院環(huán)境消毒滅菌及其效果評價 壓力蒸汽滅菌效果的監(jiān)測壓力蒸汽滅菌效果的監(jiān)測 紫外線消毒效果紫外線消毒效果 醫(yī)療器械滅菌效果監(jiān)測醫(yī)療器械滅菌效果監(jiān)測l 醫(yī)院環(huán)境衛(wèi)生學監(jiān)測（空氣、物體表面、手）醫(yī)院環(huán)境衛(wèi)生學監(jiān)測（空氣、物體表面、手）l 各類醫(yī)療用品消毒、滅菌后監(jiān)測各類醫(yī)療用品消毒、滅菌后監(jiān)測l 使用中消毒劑和無菌器械保存液檢測使用中消毒劑和無菌器械保存液檢測壓力蒸汽滅菌效果監(jiān)測流程壓力蒸汽滅菌效果監(jiān)測流程 生物學監(jiān)測方法（參照生物學監(jiān)測方法（參照20092

21、009醫(yī)院消毒技術(shù)規(guī)范）醫(yī)院消毒技術(shù)規(guī)范）將兩片嗜熱脂肪芽孢桿菌芽胞菌片（含菌量為將兩片嗜熱脂肪芽孢桿菌芽胞菌片（含菌量為5.05.010105 55.05.010106 6cfu/cfu/片）放入片）放入3 3個小紙袋內(nèi)。個小紙袋內(nèi)。放置在壓力蒸汽滅菌器上、中層的中央、下層放置在壓力蒸汽滅菌器上、中層的中央、下層（下排氣口），各（下排氣口），各1 1個裝有芽胞菌片的紙袋。個裝有芽胞菌片的紙袋。將壓力測試后的菌片置溴甲酚紫胨水培養(yǎng)基中，將壓力測試后的菌片置溴甲酚紫胨水培養(yǎng)基中，（56561 1），培養(yǎng)，培養(yǎng)48h48h后觀察顏色，直到后觀察顏色，直到7d7d，若，若不變色為合格，變黃不合格。不

22、變色為合格，變黃不合格。紫外線輻照強度監(jiān)測流程紫外線輻照強度監(jiān)測流程打開紫外線燈，穩(wěn)定打開紫外線燈，穩(wěn)定5min;5min;打開紫外線輻照強度監(jiān)測儀，調(diào)至打開紫外線輻照強度監(jiān)測儀，調(diào)至220v220v，；，；距離燈管距離燈管1m1m處測定處測定輻照強度標準：輻照強度標準：30W30W的新燈管的新燈管90W/cm90W/cm2 2 使用中的燈管使用中的燈管 70W/cm70W/cm2 2ICUICU或手術(shù)室空氣污染監(jiān)測流程或手術(shù)室空氣污染監(jiān)測流程房間面積房間面積 30m2取取5 個點（東西南北中，各端個點（東西南北中，各端距墻距墻1m，距地面，距地面80150cm ）房間面積房間面積 30m2取

23、取3點（一條對角線，兩端距墻點（一條對角線，兩端距墻1m，距地面，距地面80150cm）平皿直徑平皿直徑9cm，暴露，暴露5min，37 培養(yǎng)培養(yǎng)2448h。菌落計數(shù)并換算成：菌落計數(shù)并換算成：cfu/m3（公式公式5000N/AT） A平皿面積，平皿面積，T暴露時間，暴露時間，N平均菌落數(shù)平均菌落數(shù)物體表面污染消毒后監(jiān)測流程物體表面污染消毒后監(jiān)測流程 采樣時間：消毒處理后采樣時間：消毒處理后4h 采樣面積采樣面積 100cm2，取，取100cm2；100cm2取全部。取全部。 擺放規(guī)格板并涂抹采樣：無菌棉拭子往復擺放規(guī)格板并涂抹采樣：無菌棉拭子往復5次，剪入次，剪入10ml相應(yīng)中和劑的采樣液

24、。相應(yīng)中和劑的采樣液。 送檢并培養(yǎng)：平板傾注法，樣液震洗送檢并培養(yǎng)：平板傾注法，樣液震洗80次或渦旋，取次或渦旋，取1ml樣液，樣液，37 培養(yǎng)培養(yǎng)48h。 菌落計數(shù)并換算成：菌落計數(shù)并換算成：cfu/cm2（平板上平均菌落數(shù)（平板上平均菌落數(shù) 稀稀釋倍數(shù)釋倍數(shù)/采樣面積）采樣面積） 標準：標準：、類環(huán)境類環(huán)境 5cfu/ cm2； 類環(huán)境類環(huán)境 10cfu/ cm2 ； 類環(huán)境類環(huán)境 15cfu/ cm2 醫(yī)護人員手污染監(jiān)測流程醫(yī)護人員手污染監(jiān)測流程采樣：用稀釋液沾濕拭子，雙手手指并攏，屈面采樣：用稀釋液沾濕拭子，雙手手指并攏，屈面從指根到指端往復涂抹兩次，并轉(zhuǎn)動拭子。從指根到指端往復涂抹兩

25、次，并轉(zhuǎn)動拭子。將未接觸拭子部分剪入裝有將未接觸拭子部分剪入裝有10ml10ml稀釋液的試管中，稀釋液的試管中，震洗、接種、培養(yǎng)，并計數(shù)。震洗、接種、培養(yǎng)，并計數(shù)。不得檢出乙型溶血性鏈球菌、金黃色葡萄球菌及不得檢出乙型溶血性鏈球菌、金黃色葡萄球菌及其他；可疑污染的情況下進行相應(yīng)微生物指標檢其他；可疑污染的情況下進行相應(yīng)微生物指標檢測。母嬰同室、早產(chǎn)兒、新生兒等不得檢出沙門測。母嬰同室、早產(chǎn)兒、新生兒等不得檢出沙門菌。菌。嬰兒室腸道致病菌監(jiān)測流程嬰兒室腸道致病菌監(jiān)測流程采樣時間：一月一次采樣時間：一月一次采樣面積采樣面積 100cm100cm2 2涂抹采樣：將涂抹后拭子置于乳糖膽鹽采樣管中。涂抹

26、采樣：將涂抹后拭子置于乳糖膽鹽采樣管中。增菌培養(yǎng)：乳糖膽鹽采樣管增菌培養(yǎng)：乳糖膽鹽采樣管37 37 ，培養(yǎng)，培養(yǎng)181824h24h。轉(zhuǎn)種：渾濁的接種轉(zhuǎn)種：渾濁的接種SSSS或伊紅美藍平板或伊紅美藍平板結(jié)果判定：不得檢出腸道致病菌結(jié)果判定：不得檢出腸道致病菌血液透析水和透析液染菌量監(jiān)測流程血液透析水和透析液染菌量監(jiān)測流程樣本采集：透析用水在進入透析機位置收集；樣本采集：透析用水在進入透析機位置收集；透析液在進入透析器位置收集。透析液在進入透析器位置收集。樣本接種、培養(yǎng)、菌落計數(shù)方法同上。樣本接種、培養(yǎng)、菌落計數(shù)方法同上。標準：菌落總數(shù)標準：菌落總數(shù)200cfu/ml，并不得檢出致病微，并不得檢

27、出致病微生物。生物。使用中消毒劑污染監(jiān)測流程使用中消毒劑污染監(jiān)測流程采樣時間：每個季度采樣時間：每個季度采樣方法：無菌吸取采樣方法：無菌吸取1ml消毒劑，加入消毒劑，加入9ml相應(yīng)中相應(yīng)中和劑，混勻，立即送檢。和劑，混勻，立即送檢。接種：傾注法，普通營養(yǎng)瓊脂接種：傾注法，普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)并計數(shù)：培養(yǎng)并計數(shù)：20 培養(yǎng)培養(yǎng)7d觀察并計數(shù)霉菌菌落數(shù)；觀察并計數(shù)霉菌菌落數(shù)； 37 培養(yǎng)培養(yǎng)3d，計數(shù)細菌數(shù)并檢測致病菌。，計數(shù)細菌數(shù)并檢測致病菌。結(jié)果計算分析：標準結(jié)果計算分析：標準 100cfu/ ml，不得檢出致病，不得檢出致病性微生物。性微生物。 對疑似醫(yī)院感染患者采集感染部位的臨床樣本，對疑似醫(yī)

28、院感染患者采集感染部位的臨床樣本，進行病原體鑒定及藥物敏感性檢驗。此外，還進行病原體鑒定及藥物敏感性檢驗。此外，還需采集可能引起感染的環(huán)境標本，進行病原體需采集可能引起感染的環(huán)境標本，進行病原體分離鑒定后，進行同源性檢測，以確定病原體分離鑒定后，進行同源性檢測，以確定病原體親緣關(guān)系，為切斷傳播途徑，控制傳染源提供親緣關(guān)系，為切斷傳播途徑，控制傳染源提供依據(jù)。依據(jù)。 醫(yī)院感染微生物檢測醫(yī)院感染微生物檢測p常見醫(yī)院感染部位的微生物學檢驗常見醫(yī)院感染部位的微生物學檢驗l 臨床微生物樣本采集臨床微生物樣本采集 采集方法采集方法 送檢原則送檢原則 判定不符合要求的標本判定不符合要求的標本l 病原體分離培

29、養(yǎng)鑒定病原體分離培養(yǎng)鑒定l 病原體藥物敏感性試驗病原體藥物敏感性試驗抗菌藥物敏感性試驗抗菌藥物敏感性試驗 定性（紙片瓊脂擴散法定性（紙片瓊脂擴散法, ,即即Kirby-BauerKirby-Bauer法）法） 純化菌落：在血平板、麥康凱等分離純化出單個菌落純化菌落：在血平板、麥康凱等分離純化出單個菌落 菌液制備：挑取數(shù)個菌落，用生理鹽水將菌液濃度調(diào)整至菌液制備：挑取數(shù)個菌落，用生理鹽水將菌液濃度調(diào)整至麥氏單位（麥氏單位（5.05.010107 75.05.010108 8cfu/mlcfu/ml）；）； 涂布涂布MHMH平板：用棉簽沾取稀釋好的菌液均勻涂布平板：用棉簽沾取稀釋好的菌液均勻涂布3

30、 3次，平板次，平板內(nèi)緣再涂抹一次，即涂滿平板；內(nèi)緣再涂抹一次，即涂滿平板； 貼含藥紙片：用無鑷子將藥片緊貼于瓊脂表面，紙片中心貼含藥紙片：用無鑷子將藥片緊貼于瓊脂表面，紙片中心間間 24mm24mm，距內(nèi)緣，距內(nèi)緣 15mm15mm； 培養(yǎng)培養(yǎng)181824h24h，根據(jù)抑菌圈直徑作出敏感、耐藥、中介。，根據(jù)抑菌圈直徑作出敏感、耐藥、中介。 定量（定量（MICMIC、MBCMBC）手工或儀器分析手工或儀器分析以肺炎鏈球菌藥敏試驗結(jié)果判斷標準為例以肺炎鏈球菌藥敏試驗結(jié)果判斷標準為例肺炎鏈球菌藥敏試驗結(jié)果判斷標準肺炎鏈球菌藥敏試驗結(jié)果判斷標準醫(yī)院感染微生物檢測醫(yī)院感染微生物檢測 醫(yī)院感染暴發(fā)時的微

31、生物學檢驗醫(yī)院感染暴發(fā)時的微生物學檢驗l 樣本采集種類樣本采集種類 臨床樣本臨床樣本 環(huán)境樣本環(huán)境樣本l 病原體分離鑒定病原體分離鑒定l 病原體同源性檢測病原體同源性檢測病原體分型方法病原體分型方法 表型分型法（血清學、噬菌體等分型）表型分型法（血清學、噬菌體等分型） 分子分型法（質(zhì)粒圖譜分析方法）分子分型法（質(zhì)粒圖譜分析方法）臨床分離株及質(zhì)控株臨床分離株及質(zhì)控株質(zhì)粒提取過程（具體見實驗六部分）質(zhì)粒提取過程（具體見實驗六部分）質(zhì)粒提取物電泳質(zhì)粒提取物電泳質(zhì)粒酶切電泳圖譜分析質(zhì)粒酶切電泳圖譜分析同源性分析例同源性分析例 例例1 對對MARS流行病學分型方法，主要有表型分型方流行病學分型方法，主要

32、有表型分型方法，如噬菌體（法，如噬菌體（4組組23種噬菌體）分型，耐藥譜分型等；種噬菌體）分型，耐藥譜分型等；分子分型方法，如脈沖場凝膠電泳、隨機引物擴增多分子分型方法，如脈沖場凝膠電泳、隨機引物擴增多態(tài)性態(tài)性DNA及及DNA指紋圖譜分型等。指紋圖譜分型等。 例例2 1996年在解放軍某醫(yī)院外科病區(qū)，從年在解放軍某醫(yī)院外科病區(qū)，從6名患者的名患者的血液、大靜脈插管、腹腔引流液中分離出血液、大靜脈插管、腹腔引流液中分離出14株綠膿假株綠膿假單胞菌，血清型分型皆屬同型。用單引物單胞菌，血清型分型皆屬同型。用單引物PCR指紋圖指紋圖譜分型方法，指紋圖譜完全相同，判定此次醫(yī)院感染譜分型方法，指紋圖譜完全相同，判定此次醫(yī)院感染由綠膿假單胞菌引起。由綠膿假單胞菌引起。醫(yī)院環(huán)境微生物衛(wèi)生標準及技術(shù)規(guī)范醫(yī)院環(huán)境微生物衛(wèi)生標準及技術(shù)規(guī)范 醫(yī)院消毒衛(wèi)生標準醫(yī)院消毒衛(wèi)生標準（GB15982-1995G